Thông tin tài liệu
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ======= VŨ ANH PHƢƠNG NGHIÊN CỨU ĐỊNH LƢỢNG PARAQUAT TRONG MẪU HUYẾT TƢƠNG NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS TẠ THỊ THẢO TS HÀ TRẦN HƢNG HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Lời cho gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Tạ Thị Thảo TS Hà Trần Hƣng tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài viết luận văn Tôi xin đƣợc gửi lời cảm ơn chân thành tới ban lãnh đạo toàn thể nhân viên Trung tâm Chống Độc – Bệnh viện Bạch Mai tạo điều kiện thuận lợi cho đƣợc học tập nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn tới thầy giáo giảng dạy khoa Hoá, đặc biệt thầy mơn Hố Phân tích, cho tơi kiến thức q giá q trình học tập thực đề tài Tôi xin gửi lời cảm ơn anh chị, bạn bè tập thể lớp cao học hoá K24, đặc biệt ngƣời bạn nhóm hố phân tích K24 giúp đỡ, chia sẻ khó khăn suốt trình tơi học tập thực đề tài Cuối xin gửi lời cảm ơn tới gia đình bạn bè ln động viên, chia sẻ khó khăn tơi Hà Nội, ngày 01 tháng 10 năm 2015 Học viên Vũ Anh Phƣơng Vũ Anh Phương Trường ĐHKH Tự nhiên MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan paraquat 1.1.1 Công thức paraquat 1.1.2 Tính chất lý, hóa học paraquat 1.1.3 Cơ chế gây độc paraquat 1.1.4 Dƣợc động học paraquat 1.1.4.1 Hấp thu .6 1.1.4.2 Phân bố .6 1.1.4.3 Chuyển hoá, thải trừ 1.1.5 Tiên lƣợng bệnh nhân dựa vào nồng độ paraquat huyết tƣơng .7 1.2 Các phƣơng pháp xác định paraquat huyết tƣơng 1.2.1 Phƣơng pháp quang phô.̉ 1.2.2 Phƣơng pháp sắc ký khí khối phổ 10 1.2.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng khối phổ .11 1.2.4 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao .13 1.3 Các phƣơng pháp xử lý mẫu huyết tƣơng phân tích Paraquat 15 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 19 2.2 Chất chuẩn, hoá chất, thiết bị 19 2.2.1 Chất chuẩn 19 2.2.2 Hoá chất 19 2.2.3 Thiết bị, dụng cụ 20 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Nghiên cứu xây dựng quy trình định lƣợng paraquat 21 2.3.1.1 Chuẩn bị mẫu chuẩn .21 2.3.1.2 Phƣơng pháp tách PQ từ huyết tƣơng 21 2.3.1.3 Phƣơng pháp khảo sát điều kiện sắc ký để định lƣợng PQ huyết tƣơng 21 2.3.2 Đánh giá phƣơng pháp phân tích PQ huyết tƣơng .22 2.3.2.1 Tính chọn lọc 22 2.3.2.2 Khoảng nồng độ tuyến tính .23 2.3.2.3 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng .23 2.3.2.4 Đánh giá độ (độ thu hồi) độ chụm (độ lặp lại) 23 2.3.2.5 Độ ổn định 23 2.3.3 Phân tích PQ mẫu huyết tƣơng bệnh nhân - áp dụng thực tế tiên lƣợng bệnh nhân đánh giá hiệu lọc máu hấp phụ 24 2.3.3.1 Đối tƣợng nghiên cứu .24 2.3.3.2 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân 24 