Nghiên cứu bất hoạt nước cốt ho gà bằng formaldehyde trong sản xuất vắc xin bạch hầu ho gà uốn ván (dpt)

NGUYỄN THỊ THU HOA BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN THỊ THU HOA CÔNG NGỆ SINH HỌC NGHIÊN CỨU BẤT HOẠT NƯỚC CỐT HO GÀ BẰNG FORMALDEHYDE TRONG SẢN XUẤT VẮC XIN BẠCH HẦU – HO GÀ – UỐN VÁN (DPT) LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC 2010B Hà Nội – 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN THỊ THU HOA NGHIÊN CỨU BẤT HOẠT NƯỚC CỐT HO GÀ BẰNG FORMALDEHYDE TRONG SẢN XUẤT VẮC XIN BẠCH HẦU – HO GÀ – UỐN VÁN (DPT) Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC : TS Lê văn Bé PGS TS Nguyễn Thị Xuân Sâm Hà Nội – 2012 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác NGUYỄN THỊ THU HOA LỜI CẢM ƠN Để hồn thành luận văn này, tơi xin chân thành cảm ơn: TS Lê Văn Bé – Viện trưởng Viện Vắc xin Sinh phẩm y tế – Người thầy trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ, truyền đạt kiến thức, định hướng tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu PGS TS Nguyễn Thị Xuân Sâm – Người thầy truyền đạt kiến thức, trực tiếp hướng dẫn, động viên, tận tình giúp đỡ cho tơi suốt trình học tập nghiên cứu TS Nguyễn Thị Lan Phương, người truyền đạt kinh nghiệm nghề nghiệp quý báu, chia sẻ, giúp đỡ nhiều thời gian thực đề tài CN Nguyễn Duy Tư, CN Trần Thanh Hữu, anh chị, bạn đồng nghiệp phòng sản xuất vắc xin DPT chia sẻ kinh nghiệp nghề nghiệp quý báu, động viên tạo điều kiện cho nhiều suốt thời gian thực đề tài Ths Vũ Thị Thu Hương, CN Nguyễn Thị Bích Thuỷ, CN Nguyễn Ngọc Nhơn, anh chị phòng Kiểm định, phòng Chăn ni súc vật thí nghiệm giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi hồn thành tốt đề tài Ban Giám Hiệu Viện Đào tạo sau đại học Trường Bách Khoa Hà Nội – Khoa Công nghệ Sinh học, Ban Giám đốc Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài Tập thể thầy cô giáo cán nhân viên Viện Sau đại học Khoa Công nghệ Sinh học Cuối xin gửi tình cảm thân thương tới gia đình bạn bè giúp đỡ động viên hoàn thành đề tài Nguyễn Thị Thu Hoa DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tên đầy đủ ACT Adenilate Cyclaza Toxin (Độc tố men) ADN Deoxyribonucleic acid ADP Adenosyl Diphosphat AGG Agglutinogen (Ngưng kết nguyên) cAMP Adenosyl Mono Phosphat vòng APC Antigen Presentating Cell (Tế bào trình diện kháng nguyên) ATP Adenoxin Triphosphat BG Bordet - Geugou CD Cluster of Differenceciation (Dấu ấn phân biệt) CD4+ Glycoprotein bề mặt tế bào thường có tế bào T hỗ trợ (Th) nhận biết phân tử MHC lớp II tế bào APC CD8+ Glycoprotein bề mặt tế bào thường có tế bào T độc (Tc) nhận biết phân tử MHC lớp I tế bào đích CTTCMR Chương trình tiêm chủng mở rộng DNT Dermonecrotic Toxin (Độc tố gây hoại tử) DPT Diphtheria - Pertussis - Tetanus (Vắc xin Bạch hầu – Ho gà – Uốn ván) DPT- Hib DPT - Haemophilus influenzae tybe b (Vắc xin DPTViêm màng não mủ týp b) DPT-Hib - HeB DPT - Hib - Hepatitis B (Vắc xin DPT- Viêm màng não mủ týp b - viêm gan siêu vi B) ED 50 Effective Dose (Liều bảo vệ 50 % súc vật thí nghiệm) EP European Pharmacopoeia (Dược điển Châu Âu) FHA Filamentous Haemagglutinin (Yếu tố diềm tua ngưng kết hồng cầu) i FIM Fimbriae Agglutinogen (Các ngưng kết nguyên bề mặt) HLT Heat Labile Toxin (Độc tố không bền với nhiệt) HST Heat Stable Toxin (Độc tố bền với nhiệt) HSF Histamin Sensitive Factor (Yếu tố nhạy cảm histamine) IC Intracerebral Changllen (Thử thách tiêm não) Ig Immunoglobulin (Kháng thể) IFN γ Interferon γ IL α Interleukine α IOU International Opacity Unit (Đơn vị độ đục quốc tế) IU International Unit (Đơn vị quốc tế) KN Kháng nguyên KT Kháng thể LD 50 Lethal dose (Liều gây chết 50 % súc vật thí nghiệm) LPF Lymphocytosis Promoting Factor (Yếu tố kích hoạt bạch cầu) LPS Lipopolysaccharide (nội độc tố) MHC Major Histococompatibility Complex (phức hợp hòa hợp mô) MWG Mouse Weight Gain (Tăng trọng chuột) NCHG Nước cốt ho gà NMSL Nước muối sinh lý OD Opacity Density Pa Acellular pertussis vaccine (Vắc xin ho gà vô bào) PMNs Polymorphonuclear (Bạch cầu đơn nhân đa hình) PT Pertussis Toxin (Độc tố ho gà) Pw Whole cell pertussis vaccine (Vắc xin ho gà toàn tế bào) TB Tế bào TCT Tracheal Cytotoxin (Độc tố khí quản) TLPT Trọng lượng phân tử ii RIVM/NIHEP National Institute of Health and Enviromental Protection (Viện Bảo vệ sức khỏe Cộng đồng Hà lan) SD Standard Deviation (Độ lệch chuẩn) TCYTTG Tổ chức Y tế giới TFF Tangential Flow Filtration (Lọc tiếp tuyến) TN Thí nghiệm NICVB Viện Kiểm định quốc gia Vắc xin Sinh phẩm y tế UNICEF United Nations Children’s Fund (Quỹ Nhi đồng Liên Hiệp Quốc) VK Vi khuẩn VW Verwey WHO World Health Oganization (Tổ chức Y tế Thế giới) iii MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.BỆNH HO GÀ 1.2 ĐẶC ĐIỂM SINH VẬT, HĨA HỌC VÀ TÍNH CHẤT KHÁNG NGUN CỦA VI KHUẨN HO GÀ Bordetella pertussis 1.2.1 Hình thái tính chất bắt màu 1.2.2 Tính chất ni cấy 1.2.3 Tính chất sinh hóa 1.2.4 Tính chất kháng nguyên vi khuẩn ho gà Bordetella pertussis .10 1.2.4.1 Các kháng nguyên độc tố 10 1.2.4.2 Các ngưng kết nguyên 14 1.2.4.3 Các kháng nguyên bám dính .15 1.2.5 Đáp ứng miễn dịch ho gà 16 1.2.5.1 Đáp ứng miễn dịch dịch thể .16 1.2.5.2 Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào 17 1.2.5.3 Cơ chế bảo vệ vắc xin ho gà .18 1.3 VẮC XIN HO GÀ 18 1.3.1 Lịch sử phát triển vắc xin ho gà giới 18 1.3.2 Sản xuất vắc xin ho gà Việt nam .20 1.3.3 Vắc xin ho gà toàn tế bào .21 1.3.3.1 Chủng sản xuất 22 1.3.3.2 Môi trường .23 1.3.3.3 Nuôi cấy 25 1.3.3.4 Gặt thu sinh khối 27 iv 1.3.3.5 Bất hoạt vi khuẩn ho gà 28 1.3.3.6 Pha vắc xin 31 1.4 KIỂM ĐỊNH VẮC XIN HO GÀ .31 1.4.1 Kiểm định nguyên liệu đầu .32 1.4.2 Kiểm định lô gặt đơn 32 1.4.3 Kiểm định bán thành phẩm .32 1.4.4 Kiểm định thành phẩm .33 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .36 