Mục tiêu nghiên cứu của bài viết là đánh giá tác động gây hoại tử và phân mảnh ADN tế bào đơn nhân trong máu ngoại vi người (TBĐN) của cao chiết Sài đất.
Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 ĐÁNH GIÁ TÁC ĐỘNG GÂY HOẠI TỬ VÀ PHÂN MẢNH ADN TẾ BÀO ĐƠN NHÂN MÁU NGOẠI VI NGƯỜI CỦA CAO SÀI ĐẤT (WEDELIA CHINENSIS (OSBECK) MERR.) Nguyễn Thị Bảo Anh1, Nguyễn Thị Minh Thuận1 TÓM TẮT Đặt vấn đề: Sài đất (Wedelia chinensis (Osbeck) Merr., Asteraceae) dược liệu có hoạt tính điều hòa miễn dịch Tuy nhiên, nghiên cứu tác động Sài đất tế bào miễn dịch hạn chế Mục tiêu: Đánh giá tác động gây hoại tử phân mảnh ADN tế bào đơn nhân máu ngoại vi người (TBĐN) cao chiết Sài đất Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Chuẩn bị dãy nồng độ khảo sát cao toàn phần ethanol 50% cao phân đoạn cloroform, ethyl acetat, n-butanol Sài đất từ 1-100 ppm môi trường nuôi cấy tế bào Đánh giá tác động gây hoại tử phân mảnh ADN TBĐ b i cao chiết Sài đất 48 72 thử nghiệm lactat dehydrogenase định lượng ADN phân mảnh Kết quả: Sau 72 nuôi cấy, cao phân đoạn cloroform n-butanol gây phân mảnh ADN TBĐ với IC50 tương ứng 9,82 ppm 16,96 ppm Tế bào bị hoại tử nhiều sau 48 b i cao ethyl acetat (tăng 2,17% so với mẫu chứng), cao n-butanol gây hoại tử tế bào nhiều sau 72 (tăng 1,37% so với mẫu chứng) Kết luận: Các cao chiết Sài đất có khả gây hoại tử phân mảnh ADN TBĐ Từ khóa: Sài đất, TBĐ , hoại tử, lactat dehydrogenase, ADN phân mảnh ABSTRACT ASSESSMENT OF IN VITRO NECROTIC EFFECTS AND DNA FRAGMENTATION OF EXTRACTS OF WEDELIA CHINENSIS (OSBECK) MERR ON HUMAN PERIPHERAL BLOOD MONONUCLEAR CELLS Nguyen Thi Bao Anh, Nguyen Thi Minh Thuan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Vol 25 - No - 2021: 62- 67 Background: Wedelia chinensis (Osbeck) Merr., Asteraceae is a medicinal plant with immunomodulatory activities However, studies on the immunomodulatory effects of W chinensis are still limited Objectives: The aims of this study is to assess the in vitro necrotic effects and DNA fragmentation of crude extracts and fractions of W chinensis on human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) Materials and methods: The concentrations of ethanol crude extract and chloroform, ethyl acetate, and nbutanol fractions of W chinensis from to 100 ppm were prepared in cell culture medium The necrotic effects and DNA fragmentation of W chinensis extracts on PBMCs were evaluated after 48 and 72 hours using lactate dehydrogenase assay and DNA fragmentation test Results: After 72 hours of incubation, chloroform and n-butanol fractions of W chinensis induced the DNA fragmentation with IC50 of 9.82 ppm and 16.96 ppm, respectively The ethyl acetate fractions of W chinensis induced the strongest cell necrosis after 48 hours (increase 2.17% compared to control), while n-butanol fractions of W chinensis caused the strongest cell necrosis after 72 hours (increase 1.37% compared to the control) Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: TS.DS Nguyễn Thị Minh Thuận ĐT: 0923559973 62 Email: ntmthuan@ump.edu.vn B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Conclusion: The results of this study showed that W.chinensis may have potential necrotic effects and DNA fragmentation on human PBMCs Keywords: Wedelia chinensis, PBMCs, necrosis, lactate dehydrogenase, DNA tích đặc điểm thực vật Bộ môn Thực vật, khoa ĐẶT VẤNĐỀ Y, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh trước Hiện thử nghiệm in vitro đánh giá tiến hành nghiên cứu Phần khảo sát thực vật tăng trưởng độc tính với tế bào ni cấy học Sài đất, khảo sát độ ẩm, độ tro thường sử dụng để đánh giá độc tính hóa dược liệu khảo sát sơ thành phần hóa học chất sàng lọc thuốc Các phương pháp đánh dược liệu thực giá độc tính tế bào dựa việc đánh giá nghiên cứu trước(8) Dược liệu xử lý sơ chức tế bào, bao gồm: tính nguyên vẹn sau: mẫu dược liệu rửa nhằm loại màng tế bào, tính thấm màng tế bào, hoạt bỏ bụi, tạp học, để ráo, sấy khô 50 oC động enzym (lactat dehydrogenase ngày liên tiếp, sau xay mịn LDH)(1)… Sài đất (Wedelia chinensis (Osbeck) sàng qua rây mm, bảo quản chai thủy tinh Merr., Asteraceae) sử dụng rộng rãi tránh ánh sáng Độ tro tồn phần trung bình y học cổ truyền với công dụng bảo vệ gan, trị độ ẩm trung bình mẫu dược liệu xác ho, tiêu chảy, vàng da trị số bệnh định 14,41 ±0,45% 5,29 ±1,27% da(2) Các nghiên cứu năm gần Nguyên vật liệu cho thấy Sài đất có tính chống oxy hóa, bảo vệ Buồng đếm hemocytometer-Neubauer gan, kháng viêm, kháng khuẩn, ức chế tế bào (3-6) (Quijing, TQ); Kính hiển vi quang học thị kính ung thư điều hịa miễn dịch Ở Việt Nam (Olympus, Nhật); mơi trường ni cấy RPMIchưa có nghiên cứu tác động Sài đất 1640 phytohaemagglutinin (PHA) (Gibco, hệ miễn dịch Vì vậy, sử dụng thường Thermo Fisher); kháng sinh (penicillin, xuyên Sài đất điều trị bệnh lý mà streptomycin), huyết thai bò (Fetal Bovine khơng kiểm sốt liều lượng thời gian sử dụng Serum - FBS), Trypan blue (Sigma); Cytotoxic ảnh hưởng đến hoạt động hệ miễn Detection LDH kit (Invitrogen, Thermo Fisher); dịch Lactate dehydrogenase (LDH) dung dịch Ficoll (Hyclone, Gelifesciences); enzym nội bào nên diện LDH Diphenylamin (Kermel, Trung Quốc) môi trường nuôi cấy dấu hiệu việc màng tế bào bị tổn thương, dẫn đến chết tế bào theo chế hoại tử (necrosis)(7) Mục tiêu đề tài đánh giá khả gây chết tế bào đơn nhân máu ngoại vi người (TBĐN) theo chế hoại tử (necrosis) phân mảnh ADN (apoptosis) Sài đất Wedelia chinensis (Osbeck) Merr., Asteraceae nhằm góp phần làm hiểu rõ tác động hệ miễn dịch Sài đất ĐỐI TƯỢNG- PHƯƠNG PHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Dược liệu sử dụng nghiên cứu phần mặt đất Sài đất (Wedelia chinensis (Osbeck) Merr ), trạng thái khô, công ty Dược liệu Việt Thảo cung cấp Mẫu phân B - Khoa học Dược Phương pháp nghiên