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26 3.1 Tối ƣu hoá cać điều kiện chạy sắc lý lỏng hiệu cao 26 3.1.1 Xác định bƣớc sóng phát chất phân tích với detector DAD 26 3.1.2 Khảo sát ảnh hƣởng thể tích mẫu tiêm vào cột 26 3.1.3 Khảo sát lựa chọn loại pha động 28 3.1.4 Khảo sát thành phần pha động 29 “-” không xuất pic PQ sắc đồ, chứa pic mẫu 31 3.1.5 Khảo sát ảnh hƣởng pH pha đôṇ g 31 “-” không xuất pic PQ sắc đồ, chứa pic mẫu 33 3.1.6 Khảo sát thành phần dung dịch đệm 33 3.1.6.1 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ natriheptanesulfonate 33 3.1.6.2 Ảnh hƣởng nồng độ KCl 35 3.1.6.3 Khảo sát ảnh hƣởng nồng độ PEG 36 “-” không xuất pic PQ sắc đồ, chứa pic mẫu 37 3.1.7 Khảo sát ảnh hƣởng tốc độ dòng 37 3.1.8 Đƣờng chuẩn, giới han phat́ hiên và giơí han điṇ h lƣơn g .39 3.1.8.1 Xây dựng đƣờng chuẩn 39 3.1.8.2 Giới hạn phát giới hạn định lƣợng .42 3.1.8.3 Đánh giá phƣơng trình đƣờng chuẩn .43 3.2 Khảo sát phƣơng pháp xử lý mẫu .46 3.2.1 Khảo sát nồng độ dung dịch TCA 46 3.2.2 Khảo sát thời gian lắc xoáy 48 3.2.3 Khảo sát độ ổn định mẫu phân tích 50 3.3 Xác nhận giá trị sử dụng phƣơng pháp 51 3.3.1 Đá nh giá đô ̣ chon lo 51 c 3.3.2 Đánh giá độ phƣơng pháp .51 3.3.2.1 Đánh giá độ thu hồi phƣơng pháp 51 3.3.2.2 Đánh giá độ phƣơng pháp phân tích .52 3.3.2 Đánh giá độ lặp lại tái lặp lại 53 3.3.2.1 Đánh giá độ lặp lại thiết bị .53 3.3.2.2 Đánh giá độ chụm (độ lệch chuẩn lặp lại tái lặp) phƣơng pháp phân tích 55 3.3.3 Độ ổn định .57 Độ ổn định thời gian phân tích 58 3.4 Phân tích mẫu PQ huyết tƣơng bệnh nhân - áp dụng thực tế tiên lƣợng bệnh nhân đánh giá hiệu lọc máu hấp phụ .58 3.4.1 Đặc điểm chung nhóm BN nghiên cứu: 58 3.4.2 Nồng độ Paraquat huyết tƣơng tiên lƣợng bệnh nhân đánh giá hiệu lọc máu hấp phụ 60 KẾ T LUÂN 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO .68 DANH SÁ CH BẢ NG BIỂ U Bảng 3.1: Ảnh hƣởng thể tích bơm mâu 27 Bảng 3.2: Ảnh hƣởng tỉ lê p̣ đôṇ g t ới độ phân cực, thời gian lƣu, hệ số đối xứng pic 31 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng của pH tới thời gian lƣu, hệ số đối xứng pic 32 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng nồ ng đô ̣ natriheptanesulfonate đ ến thời gian lƣu, hệ số đối xứng pic 34 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng nồng đô ̣KCl đến thời gian lƣu hệ số đối xứng pic 35 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng nồ ng đô ̣ PEG đến thời gian lƣu hệ số đối xứng pic 37 Bảng 3.7: Ảnh hƣởng tố c đô ̣ dò ng đến thời gian lƣu hệ số đối xứng pic 38 Bảng 3.8: Nồng độ diện tích pic trung bình PQ 40 Bảng 3.9: Giới han phát hiên và giới han điṇ h lƣơng của PQ 43 Bảng 3.10: Kết so sánh giá trị a với giá trị phƣơng trình đƣờng