2.1 VẬT LIỆU 36 2.1.1 Chủng giống .36 2.1.2 Vắc xin mẫu chuẩn: 36 2.1.3 Kháng huyết ngưng kết ho gà .36 2.1.4 Mơi trường - Hóa chất 36 2.1.4.1 Các mơi trường ni cấy 36 2.1.4.2 Hoá chất 37 2.1.5 Súc vật thí nghiệm 37 2.2 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ .37 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.3.1 Thiết kế nghiên cứu qui mơ thí nghiệm 39 2.3.1.1 Chọn qui trình bất hoạt formalin 40 2.3.1.2 Tối ưu hóa qui trình bất hoạt 40 2.3.2 Áp dụng qui trình bất hoạt formalin qui mô sản xuất lớn 41 2.3.3 Thẩm định qui trình bất hoạt formalin sản phẩm NCHG hợp chủng (PM) từ nước cốt ho gà đơn chủng bất hoạt formalin 43 2.3.4 Đánh giá ổn định nước cốt ho gà hợp chủng PM từ nước cốt ho gà đơn bất hoạt formalin 43 2.3.5 Xây dựng quy trình bất hoạt canh khuẩn ho gà formalin quy mô sản xuất lớn 44 2.3.6 Các phương pháp kiểm tra chất lượng: 44 v 2.3.6.1 Cảm quan .44 2.3.6.2 Đo pH 44 2.3.6.3 Phương pháp kiểm tra an toàn đặc hiệu thử nghiệm tăng trọng chuột (Mouse Weigh Gain test) 45 2.3.6.4 Phương pháp xác định công hiệu nước cốt ho gà 46 2.3.6.5 Phương pháp xác định LPF 47 2.3.6.6 Phương pháp LAL xác định nội độc tố (endotoxin) 48 2.3.6.7 Phương pháp kiểm tra sống sót vi khuẩn ho gà 50 2.3.6.8 Phương pháp kiểm tra khả ngưng kết 50 2.3.6.9 Phương pháp kiểm tra độc tố không bền với nhiệt (HLT) 51 2.3.6.10 Phương pháp kiểm tra vô khuẩn 51 2.3.6.11 Phương pháp đo độ đục 52 2.3.6.12 Phương pháp xác định hàm lượng formalin tồn dư 53 2.3.6.13 Phương pháp xác định hàm lượng merthiolate phương pháp đo quang với thuốc thử dithizone .54 2.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ VÀ PHÂN TÍCH SỐ LIỆU .56 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 57 3.1 Nghiên cứu xác định thông số quy trình bất hoạt formalin quy mơ thí nghiệm .57 3.1.1 Xác định nồng độ formalin, nhiệt độ thời gian bất hoạt 57 3.1.2 Ảnh hưởng nồng độ chất bất hoạt formalin đến số an toàn nước cốt ho gà sau bất hoạt 60 3.1.3 Tối ưu hóa qui trình bất hoạt formalin .65 3.1.3.1 Ảnh hưởng đậm độ vi khuẩn ho gà bất hoạt formalin 65 3.1.3.2 So sánh hiệu suất phương pháp bất hoạt formalin với phương pháp bất hoạt nhiệt truyền thống (54 oC/ 30 phút) .68 3.2 Áp dụng quy trình bất hoạt formalin canh khuẩn ho gà sản xuất qui mô lớn .70 3.2.1 Nước cốt ho gà sản xuất qui mô lớn từ chủng Bp 509 .70 vi Nồng độ formalin 0,2 % pH Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D3 D5 D7 D0 D3 D5 D7 7,47 7,17 7,15 7,14 7,46 7,21 7,17 7,13 7,53 7,15 7,12 7,11 7,50 7,12 7,07 7,05 7,51 7,23 7,19 7,16 7,48 7,18 7,15 7,16 7,50 7,14 7,11 7,08 7,50 7,11 7,08 7,09 7,48 7,18 7,15 7,16 7,42 7,19 7,14 7,12 TB 7,50 7,17 7,14 7,13 7,47 7,16 7,12 7,11 ± 0,02 ± 0,04 ± 0,03 ± 0,04 ± 0,04 ± 0,04 ± 0,03 ± 0,03 Ngưng kết Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D3 D5 D7 D0 D3 D5 D7 185 81 83 89 173 80 82 85 172 88 91 94 178 83 85 97 178 93 88 85 