Nghiên cứu khả năng truyền đặc điểm đề kháng kháng sinh của probiotic sang vi khuẩn khác trong điều kiện in vitro

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết là kiểm tra khả năng truyền gen đề kháng kháng sinh từ probiotic sang Bacillus subtilis PY79 in vitro.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TRUYỀN ĐẶC ĐIỂM ĐỀ KHÁNG KHÁNG SINH CỦA PROBIOTIC SANG VI KHUẨN KHÁC TRONG ĐIỀU KIỆN IN VITRO Lê Văn Hồi Trân1, Vũ Thanh Thảo1, Trần Cát Đơng1 TĨM TẮT Đặt vấn đề: Một số chủng probiotic chứa gen kháng kháng sinh nhiễm sắc thể, tiềm ẩn nguy truyền gen sang vi sinh vật khác, đặc biệt vi sinh vật gây bệnh phương thức chuyển gen theo chiều ngang Mục tiêu: Kiểm tra khả truyền gen đề kháng kháng sinh từ probiotic sang Bacillus subtilis PY79 in vitro Đối tượng phương pháp: MIC vi khuẩn probiotic B subtilis Y79 xác định phương pháp pha loãng kháng sinh thạch ADN nhiễm sắc thể probiotic chiết biến nạp vào B subtilis PY79 hóa biến nạp Thể biến nạp khảo sát hình thái khuẩn lạc, nhuộm Gram, xác định MIC kiểu gen rep-PCR Kết quả: Khi chuyển gen vi khuẩn probiotic vào B subtilis Y79 thu 12 thể biến nạp có MIC với chloramphenicol cao gấp 4-32 lần so với MIC B subtilis PY79; 10 thể biến nạp có MIC với tetracyclin cao MIC B subtilis PY79 Trong số 22 thể biến nạp, chủng có kiểu gen tương đồng khoảng 80% với B subtilis PY79, chủng có kiểu gen tương đồng 100% với B subtilis PY79, chứng tỏ kiểu gen thể biến nạp thay đổi Kết luận: Quá trình chuyển gen đề kháng kháng sinh theo chiều ngang xảy từ probiotic sang B subtilis PY79 qua biến nạp in vitro Từ khóa: Đề kháng kháng sinh, Bacillus, probiotic, biến nạp, chuyển gen theo chiều ngang ABSTRACT STUDY ON TRANSFER OF ANTIBIOTIC-RESISTANCE CHARACTERISTIC FROM PROBIOTICS TO OTHER BACTERIAL SPECIES IN VITRO Le Van Hoai Tran, Vu Thanh Thao, Tran Cat Dong * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 25 - No - 2021: 77 - 83 Background: Some probiotic strains possess intrinsic antibiotic-resistance genes have potential risk of spreading these genes to other bacterial species, especially in case of pathogenic bacteria by horizontal gene transfer Objectives: Investigate the possibility of transformation antibiotic-resistance genes from probiotics to Bacillus subtilis PY79 in vitro Methods: Minimal inhibitory concentration (MIC) of probiotics and B subtilis PY79 were determined using agar dilution method Genomic DNA of probiotic strains was extracted and transformed to B subtilis PY79 via chemical transformation Transformants were characterized colony morphology, Gram stain, determined MIC and genotype by rep-PCR Results: Transfer of probiotic’s D A to B subtilis PY79 yield 12 transformants that showed MIC value for chloramphenicol to 32 times higher than the value of B subtilis PY79, 10 transformants had MIC value for tetracyclin higher than B subtilis PY79 Among 22 transformants, there were strains had approximately 80% genotype similarity to B subtilis PY79, none of these strains showed 100% genotype similarity to B subtilis Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: DS Lê Văn Hoài Trân ĐT: 0387861271 B - Khoa học Dược Email: lvhtran@ump.edu.vn 77 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 PY79, indicated that genotype of