chuẩn PQ .44 Bảng 3.11: Kết so sánh b b′ phƣơng trình đƣờng chuẩn PQ 45 Bảng 3.12: Ảnh hƣởng nồ ng đô ̣ TCA đến hiệu chiết PQ khỏi huyết tƣơng 48 Bảng 3.13: Ảnh hƣởng thời gian lắc xoay đến trình chiết 48 Bảng 3.14: Kết xác định độ ổn định khác ngày .50 Bảng 3.15: Kết đánh giá hiệu suất thu hồi phƣơng pháp phân tích PQ.52 Bảng 3.16: Kết phân tích lặp lại mẫu huyết tƣơng thêm chuẩn 52 Bảng 3.17: Các đại lƣợng thống kê .53 Bảng 3.18: Độ lặp lại thời gian lƣu diện tích pic chất 54 Bảng 3.19: Kết hàm lƣợng PQ tìm lại đƣợc phƣơng pháp thêm chuẩn kỹ thuật viên khác 55 Bảng 3.20: Các kiện thống kê đánh giá độ lặp lại phƣơng pháp phân tích tiến hành ba KTV khác 56 Bảng 3.21: Các kiện đánh giá độ tái lặp phƣơng pháp phân tích .57 Bảng 3.22: Kế t quả xá c điṇ h đô ̣ ổ n điṇ h ngà y 58 Bảng 3.23: Thời gian tƣ̀ lúc uống đến lấy mẫu xét nghiệm .60 Bảng 3.24: Kết định lƣợng PQ 31 bệnh nhân 61 Bảng 3.25: Thay đổi nồng độ Paraquat huyết tƣơng sau lọc máu hấp phụ 65 DANH SÁ CH HÌNH Chƣơng Hình 1.1: Cơng thức hóa học paraquat Hình 1.2 Cơ chế gây độc paraquat [15] Hình 1.3: Biểu đồ liên quan nồng độ Paraquat huyết tƣơng (µg/ml), thời gian sau uống, khả sống .8 Chƣơng Hình 3.1: Phở hấp thu U ̣ V của PQ 26 Hình 3.2: Sắ c đờ khả o sá t thể tích bơm mâu .27 Hình 3.3: Sắc đồ phân tích PQ với ḍ ung mơi A (dung dịch NaOH 0,0125M nƣớc dung dịch NaOH 0,0125M methanol theo tỷ lệ 90:10, v/v) 28 Hình 3.4: Sắc đồ phân tích PQ vơí ḍ ung mơi B 29 Hình 3.5: Sắc đồ phân tích PQ với ḍ ung mơi C 29 Hình 3.6: Sắ c ký đồ khả o sá t tỉ lê ̣ pha đôṇ g ACN : Đêm %v/v 30 Hình 3.7: Sắc đồ khaỏ sat́ an̉ h hƣơn̉ g cuả pH 32 Hình 3.8: Sắ c đờ khả o sá t nồ ng đô ̣ củ a natriheptanesulfonate đêm pH 2,5 34 Hình 3.9: Sắ c đờ PQ thay đổi nồ ng đô ̣ củ a KCl pha động 35 Hình 3.10: Sắ c đồ PQ thay đổi nồ ng đô ̣ củ a PEG pha động .37 Hình 3.11: Sắ c đồ khả o sá t tố c đô ̣ dò ng .38 Hình 3.12: Sắ c ký đờ cá c nồ ng đô ̣ PQ khá c tƣ̀ 0,02 – 10,00 µg/ml .40 Hình 3.13: Đƣờng chuẩn PQ theo diện tích pic 41 Hình 3.14: Sơ đồ quy trình xử lý PQ mẫu huyết tƣơng .49 Hình 3.15: Sắ c ký đồ PQ huyế t tƣơng chuẩ n á p duṇ g quy trình xƣ̉ lý mâũ hình 3.14 .50 Hình 3.16: Độ chọn lọc PQ phƣơng pháp .51 Hình 3.17: Phân bố bệnh nhân nghiên cứu theo nhóm tuổi 58 Hình 3.18: Phân bố bệnh nhân nghiên cứu theo nghề nghiệp 59 Hình 3.19: Kết bệnh nhân ngộ độc Paraquat 60 Độ ổn định thời gian phân tích Chuẩn bị mẫu PQ huyết tƣơng trắng nồng độ µg/ml, xử lý mẫu tiến hành sắc ký tiếp tục lần vịng Nờ ng ̣ đo đƣơc sau giờ đƣơc cho bảng sau Bảng 3.22: Kế t quả xá c điṇ h đô ̣ ổ n điṇ h ngà y Giờ RSD 1(µg/ml) 2,00 1,99 1,99 1,98 1,98 1,98 0,402 (µg/ml) 2,02 2,00 2,00 1,99 1,98 1,97 0,851 (µg/ml) 2,01 2,00 2,03 