... CứU3.1. Đối tượng , vật liệu , địa điểm và thời gian nghiên cứu 3.1.1. Đối tượng nghiên cứu Gồm một số tổ hợp lai F1 , quần thể F2 3.1.2. Vật liệu nghiên cứu * Thí nghiệm trong phòng:Thiết bị :+ Máy PCR , máy chạy điện di , máy chụp ảnh điện di , máy li tâm , máy votex , tủ lạnh , lò vi sóng . + Các loại ống effendof , các loại pipet và đầu tiếp đi kèm . Thành phần cho phản ứng PCR + Cặp mồi phát hiện gen bất dục đực tms2 theo M.T.Lopez và cộng sự (2003)có trình tự là : RM11_F:5’TCTCCTCTTCCCCCGATC3’ RM11_R:5’ATAGCGGGCGAGCTTAG3’Hóa chất chạy PCR : dNTD , MgCl2 , Taq ADN polymerase , PCR mastermix , nước cất Hóa chất dùng để chiết tách ADN hệ gen : Để chọn tạo lúa lai hai dòng thành công thì dòng TGMS phải nhiều và phong phú,từ đó mới tạo ra được tổ hợp cho ưu thế lai cao. Hiện nay các dòng TGMS đang được sử dụng như:103S,T1S96,64S,287S,36S2,Kim 76S,Pair 64S và 25S.Các nhà khoa học đã tìm được 6 gen TGMS(tms1, tms2, tms3, tms4, tms5, tms6).Mỗi gen này có ngưỡng chuyển hóa hữu dục và bất dục khác nhau,trong đó,gen tms2 có ngưỡng chuyển hóa hữu dục ổn định.Nhà chọn tạo giống đã sử dụng các gen TGMS này lai chuyển vào các dòng,giống lúa triển vọng để tạo dòng TGMS tốt,có khả năng phối hợp cao, tạo ra nhiều tổ hợp lai mới cho ưu thế lai cao như TH33,Việt Lai 20,TH34,…Thành phần Nồng dộ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 50ml dung dịch TE làm việcTrisHCl(pH=8) ... TE3.2.2. Phương pháp nghiên cứu * Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR :+) Chiết tách ADN tổng số của dòng mẹ TGMS,các tổ hợp phân ly F2 theo quy trình cải tiến của Bộ môn Công nghệ sinh học. Bước 1:Thu ngắt mẫu lá khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá lạnh. Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử trùng và đặt trong đá lạnh.Các mẫu lá được cắt nhỏ khoảng 0,5cm rồi bỏ vào cối. Bước 3:Nhỏ 400 µl dungdịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi nghiền nhỏ mẫu lá cho đến khi dungdịch chuyển sang màu xanh đen. Bước 4:Bổ sung thêm 400 µl dungdịch chiết suất AND vào pha trộn lẫn sau đó hút 400 µl vào ống eppendorf đã được đánh dấu. Bước 5: Cho 700 µl hỗn hợp Phenol : Chlorofom : Isoamylalcohol ( 25:24:1 )3.2. Nội dung và phương pháp nghiên cứu * Nội dung nghiên cứu +) Theo dõi đặc điểm nông sinh học : Các chỉ tiêu nông sinh học :+ Thời gian từ cấy đến bắt đầu trổ(10% số bông thoát khỏi lá đòng).+ Thời gian trổ từ khi bắt đầu trỗ(10% số bông thoát khỏi lá đòng) đến khi kết thúc trổ (85% thoát khỏi lá đòng) .+ Thời gian tự cấy đến chín(85% số hạt chắc màu vàng)+ Tổng thời gian sinh trưởng từ gieo đến khi thu hoạch .+ Chiều cao cây (cm) cuối cùng : đo từ mặt đất đến mút đầu bông dài nhất không kể râu .+ Chiều dài lá đòng : đo từ gối lá đến đầu mút lá , đo vào giai đoạn chín sáp. + Chiều rộng lá đòng. + Góc độ lá đòng .+ Chiều dài bông : đo từ cổ bông đến hết bông vào thời kì chín chắc .PHầN ... di phát hiện sản phẩm PCR trên gel agarose 1 %Thành phần Nồng độ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 10ml dung dịch chiết táchTrisHCl(pH=8) 1M 50mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 0,25mM...
