Sàng lọc và đánh giá tác dụng của một số chất trên dòng tế bào ung thư phổi không tế bào nhỏ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HIỀN SÀNG LỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THƢ PHỔI KHƠNG TẾ BÀO NHỎ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HIỀN SÀNG LỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THƢ PHỔI KHƠNG TẾ BÀO NHỎ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC LÝ – DƯỢC LÂM SÀNG MÃ SỐ: 8720205 Người hướng dẫn khoa học: TS Phạm Thế Hải TS Đỗ Thị Nguyệt Quế HÀ NỘI 2020 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận văn thạc sĩ “Sàng lọc đánh giá tác dụng số chất dịng tế bào ung thƣ phổi khơng tế bào nhỏ”, lời em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy TS Phạm Thế Hải Giảng viên mơn Hóa dược TS Đỗ Thị Nguyệt Quế - Giảng viên môn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội, người thầy tận tình trực tiếp hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ em nhiều suốt khoảng thời gian thực luận văn Em xin chân thành cảm ơn tới TS Nguyễn Hải Đăng- Hiệu phó Trường Đại học Khoa học Cơng nghệ Hà Nội - viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam quý thầy cô mơn Hóa dược, mơn Dược lực - Trường Đại học Dược Hà Nội, em sinh viên hỗ trợ tạo điều kiện cho em suốt trình nghiên cứu thực đề tài Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quan, gia đình bạn bè ln động viên ủng hộ em suốt thời gian qua Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng 10 năm 2020 Học viên Nguyễn Thị Hiền MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ .1 Chƣơng TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.1.Một vài nét ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh phân tử ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.3 Quá trình chết theo chương trình (apoptosis) tế bào 11 1.1.4 Liệu pháp điều trị NSCLC 16 1.1.5 Vấn đề nghiên cứu thuốc điều trị NSCLC 19 1.2 Phương pháp sàng lọc hoạt chất kháng ung thư mơ hình in silico 20 1.2.1 Nguyên lý phương thức hoạt động 20 1.2.2 Ứng dụng mơ hình in silico 22 1.3 Một số phương pháp đánh giá tác dụng chống ung thư in vitro 23 1.3.1 Một số phương pháp đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư 23 1.3.2 Một số phương pháp đánh giá tác dụng gây chết theo chương trình (apoptosis) 25 1.3.3 Phương pháp đánh giá tác dụng protein 26 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.2 Phương tiện nghiên cứu 27 2.2.1 Thuốc hóa chất 27 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 28 2.3 Nội dung nghiên cứu 29 2.4 Điều kiện thí nghiệm……………………………………….