transformants have changed Conclusions: Horizontal transfer of antibiotic-resistance genes is possible from probiotic strains to B subtilis PY79 through in vitro transformation Keywords: antibiotic-resistance, Bacillus, probiotic, transformation, horizontal gene transfer gen đề kháng kháng sinh có nguồn gốc từ ADN ĐẶT VẤNĐỀ nhiễm sắc thể probiotic qua đường biến Probiotic sản phẩm có chứa probiotic nạp tiếp hợp Jose cộng cho men vi sinh hỗ trợ tiêu hóa hay sản phẩm lên gen khơng thể truyền theo chiều ngang cho men từ sữa chứng minh có nhiều tác lồi khác(7), Bozdogan cộng sự(12) khơng động có lợi cho người sử dụng tái cân thực thành công việc chuyển gen kháng hệ vi sinh vật đường ruột, kích thích hệ thống macrolid ADN Bacillus clausii sang miễn dịch thể(1) Tác động có lợi Enterococcus faecalis JH2-2, E faecium HM1070 probiotic vật chủ thông qua nhiều chế B subtilis UCN19 in vitro khác cạnh tranh bám dính lên đường tiêu hóa, điều hịa miễn dịch khả tiết chất kháng khuẩn kìm hãm phát triển vi sinh vật khác(2,3) Nhóm vi khuẩn lactic (Lactic Acid Bacteria-LAB) biểu nhiều loại protein màng ngồi với vai trị trung gianh bám dính lên chất nhầy tế bào biểu mô ruột(4) Tương tác vi khuẩn tế bào biểu mô ruột làm tăng khả bám dính chúng đồng thời tăng thải loại vi khuẩn gây bệnh khỏi đường tiêu hóa(5) Một số vi khuẩn thuộc chi Lactobacillus hệ tiêu hóa người tiết bacteriocin lactacin B từ L acidophilus nisin từ L casein có khả kìm hãm phát triển vi khuẩn khác môi trường sống(6) Nghiên cứu nhằm kiểm tra đặc tính đề kháng kháng sinh từ probiotic Bacillus clausii Enterococcus faecalis Có khả truyền cho B subtilis PY79 thông qua biến nạp điều kiện in vitro hay khơng Ngồi chế nêu trên, khả đề kháng kháng sinh lợi nhằm tăng khả cạnh tranh probiotic với vi khuẩn đường ruột, trường hợp sử dụng chung probiotic với kháng sinh điều trị số bệnh lý(7) Tuy nhiên, probiotic sản phẩm dùng ngày nên hệ tiêu hóa trở thành nơi tích lũy gen probiotic đề kháng kháng sinh(8) Thông qua đường tiếp hợp biến nạp, gen truyền cho vi khuẩn khác hệ vi sinh vật đường ruột(8) Nhiều nghiên cứu in vitro in vivo chứng minh gen đề kháng kháng sinh từ plasmid probiotic có khả truyền cho vi khuẩn khác thông qua tiếp hợp(9-11) Tuy nhiên chưa có nghiên cứu báo cáo truyền Hóa chất, mơi trường TSA (HiMedia-Ấn Độ), TSB (HiMedia-Ấn Độ), MHA (HiMedia-Ấn Độ); Ampicillin (Sigma Aldrich), Chloramphenicol (Sigma Aldrich), Amikacin (Sigma Aldrich), Gentamycin (Sigma Aldrich), Tetracyclin (Sigma Aldrich), Erythromycin (Sigma Aldrich); Oxacillin (Fluka), Levofloxacin (Fluka) Kit định danh vi khuẩn API 20 E (bioMérieux-Pháp) 78 ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Vật liệu Chủng vi sinh vật Bacillus subtilis PY79 (Phịng thí nghiệm Vi Sinh Cơng Nghệ Dược, Khoa Dược, ĐH Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh-PTN); Bacillus clausii, Enterococcus faecalis phân lập từ chế phẩm probiotic chứa chủng vi khuẩn tương ứng thị trường Kit chiết ADN Wizard ® Genomic DNA Purification Kit (Promega) Mồi cho PCR MBO REP1 (Qiagen) CCGCCGTTGCCGCCGTTGCCGCCG-3’) (5’- B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Định danh vi khuẩn probiotic Cấy ria hai chủng vi khuẩn probiotic môi trường TSA để khuẩn lạc đơn Định danh vi khuẩn E feacalis kit API 20 E kết