... thơm, nhưng độ chính xác không cao; chỉ thị phântử nhưng độ chính xác không cao; chỉ thị phântử BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các giống lúa BADH2 đã phân biệt chính xác 100% các giống ... cho thấy chỉ thị phân tử BADH2 có độ tin cậy và chính xác rất cao phân tử BADH2 có độ tin cậy và chính xác rất cao trong việc phân biệt các giống lúa mang gen thơm trong việc phân biệt các giống ... BADH2 Kết quả sử dụng chỉ thị phântử L05 và BADH2 trong Kết quả sử dụng chỉ thị phântử L05 và BADH2 trong phân loại các giống mang gen thơm và không mang phân loại các giống mang gen thơm...
... khi phân tích.Ứng dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn tạo giống lúa thơmThu và chuyển phầndungdịch phía trên sang ống 1,5 ml mới. Thêm vào ống 300 µl dungdịch ... thị phân tử BADH2 có độ tin cậy và chính xác rất cao trong việc phân biệt các giống lúa mang gen thơm fgr (lúa thơm) và không mang gen thơm fgr (lúa không thơm). Ứng dụng chỉ thị phân ... bằng hệ thống chụp và phân tích hình ảnh Gel Doc 2000.Ứng dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn tạo giống lúa thơmKết quả sử dụng chỉ thị phântử BADH2 để xác định...
... REFERENCES In Vietnamese Bùi Chí Bửu và Nguyễn Thị Lang. 2005. Nghiên cứu và ứng dụng marker phântử để phát hiện gen kháng rầy nâu trên cây lúa (Oryza sativa L.). Hội nghị khoa học toàn quốc ... 800bp, respectively. This indicated that these varieties could carry BPH resistance gene which was heterozygous at this locus. 5. SUGGESTIONS From these results, the following recommendations ... and 398bp. APPROVAL SUPERVISOR STUDENT Dr. TRAN NHAN DUNG NGUYEN NG.QUYNH ANH Can Tho, November 25, 2010 PRESIDENT OF EXAMINATION COMMITTEE ...
... tính chất ion cao sẽ làm cho dungdịch đệm trở nên năng động rất nhiều. Do đó nồng độ Mg2+ cao hay thấp đều tạo ra những ảnh hƣởng rất lớn. Nồng độ Mg2+ cao sẽ làm cho phântử DNA mạch ... về nhiệt độ bắt cặp của mồi. Dungdịch đệm Môi trƣờng đệm KCl đã và đang đƣợc áp dụng là một dungdịch đệm rất hữu hiệu cho kỹ thuật PCR. Ngoài ra còn có dungdịch điệm NaCl dùng cho việc khuếch ... sulphate cho những sản phẩm PCR có trọng lƣợng phântử thấp (Holm và ctv, 1991). pH của dungdịch đệm cũng đƣợc xem xét kỹ trong kỹ thuật PCR. Hầu hết các dung môi phản ứng đƣợc đệm trong môi trƣờng...
... qua phần tửtứ giác với hàm dạng tuyến tính. Đây là một phầntử thông dụng trong PP-PTHHMR vì việc tính toán dựa trên phầntử này không quá phức tạp và chính xác hơn so với phầntử tam giác ... (36) (actJ là tích phân J thực; auxJlà tích phân J bổ trợ; M ñược gọi là tích phân tương tác và MW ñược gọi là năng lượng tương tác) Từ mối quan hệ của tích phân J và hệ số mật ñộ ... PHẦN TỬ HỮU HẠN MỞ RỘNG (PP-PTHHMR) Ý tưởng cơ bản của PP-PTHHMR là mở rộng không gian hữu hạn phầntử bằng cách cộng thêm những hàm mở rộng. Khảo sát một ñiểm xthuộc miền phần tử, xấp...
