Bài tập cuối kỳ học phần Hóa sinh học thực phẩm

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÀI TẬP CUỐI KỲ HỌC PHẦN HÓA SINH HỌC THỰC PHẨM TÊN ĐỀ TÀI GVHD: NGUYỄN VĂN A SVTH: NHÓM XX NGUYỄN THỊ C MSSV: 2005130XXX LỚP: XXDHTP NGÔ THỊ B MSSV: 2005130XXX LỚP: XXDHTP TP HỒ CHÍ MINH, 20xx TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM BÀI TẬP CUỐI KỲ HỌC PHẦN HÓA SINH HỌC THỰC PHẨM TÊN ĐỀ TÀI GVHD: NGUYỄN VĂN A SVTH: NHÓM XX NGUYỄN THỊ C MSSV: 2005130XXX LỚP: XXDHTP NGÔ THỊ B MSSV: 2005130XXX LỚP: XXDHTP TP HỒ CHÍ MINH, 20xx LỜI CAM ĐOAN Chúng cam đoan “Bài tập cuối kỳ học phần Hóa sinh học thực phẩm” chúng tơi thực Các nội dung trình bày tập trung thực, không chép Các tài liệu tham khảo sử dụng trích dẫn nguồn thích rõ ràng TP Hồ Chí Minh, tháng năm 20 SINH VIÊN THỰC HIỆN (Ký ghi rõ họ tên) i TĨM TẮT Trình bày tóm tắt nội dung báo cáo, tối đa 300 từ ii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH MỤC HÌNH ẢNH v DANH MỤC BẢNG BIỂU vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU NỘI DUNG 1 2.1 Tổng quan đậu xanh 2.1.1 Mô tả thực vật 2.1.2 Nguồn gốc phân bố .1 2.1.3 Thành phần hóa học vỏ đậu xanh 2.2 Flavonoid 2.2.1 Nguồn gốc .3 2.2.2 Cấu trúc 2.2.3 Phân bố flavonoid thực vật 2.2.4 Phân loại tính chất NỘI DUNG 3.1 Thời gian địa điểm làm đề tài .5 3.2 Vật liệu nghiên cứu 3.2.1 Nguyên liệu .5 3.2.2 Hóa chất 3.2.3 Thiết bị 3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 3.4 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 3.4.1 Phương pháp phân tích 3.4.2 Phương pháp xử lý số liệu .8 3.5 Nội dung nghiên cứu 3.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát lựa chọn loại nguyên liệu 3.5.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát thành phần nguyên liệu .8 NỘI DUNG 4.1 Kết thí nghiệm: Khảo sát nguyên liệu 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát loại nguyên liệu 4.1.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát thành phần nguyên liệu 4.2 Kết thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu trích ly hàm lượng flavonoid tổng 10 4.2.1 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng loại dung môi đến TFC 10 4.2.2 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi đến TFC 10 4.2.3 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng thời gian đến TFC 10 iii KẾT LUẬN 11 5.1 Kết luận 11 5.2 Ý nghĩa/ kiến nghị 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO 12 iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Cây đậu xanh Hình 1.2 Cơng thức cấu tạo Vitexin Isovitexin Hình 1.3 Cấu trúc phân tử flavonoid Hình 1.4 Hệ thống C6-C3- C6 Hình 1.5 Vịng thơm vịng pyran Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm Hình 2.3 Quy trình khảo sát nguyên liệu Hình 3.1 Đồ thị kết hàm lượng flavonoid tổng trích ly từ loại ngun liệu Hình 3.2 Ảnh hưởng loại dung môi đến hàm lượng flavonoid tổng (mgQE/g) Hình 