hợp với phản ứng lên men lactose lên men pyruvate Probiotic B clausii định danh giải trình tự 16S rADN Xác định MIC kháng sinh MIC probiotic B subtilis PY79 xác định theo hướng dẫn CLSI thử nghiệm nhạy cảm kháng sinh cho vi khuẩn hiếu khí phương pháp pha lỗng(13) Các kháng sinh chọn đại diện cho nhựng nhóm kháng sinh sử dụng lâm sàng: ampicillin, oxacillin (nhóm beta lactam); amikacin, gentamycin (nhóm aminoglycosid); chloramphenicol (nhóm phenicol); erythromycin (nhóm macrolid); levofloxacin (nhóm quinolon); tetracyclin (nhóm cyclin) Chuẩn bị môi trường Pha stock loại kháng sinh với nồng độ gấp 20 lần nồng độ cao Bảng Từ dung dịch stock (dung dịch số 0), pha loãng theo cấp số để dược dãy dung dịch (1-8) có nồng độ kháng sinh gấp 10 lần nồng độ thử nghiệm Pha loãng dung dịch 1-8 môi trường MHA với tỉ lệ 1:9 để đạt tới nồng độ thử nghiệm Dãy nồng độ kháng sinh thể Bảng Chuẩn bị huyền dịch vi khuẩn Pha loãng trực tiếp vi khuẩn nước muối sinh lí, chỉnh độ đục huyền dịch vi khuẩn 0,5 McFarland (giá trị OD600 huyền dịch nằm khoảng 0,08-0,1), sau pha lỗng 10 lần nước muối sinh lý Huyền dịch sau pha lỗng có mật độ vi khuẩn khoảng 107 CFU/ml(13) Chấm khoảng µl huyền dịch vi khuẩn lên mơi trường MHA chứa kháng sinh, theo dãy nồng độ Bảng Ủ môi trường 35± °C Đọc kết sau 16 – 20 MIC giá trị thấp nồng độ kháng sinh bổ sung vào mơi trường mà vi khuẩn khơng phát triển B - Khoa học Dược Nghiên cứu Từ giá trị MIC, xác định kháng sinh làm môi trường chọn lọc cho thí nghiệm Bảng Nồng độ kháng sinh dùng thử nghiệm STT Tên kháng sinh Ampicillin (Amp) Oxacillin (Oxa) Amikacin (Ami) Gentamycin (Gen) Chloramphenicol (Chl) Erythromycin (Ery) Levofloxacin (Lev) Tetracyclin (Tet) Khoảng nồng độ (µg/ml) 0,016 – 4,0 0,03 – 0,5 – 128 0,25 – 64 0,25 – 64 0,06 – 16 0,06 – 16 0,125 – 32 Biến nạp ADN nhiễm sắc thể vi khuẩn probiotic vào B subtilis PY79 khả nạp Chiết ADN probiotic Vi khuẩn probiotic tăng sinh môi trường TSB Sau 16 giờ,thu dịch nuôi cấy chiết ADN Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega) Xác định nồng độ háng sinh cho môi trường chọn lọc Tế bào B.subtilis PY79 khả nạp chuẩn bị qua hai bước môi trường dinh dưỡng tối thiểu(14) Trải 100 µL tế bào khả nạp lên mơi trường MHA có bổ sung kháng sinh với nồng độ tăng dần từ MIC B subtlis PY79, ủ 1620 nhiệt độ 35 ± °C Chọn nồng độ kháng sinh bổ sung mà nồng độ tế bào khả nạp khơng mọc Biến nạp 500 µl tế bào khả nạp B subtilis PY79 cho vào eppendorf 1,5 ml; thêm vào 20 µg ADN probiotic; lắc eppendorf 200 vòng/phút 30 phút 37 °C; trải 100 µl huyền dịch vi khuẩn lên mơi trường MHA có chứa nồng độ kháng sinh xác trước Kiểm tra kiểu hình, tính nhạy cảm kháng sinh kiểu gen thể biến nạp Kiểm tra kiểu hình Cấy ria thể biến nạp lên mơi trường TSA, sau 24 quan sát hình dạng, kích thước, màu sắc khuẩn lạc Nhuộm Gram quan sát thể biến nạp qua kính hiển vi với độ phóng 79 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 đại 1000X, chụp lại mẫu phần mềm ToupView 2.0 Ghi nhận đặc điểm về; kích thước, cách xếp tế bào vi khuẩn mẫu nhuộm Gram Tính nhạy cảm kháng sinh Thể biến nạp xác định MIC So sánh khả đề kháng kháng sinh thể biến nạp với chủng probiotic B subtilis PY79 KẾT QUẢ Định danh vi khuẩn probiotic Dựa vào kết phản ứng sinh hóa theo kit API 20 E, phản ứng lên