5. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu
3.1.2. Phân lập và chọn lọc nguồn thực liệu virút NPV có hoạt lực cao
Từ kết quảđiều tra thu thập các mẫu sâu khoang bị nhiễm và chết do các tác nhân gây bệnh thì không phải hầu hết các cá thể sâu chết có triệu chứng
đặc trưng của NPV. Điều đó, càng cho thấy việc phân lập, làm thuần tạo nguồn thực liệu NPV là rất cần thiết đối với quá trình phát triển chế phẩm sau này.
Các mẫu sâu khoang bị bệnh thu được từđồng ruộng của cùng một loại cây được xử lý qua cồn 50 độ, rồi chovào ống effendorf ngâm nước cất hai lần. Sau 10 ngày tiến hành ly tâm trong dung dịch Sodium Dodecyl Sulphate (SDS) 0,1% xen kẽ với 2 lần nước cất để phân lập thể vùi vi rút NPV. Sau đó, thu lại phần thể vùi và kiểm tra đếm số lượng thể vùi cho mỗi nhóm sâu nhiễm bệnh trên kính hiển vi.
Tiến hành sử dụng thể vùi thu được từ các nguồn lây nhiễm đánh giá trên sâu non sâu khoang nuôi nhân bằng thức ăn sạch. Qua đánh giá khả năng hình thành thể vùi và hiệu quả gây chết sâu khoang từ 3 nguồn thực liệu vi rút NPV thu được trên bắp cải, đậu tương và khoai sọ, kết quả (bảng 3.2) cho thấy hoạt lực và khả năng sinh thể vùi của các nguồn NPV thu được rất khác nhau giữa các nguồn thực liệu thu thập ngoài đồng ruộng.
Với nguồn sâu bị bệnh NPV thu trên bắp cải có hàm lượng thể vùi cao nhất đạt tới 2,7 x 108 OB/ml và hoạt lực gây chết sâu cũng cao nhất, tới 69,33%. Còn nguồn thực liệu thu từ ruộng đậu tương và khoai sọ có số thể vùi và khả năng gây chết sâuthấphơn, số liệu tương ứng là 1,3 x 108 OB/ml và
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 39
51,33% trên đậu tương, chỉ đạt1,0 x 108 OB/ml và 42,67% trên khoai sọ
(bảng 3.2).
Bảng 3. 2. Hiệu lực gây chết sâu khoang và khả năng sinh thể vùi của các nguồn thực liệu vi rút đã thu thập (Viện BVTV, 2013)
Ký hiệu mẫu Địa điểm thu thập Cây trồng Tỷ lệ chết (%) Lượng thể vùi hình thành từ sâu chết (OB/ml) M1 Đông Anh Bắp cải 69,33 c 2,7 x 108 c M2 Mê Linh Đậu tương 51,33 b 1,3 x 108 b M3 Từ Liêm Khoai sọ 42,67 a 1,0 x 108 a
Ghi chú: a, b, c là thể hiện sự sai khác có ý nghĩa ở mức 95%
Hình 3. 1. Thể vùi NPV phân lập từ sâu khoang bị bệnh ngoài đồng
Để chọn lọc được các nguồn thực liệu vi rút NPV thuần, có hoạt lực gây chết sâu và khả năng sinh thể vùi cao để phục vụ sản xuất chế phẩm, đề
tài tiến hành phân lập làm thuần qua các bước.