………… …30 2.5 Phương pháp nghiên cứu 30 2.5.1 Sàng lọc hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào Phương pháp in silico………………… 30 2.5.2 Đánh giá tác dụng hợp chất số dòng tế bào NSCLC 33 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 44 3.1 Sàng lọc số hợp chất có độc tính dịng tế bào NSCLC mơ hình in silico 44 3.2 Kết đánh giá tác dụng hợp chất số dòng tế bào NSCLC 49 3.2.1 Đánh giá tác dụng gây độc tính tế bào NSCLC phương pháp MTT.49 3.2.2 Kết đánh giá tác dụng chất sàng lọc trình chết theo chương trình (apoptosis) tế bào NSCLC 54 3.2.3 Đánh giá tác dụng ức chế thụ thể EGFR 58 Chƣơng BÀN LUẬN 62 4.1 Về kết sàng lọc hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào mơ hình in silico 62 4.2 Về kết đánh giá tác dụng hợp chất số dòng tế bào NSCLC 65 4.2.1 Về kết đánh giá tác dụng gây độc tính tế bào NSCLC 65 4.2.2 Về kết đánh giá tác dụng chất sàng lọc trình chết theo chương trình (apoptosis) tế bào NSCLC 68 4.2.3 Về kết đánh giá tác dụng ức chế thụ thể EGFR 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 73 PHỤ LỤC 84 DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CPT Camptothecin CSDL Cơ sở liệu CS% % Cell Survival CASPs Caspase DISC Phức hợp tín hiệu gây chết EGF Yếu tố tăng trưởng biểu bì FADD Protein gắn với Fas KI Phần trăm ức chế tăng trưởng tế bào IC50 nồng độ cố định Nồng độ ức chế 50% phát triển tế bào NSCLC Ung thư phổi không tế bào nhỏ OD Mật độ quang TNF Yếu tố hoại tử khối u UTBMV Ung thư biểu mô vảy UTBMT Ung thư biểu mô tuyến UTBMTBL Ung thư biểu mô tế bào lớn UTP Ung thư phổi DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU Bảng Danh mục 22 hợp chất dự đốn có độc tính dịng tế bào A549, H1299 H1975 .45 Bảng Giá trị IC50 chất B04, C04 dòng tế bào A549, H1299 H1975 53 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1 Vị trí hình ảnh tế bào loại ung thư phổi Hình Cấu trúc thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô [18] Hình (a) Cấu trúc thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR) [80] .7 Hình Đường truyền tín hiệu EGFR [82] Hình Các đường dẫn đến apoptosis [68] 13 Hình Biểu diễn giản đồ kiện diễn tế bào trải qua trình apoptosis [87] 15 Hình Hình ảnh chụp vi thể phần tuyến tụy ngoại tiết từ 15 chuột B6C3F1 Các mũi tên tế bào apoptotic 15 bị teo lại với tế bào chất cô đặc [68] 15 Hình Sơ đồ điều trị ung thư phổi không tế bào nhỏ theo giai đoạn [1] 17 Hình 2.1 Sơ đồ thiết kế nghiên cứu…………………………………………….30 Hình 2 Quy trình sàng lọc in silico 32 Hình 2.3 Nguyên lý hoạt động phương pháp MTT .34 Hình 2.4 Quy trình nhuộm tế bào thuốc nhuộm Hoechst 33342 [15] 38 Hình 2.5 Vị trí quần thể tế bào sau nhuộm Annexin V/PI 39 Hình 2.6 Sự kích hoạt, tái tạo phân hủy EGFR [27] .42 Hình Kết sàng lọc in silico 44 Hình Biểu đồ giá trị tỷ số tăng sinh (CS%) 22 hợp chất50 dòng tế bào A549, H1299, H1975 nồng độ 100 μmol /l 50 Hình 3 Hình ảnh dịng tế bào A549 (A), H1299 (B), H1975 (C)52 ủ với chất B04 nồng độ khác 52 Hình Quá trình chết theo chương trình tế bào A549 .54 quan sát cách nhuộm Hoechst 33342 54 Hình Quá trình chết theo chương trình tế bào H1299 55 quan sát cách nhuộm Hoechst 33342 55 Hình Quá trình chết theo chương trình tế bào H1975 55 quan sát cách nhuộm Hoechst 33342 55 Hình Quá trình apoptosis B04 gây tế bào A549 (A), H1299 (B), H1975 (C) phát phương pháp đo lưu lượng tế bào sau ủ 48h Các tế bào sau thu hoạch nhuộm Annexin V, PI phân tích lưu lượng tế bào chảy thực để phân tích trình apoptosis .57 Hình Hình