men lactose dương tính, phản ứng lên men pyruvate dương tính, xác định probiotic E faecalis(16) Kết giải trình tự 16S rADN cho kết probiotic B clausii Kiểm tra thay đổi kiểu gen Xác định MIC kháng sinh ADN thể biến nạp, B subtilis PY79 chiết Wizard® Genomic DNA Purification Kit (Promega) Thực phản ứng rep-PCR (50 µl) với mồi MBO REP1 (5’CCGCCGTTGCCGCCGTTGCCGCCG-3’)(15) Chương trình nhiệt cho phản ứng PCR sau: biến tính ADN 94 °C phút, thực 32 chu kỳ với 94 °C phút, 52 °C phút, 72 °C phút, kết thúc 72 °C phút Điện di sản phẩm rep-PCR gel polyacrylamide 5% So sánh kết điện di phần mềm Bionumeric V3.00 MIC biện giải vi khuẩn thử nghiệm thể Bảng Giá trị biện giải cho chi Bacillus lấy từ tài liệu CLSI M45-A, 2006(17) giá trị biện giải cho chi Enterococcus lấy từ CLSI M100-S23, 2013(18) Kháng sinh chọn bổ sung vào môi trường chọn lọc phải thỏa tiêu chí (1) B subtilis PY79 nhạy cảm (2) probiotic đề kháng với kháng sinh chọn Từ Bảng 2, oxacillin, chloramphenicol erythromycin dùng chọn lọc thể biến nạp từ thí nghiệm chuyển gen B clausii; amikacin, gentamycin, tetracyclin dùng chọn lọc thể biến nạp chuyển gen E faecalis Bảng Kết MIC chủng vi khuẩn với kháng sinh thử nghiệm Chủng vi khuẩn B subtilis PY79 B clausii E faecalis Amp S 0,12 S 0,5 S,a 0,5 Oxa S,a 0,25 R,a - Ami S 0,5 S 0,25 R,b 64 MIC (µg/ml) Gen Chl S S 0,06 S R 0,25 64 R,b S 16 Ery S 0,06 R 32 S Lev S 0,25 S 0,25 S Tet S S R 32 Chú thích: R: Kháng; I: Trung gian; S: Nhạy; a: Khơng có giá trị biện giải cho chi Bacillus, dựa theo giá trị biện giải cho S aureus; b Biện giải theo chi Bacillus; “-“ không thực trường ủ nhiệt độ 35 ± °C Sau 20 giờ, Biến nạp ADN vi khuẩn probiotic vào tế khơng có khuẩn lạc xuất bào khả nạp Xác định nồng độ háng sinh cho mơi trường chọn lọc Trải 100 µl tế bào khả nạp lên môi trường MHA bổ sung kháng sinh chọn với nồng độ tăng dần từ MIC B subtilis PY79 Sau khảo sát, nồng độ kháng sinh bổ sung vào môi trường thể Bảng Tại nồng độ kháng sinh tương ứng bảng trên, trải 100 µl tế bảo khả nạp môi 80 Bảng Nồng độ kháng sinh bổ sung vào môi trường chọn lọc Tên kháng sinh Oxacillin Nồng độ bổ sung (µg/ml) Amikacin 25 Gentamycin 7,5 Chloramphenicol Erythromycin Tetracyclin 7,5 B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Biến nạp ADN vi khuẩn probiotic Thí nghiệm thu 12 thể biến nạp mơi trường có chứa kháng sinh chloramphenicol 10 thể biến nạp mơi trường có tetracyclin Trên mơi trường có kháng sinh khác khơng thấy xuất thể biến nạp Nghiên cứu Nhuộm Gram quan sát thể biến nạp kính hiển vi cho thấy tất chúng trực khuẩn Gram dương, kích thước 2,4-4ì0,8 àm, sp xp riờng l hoc thnh chui (Hỡnh 2) Khơng có khác biệt vi thể thể biến nạp B subtilis PY79 Kiểm tra đặc điểm thể biến nạp Kiểm tra thay đổi kiểu hình Đối với 12 chủng C1-C12, chủng C8, C10C12 cho hình thái khóm giống với B subtilis PY79 Trong số 10 chủng T1-T10, chủng T3-T6, T8-T10 có hình thái khuẩn lạc tương tự Những thể biến nạp cịn lại có hình thái thay đổi so với B subtilis PY79 Hình thái khuẩn lạc có khác biệt rõ rệt chủng T1, C9 so sánh với B subtilis PY79 (Hình 1) Ở chủng T1, kích thước đa số khuẩn lạc mm nhỏ nhiều so với B subtilis PY79 Đối với chủng C9, kích thước khóm nhỏ hình dạng khóm đa giác so với khóm trịn B subtilis PY79 Đặc điểm khuẩn lạc thể biến nạp mơ tả Bảng Hình Hình thái khuẩn lạc B subttilis PY79 (PY79) số thể biến nạp Bảng So sánh hình thái khuẩn lạc thể biến nạp với B subtilis PY79 Chủng Hình thái khuẩn lạc Dẹt bằng, bìa trịn, đường kính 3-4 mm, B sutilis PY79 màu trắng ngà C1, C2, C3, C4, C5, Lồi, bìa trịn, đường kính 3-4 mm màu C6, C7 trắng ngà Dẹt bằng, bìa đa giác, đường kính 1-3 C9 mm, màu trắng ngà Dẹt bằng, bìa trịn, đường kính 3-5 mm, C8, C10, C11, C12 màu trắng ngà Lồi, bìa trịn, đường kính 0,5-1 mm, T1, T2, T7 màu trắng ngà T3, T4, T5, T6, T8, Dẹt bằng, bìa trịn, đường kính 3-5 mm, T9, T10, màu trắng ngà B - Khoa học Dược Hình Hình ảnh nhuộm Gram B subtilis PY79 (PY79) số thể biến nạp Tính nhạy cảm kháng sinh Chủng C1 – C12, T1 – T10 kiểm tra tính nhạy cảm với kháng sinh tương ứng chloramphenicol tetracyclin (Bảng 5) Giá trị MIC chủng C1-C12 chloramphenicol chủng T1-T10 tetracyclin cao so với B subtilis PY79 Với kháng sinh chloramphenicol, 12 thể biến nạp có giá trị MIC mức 16 – 64 µg/ml, có chủng kháng mức trung gian (MIC = 16 µg/ml) chủng đề kháng (MIC ≥ 32 µg/ml) Chủng C9 có mức đề kháng ngang với probiotic B clausii (MIC =64 µg/ml) Đối với tetracyclin, 10 thể biến nạp có giá trị MIC mức 16 - 64 µg/ml, chủng kháng mức trung gian (MIC = 16 µg/ml) chủng đề kháng (MIC ≥ 32 µg/ml) Trong chủng T4 có mức kháng cao so với probiotic E faecalis (MIC = 32 µg/ml) Kiểm tra thay đổi kiểu gen Theo phả hệ (Hình 3) chủng C1 – C12, có hai kiểu gen thể tương đồng 65% A (với chủng: C1, C2, C3, C5, C6, C7, C9) B (5 chủng: C8, C10, C11,C12, B subtilis PY79) Kết cịn cho thấy có tương quan kiểu gen kiểu hình: thể biến nạp có kiểu gen A cho khuẩn lạc lồi kháng 81 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 chloramphenicol, thể biến nạp có kiểu gen B cho khuẩn lạc dẹt đề kháng mức trung gian với chloramphenicol Đối với chủng T1 – T10 (Hình 4), có tương đồng cao kiểu gen chủng với nhau, thể phần trăm tương đồng nhóm C D 80% Tuy nhiên, không thấy tương quan kiểu gen kiểu hình thể biến nạp Chủng T7 có kiểu gen tương đồng cao với T3, T4, T6, T8 hình thái khuẩn lạc có khác biệt; hay chủng T2 có kiểu gen gần -tương đồng khoảng 86%với B subtilis PY79 kích thước khuẩn lạc lại có khác biệt nhiều (Bảng 4) Xét hai phả hệ, khơng biến nạp có kiểu gen tương đồng 100% với B subtilis PY79, chứng tỏ kiểu gen thể biến nạp có khác biệt so sánh với B subtilis PY79 ban đầu Bảng MIC thể biến nạp Thể biến nạp C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7 C8, C10, C11, C12 C9 T1, T2, T5, T6, T7, T9, T10 T3, T8 T4 Giá trị MIC (µg/ml) Chloramphenicol Tetracyclin R - I 16 R 64 - - 16 - 32 R 64 32 I R C, T: ký hiệu cho thể biến nạp thu môi trường chứa kháng sinh tương ứng chloramphenicol tetracyclin; R, I, ký hiệu cho “Kháng”, “Trung gian”, “-“ khơng thực Hình Cây phả hệ thể biến nạp C1 – C12, B subtilis PY79 (PY79) B clausii (A, B kí hiệu kiểu gen; Bên trái: phân loài; Bên phải: kết điện di xử lý b i phần mềm Bionumeric) 82 Hình Cây phả hệ thể biến nạp T1 – T10, B subtilis PY79 (PY79).