cứu Điều chế cao toàn phần ethanol cao phân đoạn Dựa theo kết nghiên cứu trước đây(8) sử dụng dung môi ethanol 50% chiết thực tương tự để thu cao toàn phần ethanol 50% Sài đất (cao TP) Sau đó, phân tán cao toàn phần với lượng nước tối thiểu Lắc phân bố lỏng - lỏng dịch cao toàn phần với dung mơi có độ phân cực tăng dần: n-hexan (Hex), cloroform (CF), ethyl acetat (EA), n-butanol (Bu) với tỉ lệ nước dung môi 1:1 (v/v) Kiểm tra màu phân đoạn sau lần lắc, cách cho bốc 10 giọt dịch chiết mặt kính đồng hồ 63 Nghiên cứu Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 quan sát, đến khơng cịn vết vết mờ ngưng Với phân đoạn dịch chiết thu được, cô quay áp suất giảm 50 oC để loại bỏ dung mơi Phần dung mơi cịn lại bốc tủ hút khối lượng không đổi, thu cao đặc có độ ẩm hiệu suất chiết trình bày Bảng Bảng Độ ẩm hiệu suất chiết cao toàn phần cao phân đoạn Sài đất Cao chiết TP Hex CF EA Bu Độ ẩm (%) 9,97 11,01 9,35 9,54 12,9 Hiệu suất chiết (%) 24,08 0,83 5,81 4,23 3,01 TP: toàn phần; Hex: n-hexan; CF: cloroform; EA: ethyl acetat; Bu: n-butanol Phân lập TBĐN từ máu người tồn phần Thiết kế quy trình nghiên cứu xem xét chấp thuận Hội đồng đạo đức Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh theo Quyết định số 325/HĐĐĐ-ĐHYD, ngày 12 tháng 05 năm 2020 Mẫu máu tồn phần chống đơng EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) thu thập từ 10 tình nguyện viên khỏe mạnh Tồn q trình phân lập TBĐN từ máu tồn phần thực điều kiện vô trùng vòng kể từ thời điểm lấy máu Quy trình phân lập TBĐN tiến hành theo hướng dẫn nhà sản xuất dung dịch ficoll (Hyclone) Máu toàn phần pha loãng với đệm PBS 1X theo tỉ lệ 1:2 (v/v) Thêm dung dịch ficoll vào máu pha loãng theo tỉ lệ 1,5:2 (v/v) Ly tâm với tốc độ 400 xg 30 phút 20 oC Hút lớp TBĐN đem rửa hai lần với mL đệm PBS 1X Ly tâm với tốc độ 80 xg 10 phút 20 oC Cắn TBĐN phân tán vào mơi trường ni cấy hồn chỉnh (MTNCHC) gồm môi trường RPMI 1640 chứa hỗn hợp kháng sinh penicillin/streptomycin 1% FBS 10% (v/v) Tỷ lệ tế bào sống xác định phương pháp nhuộm trypan blue đếm tế bào buồng đếm Hemocytometer 64 Đánh giá tác động hoại tử TBĐN cao toàn phần cao phân đoạn Sài đất thử nghiệm đo hoạt độ LDH Các nồng độ cao toàn phần cao phân đoạn Sài đất chuẩn bị cách pha loãng dung dịch cao 40 mg/mL vào MNTCHC để thu dung dịch cao có nồng độ 0,1; 1; 10; 100 ppm, sau lọc qua màng lọc tiệt khuẩn 0,22 µm trước cho vào mơi trường thử nghiệm Quy trình thực đĩa ni cấy tế bào 96 giếng đáy vơ khuẩn có nắp với cao toàn phần Sài đất nồng độ khác nhau, theo hướng dẫn nhà sản xuất Cytotoxic Detection LDH kit (Invitrogen) để đánh giá độc tính tế bào Mẫu thử gồm 50 µL huyền dịch 1x106 tế bào/mL 50 µL dịch chiết cao Mẫu chứng âm gồm 50 µL huyền dịch 1x106 tế bào/mL 50 µL MTNCHC Mẫu trắng thử gồm 50 µl dịch chiết cao toàn phần cao phân đoạn nồng độ khác 50 µl MTNCHC Mẫu trắng chứng âm 100 µL MTNCHC Đo độ hấp thu (OD) bước sóng 