169 95 97 95 183 91 94 97 179 84 86 82 171 85 90 89 180 75 78 84 TB 177,8 87,6 89,2 90,8 175,8 83,4 85,6 88,6 ± 4,8 ± 4,8 ± 4,1 ± 4,7 ± 4,7 ± 7,4 ± 7,1 ± 6,9 An toàn Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D3 D5 D7 D3 D5 D7 80,58 84,12 77,24 89,22 83,27 79,78 85,15 79,14 81,63 87,17 80,16 74,05 88,43 83,35 76,27 91,52 87,54 90,56 90,78 89,45 83,56 81,03 77,27 71,54 93,76 92,73 89,45 94,56 91,25 83,17 TB 87,74 85,76 81,63 88,70 83,90 79,82 ± 5,10 ± 5,35 ± 5,31 ± 5,09 ± 5,60 ± 7,56 Formalin Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D3 D5 D7 D3 D5 D7 0,0038 0,0035 0,0033 0,0042 0,0036 0,0034 0,0035 0,0031 0,0030 0,0038 0,0032 0,0031 0,0041 0,0037 0,0032 0,0035 0,0031 0,0030 0,0037 0,0034 0,0033 0,0037 0,0034 0,0032 0,0035 0,0032 0,0031 0,0036 0,0034 0,0030 TB 0,00372 ± 0,00025 0,00338 ± 0,00024 0,00318 ± 0,00013 0,00376 ± 0,00027 0,00334 ± 0,0002 0,00314 ± 0,00017 Phụ lục NƯỚC CỐT HO GÀ BẤT HOẠT Ở NHIỆT ĐỘ 37 oC Nồng độ formalin 0,05 % pH Loạt Chủng Bp 509 D0 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 7,46 7,23 7,21 7,18 7,46 7,27 7,23 7,17 7,47 7,19 7,17 7,14 7,52 7,23 7,18 7,15 7,54 7,25 7,22 7,16 7,48 7,22 7,18 7,13 7,48 7,21 7,18 7,17 7,48 7,25 7,17 7,12 7,47 7,17 7,13 7,11 7,54 7,28 7,25 7,21 7,23 7,18 7,15 7,49 7,25 7,20 7,16 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,04 ± 0,04 TB 7,48 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,02 Ngưng kết Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 185 133 120 105 173 130 105 91 172 128 115 98 175 121 112 100 178 143 125 107 181 127 120 105 180 131 127 109 170 118 108 96 175 125 110 90 179 139 123 108 TB 178,0 132,0 119,4 101,8 175,6 127,0 113,6 100,0 ± 4,9 ± 6,9 ± 7,0 ± 7,8 ± 4,4 ± 8,2 ± 7,7 ± 6,8 An toàn Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 65,18 73,16 78,19 65,22 78,29 80,03 78,25 86,27 89,16 61,15 70,45 71,27 72,43 84,35 84,17 75,67 83,38 81,14 63,58 77,75 78,32 63,46 79,14 82,13 62,16 72,54 73,15 71,23 83,12 88,32 TB 68,32 ± 6,18 78,81 ± 6,30 80,60 ± 6,18 67,35 ± 5,97 78,88 ± 5,24 80,58 ± 6,12 Formalin Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 0,00027 0,00015 0,00011 0,00028 0,00014 0,00007 0,00036 0,00021 0,00016 0,00027 0,00015 0,00008 0,00037 0,00018 0,00013 0,00035 0,00025 0,00018 0,00034 0,00015 0,00009 0,00033 0,00011 0,00006 0,00032 0,00017 0,00012 0,00031 0,00026 0,00018 TB 0,00033 ± 0,00004 0,00017 ± 0,00002 0,00012 ± 0,00003 0,00031 ± 0,00003 0,00018 ± 0,00007 0,00011 ± 0,00006 Nồng độ formalin 0,1 % pH Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 7,50 7,17 7,13 7,09 7,49 7,21 7,16 7,12 7,48 7,21 7,18 7,14 7,51 7,23 7,17 7,13 7,46 7,18 7,16 7,11 7,47 7,18 7,15 7,12 7,53 7,22 7,18 7,15 7,45 7,15 7,1 7,04 7,52 7,19 7,15 7,13 7,56 7,24 7,19 7,15 TB 7,50 7,19 7,15 7,11 7,50 7,20 7,16 7,11 ± 0,03 ± 0,02 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,04 ± 0,04 ± 0,03 ± 0,04 Ngưng kết Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 185 88 71 70 185 93 79 76 172 100 82 83 172 96 73 75 178 91 78 75 178 82 69 68 183 95 83 81 180 90 77 74 171 90 79 78 175 101 84 83 TB 177,8 92,8 78,6 77,4 178,0 92,4 76,4 75,2 ± 4,8 ± 4,7 ± 4,7 ± 5,1 ± 4,9 ± 7,1 ± 5,7 ± 5,4 An toàn Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 71.63 83.54 82.33 78.23 95.15 94.56 80.16 93.17 92.27 85.17 96.56 98.71 81.45 95.26 96.56 71.34 83.32 85.26 83.32 96.73 95.22 84.63 97.06 94.27 85.45 97.67 97.78 81.76 98.34 96.21 TB 80,40 93,27 92,83 80,23 94,09 93,80 ± 5,29 ± 5,70 ± 6,22 ± 5,68 ± 6,13 ± 5,09 Formalin Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 0,00158 0,00143 0,00113 0,00175 0,00164 0,00164 0,00169 0,00148 0,00115 0,00148 0,00121 0,00115 0,00143 0,00115 0,00085 0,00172 0,00156 0,00123 0,00186 0,00156 0,00115 0,00146 0,00134 0,00119 0,00164 0,00148 0,0009 0,00168 0,00142 0,00127 TB 0,00164 ± 0,00016 0,00142 ± 0,00016 0,00104 ± 0,00015 0,00162 ± 0,00014 0,00143 ± 0,00017 0,00130 ± 0,0002 Nồng độ formalin 0,2 % pH Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 7,52 7,17 7,14 7,11 7,48 7,12 7,08 7,05 7,47 7,14 7,12 7,1 7,45 7,15 7,12 7,11 7,45 7,15 7,10 7,08 7,42 7,14 7,11 7,09 7,49 7,16 7,14 7,09 7,54 7,19 7,15 7,14 7,54 7,18 7,15 7,12 7,52 7,17 7,14 7,15 TB 7,49 7,16 7,13 7,10 7,48 7,15 7,12 7,11 ± 0,04 ± 0,02 ± 0,02 ± 0,02 ± 0,05 ± 0,03 ± 0,03 ± 0,04 Ngưng kết Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D0 D1 D2 D3 D0 D1 D2 D3 185 77 82 87 173 81 85 92 172 82 89 92 175 73 75 78 178 85 83 81 181 86 83 79 183 71 77 80 170 75 77 83 171 82 85 87 179 78 84 87 TB 177,8 79,6 83,2 85,4 175,6 78,6 80,8 83,8 ± 4,8 ± 5,6 ± 4,4 ± 4,9 ± 4,4 ± 5,1 ± 4,5 ± 5,8 An toàn Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 89,19 81,56 83,24 78,22 85,48 80,29 93,27 91,78 92,27 93,56 81,36 88,45 76,67 80,07 77,35 89,34 88,87 80,98 96,63 94,56 85,75 83,28 78,45 78,14 85,12 82,23 79,54 92,45 91,15 91,12 TB 88,18 86,04 83,63 87,37 85,06 83,80 ± 7,75 ± 6,63 ± 5,82 ± 6,49 ± 5,22 ± 5,65 Formalin Loạt Chủng Bp 509 Chủng Bp 134 D1 D2 D3 D1 D2 D3 0,00403 0,00387 0,00335 0,00412 0,00372 0,00351 0,00381 0,00351 0,00353 0,00363 0,00336 0,00325 0,00376 0,00353 0,00301 0,00351 0,00326 0,00307 0,00401 0,00376 0,00345 0,00373 0,00358 0,00335 0,00375 0,00357 0,00342 0,00365 0,00329 0,00311 TB 0,00387 ± 0,00014 0,00365 ± 0,00016 0,00335 ± 0,00020 0,00373 ± 0,00023 0,00344 ± 0,00020 0,00326 ± 0,00018 Phụ lục 10 Kết an toàn đặc hiệu nước cốt ho gà bất hoạt với nồng độ formalin khác Điều kiện bất Tăng trọng lượng chuột (gam) Mẫu hoạt ngày ngày F 0,05 % - 0,23 + 1,24 + 2,28 + 3,68 + 4,7 + 5,64 + 6,78 F 0,1 % + 0,62 + 1,94 + 3,62 + 5,12 + 6,1 + 7,63 + 8,42 F 0,2 % + 0,44 + 1,94 + 3,54 + 4,22 + 5,36 + 6,72 + 7,62 + 1,34 + 3,12 + 4,32 + 5,36 + 6,22 + 8,12 + 9,38 Nhiệt 54 oC/30 phút + 0,48 + 1,92 + 3,48 + 4,04 + 4,82 + 6,44 + 7,58 F 0,05 % + 0,74 + 2,16 + 3,82 + 4,6 + 5,24 + 5,88 + 6,42 F 0,1 % + 0,52 + 2,42 + 4,04 + 5,08 + 5,42 + 6,68 + 8,62 F 0,2 % + 0,48 + 2,37 + 4,2 + 5,16 + 5,64 + 6,14 + 7,3 + 1,34 + 3,12 + 4,32 + 5,36 + 6,22 + 8,12 + 9,38 Nhiệt 54 oC/30 phút + 0,48 + 1,92 + 3,48 + 4,04 + 4,82 + 6,44 + 7,58 25 oC/ NMSL 37 oC/ ngày NMSL Phụ lục 11 Kết kiểm tra HLT (độc tố không bền nhiệt) canh khuẩn ho gà có đậm độ 33 tỷ VK/ml bất hoạt với nồng độ formalin 0,05 % , 0,1 % 0,2 % nhiệt độ 25 oC Thời gian bất hoạt Số loạt HLT (mm) F 0,05 % F 0,1 % F 0,2 % ngày n=5 12,15 ± 1,18 6,35 ± 0,75 5,5 ± 0,62 ngày n=5 8,45 ± 0,76 4,8 ± 0,78 4,15 ± 0,76 ngày n=5 7,4 ± 0,88 4,5 ± 0,66 4,02 ± 0,71 Nhiệt 54 oC/30 phút n=5 4,0 ± 0,67 NMSL Chứng (+) 20 Phụ lục 12 Kết thử nghiệm độc tố không bền nhiệt (HLT) canh khuẩn ho gà đậm độ 33 tỷ VK/ml bất hoạt với nồng độ formalin 0,05 %, 0,1 %, 0,2 % nhiệt độ 37 oC HLT (mm) Thời gian Số loạt F 0,05 % F 0,1 % F 0,2 % ngày n =5 8,15 ± 1,18 6,35 ± 0,75 5,6 ± 0,62 ngày n =5 7,25 ± 0,76 5,1 ± 0,78 4,7 ± 0,76 ngày n =5 6,4 ± 0,88 4,5 ± 0,66 4,35 ± 0,71 Nhiệt 54 oC/30 phút n =5 4,2 ± 0,67 NMSL Chứng (+) 20 Phụ lục 13 Khả hoàn tan NCHG bất hoạt formalin Thời gian bảo quản NCHG Loạt Ban 2 số đầu tuần tuần tháng tháng tháng tháng 45 59 129 179 218 267 Khả 57 81 152 227 244 321 49 62 131 191 271 294 hòa tan 50 63 126 187 233 317 (giây) 53 79 137 194 249 312 50,8 ± 4,5 68,8 ± 10,3 135 ± 10,3 195,6 ± 18,4 243 ± 19,7 302,2 ± 22,2 TB Phụ lục 14 Khả hoàn tan NCHG bất hoạt nhiệt Thời gian bảo quản NCHG Loạt Ban 2 số đầu tuần tuần tháng tháng tháng tháng Khả 108 516 1004 1702 1647 2589 125 445 892 1417 1780 2476 hòa tan 137 482 918 1490 1925 2493 (giây) 123 477 887 1478 1911 2754 119 489 891 1604 1758 2382 TB 122,4 ± 10,5 481,8 ± 25,5 918,4 ± 49,4 1538,2 ± 113,8 1804,2 ± 115,6 2538,8 ± 140,9 Phụ lục 15 Theo dõi tiêu hóa học NCHG hợp chủng PM bất hoạt formalin theo thời gian bảo quản (n=3) Thời gian bảo quản Chỉ tiêu T0 T3 T6 T9 T12 pH 7,21 7,28 7,33 7,41 7,48 Tỉ lệ tăng (%) 100 100,97 101,66 102,77 103,74 0,0073 0,0071 0,0063 0,0059 0,0052 100 97,26 86,30 80,82 71,23 0,0024 0,0023 0,0021 0,0020 0,0019 100 95,83 87,5 83,33 79,17 Merthiolate (%) Tỉ lệ giảm (%) Formaline (%) Tỉ lệ giảm (%) ... bất ho? ??t vi khuẩn ho gà formalin thay qui trình bất ho? ??t nhiệt sử dụng sở sản xuất tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên cứu bất ho? ??t nước cốt ho gà formaldehyde sản xuất vắc xin Bạch hầu – Ho gà – Uốn. .. ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - NGUYỄN THỊ THU HOA NGHIÊN CỨU BẤT HO? ??T NƯỚC CỐT HO GÀ BẰNG FORMALDEHYDE TRONG SẢN XUẤT VẮC XIN BẠCH HẦU – HO GÀ – UỐN VÁN (DPT) Chuyên ngành : Công... nước cốt ho gà bất ho? ??t formalin 0,1 %/37 oC/48 h bất ho? ??t nhiệt 54 oC/30 phút chủng Bp 134 .77 Hình 3.11 So sánh hiệu suất bất ho? ??t nước cốt ho gà bất ho? ??t formalin 0,1 %/ 37 oC/48 h bất ho? ??t