3.3 Ảnh hưởng tỷ lệ NL/DM đến hàm lượng flavonoid tổng (mgQE/g) Hình 3.4 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng flavonoid tổng (mgQE/g) v 6 12 13 15 16 17 19 20 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1.1 Thành phần flavonoid (mg/100g) số loại thực phẩm Bảng 2.1 Các loại hóa chất sử dụng nghiên cứu Bảng 2.2 Danh mục thiết bị sử dụng nghiên cứu Bảng 3.1 Các thông số nguyên liệu vi 10 11 17 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT TP.HCM: TCN: DPPH: TN: TFC: NL/ DM Thành phố Hồ Chí Minh Trước Cơng Ngun 2,2-diphenyl-1-picryl hydrazyl radical Thí nghiệm Total flavonoid content Nguyên liệu/ dung môi vii MỞ ĐẦU Trình bày mục tiêu, nội dung chính, cấu trúc báo cáo NỘI DUNG 2.1 Tổng quan đậu xanh 2.1.1 Mô tả thực vật  Bộ: Fabales  Họ: Fabaceae  Chi: Vigna  Loài: Vigna radiata  Tên khoa học Vigna radiata L Hình NỘI DUNG 1.1 Cây đậu xanh 2.1.2 Nguồn gốc phân bố Lồi đậu xanh (Vigna radiata) có nguồn gốc Ấn Độ Trung Á, từ lan sang nhiều khu vực khác châu Á … 2.1.3 Thành phần hóa học vỏ đậu xanh Việc nghiên cứu thành phần hóa học vỏ đậu xanh thu hút quan tâm số tác giả Theo nghiên cứu Trần Vân Hiền cộng phương pháp hóa lý xác định hàm lượng flavonoid toàn phần vỏ hạt đậu xanh 0,8% Các flavonoid bao gồm vitexin 90,5% isovitexin 9,5% Hình NỘI DUNG 1.2 Cơng thức cấu tạo Vitexin Isovitexin Một nghiên cứu thành phần chất vô phương pháp đo quang phổ phát xạ tác giả Hoàng Quỳnh Hoa cho thấy vỏ hạt nhân hạt đậu xanh có 14 nguyên tố vơ cơ, có 12 ngun tố giống (Al, Si, Mg, Ca, Ba, Fe, Mn, Ni, Cu, P, Na, K) có nguyên tố khác (Sr Ti có vỏ hạt cịn Mo Pb có nhân hạt), nguyên tố K chiếm tỷ lệ nhiều hạt đậu xanh (5% vỏ hạt 10 % nhân hạt) 2.2 Flavonoid Flavonoid (hay bioflavonoids) nhóm sắc tố thực vật có vai trò lớn việc tạo màu sắc nhiều loại hoa Nhiều nghiên cứu gần cho thấy flavonoid có lẽ hữu ích việc điều trị ngăn ngừa nhiều tình trạng bệnh lý thể Ngày biết nhiều loại thực phẩm, nước trái cây, thảo mộc mật ong có tác động dược lý chúng có liên quan trực tiếp đến thành phần flavonoid Hình NỘI DUNG 1.3 Cấu trúc phân tử flavonoid 2.2.1 Nguồn gốc Năm 1936, Szent Gyorgy, dược sĩ người Hungari tách từ ớt chanh chất với vitamin C có tác dụng chữa chứng chảy máu mao mạch, củng cố thành mạch, ông gọi vitamin C2 vitamin P (P chữ đầu từ tiếng Pháp perméabilité – có nghĩa tính thấm) Về sau người ta thấy giới thực vật có nhiều hợp chất thứ sinh có đặc tính tương tự vitamin P đặt cho chúng tên chung flavonoid 2.2.2 Cấu trúc Hơn 4000 hợp chất flavonoids phân lập phân loại dựa vào cấu trúc hóa học Flavonoid chuỗi polyphenolic gồm 15 nguyên tử carbon hai vòng benzen liên kết đường thẳng có carbon Hình NỘI DUNG 1.4 Hệ thống C6-C3- C6 Flavonoid gồm vòng thơm vòng pyran Hình NỘI DUNG 1.5 Vịng thơm vịng pyran Các flavonoid dẫn chất polyphenol (có nhiều nhóm chức phenol) có nhiều loại thực vật, đa phần