Xây dựng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ định lượng risperidon trong huyết tương người

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ ĐÌNH KHÁNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỊNH LƯỢNG RISPERIDON TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ ĐÌNH KHÁNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỊNH LƯỢNG RISPERIDON TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa học: TS Tạ Mạnh Hùng HÀ NỘI 2021 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Tạ Mạnh Hùng – Phó cục trưởng – Cục quản lý Dược, Bộ Y Tế, người thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm quý báu quan tâm giúp đỡ suốt trình thực hồn thành luận văn Tơi xin trân trọng cảm ơn thầy cô công tác Bộ mơn Hóa Phân tích – độc chất dạy giúp đỡ thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn Ban giám đốc – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện cho học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới đồng nghiệp khoa Vật lý Đo lường Trung tâm đánh giá tương đương sinh học – Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè ln ủng hộ, động viên Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn Thầy, Cơ, quan, gia đình bạn bè giúp tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 31 tháng 03 năm 2021 Học viên: Lê Đình Khánh MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Risperidon 1.1.1 Cơng thức cấu tạo tính chất lý hóa 1.1.2 Tác dụng dược lý chế tác dụng 1.1.3 Chỉ định, chống định thận trọng sử dụng 1.1.4 Đặc tính dược động học RPD 1.1.5 Một số phương pháp định lượng RPD 1.2 Phân tích thuốc dịch sinh học 1.2.1 Thành phần đặc điểm huyết tương người 1.2.2 Kỹ thuật xử lý mẫu 10 1.2.3 Phân tích thuốc dịch sinh học thiết bị sắc ký lỏng khối phổ 13 1.2.4 Thẩm định phương pháp phân tích thuốc dịch sinh học kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên liệu, trang thiết bị nghiên cứu 18 2.1.1 Hóa chất, chất chuẩn 18 2.1.2 Dụng cụ, thiết bị 19 2.2 Đối tượng nghiên cứu 19 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Xây dựng phương pháp định lượng RPD kỹ thuật LC-MS/MS 19 2.3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 21 2.3.3 Xác định nồng độ RPD mẫu huyết tương người sử dụng thuốc 24 i CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 Xây dựng phương pháp phân tích 26 3.1.1 Lựa chọn điều kiện khối phổ 26 3.1.2 Khảo sát lựa chọn chuẩn nội 28 3.1.3 Khảo sát điều kiện sắc ký 29 3.1.4 Nghiên cứu qui trình xử lý mẫu RPD huyết tương 31 3.2 Thẩm định phương pháp phân tích 38 3.2.1 Sự phù hợp hệ thống LC-MS/MS 38 3.2.2 Độ đặc hiệu – chọn lọc phương pháp 38 3.2.3 Ảnh hưởng mẫu 40 3.2.4 Độ nhiễm chéo 42 3.2.5 Xác định đường chuẩn khoảng tuyến tính 43 3.2.6 Xác định giới hạn định lượng (LLOQ) 44 3.2.7 Độ – độ xác 45 3.2.8 Xác định tỷ lệ thu hồi hoạt chất chất chuẩn nội 47 3.2.9 Độ ổn định 49 3.3 Ứng dụng phương pháp xây dựng để định lượng RPD huyết tương người 50 CHƯƠNG BÀN LUẬN 54 4.1 Về phương pháp định lượng RPD huyết tương người 54 4.2 Về thẩm định phương pháp phân tích 57 4.3 Về ứng dụng phương pháp xây dựng để định lượng RPD huyết tương người tình nguyện 57 KẾT LUẬN 59 KIẾN NGHỊ 59 ii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AUC Diện tích đường cong (Area under the curve) Cmax Nồng độ đỉnh CTPT Công thức phân tử CCA Dung dịch chuẩn gốc RPD để pha đường chuẩn CCB Dung dịch chuẩn gốc RPD để pha mẫu kiểm tra CV Hệ số biến thiên ĐĐ Độ ECD Detector điện hóa (Electrochemical detector) EMA Cơ quan quản lý thuốc Châu Âu ESI Ion hóa kiểu phun điện tử (Electrospray ionization) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao HQC Mẫu kiểm tra nồng độ cao HT Huyết tương IS Chất chuẩn nội KLPT LC-MS/MS LLOQ Khối lượng phân tử Sắc ký lỏng khối phổ hai lần (Liquid chromatography – Tandem mass spectrometry) Giới hạn định lượng LQC Mẫu kiểm tra nồng độ thấp m/z Khối lượng/điện tích MeCN Acetonitril MeOH Methanol MF Hệ số mẫu (Matrix factor) MQC Mẫu kiểm tra nồng độ trung bình NTN Người tình nguyện iii QC Mẫu kiểm tra CCB Dung dịch chuẩn làm việc RPD để pha đường chuẩn QCB Dung dịch chuẩn làm việc RPD để pha mẫu kiểm tra RPD Risperidon tR Thời gian lưu SKD Sinh khả dụng SKĐ Sắc ký đồ SQC Mẫu kiểm tra bổ sung STT Số thứ tự TĐSH Tương đương sinh học TLTK Tài liệu tham khảo Tmax Thời gian đạt nồng độ thuốc tối đa máu US-FDA Cơ quan quản lý thực phẩm dược phẩm Mỹ UV-VIS Tử ngoại – khả kiến v/v VKNTTW w/w WHO Thể tích/thể tích Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Khối lượng/khối lượng Tổ chức y tế Thế giới (World Health Organization) WSS-CC1 Dung dịch RPD huyết tương có nồng độ 50 ng/mL WSS-CC2 Dung dịch RPD huyết tương có nồng độ ng/mL iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các thông số dược động học RPD Bảng 1.2 Một số phương pháp định lượng RPD huyết tương Bảng 1.3 Hiệu suất số chất gây tủa protein 11 Bảng 2.1 Các chất chuẩn sử dụng 18 Bảng 2.2 Các dung mơi, hóa chất sử dụng 18 Bảng 2.3 Danh mục thiết bị sử dụng 19 Bảng 2.4 Cách chuẩn bị đường chuẩn huyết tương 22 Bảng 2.5 Cách chuẩn bị mẫu