... Các vấn đề thƣờng gặp trong PCR và phƣơng pháp khắc phục 16
2.3.2.7 Ứng dụng của PCR 18
2.4 Giới thiệu về kỹthuậtRFLP và kỹthuậtPCR – RFLP 18
2.4.1 KỹthuậtRFLP ( restricton fragment length ... có nguồn gốc tự nhiên hay là sản phẩm chuyển
gen…
2.5 Giới thiệu về kỹthuậtRFLP và kỹthuậtPCR – RFLP
2.5.1 KỹthuậtRFLP ( restriction fragment length polymorphism)
Đây là phƣơng pháp ... gen PRLR, Vincent và cộng sự đã dùng kỹthuậtPCR –
RFLP (polymerase chain reaction – restriction fragment length polymorphism). Trƣớc
ông dùng kỹthuậtPCR để phân lập một đoạn DNA của gen...
...
đoạn. Kỹthuật RT -PCR cho phép nghiên cứu các mRNA tồn tại với hàm lƣợng thấp,
RNA của virus, không thể phát hiện bằng các phƣơng pháp khác nhƣ Northern blot.
Một kỹthuật mới phát triển - kỹthuật ... 9,
11 và 12) trên thành phố Đà Lạt bằng kỹthuật ELISA.
2. Khuếch đại đoạn gene có kích thƣớc 336 bp mã hóa protein vỏ của virus PLRV
bằng kỹthuật RT -PCR.
3. Giải trình tự đoạn gene 336 bp ... Các kỹthuật RT -PCR, giải trình tự chƣa đƣợc áp dụng phổ biến trong công tác
chẩn đoán virus PLRV.
2.4.2 Nghiên cứu nƣớc ngoài về virus PVX, PVY, PLRV
- Nie và Singh (2002) đã dùng kỹ thuật...
... nucleic, thu nhận acid nucleic dạng cô đặc trong
ethanol hoặc isopropanol.
2.5 KỹthuậtPCR
2.5.1 Nguyên tắc
Kỹ thuậtPCR (Polymerase chain reaction) là phản ứng nhân nhanh số lƣợng mẫu
DNA nhờ ... ĐỊNH CÁC KIỂU GEN THỤ THỂ
PROLACTIN TRÊN MỘT SỐ GIỐNG HEO CÔNG
NGHIỆP BẰNG KỸTHUẬTPCR - RFLP
LUẬN VĂN KỸ SƢ
CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên ... truyền
2.5.1 Lịch sử nghiên cứu và thành tựu của di truyền học và kỹthuật gen
Vào những năm cuối của thế kỷ XX, khoa học kỹthuật đã phát triển một cách
chóng mặt, nhiều thành tựu mới thay...
... gen PRLR, Vincent và cộng sự đã dùng kỹthuậtPCR –
RFLP (polymerase chain reaction – restriction fragment length polymorphism). Trƣớc
đó, ông dùng kỹthuậtPCR để phân lập một đoạn DNA của gen ... nucleic, thu nhận acid nucleic dạng cô đặc trong
ethanol hoặc isopropanol.
2.5 KỹthuậtPCR
2.5.1 Nguyên tắc
Kỹ thuậtPCR (Polymerase chain reaction) là phản ứng nhân nhanh số lƣợng mẫu
DNA nhờ ...
NGHIỆP BẰNG KỸTHUẬTPCR - RFLP
LUẬN VĂN KỸ SƢ
CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC
Thành phố Hồ Chí Minh
Tháng 9/2006
14
2.6.2.7 Các vấn đề thƣờng gặp trong PCR và phƣơng...
... số kỹthuậtPCR khác:
Một số kỹthuật phát triển trên cơ sở của kỹthuậtPCR có ý nghĩa quan
trọng cho định danh và định typ vi sinh vật là nested PCR (PCR lồng), revert
transtriptase PCR ... Dùng kỹthuậtPCR cho ribotyping:
KỹthuậtPCR ribotyping là ứng dụng các cặp mồi đặc hiệu để nhân các
vùng gene của ARN (thuộc ribosom hay ARN vận chuyển). Tuy nhiên, trong
thực tế kỹthuật ... pháp này.
Bảng 1.9. Một số ví dụ cho kỹthuật RFLPs (Restriction Fragment Length
Polymorphism) phân tích các gene đặc hiệu được nhân lên bằng kỹthuật PCR.
Chủng vi sinh vật nghiên cứu Tác...
... số kỹthuậtPCR khác:
Một số kỹthuật phát triển trên cơ sở của kỹthuậtPCR có ý nghĩa quan
trọng cho định danh và định typ vi sinh vật là nested PCR (PCR lồng), revert
transtriptase PCR ... Dùng kỹthuậtPCR cho ribotyping:
KỹthuậtPCR ribotyping là ứng dụng các cặp mồi đặc hiệu để nhân các
vùng gene của ARN (thuộc ribosom hay ARN vận chuyển). Tuy nhiên, trong
thực tế kỹthuật ... hiện nhờ
kỹ thuậtPCR nhân sản phẩm cDNA được dùng cho phát hiện Helicobacter spp.
Độ nhạy của phương pháp phát hiện này tăng 50 lần so với phương pháp
truyền thống.
+ Kỹthuật rep -PCR:
Một...
... NGHỆ SINH HỌC
Câu hỏi:
Nội dung
I. Khái niệm
Bản chất của kỹthuật PCR( phản ứng chuỗi trùng hợp,phản ứng nhờ chuỗi
polymerase) là kỹthuật tổng hợp nhân tạo nhân AND với tốc độ nhsnh chưa
từng ... (94
0
C, 30 giây)
Chu trình PCR
IV: Chu kỳ phản ứng của PCR
Biến tính
- Việc tăng nhiệt độ hoặc kéo dài thời gian biến tính có thể làm tăng tính đặc hiệu
của PCR nhưng làm giảm tuổi thọ của ... links)
Quy trình
Quy trình PCR gồm 20 đến 30 chu kỳ. Mỗi chu kỳ gồm 3 bước (Hình 2)
Một số buffer đã có chứa sẵn loading buffer để có thể điện di ngay sau
PCR. Tuy nhiên, độ nhạy của PCR với những buffer...
... lũy sản phẩm và định lượng
qPCR (quantitative PCR – là PCR định lượng).
Ngoài ra còn một số kỹthuậtPCR khác nữa…
VIII. RT – PCR
Như chúng ta đã biết, PCR là kỹthuật nhân bội ADN mạch kép. ... – PCR (reverse transcriptase PCR) còn gọi là RNA – PCR hay RT
– PCR. RT – PCR nhạy hơn các phương pháp khác được dùng cho sự phân
tích ARN.
- RT – PCR cạnh tranh (Competitive RT – PCR) là kỹ ... mã.
Trong số các tiến bộ kỹthuật góp phần tạo ra các cuộc bùng nổ về lĩnh vực
sinh học phân tử chúng ta phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction).
Kỹ thuậtPCR do Kary Mullis đề suất...
... lạnh ở -20
o
C để sử dụng cho các phản ứng PCR.
Phương pháp khuyếch đại DNA (Kỹ thuật PCR)
Sản phẩm DNA sau ly trích được trộn chung với hỗn hợp gồm có PCR buffer, MgCl
2
, dNTP
/
s, Taq
DNA ... GENE KHÁNG SÂU (CryIA [b])
VÀ GENE TĂNG CƯỜNG CHUYỂN HÓA ĐƯỜNG
(Invertase) BẰNG KỸTHUẬT PCR
OPPTIMIZING PCR PROTOCOLS FOR DETECTIONS OF CRYIA(B)
AND INVERTASE GENES IN MAIZE.
Bùi Minh ... quả của Hsu – Yanglin và cộng tác viên (2000).
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Kết luận
- Sử dụng kỹthuậtPCR đã cho phép chẩn đoán sự xuất hiện của gen Invertase và gen CryIA(b)
với các thành phần...
... chuyển gen CryIA(b).
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Kết luận
KẾT QUẢ BAN ĐẦU TRONG VIỆC SỬ DỤNG
KỸ THUẬTPCR NHẰM ĐÁNH GIÁ HIỆN TRẠNG
CÁC SẢN PHẨM BẮP CHUYỂN GENE
TẠI VIỆT NAM
PREVIOUS RESULTS ...
Bt. Với cặp primer Gic, sản phẩm PCR sau khi chụp hình cho thấy có hai mẫu có band kích thước
226bp (có chuyển gen Invertase). Với cặp primer Bt, sản phẩm PCR sau khi chụp hình cho thấy có ... (25:24:1); Isopropanol; Ethanol (70%) vaa2 TE 1X.
Các hoá chất dùng cho phản ứng PCR bao gồm:
Nước cất 2 lần; PCR buffer; MgCl
2
dNTP
/
s; Taq DNA polymerase; Primer Gic và Primers Bt.
Các...
