Tiểu luận Chương trình cao họcNỘI TIẾT HỌC

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Tiểu luận Chương trình cao học NỘI TIẾT HỌC GVHD: PGS TS TRẦN LÊ BẢO HÀ PGS TS NGUYỄN TƯỜNG ANH SVTH: TRỊNH THỤY THANH GIANG ĐẶNG TRƯỜNG SƠN KHÓA 26/2016 – SINH LÝ ĐỘNG VẬT TP HỒ CHÍ MINH - 2017 NỒNG ĐỘ AMH CĨ BỊ GIẢM Ở NHỮNG NGƯỜI PHỤ NỮ KHỎE MẠNH MANG ĐỘT BIẾN BRCA1/2? CÂU HỎI NGHIÊN CỨU: Người mang gen đột biến BRCA1/2 dự trữ buồng trứng có bị suy giảm so với người không mang gen đột biến hay không (dựa nồng độ huyết anti-Müllerian hormone (AMH))?` TỔNG KẾT CÂU TRẢ LỜI: Kết nghiên cứu cho thấy người mang gen đột biến BRCA1/2 có mức huyết AMH không thấp so với người không mang gen đột biến, sau điều chỉnh yếu tố gây nhiễu tiềm ẩn NHỮNG KIẾN THỨC ĐÃ BIẾT: Nhiều nghiên cứu cho gen BRCA đóng vai trị q trình suy giảm dự trữ buồng trứng, nghiên cứu trước cho thấy khơng có đồng mức AMH huyết tình trạng đột biến gen BRCA Do đó, chưa rõ ràng liệu người mang đột biến BRCA1/2 thực có nguy giảm thời gian sinh sản hay khơng KÍCH THƯỚC, THỜI GIAN VÀ THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU: Một nghiên cứu đa trung tâm thực từ tháng năm 2012 đến tháng năm 2015 với 255 phụ nữ Nghiên cứu bao gồm 120 người mang gen đột biến BRCA1/2 120 người không mang gen đột biến chứng tỏ khác biệt nồng độ AMH 0,40 μg/l (SD ± 0,12 μg/l, α = 0.05) ĐỐI TƯỢNG THAM GIA/VẬT LIỆU, SẮP XẾP NGHIÊN CỨU, PHƯƠNG PHÁP: Phụ nữ khỏe mạnh tuổi từ 18-45 giới thiệu đến khoa Lâm sàng di truyền thực xét nghiệm tiên lượng BRCA1/2 đột biến BRCA1/2 gia đình yêu cầu tham gia Một đánh giá chọn lọc cắt ngang thực cách đo nồng độ AMH huyết điền vào bảng câu hỏi Phân tích hồi quy tuyến tính đa biến để điều chỉnh độ tuổi, tình trạng hút thuốc tình trạng sử dụng biện pháp ngừa thai nội tiết tố (hormone) thực dựa nồng độ AMH huyết chuyển đổi logarit KẾT QUẢ CHÍNH VÀ VAI TRỊ CỦA SỰ NGẪU NHIÊN: Trong số 823 phụ nữ có đủ điều kiện tham gia có: 421 (51,2%) người sẵn sàng tham gia, 166 (39%) người không đáp ứng tiêu chuẩn nhận vào, 255 người có sẵn liệu để phân tích; 124 người mang đột biến BRCA1/2 131 người khơng mang gen đột biến Mức AMH trung bình người mang đột biến 1,90 μg/l [0,11 - 19,00] so với 1,80 μg/l [0,11 - 10,00] nhóm khơng mang gen đột biến (P = 0,34) Phân tích hồi quy tuyến tính điều chỉnh cho thấy mức AMH không giảm người mang gen đột biến (sự thay đổi tương đối = 0,98 (95%Cl, 0,77-1,22), P = 0,76) NHỮNG GIỚI HẠN, CÁC LÝ DO ĐỂ CẢNH BÁO: Những người tham gia tương đối cịn trẻ Khơng đủ khả để phân tích phân tử đột biến BRCA1 BRCA2 riêng rẻ Mức AMH bị ảnh hưởng việc sử dụng thuốc tránh thai nội tiết, tỷ lệ người mang gen người không mang gen tương tự người sử dụng không sử dụng Những điều chỉnh thực để sửa chữa cho rối loạn tiềm ẩn phân tích nghiên cứu Ý NGHĨA RỘNG HƠN CỦA NGHIÊN CỨU Hạn chế phân tích tài liệu tham khảo cho nghiên cứu Từ theo dõi kiểm sốt tốt với phép