LLOQ huyết tương 22 Bảng 2.6 Cách chuẩn bị mẫu kiểm tra huyết tương 23 Bảng 3.1 Hiệu suất chiết số dung môi 34 Bảng 3.2 Điều kiện khối phổ định lượng RPD 37 Bảng 3.3 Kết đánh giá phù hợp hệ thống 38 Bảng 3.4 Ảnh hưởng mẫu trắng thời điểm trùng với tR RPD IS 40 Bảng 3.5 Kết đánh giá ảnh hưởng mẫu 41 Bảng 3.6 Kết đánh giá độ nhiễm chéo 42 Bảng 3.7 Kết khảo sát đường chuẩn 43 Bảng 3.8 Đáp ứng pic mẫu LLOQ mẫu Zero tR RPD 44 Bảng 3.9 Kết thẩm định độ – độ xác mẫu LLOQ 44 Bảng 3.10 Kết thẩm định độ – độ xác ngày khác ngày 46 Bảng 3.11 Kết thẩm định độ – độ xác pha loãng 47 Bảng 3.12 Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi IS 48 Bảng 3.13 Kết khảo sát tỷ lệ thu hồi RPD 48 Bảng 3.14 Kết nghiên cứu độ ổn định dung dịch chuẩn gốc RPD IS 49 Bảng 3.15 Kết nghiên cứu độ ổn định RPD huyết tương 50 Bảng 3.16 Kết nồng độ RPD huyết tương 01 người tình nguyện 51 v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức cấu tạo RPD Hình 1.2 Máu toàn phần sau ly tâm 10 Hình 1.3 Sơ đồ cấu tạo máy khối phổ tứ cực chập ba 14 Hình 3.1 Phổ khối MS dung dịch chuẩn RPD với chế độ ESI (+) 26 Hình 3.2 Phổ khối MS/MS phân mảnh ion [RPD + H]+ 27 Hình 3.3 Giản đồ lượng phân mảnh ion [RPD+H]+ 28 Hình 3.4 SKĐ mẫu chuẩn chứa RPD IS với cột Phenomenex C18 (50 x 2,1mm; 1,7µm) 30 Hình 3.5 SKĐ mẫu chuẩn chứa RPD IS với cột Acquity BEH C18 (50 x 2,1 mm; 1,7µm) 30 Hình 3.6 SKĐ mẫu chuẩn chứa RPD IS với thể tích tiêm 10 µL 31 Hình 3.7 Quy trình xử lý mẫu phương pháp tủa protein 32 Hình 3.8 SKĐ mẫu huyết tương chứa RPD IS tủa MeOH 33 Hình 3.9 SKĐ mẫu huyết tương chứa RPD IS tủa MeCN 33 Hình 3.10 Quy trình xử lý mẫu phương pháp chiết lỏng – lỏng 34 Hình 3.11 SKD mẫu huyết tương chứa RPD IS chiết hỗn hợp dung môi methyl tert-butyl ether – cloroform (7:3) 35 Hình 3.12 SKĐ phân tích mẫu huyết tương chứa IS chuẩn RPD nồng độ 15 ng/mL 37 Hình 3.13 SKĐ mẫu huyết tương trắng 39 Hình 3.14 SKĐ mẫu huyết tương trắng có pha IS chuẩn RPD nồng độ LLOQ 39 Hình 3.15 SKĐ mẫu huyết tương NTN trước uống thuốc có thêm chuẩn nội 52 Hình 3.16 SKĐ mẫu huyết tương NTN thời điểm sau uống thuốc 52 Hình 3.17 Đường cong nồng độ RPD – thời gian người tình nguyện 53 vi ĐẶT VẤN ĐỀ Risperidon (RPD) thuốc chống loạn thần không điển hình thuộc nhóm benzisoxazol US-FDA phê duyệt lần đầu năm 1993 với tên biệt dược Risperdal® sử dụng rộng rãi đến ngày để điều trị bệnh tâm thần phân liệt, tâm thần hưng cảm bệnh tự kỉ trẻ em [3],[20],[28] Thuốc có tác dụng đối kháng chọn lọc với thụ thể serotonin typ (5-HT2) thụ thể dopamin typ (D2), điều làm tăng hiệu điều trị triệu chứng âm bệnh tâm thần phân liệt làm giảm triệu chứng ngoại tháp so với thuốc chống loạn thần điển hình ức chế thụ thể D2 haloperidol, clopromazin Đặc biệt, RPD có khả dung nạp tốt liều dùng thấp nhiều so với thuốc loạn thần khác [18] Với vai trị ưu điểm nói trên, RPD WHO đưa vào danh mục thuốc thiết yếu dùng điều trị rối loạn tâm thần rối loạn hành vi [26] Theo quy định Thông tư số 08/2010/TT-BYT ngày 26/4/2010 Bộ Y tế hướng dẫn báo cáo số liệu nghiên cứu sinh khả dụng tương đương sinh học đăng ký thuốc thuốc chống rối loạn tâm thần thuộc danh mục nhóm thuốc có tác dụng dược lý ưu tiên cần báo cáo số liệu nghiên cứu tương đương sinh học đăng ký thuốc Ở Việt Nam có nhiều thuốc generic có chứa RPD sản xuất đăng ký lưu hành, nghiên cứu sinh khả dụng (SKD) tương đương sinh học (TĐSH) RPD hạn chế Để thực nghiên cứu cần xây dựng phương pháp định lượng RPD huyết tương đạt yêu cầu theo quy định hành Tuy nhiên, nồng độ RPD huyết tương thấp, mẫu thường phức tạp nên kỹ thuật phân tích thơng dụng quang phổ UV-Vis, sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) kết nối với detector UV, ECD, huỳnh quang, … thường không đủ độ nhạy độ đặc hiệu Thay vào đó, kỹ thuật sắc ký lỏng ghép nối khối phổ với nhiều ưu như: độ nhạy, độ đặc hiệu – chọn lọc cao, thời gian phân tích ngắn nên ngày sử dụng rộng rãi phịng thí nghiệm Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator LLOQ4 VAL19032020-1.wiff Quality Control 3/19/2020 6:18:45 PM Risperidone01.dam Validation\2020_Risperidone VAL19032020.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-duc Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume Instrument Name Area (cps) 16965881 Target Analyte Risperidone Area (cps) 126760 20 MQL 0.00 Sciex QTRAP 6500+ RT (min) 1.026 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.862 Target conc (ng/mL) 0.206 Calc Conc (ng/mL) 0.210 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 1.026(0.974) Concnetration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Quality Control) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.862 (0.830) Calculated conc: 0.210 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.007 (Quality Control) Page 54 of 100 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator LLOQ5 VAL19032020-1.wiff Quality Control 3/19/2020 6:21:21 PM Risperidone01.dam Validation\2020_Risperidone VAL19032020.