ảnh mơ tương tác Erlotinib với EGFR .59 Hình Hình ảnh mô tương tác B04 với (A) EGFR hoạt động kèm đột biến đoạn exon 19 (PDB ID: 1M17), (B) EGFR không hoạt động (PDB ID: 4HJO); (C) EGFR hoạt động kèm đột biến điểm L858R exon 21 (PDB ID: 2ITV) 60 Hình 10 B04 ức chế thụ thể EGFR tế bào H1975 .61 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư phổi không tế bào nhỏ (Non-small cell lung cancer, NSCLC) chiếm 85% trường hợp ung thư phổi (UTP) Việt Nam giới Mặc dù việc chẩn đoán điều trị ung thư phổi cải thiện, tỷ lệ sống sót sau năm bệnh nhân NSCLC thấp 15% [69] Hiện nay, phác đồ điều trị UTP kết hợp phẫu thuật, xạ trị hóa trị cịn nhiều hạn chế Trong đó, hóa trị liệu sử dụng thuốc gây độc tế bào thường có nhiều phản ứng phụ tính chọn lọc Trong năm gần đây, nghiên cứu hồ sơ di truyền học bệnh lý ung thư, đặc biệt ung thư phổi giúp phát nhiều loại đột biến gen quan trọng (driver mutation) ảnh hưởng đến khả đáp ứng thuốc Trong NSCLC, đột biến gen EGFR (Epidermal growth factor receptor - thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì) đích phân tử tiềm cho nghiên cứu sàng lọc tìm kiếm thuốc Các chất có khả ức chế hoạt động gen đột biến ngăn không cho tế bào ung thư phát triển, thúc đẩy trình chết tự nhiên (apoptosis) tế bào Nhờ đó, thuốc tiêu diệt chọn lọc tế bào ung thư mà ảnh hưởng đến tế bào lành Đồng thời giúp kéo dài thời gian sống cải thiện chất lượng sống bệnh nhân Hiện nay, phương pháp nghiên cứu tìm kiếm thuốc với hỗ trợ công nghệ thu hút quan tâm lớn từ cộng đồng khoa học Một cách tiếp cận phổ biến tích hợp mơ hình máy tính (ví dụ mơ hình học máy hay trí tuệ nhân tạo) vào q trình sàng lọc ứng viên thành thuốc Các mơ hình giúp thu hẹp khơng gian tìm kiếm tăng xác suất thành cơng q trình sàng lọc thực nghiệm đích phân tử, tế bào hay mơ hình in vitro Ưu điểm cách tiếp cận giảm thiểu chi phí nghiên cứu tăng hiệu suất trình tìm kiếm thuốc Trong nghiên cứu Castillo et al [43], mơ hình học máy tính phát triển, giúp sàng lọc tìm kiếm chất có độc tính đồng thời PHỤ LỤC Dãy nồng độ thử độc tính chất B04, C04 camptothecin dòng tế bào A549, H1299, H1975 Chất thử (dòng tế bào) Nồng độ thử (µmol/l) B04 (A549, H1299) 12,5 25 50 100 200 B04 (H1975) 10 30 100 C04 (A549, H1299) 12,5 25 50 100 200 C04 (H1975) 10 30 100 0,3 10 Camptothecin (A549, H1299, H1975) PHỤ LỤC Bảng 1: Kết đánh giá độc tính chất A01, A02, A03, A04, A05, A06, A07 dòng tế bào A549 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Control CPT A01 A02 A03 5µM 1µM 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 0.556 0.61 0.832 1.137 1.102 1.016 0.796 0.687 0.93 0.968 0.57 0.912 1.163 1.145 1.161 1.072 0.666 0.826 1.119 0.571 0.91 1.048 1.011 1.028 0.809 0.858 1.108 1.0955 0.583667 0.884667 1.116 1.078 1.0945 0.892333 0.737 0.954667 50.75308 55.68234 75.94706 103.7882 100.5933 92.74304 72.66089 62.71109 84.89274 88.36148 52.03104 83.24966 106.1616 104.5185 105.979 97.85486 60.79416 75.39936 102.1451 52.12232 83.06709 95.66408 92.28663 93.83843 73.84756 78.3204 101.141 100 53.27856 