Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).

Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả năng chịu hạn của cây đậu tương (Glycine max (L.) Merrill).

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ MẠNH DŨNG NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN codA NHẰM NÂNG CAO KHẢ NĂNG CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƯƠNG (Glycine max (L.) Merrill) LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 12/2021 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGÔ MẠNH DŨNG NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN codA NHẰM NÂNG CAO KHẢ NĂNG CHỊU HẠN CỦA CÂY ĐẬU TƯƠNG (Glycine max (L.) Merrill) Ngành: Di truyền học Mã số: 9420121 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Chu Hoàng Hà GS.TS Chu Hoàng Mậu THÁI NGUYÊN - 12/2021 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan luận án cơng trình nghiên cứu hướng dẫn PGS.TS Chu Hoàng Hà GS.TS Chu Hoàng Mậu Các kết nghiên cứu trình bày luận án trung thực trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Một phần kết công bố tạp chí hội nghị khoa học chuyên ngành với đồng ý cho phép đồng tác giả, phần cịn lại chưa cơng bố cơng trình khác Tơi xin chịu trách nhiệm hồn tồn kết trình bày luận án Thái Nguyên, tháng 12 năm 2021 TÁC GIẢ Ngô Mạnh Dũng LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Chu Hồng Hà GS.TS Chu Hoàng Mậu, người trực tiếp hướng dẫn, định hướng, giúp đỡ, động viên tơi có tự tin, khắc phục khó khăn để hồn thành tốt luận án Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới PGS.TS Phạm Bích Ngọc, TS Đỗ Tiến Phát, ThS Tạ Thị Đông, ThS Nguyễn Hồng Nhung cán bộ, nghiên cứu viên phòng Cơng nghệ ADN ứng dụng, phịng Cơng nghệ tế bào thực vật phịng thí nghiệm trọng điểm Cơng nghệ gen thuộc Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành thí nghiệm nghiên cứu thuộc đề tài luận án Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô cán môn Di truyền học Công nghệ sinh học, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên giúp tơi tích lũy nhiều kiến thức, phương pháp nghiên cứu vấn đề đại sinh học cơng nghệ sinh học, đồng thời đưa nhiều đóng góp q báu để tơi hồn thành kế hoạch học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn thầy giáo, cán Khoa Sinh học, Phịng Đào tạo, Bộ phân đào tạo Sau đại học, Trường Đại học Sư phạm, Đại học Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho hồn thành khố học Tơi xin bày tỏ lịng tri ân biết ơn sâu sắc tới thầy cô, gia đình, bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ, động viên chia sẻ khó khăn suốt chặng đường học tập, nghiên cứu thời gian qua Thái Nguyên, tháng 12 năm 2021 TÁC GIẢ Ngô Mạnh Dũng MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục hình ix Danh mục bảng xi MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .6 1.1 TÁC ĐỘNG CỦA HẠN VÀ CƠ CHẾ CHỊU HẠN Ở THỰC VẬT 1.1.1 Ảnh hưởng stress hạn đến sinh trưởng, phát triển đặc tính sinh lý, sinh hoá thực vật 1.1.2 Phản ứng thực vật điều kiện stress hạn 11 1.2 GLYCINE BETAINE, CHOLINE OXIDASE 18 1.2.1 Glycine betaine 18 1.2.2 Choline oxidase 23 1.3 NÂNG CAO KHẢ NĂNG CHỊU HẠN Ở ĐẬU TƯƠNG BẰNG KỸ THUẬT CHUYỂN GEN 29 1.3.1 Cây đậu tương .29 1.3.2 Chuyển gen đậu tương thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 31 1.3.3 Nâng cao khả chịu hạn đậu tương kỹ thuật chuyển gen 33 1.3.4 Tình hình nghiên cứu chuyển gen codA thực vật 38 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 46 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .46 2.1.1 Vật liệu thực vật 46 2.1.2 Các chủng vi khuẩn loại vector 46 2.1.3 Các cặp mồi sử dụng cho phản ứng PCR 46 2.2 HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ 48 2.2.1 Hoá chất 48 2.2.2 Thiết bị 48 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 49 2.3.1 Nhóm phương pháp thiết kế vector chuyển gen codA chuyển gen thuốc 49 2.3.2 Nhóm phương pháp nghiên cứu điều kiện thích hợp cho chuyển gen giống đậu tương ĐT22 53 2.3.3 Nhóm phương pháp tạo đậu tương