490 nm với bước sóng đối chứng 680 nm thời điểm sau 48 72 ni cấy Lặp lại thí nghiệm lần, lấy kết trung bình Tính kết theo công thức Cytotoxic Detection LDH kit (Invitrogen): Tỉ lệ tế bào chết mẫu thử (%) = Đánh giá tác động phân mảnh ADN TBĐN cao Sài đất Quy trình định lượng ADN phân mảnh tế bào TBĐN thực theo nghiên cứu trước(9) tóm tắt sau: Trên đĩa 96 giếng, cho vào giếng 500 µl huyền dịch tế bào TBĐN (mật độ 1x106 tế bào/ml), ủ tủ ấm nhiệt độ 37oC, độ ẩm 95 ±5% với 5% CO2 để ổn định tế bào Đối với mẫu thử, thêm 500 µl dịch chiết cao toàn phần cao phân đoạn nồng độ pha loãng khác vào giếng Đối với mẫu chứng âm, thêm 500 µl MTNCHC B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 vào giếng Ủ đĩa 24 giếng tủ ấm nhiệt độ 37 oC, độ ẩm 95 ± 5%với 5% CO2 Sau 48 72 nuôi cấy tế bào, ly tâm tế bào giếng với tốc độ 1500 vịng/phút để loại bỏ mơi trường ni cấy Sau phân tán cắn tế bào vào 400 µl dung dịch đệm TE (pH 8,0), 350 µl dung dịch đệm ly giải (pH 8,0) ủ 30 phút oC, đem ly tâm 13000 xg 15 phút oC để tách ADN phân mảnh (phần dịch nổi) ADN nguyên vẹn (phần cắn ly tâm) Thêm 750 µl acid tricloracetic 10% vào eppendorf chứa dịch cắn ly tâm riêng biệt, ủ qua đêm oC Sau ly tâm eppendorf với tốc độ 1400 xg oC 10 phút, thêm 500 µl acid tricloracetic 5% vào phần cắn eppendorf đun 90 oC 15 phút Sau ly tâm, hút 500 µl dịch ly tâm cho vào ml thuốc thử diphenylamin chứa sẵn eppendorf khác, trộn ủ qua đêm nhiệt độ phòng, tránh ánh sáng Đo độ hấp thu (OD) 600 nm Mẫu trắng tiến hành song song, chứa acid tricloracetic 5% Mỗi mẫu tiến hành lặp lại lần Tính tốn kết quả: % ADN phân mảnh = Xác định nồng độ cao gây tỉ lệ phân mảnh ADN đạt 50% mẫu thử nghiệm (IC50) Xử lý thống kê Nghiên cứu toán thuật toán non-linear regression Sự khác biệt giá trị trung bình phát phép kiểm t-test Sự khác biệt coi có ý nghĩa thống kê giá trị p < 0,05 KẾT QUẢ Kết đánh giá hoạt tính hoại tử TBĐN cao tồn phần cao phân đoạn Sài đất thử nghiệm đo hoạt độ LDH Sau 48 giờ, hoạt độ LDH đo mẫu tế bào tiếp xúc với cao chiết nồng độ khảo sát tăng so với mẫu chứng âm Điều chứng tỏ cao toàn phần cao phân đoạn có thúc đẩy q trình hoại tử (necrosis) TBĐN mạnh Tỉ lệ tế bào hoại tử cao toàn phần ppm tăng 1,43% so với chứng âm (p = 0,045) Tỉ lệ tế bào necrosis cao phân đoạn ethyl acetat 100 ppm tăng 2,17% so với chứng âm (p = 0,020) Phân đoạn n-butanol làm tăng trình hoại tử tế bào so với mẫu chứng nồng độ (p = 0,027) Sau 72 ni cấy, cao tồn phần cao phân đoạn tiếp tục làm tăng tỉ lệ tế bào hoại tử so với mẫu chứng Cao toàn phần ppm có tác động gây hoại tử tế bào mạnh (tỉ lệ tế bào hoại tử 1,33%, tăng có ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng, p= 0,002) Phân đoạn cloroform phân đoạn ethyl acetat có tác động hoại tử tế bào mạnh nồng độ thấp 0,1 ppm với tỉ lệ tế bào hoại tử tăng khoảng 1% so với mẫu chứng (p < 0,05) Phân đoạn n-butanol 100 ppm gây hoại tử TBĐN mạnh với tỉ lệ tế bào hoại tử 1,33% (p = 0,006) (Bảng 2) Số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel 2013 Kết biểu diễn dạng trung bình (mean) ± độ lệch chuẩn (SD – standard deviation) Các giá trị IC50 tính Bảng Kết thử nghiệm LDH sau 48 72 nuôi cấy (N = 3) Thời gian thử nghiệm 48 72 Cao TP CF EA Bu Chứng âm Cao TP CF EA Bu Chứng âm 0,1 ppm 23,64 ± 0,05 24,20 ± 0,10 23,78 ± 0,13 24,67 ± 0,05 40,97 ± 0,21 40,56 ± 0,13 40,23 ± 0,10 40,40 ± 0,60 Tỉ lệ tế bào hoại tử (%) ppm 10 ppm 24,58 ± 0,01 24,25 ± 0,03 24,87 ± 0,05 24,82 ± 0,16 24,10 ± 0,13 24,03 ± 0,04 24,98 ± 0,10 24,43 ± 0,21 23,15 ± 0,05 40,36 ± 0,18 40,70 ± 0,13 40,75 ± 0,01 40,37 ± 0,21 40,95 ± 0,40 40,60 ± 0,04 40,63 ± 0,04 40,41 ± 0,05 40,03 ± 0,15 100 ppm 23,83 ± 0,05 24,30 ± 0,12 25,32 ± 0,06 24,53 ± 0,16 41,12 ± 0,20 41,32 ± 0,02 41,27 ± 0,04 41,40 ± 0,12 TP: toàn phần; Hex: n-hexan; CF: cloroform; EA: ethyl acetat; Bu: n-butanol; p 100 ppm (Bảng 3) mẫu chứng (p < 0,05) Tuy nhiên, phân Bảng Kết phân mảnh ADN TBĐ sau 72 xử lý tế bào với cao Sài đất (N = 3) Loại cao chiết Cao TP CF EA Bu Chứng âm 0,1 ppm a 49,24 ± 1,64 a 55,01 ± 2,47 a 54,37 ± 2,26 a 52,30 ± 2,56 Tỉ lệ ADN phân mảnh (%) ppm 10 ppm a a 46,93 ± 1,90 47,93 ± 2,11 a a 53,97 ± 3,20 64,44 ± 3,47 a 45,71 ± 1,87 41,28 ± 1,50 a a 49,96 ± 1,15 55,60 ± 4,60 40,40 ± 1,11 100 ppm a 47,76 ± 1,97 a 74,40 ± 0,50 40,53 ± 1,66 a 62,31 ± 2,48 IC50 (ppm) >100 9,82 >100 16,96 TP: toàn phần; Hex: n-hexan; CF: cloroform; EA: ethyl acetat; Bu: n-butanol; a: khác biệt có ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng (p < 0,05) cứu cho thấy cao toàn phần cao phân BÀNLUẬN đoạn có tác động gây hoại tử TBĐN sau 48 Nghiên cứu chọn dung môi chiết cao nuôi cấy tế bào, tế bào bị hoại tử nhiều toàn phần Sài đất ethanol 50% dựa kết cao ethyl acetat 100 ppm (tăng 2,17% so khảo sát nghiên cứu trước(8) Kết với mẫu chứng) Tỉ lệ tế bào hoại tử sau 72 định tính sơ thành phần hóa học tăng nhiều mẫu thử với cao n-butanol 100 nghiên cứu trước cho thấy cao toàn phần Sài ppm (tăng 1,37% so với mẫu chứng) đất có chứa nhiều thành phần, gồm hợp chất phenolic, coumarin, flavonoid, saponin, tannin, đường khử, triterpenoid(8,10) Phân đoạn cloroform có chứa hợp chất phân cực thuộc nhóm triterpenoid, coumarin chứa hợp chất phenolic, nhóm hợp chất ghi nhận có tác động kháng viêm điều hòa miễn dịch(11-14) Điều phù hợp với nghiên cứu trước cho thấy Sài đất có tác dụng kháng viêm, điều hịa miễn dịch(5,15) Một số nghiên cứu trước chứng minh cao chiết Sài đất có tác động gây giảm số lượng TBĐN, phân đoạn giàu tế bào miễn dịch có nhiều vai trị q trình viêm miễn dịch thể (8,10,16), chưa rõ chế gây độc phân đoạn cao chiết Sài đất Lactat dehydrogenase (LDH) enzym nội bào Sự diện LDH môi trường nuôi cấy dấu hiệu việc màng tế bào bị tổn thương, dẫn đến chết tế bào Kết nghiên 66 Một nghiên cứu trước tác động phân đoạn cloroform Sài đất tế bào TBĐN ghi nhận