80.7546 101.8713 98.40256 99.90872 81.45443 67.27522 87.14438 4.964978 1.202175 2.404351 3.178327 6.115929 6.070288 8.207365 5.550247 7.515779 A04 A05 A06 A07 30µM 0.694 0.894 0.987 0.858333 63.35007 81.60657 90.09585 78.35083 7.890586 100µM 0.277 0.281 0.67 0.279 25.28526 25.65039 61.15929 25.46782 0.182565 30µM 0.717 1.202 1.073 1.1375 65.44957 109.7216 97.94614 103.8339 5.887723 100µM 0.509 0.89 0.648 0.5785 46.4628 81.24144 59.15107 52.80694 6.344135 30µM 0.841 1.085 0.846 0.924 76.7686 99.04153 77.22501 84.34505 7.349424 100µM 0.709 1.006 0.844 0.853 64.71931 91.83021 77.04245 77.86399 7.837018 30µM 0.961 1.012 0.977 0.9945 87.7225 92.37791 89.18302 90.78047 1.597444 100µM 0.311 0.799 0.813 0.806 28.38886 72.93473 74.21269 73.57371 0.638978 Bảng 2: Kết đánh giá độc tính chất B01, B02, B03, B04, B05, B06, B07 dòng tế bào A549 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE CONTROL CPT B01 B02 B03 5µM 1µM 30µM 100 µM 30µM 100µM 30µM 0.946 0.851 0.437 0.597 0.859 0.974 1.012 0.875 0.877 1.001 1.23 0.574 0.659 0.947 1.078 1.261 1.065 1.18 1.267 1.507 0.497 0.76 0.938 1.012 1.176 1.041 1.031 1.133666667 0.502667 0.672 0.914667 1.021333 1.149667 0.993667 1.029333 83.44605 75.06616 38.54749 52.66098 75.77183 85.91591 89.26786 77.18318 77.3596 88.29756 108.4975 50.63217 58.12996 83.53425 95.08968 111.232 93.94296 104.087 111.7612 132.9315 43.84005 67.03911 82.74037 89.26786 103.7342 91.82593 90.94384 94.50161717 44.3399 59.27668 80.68215 90.09115 101.4113 87.65069 90.79682 8.80850835 3.497488 4.190022 2.465833 2.680042 6.445992 5.269314 7.715896 B03 B04 B05 b06 B07 `100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 1.08 0.756 0.252 1.118 1.023 0.972 0.873 0.897 0.969 0.984 0.698 0.359 1.071 0.811 1.032 0.6 1.145 0.822 1.012 0.717 0.235 1.036 0.854 1.116 0.588 1.035 0.75 1.025333 0.723667 0.282 1.075 0.896 1.04 0.687 1.025667 0.847 95.2661 66.68627 22.22876 98.61805 90.23817 85.73949 77.00676 79.12379 85.47486 86.798 61.57013 31.66716 94.47221 71.53778 91.03205 52.92561 100.9997 72.50809 89.26786 63.2461 20.7292 91.38489 75.33079 98.44163 51.8671 91.29668 66.15701 90.44399 63.83417 24.87504 94.82505 79.03558 91.73772 60.59982 90.47339 74.71332 2.514267 1.505887 3.423538 2.095475 5.707311 3.683731 8.209159 6.328436 5.684543 Bảng 3: Kết đánh giá độc tính chất C01, C02, C03, C04, C05, C06, C07, D01 dòng tế bào A549 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE control CPT 1.429 1.462 1.323 1.521 1.508 1.558 1.466833333 97.42075 99.67049 90.1943 103.6928 102.8065 106.2152 100 2.331341702 c04 30µM 100µM 1.253 0.78 1.133 0.623 1.301 0.619 1.229 0.674 85.42211 53.17578 77.24122 42.47245 88.69447 42.19975 83.78593 45.94932 3.405976 3.614083 5µM 1µM 0.55 0.812 0.672 0.865 0.465 1.09 0.562333 0.922333 37.49574 55.35735 45.81298 58.97057 31.70094 74.30974 38.33655 62.87922 4.095428 5.809659 c05 30µM 100µM 1.633 1.025 1.712 0.946 1.855 0.976 1.733333 0.982333 111.3283 69.87842 116.714 64.49267 126.4629 66.53789 118.1684 66.96966 4.4291 1.569649 C01 30µM 