1,99 1,98 1,98 0,601 Mẫu (%) Nhận xét thấy, giá trị RSD nhỏ (< 1%) chứng tỏ phƣơng pháp có độ tái lặp tốt giá trị sử dụng cao, ứng dụng để phân tích thời điểm khác sau xƣ̉ lý mâu vò ng tiêń g 3.4 Phân tích mẫu PQ huyết tƣơng bệnh nhân - áp dụng thực tế tiên lƣợng bệnh nhân đánh giá hiệu lọc máu hấp phụ 3.4.1 Đặc điểm chung nhóm BN nghiên cứu: 31 bệnh nhân ngộ độc PQ đủ tiêu chuẩn đƣợc chọn vào nghiên cứu Trong 16 bệnh nhân (BN) nam (51,6%) 15 BN nữ (48,4%) 70% 60% 50% 65% 40% 30% 20% 10% 19% 16% 0% < 18 tuổi 18-50 tuổi > 50 tuổi Hình 3.17: Phân bố bệnh nhân nghiên cứu theo nhóm tuổi Trong nhóm BN nghiên c ứu, tuổi thấp là 14 tuổi, tuổi cao là 63 t̉ i, trung bình: 32,1 ± 15,2 Ngơ ̣ đôc PQ hay găp ở đô ̣ tuổ i lao động 18-50 t̉ i (64,5%) Đặc điểm phân bố nhóm tuổi BN nghiên cứu tƣơng tự nghiên cứu trƣớc tác giả Đặng Thị Xuân, Nguyễn Thị Dụ [4] Vũ Mai Liên [2] Trung tâm chống độc Đáng ý 16,1% BN ngộ độc PQ tuổi thiếu niên Phân bố bệnh nhân theo nghề nghiệp đƣợc hình 3.18 40% 35% 30% 25% 20% 36% 26% 15% 26% 10% 07% 5% 0% làm ruộng học sinh sinh viên công nhân 07% hành khơng việc làm Hình 3.18: Phân bố bệnh nhân nghiên cứu theo nghề nghiệp Trong số bệnh nhân nghiên cứu, nghề lam ̀ ruôṇ g chiếm tỉ lê ̣cao 11 bệnh nhân (35,5%) phù hợp với việc PQ đƣợc dùng nơng nghiệp nên sẵn có nông thôn Học sinh, sinh viên chiếm tỉ lê c̣ ao thƣ́ hai (25,8%) đáng quan tâm Khi xem xét nguyên nhân ngộ độc, hầu hết BN nghiên cứu ngộ độc tự tử (29 bệnh nhân - 93,6%) Chỉ có BN tai nạn (6,4%), BN bất cẩn phun thuốc, BN uống nhầm Trong các s ản phẩm thƣơng maị c PQ BN gia đình mang đến viện, Gfaxone 20SL hay găp nhât́ , ngồi có số tên sản phẩm khác: Gramoxone, Fansipan, Tungmaxone, Cỏ cháy 26% Sống Tử vong 74% Hình 3.19: Kết bệnh nhân ngộ độc Paraquat 3.4.2 Nồng độ Paraquat huyết tương tiên lượng bệnh nhân đánh giá hiệu lọc máu hấp phụ Thơì gian tƣ̀ luć BN uống PQ lấy mẫu xét nghiệm đƣợc trình bày bảng 3.23 Trung biǹ h thơì gian tƣ̀ luć uống đến luć l mẫu xét nghiệm là 6,6 ± 4,23 Thơì gian ngắn là giờ, nhiều là 23 Thời gian lấy mẫu sau uống chủ yếu (74,2%) Bảng 3.23: Thơì gian tƣ̀ luć uống đến lấy mẫu xét nghiệm Thơì gian Số bêṇ h nhân Tỉ lệ % ≤ 3,2 >2 - 22,6 >4 - 12 38,7 Sau 11 35,5 Nồng độ Paraquat huyết tƣơng vào viện: Áp dụng quy trình phân tích xây dựng đƣợc, chúng tơi xác định nồng độ PQ huyết tƣơng Mỗi mẫu phân tích lặp lại lần Kết thu đƣợc bảng 3.24 Giá trị nồng độ PQ huyết tƣơng trung bình 8,1 µg/ml (thấp nhất: 0,215 µg/ml; cao 88,66 µg/ml) Bảng 3.24: Kết định lƣợng PQ 31 bệnh nhân Thời Kết định lƣợng PQ (µg/ml) gian STT Bệnh nhân Tuổi Giới uống đến Vào Sau Trƣớc Sau Trƣớc Sau viện HP1 HP2 HP2 HP3 HP3 0,05 0,12
Ngày đăng: 24/12/2021, 21:32
Xem thêm:
