CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu
3.3.2 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng của Ctf chất đến quá trình len men sinh tổng hợp protease trên môi trường rắn SSF
tổng hợp protease trên môi trường rắn SSF
Mục đích: Tìm ra loại cơ chất thích họp cho quá trình sinh tổng họp protease đạt hiệu quả cao. Kết quả này được sử dụng làm thông số cố định cho các thí nghiệm sau.
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí ngẫu nhiên với 1 nhân tố. Nhân tố A: Cơ chất cho quá trình sinh tổng hợp protease Ai:
Bột đậu nành A2: Cám gạo A3: Bột mì Tổng số nghiệm thức: 3 nghiệm thức
Nhân tố cố định: Độ ẩm môi trường (60%), huyền phù bào tử nấm bổ sung là 1 mL (với mật số nấm mốc 105 bào tử/mL), nhiệt độ ủ 30°c, thời gian ủ 72 giờ.
Tiến hành thí nghiệm:
Lên men: Cân 10 g môi trường cho vào các bình tam giác 250 mL, làm ẩm cơ chất bằng
dung dịch muối khoáng (bao gồm: yeast extract 0,5%, KH2PO4 0,4%, NaCl 0,1% và MgSƠ4 0,05%) đến 55%. Thanh trùng các bình tam giác chứa cơ chất ở 121°c trong 15 phút. Làm mát các bình sau khi thanh trùng, cho 1 mL huyền phù bào tò nấm (với mật số nấm mốc 105 bào tử/mL) vào 3 môi trường trên ở, ủ ở nhiệt độ phòng (30°C), thời gian ủ 72 giờ. Sau khi ủ đủ thời gian, trích lấy dịch chứa enzyme thô và xác đinh hoạt tính.
Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường Đại học cần Thơ
Ly trích enzyme: Dịch chứa protease được ly trích bằng cách sử dụng 30 mL nước cất (pH 6,7 6,8) cho vào bình mẫu sau khi ủ, tiến hành khuấy để ly trích enzyme trong thời gian 30 phút. Tiến hành ly tâm ở 4°c, tốc độ 10000 rpm thu được phần dịch trong (sau khi loại bỏ phần kết tủa) là dịch trích enzyme thô. Xác định thể tích enzyme thô thu được. Đo hoạt tính protease trong enzyme thô (U/mL dịch trích), từ đó xác định hoạt tính protease tương ứng với nghiệm thức khảo sát (U/g cơ chất) theo công thức: Hoạt tính protease thu được (U/g): c =
m
Với:
c0: Hoạt tính protease trong 1 mL dịch trích V: Thể tích dịch trích (mL)
m: Khối lượng cơ chất chính trước khi lên men (g)
Hoạt tính enzyme protease được xác định bằng phương pháp Anson.
Kết quả thu nhận: Cơ chất thích hợp cho quá trình lên men cho hoạt tính protease cao nhất được chọn làm thông số cố định cho các thí nghiệm sau.