Sàng lọc bacillus có khả năng kháng nấm gây bệnh rụng lá và bệnh nấm hồng trên cây cao su nghiên cứu khoa học

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƯỞNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN CẤP TRƯỜNG SÀNG LỌC BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM GÂY BỆNH RỤNG LÁ VÀ BỆNH NẤM HỒNG TRÊN CÂY CAO SU Thuộc nhóm ngành khoa học: Nơng - Lâm - Ngư nghiệp Tp Hồ Chí Minh, 04/2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CỦA SINH VIÊN THAM GIA XÉT GIẢI THƯỞNG NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN CẤP TRƯỜNG SÀNG LỌC BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM GAY BỆNH RỤNG LÁ VÀ BỆNH NẤM HỒNG TRÊN CÂY CAO SU Thuộc nhóm ngành khoa học: nơng lâm ngư nghiệp Sinh viên thực hiện: TƠ HỒNG SƠN Nam, Nữ: Nam Dân tộc: Kinh Lớp, khoa: SH09VS, Công Nghệ Sinh Học Năm thứ: /Số năm đào tạo: năm Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Người hướng dẫn: ThS NGUYỄN VĂN MINH Tp, Hồ Chí Minh 04/2013 Mẫu SV-07 Thông tin sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI I SƠ LƢỢC VỀ SINH VIÊN: Ảnh 4x6 Họ tên: TÔ HỒNG SƠN Sinh ngày: 01 tháng 10 năm 1991 Nơi sinh: Lấp Vò, Đồng Tháp Lớp: SH09VS Khóa: 2009 - 2013 Khoa: Cơng Nghệ Sinh Học Địa liên hệ: 426, Ấp An Quới, Mỹ An Hưng B, Lấp Vò Đồng Tháp Điện thoại: 01675536075 Email: sonhongSTr24020110dtpy@gmail.com II Q TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích sinh viên từ năm thứ đến năm học): * Năm thứ 1: Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Khoa: Công Nghệ Sinh Học Kết xếp loại học tập: trung bình Sơ lược thành tích: điểm trung bình chung tích lũy 5,3 * Năm thứ 2: Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Khoa: Công Nghệ Sinh Học Kết xếp loại học tập: trung bình Sơ lược thành tích: điểm trung bình chung tích lũy 6,1 Năm thứ 3: Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Khoa: Công Nghệ Sinh Học Kết xếp loại học tập: trung bình Sơ lược thành tích: điểm trung bình chung tích lũy 6,18 Năm thứ 4: Ngành học: Công Nghệ Sinh Học Khoa: Công Nghệ Sinh Học Kết xếp loại học tập: trung bình Sơ lược thành tích: điểm trung bình chung tích lũy 6,28 Ngày 24 tháng 04 năm 2013 Xác nhận đơn vị (ký tên đóng dấu) Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Tô Hồng Sơn Mẫu SV-06 Thông tin kết nghiên cứu đề tài BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU CỦA ĐỀ TÀI Thông tin chung: - Tên đề tài: BACILLUS CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG NẤM GÂY BỆNH RỤNG LÁ VÀ BỆNH NẤM HỒNG TRÊN CÂY CAO SU - Sinh viên thực hiện:1 TÔ HỒNG SƠN NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG - Lớp: SH09VS Khoa: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Năm thứ: Số năm đào tạo: năm - Người hướng dẫn: ThS NGUYỄN VĂN MINH Mục tiêu đề tài: ột số Bacillus có khả kháng nấm gây bệnh rụng bệnh nấm hồng cao su Tính sáng tạo: Bacillus chi có tiềm ứng dụng nhiều lĩnh vực, phân bố rộng tự nhiên, gồm nhiều nhóm sinh lí, sinh thái khác Do đa dạng sinh thái đa dạng loài nên hoạt chất sinh học chúng vô phong phú: chất kháng nấm kháng khuẩn, enzym ngoại bào, chất