... PCRThành phần Nồng dộ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 50ml dung dịch TE làm việcTrisHCl(pH=8) 1M 10mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 1mM 0,1mlH2O 49,4mlThành phầndungdịch đệm TE•Hóa ... Nghiên cứu ứng dụng chỉ thị phântử DNA để chọn lọc gen tms2 tạo ra các dòng TGMS mới”Người hướng dẫn : 1.PGS.TS.Phan Hữu Tôn 2.KS.Tống Văn Hải Bộ môn : Công nghệ sinh học ứng dụng Khoa CNSHTrường ĐHNNHà NộiNgười thực hiện : SV.Nguyễn Thị Hồng HạnhLớp :0602 CNSH 3.2.2. Phương pháp nghiên cứu * Xác định khả năng chứa gen bất dục đực mẫn cảm với nhiệt độ tms2 bằng phương pháp PCR :+) Chiết tách ADN tổng số của dòng mẹ TGMS,các tổ hợp phân ly F2 theo quy trình cải tiến của Bộ môn Công nghệ sinh học. Bước 1:Thu ngắt mẫu lá khỏe,dài khoảng 2cm bỏ vào ống eppendorf có dung tích 1,5ml,đánh dấu tên giống rồi bỏ vào đá lạnh. Bước 2:Cối,chày sứ dùng để nghiền mẫu đã được hấp khử trùng và đặt trong đá lạnh.Các mẫu lá được cắt nhỏ khoảng 0,5cm rồi bỏ vào cối. Bước 3:Nhỏ 400 µl dungdịch đệm chiết suất ADN vào cối rồi nghiền nhỏ mẫu lá cho đến khi dungdịch chuyển sang màu xanh đen. Bước 4:Bổ sung thêm 400 µl dungdịch chiết suất AND vào pha trộn lẫn sau đó hút 400 µl vào ống eppendorf đã được đánh dấu. Bước 5: Cho 700 µl hỗn hợp Phenol : Chlorofom : Isoamylalcohol ( 25:24:1 )STT ... Thành phần Nồng độ dung dịch mẹNồng độ dung dịch làm việcHỗn hợp 10ml dung dịch chiết táchTrisHCl(pH=8) 1M 50mM 0,5mlEDTA(pH=8) 0,5M 0,25mM...
... 28.10% Cao 7 10101 31.30% Cao 20 10248 30.90% Cao 8 10111 30.40% Cao 21 10259 29.70% Cao 9 10115 31.80% Cao 22 10279 23.30% TB10 10119 35.10% Cao 23 10715 35.90% Cao 11 10120 36.60% Cao 24 10716 ... 31.10% Cao 2 10059 17.50% Thấp 15 10175 35.40% Cao 3 10063 35.60% Cao 16 10243 30.60% Cao 4 10067 7.90% Rất thấp 17 10244 31.32% Cao 5 10069 26.40% Cao 18 10246 28.70% Cao 6 10091 38.80% Cao 19 ... tới khi thành dịch màu xanh lá cây. Bổ sung 400µl dịch chiết vào cối rồi chuyển sang ống eppendorf. Thêm 700 µl dungdịch phenol: chloroform: Isoamyalcohol (25:24:1), ly tâm và thu dịch nổi. Tủa...
... không thơm cho thấy:+ Các chỉ thị phântử RG28, RM342 không phân biệt được các giống lúa mang gen thơm và không mang gen thơm.+ Chỉ thị phântử L05 có thể phân biệt được giữa các giống lúa ... lúa.Ứng dụng chỉ thị phân tử AND xác định gene phục vụ chọn tạo giống lúa thơmThu và chuyển phầndungdịch phía trên sang ống 1,5 ml mới. Thêm vào ống 300 µl dungdịch Isopropanol, ... thị phântử BADH2 có độ tin cậy và chính xác rất cao trong việc phân biệt các giống lúa mang gen thơm fgr (lúa thơm) và không mang gen thơm fgr (lúa không thơm). Ứng dụng chỉ thị phân...
... các văc-xin với nhau.- Loại phản ứng miễn dịch và hiện tượng chuyển hướng miễn dịch: đối với các tác nhân gây bệnh ngoại bào, đáp ứng miễn dịchdịch thể là thích hợp (loại đáp ứng này được ... đáp ứng miễn dịch tế bào qua CD8 được kích thích. Tuy nhiên phương BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI II Nguyễn Thị Thanh HươngTIỂU LUẬN: Môn miễn dịch học phân tử Vấn đề:Vacxin.Lớp: ... ra loại đáp ứng miễn dịch mong muốn. Thí dụ, chất nhôm phosphate và các oligonucleotide chứa CpG demethyl hóa đưa vào vắc-xin khiến đáp ứng miễn dịch phát triển theo hướng dịch thể (tạo kháng...
... các văc-xin với nhau.- Loại phản ứng miễn dịch và hiện tượng chuyển hướng miễn dịch: đối với các tác nhân gây bệnh ngoại bào, đáp ứng miễn dịchdịch thể là thích hợp (loại đáp ứng này được ... lympho Th1). Ngược lại, đáp ứng miễn dịch tế BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI II Nguyễn Thị Thanh HươngTIỂU LUẬN: Môn miễn dịch học phân tử Vấn đề:Vacxin.Lớp: Sinh học thực ... chất (đáp ứng miễn dịch không thích hợp) hoặc về mặt lượng (không có đáp ứng miễn dịch) .Nguyên nhân gây kém hiệu quả về lượng:- Các "lỗ hổng" trong kho tàng miễn dịch: trên lý thuyết,...