phân đoạn cloroform Sài đất làm tăng tỉ lệ tế bào chết theo chương trình (apoptosis) sớm 15,4% so với mẫu chứng(17) Trong nghiên cứu này, kết đánh giá tác động cảm ứng trình apoptosis cao tồn phần thử nghiệm ADN phân mảnh cho thấy tỉ lệ ADN phân mảnh không phụ thuộc vào nồng độ Nồng độ IC50 cao phân đoạn cloroform n-butanol gây phân mảnh ADN TBĐN xác định 9,82 ppm 16,96 ppm sau 72 nuôi cấy Tác động phụ thuộc vào thời gian liên quan tới diện nhóm hợp chất coumarin, triterpen saponin triterpen cao chiết(11-14) Những nghiên cứu trước ghi nhận số hợp chất thuộc nhóm triterpenoid có tác động cảm ứng q trình apoptosis(18,19) B - Khoa học Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 25 * Số * 2021 Nghiên cứu Các hợp chất thuộc nhóm coumarin có tác động cảm ứng trình apoptosis cách hoạt hóa protein liên quan đến q trình apoptosis(20) 11 KẾT LUẬN 12 Nghiên cứu chứng minh cao chiết Sài đất có khả làm hoại tử phân mảnh ADN TBĐN Kết nghiên cứu định hướng cho nghiên cứu phân lập chất có tác dụng ức chế TBĐN từ Sài đất 13 14 TÀI LIỆU THAMKHẢO Li W, Zhou J, Xu Y (2015) Study of the in vitro cytotoxicity testing of medical devices Biomed Rep, 3(5):617-620 Nomani I, Mazumder A, Chakraborthy GS (2013) Wedelia chinensis (Asteraceae) - An overview of a potent medicinal herb Int J PharmTech Res, 5(3):957-964 Bora KS, Pant A (2018) Evaluation of anxiolytic activity of W chinensis Merrill leaves The Journal of Phytopharmacology, 7(1):19-24 Deeb D, Gao X, Liu Yb, Pindolia K, Gautam SC (2014) Pristimerin, a quinonemethide triterpenoid, induces apoptosis in pancreatic cancer cells through the inhibition of pro-survival Akt/NF-κB/mTOR signaling proteins and anti-apoptotic Bcl-2 Int J Oncol, 44(5):1707-15 Huang YT, Wen CC, Chen YH, Huang WC, Huang LT, Lin WC, Arulselvan P, Liao JW, Lin SH, Hsiao PW, Kuo SC, Yang NS (2013) Dietary uptake of Wedelia chinensis extract attenuates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice PLoS ONE 8(5):e64152 Mishra G, Sinha R, Verma N, Khosa RL, Garg VK, Singh P (2009) Hepatoprotective activity of alcoholic and aqueous extracts of Wedelia chinensis Pharmacologyonline, 1:345-356 Kumar P, Nagarajan A, Uchil PD (2018) Analysis of cell viability by the lactate dehydrogenase assay Cold Spring Harb Protoc, 2018(6):doi: 10.1101/pdb.prot095497 Nguyễn Thị Minh Thuận, Lê Hoàng Hạnh Đan, Nguyễn Thị Bảo Anh (2020) Đánh giá tác động tăng sinh in vitro tế bào đơn nhân máu ngoại vi người hoạt tính chống oxy hóa cao chiết Wedelia chinensis (Osbeck) Merr., Asteraceae Y Học Thành Phố Hồ Chí Minh, 24(2):106-113 Knethen AV, Brockhaus F, Kleiter I (1999) NO-Evoked macrophage apoptosis is attenuated by cAMP-induced gene expression Molecular Medicine, 5(10):672-684 10 Thuan Thi Minh Nguyen, Nguyen Thi Thao Le (2021) Inhibitory effect of medicinal plants on in vitro human peripheral blood B - Khoa học Dược 15 16 17 18 19 20 