100µM 1.541 1.648 1.524 1.685 1.392 1.712 1.485667 1.681667 105.0562 112.3509 103.8973 114.8733 94.89831 116.714 101.2839 114.6461 3.2103 1.264645 C06 30µM 100µM 1.26 1.248 1.257 1.144 1.652 1.318 1.389667 1.236667 85.89933 85.08124 85.69481 77.99114 112.6236 89.85343 94.73923 84.3086 8.942361 3.44607 c02 30µM 100µM 1.189 1.266 1.355 1.274 1.532 1.522 1.358667 1.354 81.05897 86.30837 92.37587 86.85377 104.4427 103.7609 92.62584 92.30769 6.751452 5.728786 c07 30µM 100µM 1.174 0.884 1.277 0.969 1.567 0.848 1.339333 0.900333 80.03636 60.26588 87.05829 66.06067 106.8288 57.81161 91.30781 61.37939 8.02085 2.445519 C03 30µM 100µM 1.471 1.513 1.581 1.56 1.595 1.451 1.549 1.508 100.2841 103.1474 107.7832 106.3516 108.7376 98.92058 105.6016 102.8065 2.673026 2.151897 d01 30µM 100µM 0.9 0.896 0.988 0.915 0.823 0.804 0.903667 0.871667 61.35666 61.08397 67.35598 62.37928 56.10726 54.81195 61.60664 59.42507 3.249631 2.336668 Bảng 4: Kết đánh giá độc tính chất A01, A02, A03, A04, A05, A06, A07 dòng tế bào H1299 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Control 1.751 1.41 1.613 1.549 113.0407 91.02647 104.1317 100 4.49837 A03 100µM 1.348 1.534 1.169 1.441 87.02389 99.03163 75.46804 93.02776 6.003873 CPT 1µM 1.304 0.824 1.693 0.789 1.523 0.886 0.8375 84.18334 53.19561 109.2963 50.93609 98.3215 57.19819 54.06714 3.131052 A04 30µM 100µM 1.726 1.643 1.642 1.241 1.51 1.33 1.626 1.2855 111.4267 106.0684 106.0039 80.1162 97.48225 85.86185 104.9709 82.98903 4.058421 2.872821 A01 A02 A03 5µM 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 0.324 1.342 1.302 1.444 1.437 1.409 0.329 1.589 1.456 1.64 1.507 1.366 0.396 2.23 1.153 1.716 1.424 1.485 0.36 1.4655 1.2275 1.678 1.456 1.42 20.91672 86.63654 84.05423 93.22143 92.76953 90.96191 21.23951 102.5823 93.99613 105.8748 97.28857 88.18593 25.56488 143.9638 74.43512 110.7811 91.93028 95.8683 23.2408 94.60943 79.24467 108.328 93.99613 91.67205 2.32408 7.972886 4.809555 2.453196 1.663955 2.245955 A05 A06 A07 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 1.625 1.693 1.613 1.718 1.228 1.388 1.548 1.76 1.848 1.466 1.458 1.59 1.363 1.585 1.956 1.372 1.277 1.192 1.4555 1.639 1.805667 1.518667 1.3675 1.29 104.9064 109.2963 104.1317 110.9103 79.27695 89.6062 99.93544 113.6217 119.3028 94.6417 94.12524 102.6469 87.99225 102.3241 126.275 88.57327 82.44028 76.95287 93.96385 105.8102 116.5698 98.04175 88.28276 83.27954 5.971595 3.48612 6.53665 6.668471 5.842479 6.326662 Bảng 5: Kết đánh giá độc tính chất B01, B02, B03, B04, B05, B06, B07 dòng tế bào H1299 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE CONTROL CPT B01 B02 B03 µM µM 30 µM 100 µM 30 µM 100 µM 30 µM 1.482 1.283 0.662 0.409 1.107 0.833 1.446 1.288 1.458 1.388 1.41 0.76 0.38 1.213 1.115 1.69 1.435 1.311 1.428 1.337 0.847 0.289 1.191 1.206 1.758 1.532 1.518 1.388 0.756333 0.359333 1.170333 1.051333 1.631333 1.418333 1.429 100 101.585 47.69452 29.46686 79.75504 60.01441 104.1787 92.79539 105.0432 102.8818 96.32565 54.75504 27.37752 87.39193 80.33141 121.7579 