đo AMH lặp lại để xác định liệu người mang gen có nguy dự trữ buồng trứng thấp, nghiên cứu hướng dẫn rõ ràng cẩn thận SỐ ĐĂNG KÝ THỬ NGHIỆM: NTR số 4324 Từ khoá: anti-Müllerian hormone / BRCA mutation / ovarian reserve / ovarian aging / genes GIỚI THIỆU Sự lão hóa buồng trứng kết giảm dự trữ buồng trứng, bao gồm số lượng chất lượng noãn bào cuối dẫn đến mãn kinh Sự đa dạng độ tuổi thời kỳ mãn kinh tự nhiên (Age at Natural Menopause - ANM) dân số nói chung (40-60 năm) cho thấy khác biệt đáng kể q trình lão hóa Thời điểm mãn kinh liên quan đến khởi đầu nhiều nguy sức khoẻ phụ nữ Do đó, nghiên cứu yếu tố xác định suy giảm trữ lượng buồng trứng ANM giúp làm sáng tỏ đường sinh học tiềm ẩn chế liên quan đến vô sinh nguy sức khoẻ Quá trình biến thiên suy giảm dự trữ buồng trứng chủ yếu kết hợp yếu tố di truyền không di truyền lối sống môi trường Các nghiên cứu liên kết gen đại diện xác định loci liên quan đến ANM chủ yếu tham gia vào việc sửa chữa DNA chức miễn dịch Người ta thấy gen BRCA, có liên quan đến việc sửa chữa DNA đứt gãy (Double Strand Break - DSB), khơng quan trọng việc phịng ngừa ung thư mà cịn đóng vai trị q trình suy giảm dự trữ buồng trứng Một tổng kết gần mô tả mối liên hệ số loại tổn thương DNA với sửa chữa lão hóa Tổng kết đề cập đến ảnh hưởng việc sửa chữa DSB DNA chết tế bào lão hoá Một nghiên cứu thực nghiệm chứng minh chuột đột biến gen BRCA1 có tế bào trứng sinh giảm khôi phục BRCA1 tế bào trứng chuột dẫn đến gia tăng nhạy cảm stress mơi trường, tích tụ DSBs chết tế bào Trong nghiên cứu người, kết mâu thuẫn tìm thấy liên quan đến tình trạng đột biến gen BRCA đáp ứng buồng trứng gia tăng kích thích có kiểm soát Anti-Müllerian hormone (AMH) tạo tế bào hạt nang trứng giai đoạn sau trình phát triển nang trứng AMH biomarker xác để đánh giá định lượng dự trữ buồng trứng Một số nghiên cứu báo cáo mối liên hệ ngược đột biến BRCA nồng độ AMH, nghiên cứu khác xác nhận kết Ngoài ra, nghiên cứu suy giảm khả sinh sản số lần mang thai vấn đề khả sinh sản báo cáo người mang đột biến gen BRCA Nhìn chung, chưa rõ liệu có liên quan tình trạng đột biến gen BRCA tiến triển q trình lão hóa buồng trứng Nếu gen BRCA1/2 xác nhận đóng vai trị q trình giảm trữ lượng buồng trứng, ảnh hưởng đánh giá sức khoẻ sinh sản phụ nữ mang đột biến BRCA Nghiên cứu nhằm mục đích tinh chỉnh kết nghiên cứu trước đó, cho thấy có hay khơng việc giảm dự trữ buồng trứng người mang gen đột biến BRCA cách so sánh nồng độ AMH huyết người mang đột biến gen BRCA1/2 người không mang gen đột biến VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU, ĐỐI TƯỢNG THAM GIA VÀ THU THẬP DỮ LIỆU Một nghiên cứu cắt ngang đa trung tâm nhằm nghiên cứu tương quan tình trạng đột biến gene BRCA1/2 và dự trữ buồng trứng cách đo mức huyết AMH Sau đó, nghiên cứu đánh giá tiền sử khả sinh sản cách sử dụng liệu tự báo cáo thu thập bảng câu hỏi Tất phụ nữ khỏe mạnh từ 18 đến 45 tuổi, giới thiệu đến khoa lâm sàng di truyền kiểm tra tiên lượng BRCA1/2 mang đột biến BRCA1/2 gia đình Những người tham gia tuyển chọn từ tháng năm 2012 đến tháng năm 2015 Hai phương pháp tiếp cận sử dụng để lựa chọn người tham gia: Trong phương pháp tiếp cận A, người tham gia cung cấp mẫu máu bổ sung thời điểm thu thập mẫu máu để kiểm tra DNA Trong phương pháp tiếp cận B, phụ nữ có xét nghiệm dự đốn DNA vịng năm, biết tình trạng đột biến gen BRCA1/2, họ yêu cầu đến bệnh viện để lấy mẫu máu lần Cả người mang gen đột biến không mang gen đột biến đưa vào phương pháp tiếp cận B Hai trung tâm sử dụng hai phương pháp Đại học Y khoa Utrecht Trung tâm Y tế Đại học Maastricht Các trung tâm khác sử dụng phương pháp A Những phụ nữ tham gia sàng lọc BRCA phải đáp ứng tiêu chí có chu kỳ kinh nguyệt đặn (chu kỳ kinh nguyệt trung bình 21-35 ngày thời gian kinh nguyệt dự đốn vịng ngày) có tiền sử chu kỳ kinh nguyệt đặn trước đến sử dụng nội tiết tố tránh thai Tiêu chuẩn áp dụng để loại trừ trường hợp có hội chứng buồng trứng đa nang (PCOS) Các lý khác để loại trừ có tiền sử ung thư vú ung thư buồng trứng, triệu chứng phẫu thuật mãn kinh (ví dụ phẫu thuật cắt bỏ tử cung trước mãn kinh phẫu thuật cắt hai bên buồng trứng), có tiền sử phẫu thuật buồng trứng, hóa trị liệu/xạ trị, nhiễm HIV, rối loạn nội tiết bệnh tự miễn, tự chẩn đoán PCOS rối loạn di truyền đột biến BRCA1/2, liên quan đến thiếu hụt buồng trứng nguyên phát Những người mang gen đột biến định nghĩa phụ nữ có mang gen đột biến BRCA1, BRCA2 đột biến hai gen BRCA1 BRCA2 Những người không mang mầm bệnh phụ nữ không mang đột biến gây bệnh mà trước xác nhận gia đình họ Mẫu máu thu thập khơng phân biệt số ngày chu kỳ lưu trữ -80°C Tất người tham gia yêu cầu hoàn thành bảng câu hỏi tiền sử y khoa/phẫu thuật/kinh nguyệt/sinh sản, biện pháp tránh thai sử dụng, yếu tố lối sống điều trị muộn PHÂN TÍCH AMH (AMH ASSAY) Sau máu thu nhận (từ tháng năm 2012), huyết tương dùng để đánh giá AMH phân tách trực tiếp đông lạnh vòng 1-2 Tháng năm 2015, tất mức AMH đo phòng xét nghiệm nội tiết chẩn đoán Trung tâm Y tế Đại học Utrecht (Utrecht, Hà Lan) Tất phép đo thực phân tích hàng loạt robot DS2 ELISA máy phân tích phản ứng đơn chất (AMH Gen II ELISA, A79765, Beckman Coulter, Inc., USA) Giới hạn phát 0,16 μg/l Sự biến thiên xét nghiệm 10% 0,27 μg/l 4,7% 3.9 μg/l (n = 18) SỰ PHÊ DUYỆT ĐẠO ĐỨC NGHIÊN CỨU Nghiên cứu Hội đồng xét duyệt tất trung tâm tham gia (n = 5) chấp thuận đăng ký Cục đăng kí thử nghiệm Hà Lan (www.trialregister.nl; NTR 4324) Tất người tham gia viết giấy xác nhận PHÂN TÍCH THỐNG KÊ Các phân tích thống kê thực phần mềm SPSS 21.0 cho Windows (SPSS, Chicago, IL) Các tham số mô tả báo cáo gồm trung vị [khoảng] liệu phân loại dạng phần trăm (%) So sánh đặc điểm đối tượng nghiên cứu thực cách sử dụng Chi-square test Mann-Whitney U-test, tùy thuộc vào biến số Thống kê có ý nghĩa đạt giá trị P