có màu vàng, số có màu đỏ, xanh, tím hay khơng có màu Về cấu trúc hóa học, flavonoid có khung chung C 6-C3-C6 gồm vịng benzen A, B vòng pyran C 2.2.3 Phân bố flavonoid thực vật Flavonoid gặp thực vật bậc thấp Trong ngành rêu thấy, dương xỉ số lượng flavonoid có mặt nhóm anthocyanin, flavanon, flavon, flavonol, chalcon, dihydrochalcon Bảng NỘI DUNG 1.1 Thành phần flavonoid (mg/100g) số loại thực phẩm 4-Oxoflavonoids Thực phẩm Anthocyanin Catechins Biflavans Bưởi 50 Cam 50-100 Táo 3-16 Mơ 10-18 25 Lê 1-5 5-20 1-3 Khoai tây 85-130 Nam việt quất 60-200 20 100 Quả lý chua 20-400 130-400 15 50 Nho 65-140 5-30 50 Mâm xôi 300-400 10-500 100-200 100-150 100-250 1-2 Củ hành 100-2000 Ngị tây 1400 Đậu khơ 20-75 50-90 0-25 10-1000 Cây xô thơm 1000-1500 (ngài đắng) Trà 5-50 Rượu vang đỏ 2-4 50-120 (Nguồn: Bảng thành phần thực phẩm Việt Nam, 2017) 2.2.4 Phân loại tính chất Có nhiều cách phân loại khác nhau, cách phân loại thường dùng dựa vào vị trí gốc aryl (vịng B) mức độ oxy hoá mạch 3C NỘI DUNG 3.1 Thời gian địa điểm làm đề tài Thời gian: 15/03/2017 đến 28/06/2017 Địa điểm thực đề tài: Trung tâm thí nghiệm thực hành trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm Tp.HCM 3.2 Vật liệu nghiên cứu 3.2.1 Nguyên liệu Nguyên liệu chọn nghiên cứu vỏ hạt đậu xanh, phế phẩm nông nghiệp thu gom từ sở nhà máy chế biến xay xát đậu xanh vỏ hạt đậu xanh thu từ trình làm giá thực phẩm (vỏ giá)… 3.2.2 Hóa chất Bảng NỘI DUNG 2.2 Các loại hóa chất sử dụng nghiên cứu STT Tên hóa chất Độ tinh khiết Hãng sản xuất Ethyl acetate 99,99% Trung Quốc Ethanol >99,7% Việt Nam Methanol 98% Trung Quốc 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) 99,99% Merck Acid ascorbic 99,99% Trung Quốc Dung dịch Folin 1N Trung Quốc Natri carbonat 99,99% Trung Quốc NaOH >96% Trung Quốc AlCl3.6H20 ≥99.7% Trung Quốc 10 Quercetin 98% Sigma aldrich 3.2.3 Thiết bị Bảng NỘI DUNG 2.3 Danh mục thiết bị sử dụng nghiên cứu Chủng loại/ STT Tên thiết bị Máy quang phổ PhotoLab 6100 VIS Máy siêu âm Sonics Bể ổn nhiệt Memmert Hãng sản xuất Thông số kỹ thuật Λ=400-1100nm Tần số: 20 kHz Công suất cực đại: 750W Nhiệt độ tối đa: 1250C Tốc độ cô quay: 50 đến 280 rpm Thiết bị cô quay Eyela chân khơng Khoảng chân khơng tối đa: 399.9Pa Độ xác nhiệt : ±0.30C Trọng lượng tối đa: 50g Cân xác định ẩm MB45 Tủ sấy Venticell Venticell Nhiệt độ: 0-2000C Lò nung Lenton Nhiệt độ: 0-10000C Trọng lượng tối thiểu: 0.5 g 3.3 Phương pháp nghiên cứu 3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm Mẫu vỏ đậu xanh Khảo sát thành phần hóa học Độ ẩm, tro toàn phần, hàm lượng flavonoid tổng Đánh giá khả kháng oxy hóa ngun liệu Thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến qúa trình trích ly flavonoid Loại dung mơi Tỷ lệ ngun liệu/ dung mơi Thời gian Nhiệt độ Thí nghiệm tối ưu hóa điều kiện trích ly Thời gian siêu âm Cơng suất siêu âm Sấy phun tạo chế phẩm Kiểm tra