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-duc Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume Instrument Name Area (cps) 17297528 Target Analyte Risperidone Area (cps) 130377 21 MQL 0.00 Sciex QTRAP 6500+ RT (min) 1.028 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.861 Target conc (ng/mL) 0.206 Calc Conc (ng/mL) 0.210 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 1.028(0.974) Concnetration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Quality Control) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.861 (0.830) Calculated conc: 0.210 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.008 (Quality Control) Page 55 of 100 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator LLOQ6 VAL19032020-1.wiff Quality Control 3/19/2020 6:23:57 PM Risperidone01.dam Validation\2020_Risperidone VAL19032020.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-duc Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume Instrument Name Area (cps) 17480544 Target Analyte Risperidone Area (cps) 128558 22 MQL 0.00 Sciex QTRAP 6500+ RT (min) 1.033 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.864 Target conc (ng/mL) 0.206 Calc Conc (ng/mL) 0.210 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 1.033(0.974) Concnetration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Quality Control) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.864 (0.830) Calculated conc: 0.210 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.007 (Quality Control) Page 56 of 100 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-0 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:06:09 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 43 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13414175 Target Analyte Risperidone Area (cps) RT (min) 0.979 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.000 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) N/A Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.979(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.000 (0.830) Calculated conc: N/A ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.000 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-0.167 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:08:44 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 44 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13604547 Target Analyte Risperidone Area (cps) RT (min) 0.963 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.000 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) N/A Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.963(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.000 (0.830) Calculated conc: N/A ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.000 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-LQC1 R06.wiff Quality Control 6/23/2020 7:11:20 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 45 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13165693 Target Analyte Risperidone Area (cps) 234412 RT (min) 0.977 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.849 Target conc (ng/mL) 0.614 Calc Conc (ng/mL) 0.679 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.977(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Quality Control) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.849 (0.830) Calculated conc: 0.679 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.018 (Quality Control) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-0.33 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:13:56 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 46 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13225683 Target Analyte Risperidone Area (cps) 127167 RT (min) 0.971 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.846 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 0.376 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.971(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.846 (0.830) Calculated conc: 0.376 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.010 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-0.5 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:16:29 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 47 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13445238 Target Analyte Risperidone Area (cps) 598832 RT (min) 0.969 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.840 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 1.668 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.969(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.840 (0.830) Calculated conc: 1.668 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.045 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-0.75 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:19:05 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 48 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13144256 Target Analyte Risperidone Area (cps) 2556150 RT (min) 0.969 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.839 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 7.213 