(C, D ký hiệu kiểu gen Bên trái: phân loài; Bên phải: kết điện di xử lý b i phần mềm Bionumeric) BÀNLUẬN Đa số nghiên cứu công bố trước xem xét khả truyền gen kháng kháng sinh nằm plasmid probiotic qua đường tiếp hợp(9,10), đoạn nhiễm sắc thể mang gen đề kháng sang lồi khác(12,19) Khác với cơng bố trên, nghiên cứu xem xét khả biến nạp tất phân mảnh gen nhiễm sắc thể probiotic sang cho vi khuẩn khác B subtilis PY79 Trong điều kiện này, trình biến nạp xảy hoàn toàn ngẫu nhiên thực tế thu thể biến nạp môi trường chọn lọc Từ kết MIC công bố trước đây(19-22), dự đốn ADN nhiễm sắc thể probiotic B clausii E faecalis nghiên cứu mang gen kháng kháng sinh Tuy nhiên với kích thước đoạn gen mã hóa cho chloramphenicol acetyltransferase khoảng 2,3 kb(19) gen kháng tetracyclin có kích thước khoảng kb 83(20,21,23), khả biến nạp vào B subtilis PY79 thấp(24,25) Do dự đốn gen diện probiotic chuyển vào B subtilis PY79 qua biến nạp với đoạn gen có kích thước lớn Vì vậy, ngồi khả gia tăng đề kháng với kháng sinh, thể biến nạp tạo thành cịn có kiểu gen thay đổi so sánh với B subtilis PY79 Trong nghiên cứu không xác nhận diện gen đề kháng kháng sinh B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 probiotic phương pháp sinh học phân tử mà dựa vào đề kháng probiotic kháng sinh nhiều nghiên cứu tác giả khác cơng bố trước Vì vậy, cần xác nhận lại gen kháng kháng sinh có nhiễm sắc thể probiotic kiểm tra diện gen thể biến nạp giải trình tự gen để khẳng định trình biến nạp xảy điều kiện thử nghiệm KẾT LUẬN Từ kết thử nghiệm tính nhạy cảm kháng sinh so sánh kiểu gen thể biến nạp so với chủng B subtilis PY79, nghiên cứu cho thấy đặc điểm đề kháng kháng sinh probiotic truyền sang B subtilis PY79 đường biến nạp điều kiện phịng thí nghiệm TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Văn Thanh, Trần Cát Đông (2008) Công nghệ lên men In: Công Nghệ Sinh Học Dược, pp.73-88 Nhà Xuất Bản Giáo dục Việt Nam, Hà Nội Schiffrin EJ, Blum S (2002) Interactions between the microbiota and the intestinal mucosa Eur J Clin Nutr, 56(S3):S60-64 Keersmaecker SC de, Verhoeven TL, Desair J, et al (2006) Strong antimicrobial activity of Lactobacillus rhamnosus GG against Salmonella typhimurium is due to accumulation of lactic acid FEMS Microbiol Lett, 259(1):89-96 Tassell ML van, Miller MJ (2011) Lactobacillus adhesion to mucus Nutrients, 3(5):613-636 Ouwehand AC, Salminen S, Tolkko S, et al (2002) Resected human colonic tissue: new model for characterizing adhesion of lactic acid bacteria Clin Diagn Lab Immunol, 9(1):184-186 Nielsen DS, Cho GS, Hanak A, et al (2010) The effect of bacteriocin-producing Lactobacillus plantarum strains on the intracellular pH of sessile and planktonic Listeria monocytogenes single cells Int J Food Microbiol, 141(S1):S53-S59 Jose NM, Bunt CR, Hussain MA (2015) Implications of antibiotic resistance in probiotics Food Reviews International, 31(1):52-62 Gueimonde M, Sánchez B, G de Los Reyes-Gavilán C, et al (2013) Antibiotic resistance in probiotic bacteria Frontiers in Microbiology, 4:202-202 Gevers D, Huys G, Swings J (2003) In vitro conjugal transfer of tetracycline resistance from Lactobacillus isolates to other grampositive bacteria FEMS Microbiol Lett, 225(1):125-130 10 Jacobsen L, Wilcks A, Hammer K, et al (2007) Horizontal transfer of tet(M) and erm(B) resistance plasmids from food strains of Lactobacillus plantarum to Enterococcus faecalis JH2-2 in B - Khoa học Dược Nghiên cứu 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 the gastrointestinal tract of gnotobiotic