hàm lượng flavonoid tổng Đánh giá khả kháng oxy hóa chế phẩm Hình NỘI DUNG 2.6 Sơ đồ nghiên cứu 3.4 Phương pháp phân tích xử lý số liệu 3.4.1 Phương pháp phân tích  Xác định ẩm cân sấy ẩm MB50 (phụ lục 1A) 3.4.2 Phương pháp xử lý số liệu Trong nghiên cứu này, thí nghiệm tiến hành lặp lại ba lần, kết trình bày dạng giá trị trung bình ± giá trị sai số Kết tính tốn phần mềm Microft Office Excel 2010 phần mềm thống kê JMP Kết phân tích ANOVA với độ tin cậy 95%, so sánh khác biệt nghiệm thức qua phép thử LSD Quy trình mơ hình hóa tối ưu hóa thực nghiệm thực phần mềm JMP 10.0 (α = 5%) Đồ thị vẽ chương trình Microsoft Office Excel 2010 JMP 10.0 3.5 Nội dung nghiên cứu 3.5.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát lựa chọn loại nguyên liệu  Mục đích: Chọn loại ngun liệu có ưu điểm bật cho nhiều hàm lượng flavonoid, mang tính kinh tế, tận dụng phế phẩm 3.5.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát thành phần nguyên liệu  Mục đích: Sau lựa chọn loại nguyên liệu thí nghiệm 1, tiến hành xác định thành phần hóa học độ ẩm, tro tồn phần, hàm lượng flavonoid  Tiến hành: Nguyên liệu Xử lý mẫu Xác định độ ẩm Xác định tro toàn phần Xác định hàm lượng flavonoid Hình 2.3 Quy trình khảo sát nguyên liệu Đánh giá khả kháng oxi hóa NỘI DUNG 4.1 Kết thí nghiệm: Khảo sát nguyên liệu 4.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát loại nguyên liệu Hàm lượng TFC trích ly từ loại nguyên liệu Hàm lượng TFC trích ly từ loại nguyên liệu khảo sát Kết khảo sát sở để chọn loại nguyên liệu có hàm lượng TFC cao đem trích ly a b Hình NỘI DUNG 3.7 Đồ thị kết hàm lượng flavonoid tổng trích ly từ loại ngun liệu Vì vậy, nguyên liệu vỏ đậu xay xát chọn làm đối tượng để tiến hành khảo sát tiếp q trình trích ly 4.1.2 Kết thí nghiệm 2: Khảo sát thành phần nguyên liệu Kết thu được thể Bảng 3.1 số liệu xử lý Bảng NỘI DUNG 3.4 Các thông số nguyên liệu 4.2 Kết thí nghiệm khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến hiệu trích ly hàm Thông số Ẩm (%) Vỏ đậu 7.517 ± xay xát 0.154 Bột vỏ … đậu lượng flavonoid tổng Tro toàn phần (%) % Ức chế gốc Hàm lượng Hàm lượng tự DPPH polyphenol flavonoid tổng tổng (mgQE/g) (mgGAE/g) 2.281 ± 0.099 … 71.636 ± 0.364 0.555 ± 0.011 6.144 ± 0.360 … … … 4.2.1 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng loại dung môi đến TFC Với kỹ thuật trích ly rắn – lỏng việc lựa chọn dung mơi phù hợp quan trọng, có tính chất định đến hiệu q trình trích ly Ở khảo sát này, tiến hành trích ly 2g mẫu với nhiệt độ 50 0C, giờ, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 1/20 với loại dung mơi Điều mơ tả cụ thể đồ thị (Hình 3.2) Cụ thể thể Phụ lục 5B Hình NỘI hưởng loại lượng flavonoid DUNG 3.8 Ảnh dung môi đến hàm tổng (mgQE/g) (Dữ liệu dạng ±SD đánh dấu (a - d) thể có ý nghĩa 0.05) Các số khác biệt trình bày Các mức tỷ lệ ký tự khác khác biệt thống kê (P < liệu có kí tự