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.969(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.839 (0.830) Calculated conc: 7.213 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.194 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-1 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:21:38 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 49 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13189495 Target Analyte Risperidone Area (cps) 4569513 RT (min) 0.975 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.847 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 12.834 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.975(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.847 (0.830) Calculated conc: 12.834 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.346 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-SQC1 R06.wiff Quality Control 6/23/2020 7:24:11 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 50 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 12832119 Target Analyte Risperidone Area (cps) 1516428 RT (min) 0.970 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.843 Target conc (ng/mL) 4.092 Calc Conc (ng/mL) 4.391 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.970(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Quality Control) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.843 (0.830) Calculated conc: 4.391 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.118 (Quality Control) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-1.33 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:26:44 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 51 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13027435 Target Analyte Risperidone Area (cps) 6545865 RT (min) 0.978 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.848 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 18.604 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.978(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.848 (0.830) Calculated conc: 18.604 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.502 (Unknown) Page of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-1.67 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:29:20 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 52 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13234910 Target Analyte Risperidone Area (cps) 6829487 RT (min) 0.952 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.822 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 19.105 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.952(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.822 (0.830) Calculated conc: 19.105 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.516 (Unknown) Page 10 of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-2 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:31:56 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 53 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13560787 Target Analyte Risperidone Area (cps) 6176419 RT (min) 0.980 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.850 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 16.865 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.980(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.850 (0.830) Calculated conc: 16.865 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.455 (Unknown) Page 11 of 52 Created with Analyst Reporter NIDQC-BEcenter ANALYST SAMPLE REPORT Sample Name Data File Sample Type Acquisition Date Acquisition Method Project Result Table Instrument Code Operator R06-1-3 R06.wiff Unknown 6/23/2020 7:34:29 PM Risperidone01.dam Analysis\2020_Risperidone_50BE 03 R06.rdb VKN/TĐSH/53.05 tdsh_53.05-dp-huyenb Internal Standard Haloperidol Injection Vial Injection Volume Algorithm Used Dilution Factor Weight to Volume 54 MQL 1.0 0.00 Instrument Name Sciex QTRAP 6500+ Area (cps) 13458358 Target Analyte Risperidone Area (cps) 5049420 RT (min) 0.980 Target conc (ng/mL) 1.00 Calc Conc (ng/mL) - RT (min) 0.852 Target conc (ng/mL) N/A Calc Conc (ng/mL) 13.896 Haloperidol (Internal Standard) RT (Exp RT): 0.980(0.974) Concentration: 1.00 ng/mL Sample Type: (Unknown) Risperidone (411.000/191.000 Da) RT (Exp RT): 0.852 (0.830) Calculated conc: 13.896 ng/ml Area Ratio: Sample Type: 0.375 (Unknown) Page 12 of 52 ... trên, tiến hành thực đề tài: ? ?Xây dựng phương pháp sắc ký lỏng khối phổ định lượng Risperidon huyết tương người? ?? với mục đích xây dựng phương pháp phân tích đáp ứng quy định hành phù hợp với điều... với phương pháp chiết lỏng lỏng Vì vậy, phương pháp tủa protein lựa chọn để xử lý mẫu huyết tương Từ kết thực nghiệm nêu, phương pháp sắc ký lỏng khối phổ sử dụng để định lượng RPD huyết tương người. .. NỘI LÊ ĐÌNH KHÁNH XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG KHỐI PHỔ ĐỊNH LƯỢNG RISPERIDON TRONG HUYẾT TƯƠNG NGƯỜI LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC KIỂM NGHIỆM THUỐC – ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 8720210 Người hướng dẫn khoa