rats FEMS Microbiol Ecol, 59(1):158-166 Morelli L, Sarra PG, Bottazzi V (1988) In vivo transfer of pAM beta from Lactobacillus reuteri to Enterococcus faecalis J Appl Bacteriol, 65(5):371-375 Bozdogan B, Galopin S, Leclercq R (2004) Characterization of a new erm-related macrolide resistance gene present in probiotic strains of Bacillus clausii Appl Environ Microbiol, 70(1):280-284 Clinical and Laboratory Standards Institute (2012) Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically 9th ed Approved Standard, USA Cutting SM, Horn V (1990) Molecular biological methods for Bacillus Wiley, Chichester Rusenova N, Parvanov P, Stanilova S (2013) Molecular typing of Paenibacillus larvae strains isolated from Bulgarian apiaries based on repetitive element polymerase chain reaction (Rep-PCR) Curr Microbiol, 66(6):573-7 Cowen S (1993) Cowan and Steel's manual for the identification of medical bacteria 3rd ed, pp.61-63 Cambridge University Press, USA Hindler JA (2016) Methods for antimicrobial dilution and disk susceptibility testing of infrequently isolated or fastidious bacteria: Approved guideline 3rd ed Clinical and Laboratory Standards Institute, USA Institute CaLS (2013) Performance standards for antimicrobial susceptibility testing V33(1), 23rd ed Clinical and Laboratory Standards Institute, USA Galopin S, Cattoir V, Leclercq R (2009) A chromosomal chloramphenicol acetyltransferase determinant from a probiotic strain of Bacillus clausii FEMS Microbiol Lett, 296(2):185-189 Ayeni FA, Odumosu BT, Oluseyi AE, et al (2016) Identification and prevalence of tetracycline resistance in enterococci isolated from poultry in Ilishan, Ogun State, Nigeria J Pharm Bioallied Sci, 8(1):69-73 Tian Y, Yu H, Wang Z (2019) Distribution of acquired antibiotic resistance genes among Enterococcus spp isolated from a hospital in Baotou, China BMC Res Notes, 12(1):27 Rice LB (1998) Tn916 family conjugative transposons and dissemination of antimicrobial resistance determinants Antimicrob Agents Chemother, 42(8):1871-1877 Nishimoto Y, Kobayashi N, Alam MM, et al (2005) Analysis of the prevalence of tetracycline resistance genes in clinical isolates of Enterococcus faecalis and Enterococcus faecium in a Japanese hospital Microb Drug Resist, 11(2):146-153 Lorenz MG, Wackernagel W (1994) Bacterial gene transfer by natural genetic transformation in the environment Microbiol Rev, 58(3):563-602 Morrison DA, Guild WR (1972) Transformation and deoxyribonucleic acid size: extent of degradation on entry varies with size of donor J Bacteriol, 112(3):1157-1168 Ngày nhận báo: 15/12/2020 Ngày phản biện nhận xét báo: 08/03/2021 gày báo đăng: 20/08/2021 83 ... biến nạp, gen truyền cho vi khuẩn khác hệ vi sinh vật đường ruột(8) Nhiều nghiên cứu in vitro in vivo chứng minh gen đề kháng kháng sinh từ plasmid probiotic có khả truyền cho vi khuẩn khác thơng... faecalis Có khả truyền cho B subtilis PY79 thông qua biến nạp điều kiện in vitro hay khơng Ngồi chế nêu trên, khả đề kháng kháng sinh lợi nhằm tăng khả cạnh tranh probiotic với vi khuẩn đường... tiết bacteriocin lactacin B từ L acidophilus nisin từ L casein có khả kìm hãm phát triển vi khuẩn khác môi trường sống(6) Nghiên cứu nhằm kiểm tra đặc tính đề kháng kháng sinh từ probiotic Bacillus