103.3862 94.45245 102.8818 96.32565 61.02305 20.82133 85.80692 86.88761 126.6571 110.3746 109.366 101.9212 54.49087 25.88857 84.31796 75.74448 117.5312 102.1854 102.9539 1.239947 3.849882 0.852968 3.117746 8.294382 7.176699 4.323667 4.323667 B03 B04 B05 B06 B07 `100 µM 30 µM 100 µM 30µM 100µM 30µM 100µM 30µM 100µM 1.284 1.142 0.191 1.509 1.34 1.503 1.296 1.22 1.175 1.412 1.034 0.388 1.364 1.374 1.469 1.057 1.315 0.946 1.331 1.289 0.201 1.257 1.157 1.349 1.128 1.378 0.961 1.342333 1.155 0.26 1.376667 1.290333 1.440333 1.160333 1.304333 1.027333 92.5072 82.27666 13.76081 108.7176 96.54179 108.2853 93.37176 87.89625 84.65418 101.7291 74.49568 27.95389 98.27089 98.99135 105.8357 76.15274 94.74063 68.15562 95.89337 92.86744 14.48127 90.56196 83.35735 97.1902 81.26801 99.27954 69.23631 96.70989 83.21326 18.73199 99.18348 92.9635 103.7704 83.5975 93.97214 74.01537 3.764826 3.176572 5.794302 4.264842 1.000032 1.000032 7.029636 2.794207 6.735509 Bảng 6: Kết đánh giá độc tính chất C01, C02, C03, C04, C05, C06, C07, D01 dòng tế bào H1299 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE control CPT µM 1.58 0.824 1.62 0.789 1.617 0.886 1.6057 0.833 98.401 51.318 100.89 49.138 100.71 55.18 100 51.879 0.5664 1.7663 c04 30µM 100µM 1.212 0.785 1.25 0.849 1.564 0.783 1.342 0.8057 75.483 48.889 77.849 52.875 97.405 48.765 83.579 50.176 6.9467 1.3499 µM 0.324 0.329 0.396 0.3497 20.179 20.49 24.663 21.777 1.4456 c01 c02 C03 30µM 100 µM 30µM 100µM 30µM `100µM 1.574 1.51 1.397 1.434 1.598 1.5 1.651 1.739 1.422 1.474 1.707 1.433 1.451 1.702 1.522 1.426 1.503 1.459 1.5587 1.6503 1.447 1.4447 1.6027 1.464 98.028 94.042 87.004 89.309 99.523 93.419 102.82 108.3 88.561 91.8 106.31 89.246 90.367 106 94.789 88.81 93.606 90.866 97.073 102.78 90.118 89.973 99.813 91.177 3.6273 4.4203 2.3783 0.9247 3.6705 1.2146 c05 C06 c07 d01 30µM 100µM 30µM 100µM 30 µM 100µM `100µM 30µM 1.594 1.367 1.789 1.291 1.638 1.297 1.5 1.464 1.478 1.43 1.532 1.301 1.568 1.4 1.433 1.632 1.346 1.396 1.649 1.199 1.436 1.407 1.459 1.488 1.4727 1.3977 1.6567 1.2637 1.5473 1.368 1.464 1.528 99.273 85.136 111.42 80.403 102.01 80.776 93.419 91.177 92.049 89.06 95.412 81.026 97.654 87.191 89.246 101.64 83.828 86.942 74.673 89.433 87.627 90.866 92.672 91.717 87.046 103.41 78.7 96.367 85.198 91.177 95.163 4.4618 1.1338 6.5343 2.0217 3.6882 2.2145 1.2146 3.2671 Bảng 7: Kết đánh giá độc tính chất A01-07, B01-07 dịng tế bào H1975 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Control 1.751 1.304 1.41 1.693 1.613 1.523 1.549 113.0407 84.18334 91.02647 109.2963 104.1317 98.3215 100 4.498369502 A06 A07 100 µM 100 µM 0.805 1.298 0.896 1.208 0.812 1.301 0.8505 1.269 51.96901 83.796 57.84377 77.9858 52.42092 83.98967 54.90639 81.92382 2.937379 1.969806 CPT 1µM 0.824 0.989 0.886 0.9375 53.19561 63.84764 57.19819 60.52292 3.324726 B01 100 µM 0.938 0.834 0.972 0.903 60.5552 53.84119 62.75016 58.29567 4.454487 5µM 0.424 0.329 0.496 0.46 27.3725 21.23951 32.02066 29.69658 2.32408 B02 100 µM 1.402 1.419 1.363 1.412 90.51001 91.60749 