kích thích sinh trưởng thực vật, chất hoạt động bề mặt Nhiều nghiên cứu chứng minh nhiều loài Bacillus ứng dụng nhiều lĩnh vực Kết nghiên cứu nội dung sở cho nghiên cứu khoa học việc ứng dụng Bacillus để nghiên cứu sản xuất chế phẩm sinh học phịng trị bệnh nơng nghiệp nói chung ngành trồng cao su nói riêng Trên thị trường nay, có chế phẩm sinh học phuc vụ cho việc phịng trị nấm, có số chế phẩm “ vườn sinh thái” hỗ trợ cho cao su phát triển nhanh cho sản lượng mủ cao Vì kết nghiên cứu nội dung sở cho nghiên cứu khoa học việc ứng dụng Bacillus để nghiên cứu sản xuất chế phẩm sinh học phịng trị bệnh nơng nghiệp nói chung ngành trồng cao su nói riêng Kết nghiên cứu: Corynespora cassiicola cao su chi Bacillus Bacillus ST nấm Corticium salmonicolor RRIV4 Corynespora cassiicola ệnh nấm hồ ả chủng nấm bệ Định danh thành công chủng S29 S43 thử nghiệm sinh hóa theo khóa phân loại Cowan and Steel’s Chủng S29: Bacillus thuringensis S29 chủng S43: Bacillus firmus S43 Đóng góp mặt kinh tế - xã hội, giáo dục đào tạo, an ninh, quốc phòng khả áp dụng đề tài: Kết nghiên cứu tìm chủng Bacillus có khả kháng nấm gây bệnh cao su làm sở cho nghiên cứu việc ứng dụng sản xuất chế phẩm sinh học để phòng trị bệnh cao su Công bố khoa học sinh viên từ kết nghiên cứu đề tài (ghi rõ tên tạp chí có) nhận xét, đánh giá sở áp dụng kết nghiên cứu (nếu có): Ngày 22 tháng 04 năm 2013 Sinh viên chịu trách nhiệm thực đề tài (ký, họ tên) Tô Hồng Sơn Nhận xét người hướng dẫn đóng góp khoa học sinh viên thực đề tài (phần người hướng dẫn ghi): Bố trí thí nghiệm hợp lí, phương pháp thí nghiệm khoa học, kết có độ tin cậy cao Kết nghiên cứu viết báo đăng tạp chí chuyên ngành Bệnh nấm hồng bệnh rụng cao su hai loại bệnh phổ biến cao su gây ảnh hưởng lớn đến suất mà chưa có chế phẩm phịng trị hữu hiệu Thành cơng đề tài góp phần kiểm soát sinh học bệnh nấm hồng bệnh rụng cao su Ngày 22 tháng 04 năm 2013 Xác nhận đơn vị Người hướng dẫn (ký tên đóng dấu) (ký, họ tên) Nguyễn Văn Minh – trình nghiên cứu khoa họ – ửi đến thầy lời tri ân sâu sắc quan tâm, tạo điều kiện hướng dẫn tận tình để chúng em hồn thành cơng trình nghiên cứu khoa học cách tốt ọc việc phịng thí nghiệm Cơng nghệ vi sinh nhiệt tình tận tâm giúp đỡ chúng em mặt, động viên chia sẻ buồn vui công việc ời cảm ơn đến Quý Thầy Cô khoa Công Nghệ Sinh Học trường Đại học Mở Tp HCM truyền đạt cho chúng em kiến thức quý báu làm tảng để thực cơng trình nghiên cứu khoa học Và cảm ơn Bộ môn bảo vệ thực vật, Viện nghiên cứu Cao su Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ chúng tơi Hơn hế Trưởng nhóm sinh viên: Tơ Hồng Sơn NGHIÊN CỨU KHOA HỌC MỤC LỤC MỤC LỤC CHƢƠNG TỔ 1.1 13 NH CAO SU TRONG N 14 1.1.1 14 1.1.2 14 1.2 BACILLUS 16 1.2.1 16 1.2.2 17 1.2.3 Dinh dƣỡng tăng trƣởng 19 1.2.4 1.3 Bacillus 23 TRÊN CÂY CAO SU 24 1.3.1 Phân bố 24 1.3.2 Triệu chứng bệnh cao su 25 1.3.3 29 1.3.4 ụng cao su 32 1.4 BỆNH NẤM HỒNG TRÊN CÂY CAO SU 35 1.4.1 Phân bố 35 1.4.2 Triệu chứng bệnh cao su 36 1.4.3 Phân biệt bệnh nấm hồng với bệnh khác cao su 40 SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG trang NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC PHỤ LỤC 1: KẾT QUẢ XỬ LÍ THỐNG KÊ KẾT QUẢ ĐƢỜNG KÍNH KHÁNG NẤM CORYNESPORA CASSIICOLA ST CỦA CÁC CHỦNG BACILLUS Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance S29 79 26.33333 1.083333 S31 0 S43 61.5 20.5 0.25 S50 0 S70 40.5 13.5 0.25 S95 0 S115 42.5 14.16667 1.583333 ANOVA Source of Variation SS Between Groups 2111.238 df MS F 351.873 777.8246 P-value F crit 7.67E- 2.847726 SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 136 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 17 Within Groups 6.333333 14 0.452381 Total 2117.571 20 KẾT QUẢ ĐƢỜNG KÍNH KHÁNG NẤM CORTICIUM SALMONICOLOR RRIV4 CỦA CÁC CHỦNG BACILLUS Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance S29 76.5 25.5 1.75 S31 47.5 15.83333 1.083333 S43 68.5 22.83333 0.583333 S50 S70 53.5 17.83333 0.583333 S95 33.5 11.16667 1.083333 S115 43 14.33333 0.583333 0 ANOVA Source of Variation SS df MS Between Groups 1258.738 209.7897 Within Groups 11.33333 14 0.809524 Total 1270.071 20 F 259.152 P-value F crit 1.6E-13 2.847726 SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 137 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC KẾT QUẢ PHẦN TRĂM ỨC CHẾ NẤM CORYNESPORA CASSIICOLA ST Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance S29 299.3522 99.78407 3.48E-05 S31 S43 S50 S70 139.1737 46.39125 4.755016 S95 S115 146.8893 48.96309 5.935735 0 279.468 93.15601 2.810801 0 0 0 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit 7.22EBetween Groups 33933.16 5655.526 Within Groups 27.00317 14 1.928798 Total 33960.16 20 2932.15 21 2.847726 KẾT QUẢ PHẦN TRĂM ỨC CHẾ NẤM CORTICIUM SALMONICOLOR RRIV4 Anova: Single Factor SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 138 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 99.7664 4.77E-05 S29 299.2992 S31 198.2635 66.08782 14.30363 S43 282.4537 94.15123 1.500848 S50 147.7569 49.25229 210.5624 S70 227.5421 75.84736 13.88706 S95 149.5345 49.84483 4.179568 S115 0 ANOVA Source of Variation SS df MS Between Groups 20467.76 Within Groups 488.8671 14 34.91908 Total 20956.62 20 F 3411.293 97.69137 P-value F crit 1.3E-10 2.847726 KẾT QUẢ ĐO OD Anova: Single Factor SUMMARY SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 139 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Groups Count Sum Average Variance 0h 0.446 0.148667 0.000158 12h 1.387 0.462333 0.029617 24h 2.213 0.737667 36h 3.572 1.190667 0.001812 48h 3.425 1.141667 0.001634 60h 3.387 1.129 72h 2.913 0.971 0.001204 3.43E-05 1.9E-05 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit 1.48EBetween Groups 2.832893 0.472149 95.85482 Within Groups 0.068959 14 0.004926 Total 2.901853 20 SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 10 2.847726 140 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 141 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 142 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 143 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 144 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC PHỤ LỤC : MÔI TRƢỜNG 2.1 Môi trƣờng NA – NB 8g – Agar 20 g – Nƣớc cất 1000 mL – Hấp khử trùng 1210C/15 – 20 phút 2.2 Môi trƣờng NA bổ sung 1% casein Môi trƣờng – NB 8g – Agar 20 g – Casein 0,1 g – Nƣớc cất 1000 mL Dung dịch Casein 1% – Casein tinh khiết 1g – NaOH 0,1N 15mL – Hòa casein vào NaOH 0,1N đun cách thủy cho tan Sau thêm từ từ HCl SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 145 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC 0,1N để trung hịa đạt pH mong muốn dừng (pH = -8) Thêm nƣớc cất cho đủ 100 mL 2.3 Môi trƣờng Clark – Lubs (môi trƣờng canh MR - VP) – Pepton 7g – Glucose 5g – K2HPO4 5g – Nƣớc cất 1000 mL – pH : 6.9 ± 0.2 – Đem hấp khử trùng 1210C (1atm)/ 15 – 20 phút 2.5 Môi trƣờng NA bổ sung 1% tinh bột – NB 8g – Tinh bột 10 g – Nƣớc cất 1000 mL – Đem hấp khử trùng 1210C /15 – 20 phút 2.6 Môi trƣờng lên men loại đƣờng – NB 8g SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 146 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC – Đƣờng 10 g – Phenol red 0,01 g – Nƣớc cất 1000 mL – pH : 7.4 – Đem hấp khử trùng 1150C /15 – 20 phút Dung dịch Phenol red 0,1% : 0,1g 100 mL cồn 200 2.7 Môi trƣờng khử Nitrate – NB 8g – KNO3 ( NaNO3) 2g – Nƣớc cất 1000 mL – pH 7.2 – Hấp khử trùng 1210C /15 – 20 phút 2.8 Môi trƣờng Chiristensen’s Urea Môi trƣờng bản: – Pepton 1g – NaCl 5g SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 147 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC – Glucose 1g – K2HPO4 2g – Phenol red 0,012 g – Nƣớc cất 900 mL Hòa tan tất thành phần 900 mL nƣớc Hấp 1210C /15 phút, để nguội đến 50 – 550C, Dung dịch ure – Urea 20 g – Nƣớc cất 100 mL – pH 6.8 ± 0.1 Hòa tan urê 100 mL nƣớc cất, lọc vô trùng, thêm vào môi trƣờng làm nguội 2.9 Môi trƣờng Simmon’s Citrat – Sodium citrate 2g – K2HPO4 1g – MgSO4 0,2 g SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 148 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC – Bromothymol blue 0,08 g – NaCl 5g – NH4H2PO4 1g – Agar 18g – pH : 6,9 – – Đem hấp khử trùng 1210C (1atm)/ 15 – 20 phút 10 Môi trƣờng Sabouraud agar (SA) Pepton 10g Glucose 40g Agar 15g Nƣớc cất 1000 ml 2.11 Môi trƣờng PDA (Potato D-Glucose Agar) Dịch chiết khoai tây 20 % Peptone 10 g/l D-Glucose 20 g/l Agar 20 g SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 149 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC Nƣớc cất 1000ml 2.12 Môi trƣờng PS (Potato Sabouraud) Dịch chiết khoai tây 20 % Pepton 10g Glucose 40g Nƣớc cất 1000ml SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 150 ... khả kháng nấm gây bệnh rụng bệnh nấm hồng cao su? ??, để học có khả điều trị bệnh cao su vi nấ ản xuấ ế phẩm sinh rồng cao su củ SVTH: TÔ HỒNG SƠN – NGUYỄN THỊ ĐÀI TRANG 12 NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHƢƠNG... nghiệm khoa học, kết có độ tin cậy cao Kết nghiên cứu viết báo đăng tạp chí chuyên ngành Bệnh nấm hồng bệnh rụng cao su hai loại bệnh phổ biến cao su gây ảnh hưởng lớn đến su? ??t mà chưa có chế... chứng bệnh giai đoạn bệnh nặng 1.4.2.3 Cảnh báo bệnh nấm hồng cao su non Bệnh nấm hồng gây hại nặng cho cao su từ 4-8 năm tuổ ệu đƣợc công bố cho thấy bệnh nấm hồng gây hại cao su non Tuy nhiên,