chung khơng có ý nghĩa) Biểu đồ thể hàm lượng flavonoid tổng vỏ đậu xanh từ loại dung môi nước, ethanol, methanol ethyl acetate Trong dung môi khảo sát, dung môi nước cho hiệu cao Các kết có hồn tồn phù hợp độ phân cực dung môi dùng để chiết tách tính tan hợp chất flavonoid nguyên liệu Và thực tế, việc sử dụng dung mơi nước có nhiều thuận lợi ethanol methanol an tồn kinh tế 4.2.2 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi đến TFC Ảnh hưởng nguyên liệu/ dung môi đến hàm lượng flavonoid tổng thể biểu đồ Dựa vào kết phân tích trên, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 1/30 lựa chọn cho bước nghiên cứu 10 4.2.3 Thí nghiệm 5: Khảo sát ảnh hưởng thời gian đến TFC Tiến hành trích ly 2g mẫu với dung môi nước, giờ, tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi 1/30 nhiệt độ 500C mốc thời gian 30, 45, 60, 75 90 phút a b c c d Hình NỘI DUNG 3.9 Ảnh hưởng thời gian đến hàm lượng flavonoid tổng (mgQE/g) (Dữ liệu trình bày dạng ±SD Các mức tỷ lệ đánh dấu ký tự khác (a - d) thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0.05) Các số liệu có kí tự chung khác biệt khơng có ý nghĩa) Từ khảo sát trên, thời gian trích ly flavonoid tổng thích hợp 60 phút chọn để tiến hành bước khảo sát KẾT LUẬN 5.1 Kết luận Vỏ đậu xanh chứa hàm ẩm 7.517%, chế phẩm có hàm ẩm 6.05% … 5.2 Ý nghĩa/ kiến nghị  Nghiên cứu ứng dụng chế phẩm flavonoid vào lĩnh vực thực phẩm, y học… để tận dụng nguồn phế phẩm đạt tính kinh tế  … 11 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] Hiltunen R and Holm Y., "Basil: the genus Ocimum," ed: CRC Press, 2003 Phan Quốc Kinh, Giáo trình Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học: Nhà xuất giáo dục Việt Nam, 2011 Heim K E., et al., "Flavonoid antioxidants: chemistry, metabolism and structure-activity relationships," The Journal of Nutritional Biochemistry, vol 13, pp 572-584, 10/01/ 2002 Zhishen J., et al., "The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxide radicals," Food Chemistry, vol 64, pp 555-559, 03/01/ 1999 Formica J V and Regelson W., "Review of the biology of quercetin and related bioflavonoids," Food and Chemical Toxicology, vol 33, pp 1061-1080, 12/01/ 1995 Lê Văn Việt Mẫn, Công nghệ chế biến thực phẩm: Nhà xuất Đại học Quốc Gia TP.HCM, 2011 Nguyễn Hải Hà, "Nghiên cứu trích ly polyphenol từ trà Camellia sinensis (L.)," Luận văn thạc sĩ, Trường Đại Học Bách Khoa TP.HCM, 2006 Nguyễn Năng Vinh Nguyễn Thị Minh Tú, Công nghệ chất thơm thiên nhiên: Nhà xuất Bách Khoa Hà Nội, 2009 Đình Văn Đệ., "Sản xuất chất thơm thiên nhiên tổng hợp," pp 11-12, 2004 Lê Tiến Khoan, Lý Thuyết Thiết Bị Hình Ảnh Y Tế vol 2: Nhà Xuất Bản Giáo Dục, 2008 Rodrigues S., et al., "Optimization of ultrasound extraction of phenolic compounds from coconut (Cocos nucifera) shell powder by response surface methodology," Ultrasonics Sonochemistry, vol 15, pp 95-100, 