87.99225 89.79987 1.807618 A01 100 µM 1.498 1.589 1.907 1.5435 96.70755 102.5823 123.1117 99.64493 2.937379 B03 100 µM 1.592 1.672 1.485 1.602 102.776 107.9406 95.8683 99.32214 3.453841 A02 100 µM 1.402 1.056 1.653 1.5275 90.51001 68.17301 106.714 98.61201 8.102001 B04 100 µM 0.192 0.219 0.109 0.173333 12.39509 14.13815 7.036798 11.19002 2.136701 A03 100 µM 1.104 1.194 1.145 1.1695 71.27179 77.08199 73.91866 75.50032 1.581666 B05 100 µM 1.718 1.466 1.372 1.518667 110.9103 94.6417 88.57327 98.04175 6.668471 A04 100 µM 1.1297 1.237 1.212 1.1929 72.93092 79.85797 78.24403 77.01097 2.092552 B06 100 µM 0.989 1.012 1.089 0.936 63.84764 65.33247 70.30342 67.81795 2.485474 A05 100 µM 0.909 0.803 0.937 0.883 58.68302 51.8399 60.49064 57.00452 2.634506 B07 100 µM 1.388 1.467 1.427 1.4075 89.6062 94.70626 92.12395 90.86507 1.258877 Bảng 8: Kết đánh giá độc tính chất C01, C02, C03, C04, C05, C06, C07, D01 dòng tế bào H1975 Mẫu/Giá trị Nồng độ C01 100 µM C02 100 µM C03 100 µM C04 100 µM C05 100 µM C06 100 µM C07 100 µM D01 100 µM OD lần 1.209 1.187 1.748 0.401 0.518 1.718 0.891 0.719 OD lần 1.198 1.098 1.105 0.529 0.601 1.466 0.798 0.701 OD lần 1.246 1.023 0.938 0.497 0.672 1.372 0.874 0.602 OD trung bình 1.217667 1.0605 1.0215 0.449 0.597 1.518667 0.836 0.6605 %CS lần 78.05036 76.63008 112.847 25.88767 33.44093 110.9103 57.52098 46.41704 %CS lần 77.34022 70.88444 71.33635 34.15107 38.79923 94.6417 51.51711 45.255 %CS lần 80.43899 66.04261 60.5552 32.08522 43.38283 88.57327 56.4235 38.86378 % CS trung bình 78.60986 68.46352 65.94577 28.98644 38.54099 98.04175 53.9703 42.64041 SE 0.937262 2.420917 5.390575 3.098773 2.872882 6.668471 2.453196 3.77663 Bảng 9: Kết đánh giá độc tính chất Camptothecin, B04, C04 để tính giá trị IC50 dịng tế bào A549 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Control DMSO 1% 0.762 0.831 0.684 0.845 0.911 0.794 1.009 0.792 0.735 0.822666667 0.737666667 92.6256078 101.013 83.14424635 102.714749 110.7374 96.51539708 122.649919 96.27229 89.34359806 100 89.66774716 1.927512138 3.863319921 B04 25 µM 50 µM 100 µM 0.701 0.496 0.236 0.729 0.599 0.29 0.719 0.592 0.315 0.71633333 0.562333 0.280333333 85.2106969 60.29173 28.68719611 88.6142626 72.81199 35.25121556 87.3987034 71.9611 38.29011345 87.0745543 68.35494 34.07617504 0.99580273 4.03908 2.833698733 0,3 µM 0.64 0.756 0.745 0.713667 77.79579 91.89627 90.55916 86.75041 4.493917 Camptothecin µM µM 0.597 0.437 0.601 0.374 0.502 0.497 0.566667 0.436 72.56888 53.11994 73.05511 45.46191 61.02107 60.41329 68.88169 52.99838 3.932813 4.316519 200 µM 0.101 0.102 0.152 0.118333 12.27715 12.3987 18.4765 14.38412 2.046492 12.5 µM 0.684 0.753 0.829 0.755333 83.14425 91.5316 100.7699 91.81524 5.090051 25 µM 0.701 0.729 0.698 0.709333 85.2107 88.61426 84.84603 86.22366 1.199926 10 µM 0.186 0.218 0.16 0.188 22.6094 26.49919 19.44895 22.85251 2.038857 C04 50 µM 0.521 0.599 0.65 0.59 63.33063 72.81199 79.01135 71.71799 4.559562 B04 12.5 µM 0.784 0.765 0.729 0.759333 95.29984 92.99028 88.61426 92.30146 1.960449 100 