mononuclear cell proliferation, interleukin-2 secretion and antioxidant activity MedPharmRes, 5(1):23-29 Harun NH, Septama AW, Ahmad WANW, Suppian R (2020) Immunomodulatory effects and structure-activity relationship of botanical pentacyclic triterpenes: A review Chinese Herbal Medicines, 12 (2):118-124 Kumar SV, Kumar SP, Rupesh D, Nitin K (2011) Immunomodulatory effects of some traditional medicinal plants J Chem Pharm Res, 3(1):675-684 Top H, Sarikahya NB, Nalbantsoy A, Kirmizigul S (2017) Immunomodulatory, hemolytic properties and cytotoxic activity potent of triterpenoid saponins from Cephalaria balansae Phytochemistry, 137:139-147 Yang LL, Wang MC, Chen LG, Wang CC (2003) Cytotoxic activity of coumarins from the fruits of Cnidium monnieri on leukemia cell lines Planta Med, 69(12):1091-1095 Maji AK, Mahapatra S, Banerji P, Banerjee D (2015) Immunomodulatory effect of Wedelia chinensis and demethylwedelolactone by interfering with various inflammatory mediators Oriental Pharmacy and Experimental Medicine, 15(1):23-31 Nguyễn Thanh Thy, Nguyễn Thị Bảo Anh, Nguyễn Thị Minh Thuận (2018) Tối ưu hóa điều kiện ni cấy in vitro tế bào đơn nhân chiết từ máu ngoại vi người Tạp Chí Khoa Học Trường Đại học Cần Thơ, 55(1):71-78 Nguyễn Thị Minh Thuận, Lê Thị Thảo Nguyên (2020) Đánh giá tác động gây độc chết theo chương trình cao phân đoạn chiết từ Wedelia chinensis (Osbeck) Merr., tế bào đơn nhân máu ngoại vi người Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 11(4):18-23) Darah I, Lim SH, Nithianantham K (2013) Effects of methanol extract of Wedelia chinensis (Osbeck) Asteraceae leaves against pathogenic bacteria with emphasise on Bacillus cereus Indian J Pharm Sci, 75(5):533–539 Reyes-Zurita FJ, Pachón-Pa G, Lizárraga D, Rufino-Palomares EE, Cascante M, Lupiáđez JA (2011) The natural triterpene maslinic acid induces apoptosis in HT29 colon cancer cells by a JNK-p53-dependent mechanism BMC Cancer, 11:154-154 Lopez-Gonzalez JS, Prado-Garcia H, Aguilar-Cazares D, MolinaGuarneros JA, Morales-Fuentes J, Mandok JJ (2004) Apoptosis and cell cycle disturbances induced by coumarin and 7hydroxycoumarin on human lung carcinoma cell lines Lung Cancer, 43(3):275-283 Ngày nhận báo: 21/12/2020 Ngày phản biện nhận xét báo: 28/05/2021 gày báo đăng: 20/08/2021 67 ... dấu hiệu vi? ??c màng tế bào bị tổn thương, dẫn đến chết tế bào theo chế hoại tử (necrosis)(7) Mục tiêu đề tài đánh giá khả gây chết tế bào đơn nhân máu ngoại vi người (TBĐN) theo chế hoại tử (necrosis)... ppm có tác động gây hoại tử tế bào mạnh (tỉ lệ tế bào hoại tử 1,33%, tăng có ý nghĩa thống kê so với mẫu chứng, p= 0,002) Phân đoạn cloroform phân đoạn ethyl acetat có tác động hoại tử tế bào mạnh... Cytotoxic Detection LDH kit (Invitrogen): Tỉ lệ tế bào chết mẫu thử (%) = Đánh giá tác động phân mảnh ADN TBĐN cao Sài đất Quy trình định lượng ADN phân mảnh tế bào TBĐN thực theo nghiên cứu