Khảo sát quá trình sinh tổng hợp lipid và carotenoid của rhodotorula mucilaginosa nghiên cứu khoa học

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP LIPID VÀ CAROTENOID CỦA RHODOTORULA MUCILAGINOSA MÃ SỐ: 19 Bình Dương, 04/2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP LIPID VÀ CAROTENOID CỦA RHODOTORULA MUCILAGINOSA Chủ nhiệm đề tài: Võ Thị Mỹ Dung Khoa: Công nghệ sinh học Các thành viên: Phạm Thị Hằng Nga Huỳnh Thị Y Bình Người hướng dẫn: Lý Thị Minh Hiền Bình Dương, 04/2018 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan nấm men Rhodotorula 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Giới thiệu chung 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Hình thái, kích thước tế bào nấm men 1.1.5 Cấu tạo nấm men Rhodotorula 1.1.6 Sinh sản nấm men Rhodotorula 1.1.7 Đặc điểm sinh hóa 10 1.1.8 Các yếu tố ảnh hưởng đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula 10 1.1.9 Giá trị dinh dưỡng sinh khối nấm men Rhodotorula 13 1.2 Tổng quan Lipid 14 1.2.1 Khái niệm Lipid 14 1.2.2 Cấu tạo 15 1.2.3 Phân loại 16 1.2.4 Trạng thái tự nhiên tính chất vật lý 16 1.2.5 Vai trò lipid 16 1.2.6 Lipid vi sinh vật 17 1.2.7 Acid béo không bão hịa đa nối đơi (PUFA-polyunsaturated fatty acid) 18 1.3 Tổng quan carotenoid 20 i 1.3.1 Định nghĩa 20 1.3.2 Lịch sử carotenoid 20 1.3.3 Phân bố 21 1.3.4 Cấu tạo 21 1.3.5 Phân loại 22 1.3.6 Tính chất 23 1.3.7 Cơ chế sinh tổng hợp sắc tố carotenoid vi sinh vật 24 1.3.8 Ứng dụng carotenoid 28 CHƯƠNG II: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm 31 2.2 Nguyên vật liệu – hóa chất – thiết bị 31 2.2.1 Nguyên vật liệu 31 2.2.2 Hóa chất – Thiết bị - Dụng cụ 34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 35 2.3.1 2.4 Quy trình ni cấy 35 Bố trí thí nghiệm 37 2.4.1 Khảo sát trình sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bổ sung dịch thủy phân tinh bột khoai mì 37 2.4.2 Khảo sát trình sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bổ sung dịch thủy phân bắp nếp 42 2.4.3 Khảo sát trình sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa ………… 47 CHƯƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 53 ii 3.1 Kết thí nghiệm khảo sát q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bổ sung dịch thủy phân tinh bột khoai mì… 54 3.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ enzyme thời gian đến trình thủy phân tinh bột khoai mì 54 3.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến trình thủy phân tinh bột khoai mì 55 3.1.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon (dịch thủy phân tinh bột khoai mì, glycerol) đến khả tích lũy sinh khối nấm men Rhodotorula mucilaginosa 56 3.1.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả tích lũy sinh khối tế bào Rhodotorula mucilaginosa 58 3.1.5 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ carbon / nitơ (C / N) đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa ………….… 59 3.2 Kết thí nghiệm khảo sát trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bổ sung dịch bắp thủy phân 61 3.2.1 Thí nghiệm 6: Khảo sát ảnh hưởng nồng độ enzyme thời gian đến trình thủy phân dịch bắp nếp 61 3.2.2 Thí nghiệm 7: Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến trình thủy phân dịch bắp nếp 63 3.2.3 Thí nghiệm 8: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon đến khả tích lũy sinh khối nấm men Rhodotorula mucilaginosa 63 3.2.4 Thí nghiệm 9: Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả tích lũy sinh khối tế bào Rhodotorula mucilaginosa mơi trường bắp nếp 65 iii 3.2.5 Thí nghiệm10: Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ carbon / nitơ (C / N) đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bắp nếp 66 3.3 Kết thí nghiệm khảo sát q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 68 3.3.1 Thí nghiệm 11: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa ………… 68 3.3.2 Thí nghiệm 12: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon saccharose đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa…… 69 3.3.3 Thí nghiệm 13: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa…… 70 3.3.4 Thí nghiệm 14: Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol kết hợp với D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 71 3.3.5 Thí nghiệm 15: Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 72 CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 74 4.1 Kết luận 75 4.2 Kiến nghị 76 TÀI LIỆU THAM KHẢO 77 PHỤ LỤC 80 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Phân loại nấm Rhodotorula (Harison, 1927) Bảng Bảng phân loại lipid 16 Bảng Sự phân bố đặc điểm carotenoid sinh vật 21 Bảng Một số nghiên cứu sinh tổng hợp carotenoid từ nấm men Rhodotorula 27 Bảng Bảng bố trí thí nghiệm nồng độ thời gian thủy phân tinh bột khoai mì 37 Bảng 2 Nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân đến trình thủy phân tinh bột khoai mì 39 Bảng Nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon (dịch thủy phân tinh bột khoai mì, glycerol) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa 40 Bảng Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nguồn nitơ đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid 41 Bảng Bố trí thí nghiệm ảnh hưởng tỉ lệ C / N đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid 42 Bảng Bảng bố trí thí nghiệm nồng độ thời gian thủy phân dịch bắp 43 Bảng Nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân đến trình thủy phân dịch bắp 44 Bảng Nghiệm thức thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon (dịch thủy phân bắp, glycerol, D-glucose) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa …45 Bảng Bảng bố trí thí nghiệm tỉ lệ nitơ hữu / vô môi trường bắp nếp 46 Bảng 10 Bảng bố trí thí nghiệm C / N môi trường bắp nếp 47 Bảng 11 Bố trí thí nghiệm hàm lượng D-glucose 48 Bảng 12 Bố trí thí nghiệm hàm lượng saccharose 49 Bảng 13 Bố trí thí nghiệm hàm lượng glycerol 50 Bảng 14 Bố trí thí nghiệm hàm lượng glycerol D-glucose 51 Bảng 15 Bố trí thí nghiệm hàm lượng nguồn nitơ 52 v Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng enzyme Termamyl SC Novozyme thời gian thủy phân đến trình thủy phân tinh bột khoai mì………… ……… 54 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân đến trình thủy phân tinh bột khoai mì 55 Bảng 3 Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nguồn carbon (dịch thủy phân tinh bột khoai mì glycerol) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa 57 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ (hữu vơ cơ) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa 58 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ carbon / nitơ (C / N) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa 59 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng hàm lượng enzyme Termamyl SC Novozyme thời gian thủy phân đến trình thủy phân dịch bắp 61 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ thủy phân đến trình thủy phân dịch bắp 63 Bảng Kết khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ nguồn carbon (dịch bắp, glucose glycerol) đến q trình ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa 64 Bảng Bảng kết khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả tích lũy sinh khối tế bào Rhodotorula mucilaginosa môi trường bắp nếp 65 Bảng 10 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ carbon / nitơ (C / N) đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bắp nếp 66 Bảng 11 Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon D-glucose đến phát triển sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 68 Bảng 12 Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon saccharose đến phát triển sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 69 Bảng 13 Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến phát triển sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 70 Bảng 14 Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến phát triển sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 71 vi Bảng 15 Kết khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến phát triển sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 72 vii DANH MỤC HÌNH Hình 1 Tế bào nấm men Rhodotorula mucilaginosa qua kính hiển vi Hình Khuẩn lạc Rhodotorula mucilaginosa Hình Một số thực phẩm giàu lipid 15 Hình Chất béo thực phẩm 17 Hình Phân tử acid béo khơng bão hịa đa (cis) 18 Hình Cơng thức cấu tạo Linoleic acid 19 Hình Phân loại carotenoid (Nguyễn Thị Minh Nguyệt, 2005) 22 Hình Con đường sinh tổng hợp carotenoid 25 Hình Các phản ứng dehydro trình sinh tổng hợp carotenoid 26 Hình 10 Tổng hợp carotenoid có vịng từ lycopene 26 Hình Trái bắp nếp mua chợ Thủ Dầu Một……………………………… 31 Hình 2 Tinh bột khoai mì mua chợ Thủ Dầu Một 32 Hình Khuẩn lạc chủng nấm men Rhodotorula mucilaginosa 33 Hình Giữ giống môi trường thạch nghiêng 34 Hình Sơ đồ ni cấy nấm men Rhodotorula mucilaginosa môi trường lỏng 35 Hình Sinh khối sau ly tâm 36 viii Multiple Range Tests for Sinh khoi kho by Nghiem thuc Method: 95.0 percent Duncan Nghiem Count Mean Homogeneous thuc Groups P1 3.36 X P3 3.94 XX P2 4.0 XX P4 4.2 X P5 5.06667 X  BẢNG ANOVA Table for g lipid/g chất khô by Nghiem thuc Source Sum of Squares 0.0931707 Between groups Within 0.0238727 groups Total (Corr.) 0.117043 Df Mean F-Ratio Square 0.0232927 9.76 P-Value 0.0018 10 0.0023872 14 Table of Means for g lipid tren g chat kho by Nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals nghiem thuc Count Mean P1 0.227333 P2 0.354667 P3 0.182667 P4 0.322667 P5 0.151 Total 15 0.247667 Stnd error (pooled s) Lower Upper limit limit 0.0282091 0.18288 0.271778 0.0282091 0.31022 0.399111 0.0282091 0.13822 0.227111 0.0282091 0.27822 0.367111 0.0282091 0.10655 0.195445 101 Multiple Range Tests for g lipid tren g chat kho by Nghiem thuc Method: 95.0 percent Duncan nghiem thuc P5 P3 Count Mean P1 P4 P2 3 Homogeneous Groups 0.151 X 0.18266 X 0.22733 X 0.32266 X 0.35466 X  Bảng ANOVA Table for khoi luong lipid by Nghiem thuc Source Sum of Df Mean F-Ratio P-Value Squares Square Between 0.0376897 0.00942243 6.17 0.0091 groups Within groups 0.0152747 10 0.00152747 Total (Corr.) 0.0529644 14 Table of Means for khoi luong lipid by Nghiem thuc with 95.0 percent LSD intervals Nghiem thuc Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit P1 0.144333 0.0225645 0.108782 0.179884 P2 0.202667 0.0225645 0.167116 0.238218 P3 0.091 0.0225645 0.0554489 0.126551 P4 P5 Total 3 15 0.219667 0.111333 0.1538 0.0225645 0.0225645 0.184116 0.0757822 0.255218 0.146884 Multiple Range Tests for khoi luong lipid by Nghiem thuc 102 Nghiem thuc P3 P5 P1 P2 P4 Method: 95.0 percent Duncan Count Mean Homogeneous Groups X 0.091 X 0.111333 XX 0.144333 XX 0.202667 X 0.219667 103 Phụ lục 11 So sánh ảnh hưởng nguồn carbon D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa  Bảng: Số liệu thực nghiệm ảnh hưởng nguồn carbon D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa Hàm Lần Lần Lần lượng Dglucose OD (g/l) M1 Hàm OD Hàm OD Hàm lượng β- lượng β- lượng β- carotene carotene carotene (μg/l) (μg/l) (μg/l) 0,549 237,9 1,047 453,8 0,112 48,53 0,652 282,6 0,442 191,6 0,143 61,97 2,167 939,2 1,336 445,7 0,447 193,7 0,870 377,1 1,321 572,5 0,305 132,2 (15) M2 (20) M3 (25) M4 (30) 104  Kết ANOVA khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 105 Phụ lục 12 So sánh ảnh hưởng nguồn carbon saccharose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa  Bảng: Số liệu thực nghiệm ảnh hưởng nguồn carbon saccharose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa Hàm Lần Lần Lần lượng saccharose OD (g/l) Hàm OD Hàm OD Hàm lượng β- lượng lượng carotene β- β- carotene carotene (μg/l) (μg/l) (μg/l) S1 (15) 0,449 194,6 0,554 240,1 0,278 120,5 S2 (20) 0,551 238,8 0,668 289,5 1,485 643,6 S3 (25) 0,523 226,7 0,527 228,4 0,798 345,8 S4 (30) 0,346 149,9 1,132 490,6 1,145 496,2 106  Kết ANOVA khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon saccharose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 107 Phụ lục 13 So sánh ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa  Bảng: Số liệu thực nghiệm ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa Hàm lượng Lần Glycerol (g/l) OD Lần Hàm OD Lần Hàm OD Hàm lượng lượng lượng β- β- β- carotene carotene carotene (μg/l) (μg/l) (μg/l) G1 (15) 1,666 722,0 0,104 45,07 1,028 445,5 G2 (20) 0,769 333,3 0,196 84,93 1,316 570,3 G3 (25) 0,264 114,4 0,175 75,83 1,155 500,6 G4 (30) 1,228 532,2 0,128 55,47 1,139 493,6 108  Kết ANOVA khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 109 Phụ lục 14 So sánh ảnh hưởng nguồn carbon glycerol kết hợp D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa  Bảng: Số liệu thực nghiệm ảnh hưởng nguồn carbon glycerol kết hợp D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa Lần Hàm lượng Hàm OD β- Lần Hàm lượng Glycerol : Dglucose (g/l) Lần Hàm lượng OD β- lượng OD β- carotene carotene carotene (μg/l) (μg/l) (μg/l) D1 (10 : 10) 1,872 811,3 2,117 917,5 1,530 663,1 D2 (7 : 13) 1,265 548,3 1,335 578,6 1,707 739,8 D3 (5 : 15) 1,245 539,6 1,235 535,2 0,747 323,7 D4 (4 : 16) 1,438 623,2 1,012 438,6 1,112 481,9 110  Kết ANOVA khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon glycerol kết hợp D-glucose đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 111 Phụ lục 15 So sánh ảnh hưởng nguồn nitơ đến trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa  Bảng: Số liệu thực nghiệm ảnh hưởng nguồn nitơ đến q trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa Hàm lượng Lần Nitơ hữu cơ/ vô OD Lần Hàm OD Lần Hàm OD Hàm lượng lượng lượng β- β- β- carotene carotene carotene (μg/l) (μg/l) (μg/l) E1 (100 : 0) 0,616 266,9 0,309 133,9 0,275 119,1 E2 (90 : 10) 0,092 39,87 0,198 85,81 0,334 144,7 E3 (70 : 30) 0,264 114,4 0,795 344,5 0,488 211,4 E4 (50 : 50) 0,384 166,4 0,204 88,41 0,436 188,9 E5 (30 : 70) 0,492 213,2 0,133 57,64 0,445 192,8 E6 (10 : 90) 0,236 102,2 0,222 96,21 0,198 196,3 E7 (0 : 100) 0,301 130,4 0,103 44,64 0,285 123,5 112  Kết ANOVA khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ đến trình tích lũy sinh khối tế bào sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa 113 Phụ lục 16 Phương pháp xác định hàm lượng carotenoid so màu UV vis dựa vào đường chuẩn β – carotene  Nguyên tắc: Hỗn hợp carotenoid Rhodotorula mucilaginosa sinh tổng hợp bao gồm: β – carotene, torulene torularhodin Trong chủ yếu β – carotene Cả ba chất hấp thu ánh sáng tốt bước sóng từ 400 – 500 nm Trên sở đó, chúng tơi xây dựng đường chuẩn carotenoid với chất chuẩn β – carotene Dựa vào đường chuẩn xác định hàm lượng carotenoid dung dịch  Dựng đường chuẩn carotenoid: Chúng dùng β – carotene chuẩn 95 % pha nồng độ µg/ml, 10 µg/ml, 15 µg/ml, 20 µg/ml, 30 µg/ml dung mơi acetone để tiến hành xây dựng đường chuẩn Các nồng độ dung dịch β – carotene đem đo hấp thu bước sóng 400 nm Sau dùng phương pháp hồi quy tuyến tính để dựng lên đường chuẩn dựa vào nồng độ β – carotene giá trị OD đo Kết sau: Bảng 2.1 Giá trị OD tương ứng với nồng độ β-carotene OD 0,4 24 0,82 1,17 1,60 10 15 20 1,9 05 2,23 Nồng độ dung dịch β-carotene 25 30 (µg/ml) 114 Hình 2.1 Đồ thị đường tương quan tuyến tính OD400nm hàm lượng β-carotene (µg/ml) dung dịch  Cách xác định nồng độ carotenoid: Dịch trích màu từ sinh khối nấm men dung môi Acetone đem so màu bước sóng 400 nm Từ dựa vào đường chuẩn để xác định nồng độ carotenoid dịch trích 115 ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN KHẢO SÁT QUÁ TRÌNH SINH TỔNG HỢP LIPID VÀ CAROTENOID CỦA RHODOTORULA MUCILAGINOSA. .. bột khoai mì 37 2.4.2 Khảo sát trình sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa môi trường bổ sung dịch thủy phân bắp nếp 42 2.4.3 Khảo sát trình sinh tổng hợp carotenoid Rhodotorula. .. đến q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa ………….… 59 3.2 Kết thí nghiệm khảo sát q trình tích lũy sinh khối sinh tổng hợp lipid Rhodotorula mucilaginosa