µM 200 µM 0.366 0.201 0.49 0.202 0.415 0.152 0.423667 0.185 44.48947 24.43274 59.5624 24.55429 50.44571 18.4765 51.49919 22.48784 4.382948 2.00598 Bảng 10: Kết đánh giá độc tính chất Camptothecin, B04, C04 để tính giá trị IC50 dịng tế bào H1299 Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Mẫu/Giá trị Nồng độ OD lần OD lần OD lần OD trung bình %CS lần %CS lần %CS lần % CS trung bình SE Control DMSO 1% 0.762 0.831 0.698 0.845 0.911 0.794 1.009 0.792 0.735 0.822666667 0.742333 92.62561 101.013 84.84603 102.7147 110.7374 96.5154 122.6499 96.27229 89.3436 100 90.23501 1.927512138 3.398014 B04 25 µM 50 µM 100 µM 0.701 0.408 0.136 0.729 0.593 0.2 0.691 0.392 0.115 0.707 0.464333 0.150333 85.2107 49.59481 16.5316 88.61426 72.08266 24.31118 83.99514 47.64992 13.97893 85.94003 56.44246 18.27391 1.382392 7.840226 3.10728 0,3 µM 0.64 0.756 0.745 0.713667 77.79579 91.89627 90.55916 86.75041 4.493917 Camptothecin µM µM 0.597 0.437 0.601 0.374 0.502 0.497 0.566667 0.436 72.56888 53.11994 73.05511 45.46191 61.02107 60.41329 68.88169 52.99838 3.932813 4.316519 200 µM 0.101 0.102 0.152 0.118333 12.27715 12.3987 18.4765 14.38412 2.046492 12.5 µM 0.784 0.689 0.789 0.754 95.29984 83.75203 95.90762 91.65316 3.954461 25 µM 0.741 0.629 0.603 0.657667 90.07293 76.45867 73.29822 79.94327 5.146346 10 µM 0.186 0.218 0.16 0.188 22.6094 26.49919 19.44895 22.85251 2.038857 C04 50 µM 0.538 0.579 0.665 0.594 65.39708 70.38088 80.83468 72.20421 4.548747 B04 12.5 µM 0.784 0.684 0.729 0.732333 95.29984 83.14425 88.61426 89.01945 3.514861 100 µM 0.302 0.394 0.415 0.370333 36.70989 47.89303 50.44571 45.01621 4.218027 200 µM 0.179 0.202 0.152 0.177667 21.75851 24.55429 18.4765 21.59643 1.756379 Bảng 11: Kết đánh giá độc tính chất Camptothecin, B04, C04 để tính giá trị IC50 dịng tế bào H1975 Mẫu/Giá trị Control Nồng độ Camptothecin B04 0.3 µM µM µM 10 µM µM OD trung bình 1.344 0.85 0.5 0.38 0.13 1.265 % CS trung bình 100 63.24405 37.20238 28.27381 9.672619 94.12202 SE 0.967261905 6.705882 1.6 3.684211 7.692308 4.268775 Mẫu/Giá trị B04 C04 Nồng độ µM 10 µM 30 µM µM µM 10 µM 30 µM OD trung bình 1.2 1.02 0.538 1.432 1.276 0.993 0.64 % CS trung bình 89.28571429 75.89286 40.02976 106.5476 94.94048 73.88393 47.61905 SE 8.5 3.627451 7.620818 7.541899 3.918495 4.330312 6.875 PHỤ LỤC Hình ảnh dịng tế bào A549 (A), H1299 (B), H1975 (C) tác dụng chất B04 nồng độ khác (độ phóng đại 40x) A B C ... chất dòng tế bào ung thƣ phổi không tế bào nhỏ? ??, với mục tiêu sau: Sàng lọc số chất có độc tính dịng tế bào ung thư phổi không tế bào nhỏ: A549, H1299, H1975 mơ hình in silico, invitro Đánh giá tác. .. 1.1.Tổng quan ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.1 .Một vài nét ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.2 Cơ chế bệnh sinh phân tử ung thư phổi không tế bào nhỏ 1.1.3 Quá trình...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HIỀN SÀNG LỌC VÀ ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CỦA MỘT SỐ CHẤT TRÊN DỊNG TẾ BÀO UNG THƢ PHỔI KHƠNG TẾ BÀO NHỎ LUẬN VĂN THẠC