01/01/ 2008 Chendke P K and Fogler H S., "Macrosonics in industry," Ultrasonics, vol 13, pp 31-37, Jan 1975 Jing-Ping Z., et al., "Extraction process for helicid from helicid nilagirica beed," Chinese Journal of Pharmaceuticals, Nov 1991 Gharsallaoui A., et al., "Applications of spray-drying in microencapsulation of food ingredients: An overview," Food Research International, vol 40, pp 1107-1121, 2007 Sansone F., et al., "Flavonoid microparticles by spray-drying: Influence of enhancers of the dissolution rate on properties and stability," Journal of Food Engineering, vol 103, pp 188-196, 03/01/ 2011 Hương N T., "Nghiên cứu thành phần hóa học Vỏ đậu xanh," Trường Dại học Dược Hà Nội2011 Vongsak B., et al., "Maximizing total phenolics, total flavonoids contents and antioxidant activity of Moringa oleifera leaf extract by the appropriate 12 [18] [19] [20] [21] [22] [23] [24] [25] [26] [27] [28] [29] extraction method," Industrial Crops and Products, vol 44, pp 566-571, 01/01/ 2013 Masters K., Spray drying, 1972 Howard L and Pandjaitan N., "Pressurized liquid extraction of flavonoids from spinach," Journal of food science, vol 73, 2008 Cheng W et al, "Anti-inflammatory and immunomodulatory activities of the extracts from the inflorescence of Chrysanthemum indicum Linne.," Journal of Ethnopharmacology , 2005, 101, pp.334-337 Mat Nor N A and Arof A K., "On statistical analysis of factors affecting anthocyanin extraction from Ixora siamensis," Optical Materials, vol 60, pp 462-466, 10/01/ 2016 Trần Vân Hiền, Phạm Hoàng Ngọc, "Phân lập nhận dạng số flavonoid từ CHV (Chrysanthemum indicum L.) trồng Việt Nam ," ed: Tạp chí Dược liệu , 2008 Nicolin D J., et al., "Study of uncertainty in the fitting of diffusivity of Fick's Second Law of Diffusion with the use of Bootstrap Method," Journal of Food Engineering, vol 184, pp 63-68, 2016/09/01/ 2016 Li X., et al., "Nitric oxide mediates brassinosteroid-induced flavonoid biosynthesis in Camellia sinensis L," Journal of Plant Physiology, vol 214, pp 145-151, 7/ 2017 M B., " Influence of extraction methods on stability of flavonoids," Journal of ChromatographyA., 2011, 1218, pp.2505-2512 Sansone F., et al., "Flavonoid microparticles by spray-drying: Influence of enhancers of the dissolution rate on properties and stability," Journal of Food Engineering, vol 103, pp 188-196, 2011 Huang W., et al., "Optimised ultrasonic-assisted extraction of flavonoids from Folium eucommiae and evaluation of antioxidant activity in multi-test systems in vitro," Food Chemistry, vol 114, pp 1147-1154, 2009/06/01/ 2009 Nguyễn Trọng Điệp, Nguyễn Tùng Linh, Nguyễn Thanh Hải, , "Nghiên cứu chiết xuất flavonoid toàn phần từ Cúc hoa vàng (Chrysanthemum indicum L.)," Tạp chí y – dược học quân sự, vol 9, pp 38-45, 2013 Lê Thị Mùi, Kiểm nghiệm phân tích thực phẩm: Nhà Xuất Bản Giáo Dục, 2009 13