... Vân Anh, Bùi Văn Công, Hoàng Văn Dương
Đề tài:
Đề tài:
“Ứng dụng kỹthuậtPCR và lây nhiễm nhân tạo
“Ứng dụng kỹthuậtPCR và lây nhiễm nhân tạo
kiểm chứng gen kháng bệnh bạc lá ở các dòng ... tiến hành:
+ Cách tiến hành:
•
Phản ứng PCR: thành phần 20 μl dung dịch phản ứng PCR gồm
Phản ứng PCR: thành phần 20 μl dung dịch phản ứng PCR gồm
có: 12.24 μl nước cất, 0.1 μl
có: 12.24 ... những kết luận không chính xác.
Chính vì vậy chúng em tiến hành đề tài “Ứng dụng kỹ
thuật PCR và lây nhiễm nhân tạo kiểm chứng gen kháng
bệnh bạc lá ở các dòng đẳng gen”
HỘI NGHỊ...
... xuất và trồng trọt 12
2.2. KỹthuậtPCR 13
2.2.1. Lịch sử PCR 13
2.2.2. Nguyên tắc PCR 14
2.2.3. Các thành phần của phản ứng PCR 14
2.2.4. Ƣu điểm và nhƣợc điểm của PCR 17
2.2.5. Nguyên tắc ... là sản phẩm PCR
khi thực hiện PCR mẫu 4 với cặp primer W11. F là sản phẩm PCR khi
thực hiện PCR mẫu 4 với cặp primer T1. 1 – 6 là sản phẩm PCR thu đƣợc
khi thực hiện multiplex PCR các mẫu ... tinh sạch, chỉ cần
pha loãng DNA, vẫn có thể thực hiện thành công phản ứng PCR.
Kỹ thuậtPCR
Dựa vào kết quả chạy PCR có thể xác định đƣợc giới tính cây đu đủ với mức độ
chính xác rất cao....
...
2.2.2. Lợi ích của nấm cộng sinh 12
2.3. Sơ lƣợc về kỹthuậtPCR 13
2.3.1. Nguyên tắc của kỹthuậtPCR 13
2.3.2. Các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng PCR 16
2.3.2.1. DNA mẫu 16
2.3.2.2. Taq polmerase ... Các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng PCR
2.3.2.1. DNA mẫu
Phản ứng khuếch đại tối ƣu xảy ra trên DNA thật tinh sạch. Tuy nhiên,
những kỹthuật chẩn đoán bằng PCR vẫn cho kết quả tốt với DNA thu ... phẩm PCR theo ý muốn.
2.3.2.3. Primer
Primer là chỉ tiêu quan trọng nhất để đạt đƣợc sự khuếch đại đặc trƣng và có
hiệu quả cao. Việc chọn primer là giai đoạn quyết định của kỹthuật PCR, ...
...
PHÁT HIỆN BỆNH KHẢM LÁ MÍA BẰNG KỸ
THUẬT ELISA VÀ BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU
PHÁT HIỆN BỆNH CẰN MÍA GỐC
BẰNG KỸTHUẬTPCR
Luận văn kỹ sƣ
Chuyên ngành: Công nghệ sinh học
... thuật lai tại vết bệnh (dot blot hybridization)
với 7 đầu dò DNA đặc hiệu cho Lxx.
Kỹthuật PCR.
Kỹ thuậtPCR đƣợc phát triển nhằm phát hiện Lxx (Pan và các cộng sự, 1998; Taylor
và các cộng ... tổng hợp nên một sợi DNA đặc thù.
Sơ đồ 2.2. Sơ đồ tổng quát của kỹthuật RT -PCR (Trích dẫn Vương Hồ Vũ, 2005).
Trong kỹthuật PCR, các đoạn mồi đƣợc chọn nằm ở 2 đầu đoạn DNA cần nhân
lên,...
... kỹthuậtPCR 13
2.3.1. Nguyên tắc của kỹthuậtPCR 13
2.3.2. Các yếu tố ảnh hƣởng đến phản ứng PCR 16
2.3.2.1. DNA mẫu 16
2.3.2.2. Taq polmerase 16
2.3.2.3. Primer 16
13
Phản ứng PCR ... giữa G – C mạnh hơn A – T sẽ bảo đảm
cho sự bắt cặp đặc hiệu.
2.3.2.4. Nhiệt độ bắt cặp
Kỹ thuậtPCR rất mẫn cảm với nhiệt độ. Vì thế bất cứ sự thay đổi nhiệt độ
nào của phản ứng cũng có ... 3 mM MgCl
2
e. Số lƣợng chu kỳ của phản ứng PCR
Trong thực tế số chu kỳ cho một phản ứng PCR không nên vƣợt quá 40. Sở
dĩ nhƣ vậy vì phản ứng PCR diễn tiến qua hai giai đoạn :
Giai đoạn đầu:...