chuyển gen codA 55 2.3.4 Phân tích xử lý liệu 60 2.4 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 61 2.4.1 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .62 3.1 THIẾT KẾ VÀ BIỂU HIỆN VECTOR CHUYỂN GEN MANG GEN CODA .62 3.1.1 Tạo cấu trúc chuyển gen codA .62 3.1.2 Đánh giá hoạt động vector mang gen chuyển codA thuốc 66 3.1.3 Thảo luận kết thiết kế vector hoạt động vector biểu thuốc 69 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ ĐẾN HIỆU QUẢ CHUYỂN GEN 2.4.2 CODA Ở GIỐNG ĐẬU TƯƠNG ĐT22 72 3.2.1 Ảnh hưởng nồng độ PPT đến khả tạo chồi đậu tương 73 3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ khuẩn thời gian ủ khuẩn, đồng nuôi cấy đến khả cảm ứng tạo chồi đậu tương 74 3.2.3 Ảnh hưởng nồng độ kháng sinh thời gian diệt khuẩn đến phát sinh sinh trưởng chồi đậu tương 78 3.2.4 Thảo luận kết nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố đến hiệu chuyển gen codA giống đậu tương ĐT22 79 3.3 BIẾN NẠP GEN CODA VÀO GIỐNG ĐẬU TƯƠNG ĐT22 VÀ TẠO CÂY 2.4.3 ĐẬU TƯƠNG CHUYỂN GEN CHỊU HẠN 82 3.3.1 Kết chuyển gen codA vào giống đậu tương ĐT22 82 3.3.2 Phân tích đậu tương chuyển gen 84 3.3.3 Thử nghiệm đánh giá khả chịu hạn số dòng đậu tương chuyển gen 90 3.3.4 Thảo luận kết biến nạp gen codA vào giống đậu tương ĐT22 thử nghiệm khả chịu hạn số dòng đậu tương chuyển gen 98 3.3.5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 101 3.3.6 CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 102 3.3.7 TÀI LIỆU THAM KHẢO 103 3.3.8 3.3.9 3.3.10 3.3.11 3.3.12 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT A 3.3.13 Abscisic acid 3.3.14 A 3.3.16 Ascorbate peroxidase 3.3.17 B 3.3.19 Betaine aldehyde dehydrogenase B 3.3.21 6-benzyladenine purin 3.3.22 b 3.3.24 Bialaphos resistance 3.3.25 b 3.3.27 Base pair C 3.3.30 Crassulacean acid metabolism C 3.3.32 Catalase C 3.3.35 Cocultivation medium BA 3.3.15 PX 3.3.18 ADH 3.3.20 AP 3.3.23 ar 3.3.26 3.3.28 Cặp base p 3.3.29 AM 3.3.31 3.3.33 AT 3.3.34 CM 3.3.37 3.3.36 Môi trường đồng nuôi cấy C 3.3.38 Choline dehydrogenase 3.3.39 C 3.3.41 Choline 3.3.42 HDH 3.3.40 MO 3.3.43 monooxygenase 3.3.45 C 3.3.44 Choline oxidase c 3.3.47 Choline oxidase from Agrobacterium globiformis C 3.3.49 Cetyltrimethyl ammonium bromide D 3.3.51 Dehydroascorbate OD 3.3.46 odA 3.3.48 TAB 3.3.50 HAR 3.3.53 3.3.52 reductase 3.3.55 D 3.3.54 Deoxyribonucleic acid d 3.3.57 Deoxyribonucleotide triphosphate D 3.3.59 Dry weight E 3.3.62 Enzyme-linked immunosorbent assay F 3.3.64 Flavin adenine NA 3.3.56 NTP 3.3.58 3.3.60 Khối lượng khô W 3.3.61 LISA 3.3.63 AD dinucleotide 3.3.65 3.3.66 F 3.3.67 Fresh weight 3.3.68 Khối lượng tươi G 3.3.70 Gibberellic acid 3.3.71 G 3.3.73 Glycine Betaine 3.3.74 G 3.3.76 Germination medium H 3.3.79 Heat shock protein W 3.3.69 A3 3.3.72 B 3.3.75 3.3.77 Môi trường nảy mầm M 3.3.78 SP 3.3.80 3.3.81 3.3.82 3.3.83 IA 3.3.84 Indoleacetic acid 3.3.85 IB 3.3.87 Indole-3-butyric acid 3.3.88 3.3.89 kb 3.3.90 Kilo base 3.3.91 3.3.92 k 3.3.93 Kilo Dalton 3.3.94 L 3.3.97 3.3.98 Luria Bertani A 3.3.86 A Da 3.3.95 3.3.96 B 3.3.101 L EA 3.3.104 3.3.102 Late embryogenesis 3.3.99 Môi trường dinh dưỡng 3.3.100 nuôi cấy vi khuẩn 3.3.103 abundant M 3.3.105 Microtubule associated protein kinase M 3.3.107 Malondialdehyde M 3.3.110 Monodehydroascorbate reductase M 3.3.112 2-(N-Morpholino)ethanesulfonic APK 3.3.106 3.3.108 DA 3.3.109 DHAR 3.3.111 ES 3.3.113 3.3.114 M 3.3.115 3.3.116 Murashige and Skoog S 3.3.119 m RNA 3.3.122 3.3.120 Messenger ribonucleic 3.3.117 Môi trường dinh dưỡng 3.3.118 MS 3.3.121 acid N 3.3.123 α-Naphthaleneacetic acid 3.3.124 O 3.3.126 Optical density pa 3.3.129 Phosphinothricin acetyltransferase P 3.3.131 Polymerase Chain 3.3.132 Phản ứng chuỗi Reaction polymerase AA 3.3.125 3.3.127 Mật độ quang D 3.3.128 t 3.3.130 CR 3.3.133 P 3.3.134 phosphoethanolamine N-methyltransferase P 3.3.136 Polyethylene glycol P 3.3.139 Phosphoenolpyruvate carboxylase P 3.3.141 p-hydroxybenzoate hydroxylase P 3.3.143 Peroxidase EAMT 3.3.135 3.3.137 EG 3.3.138 EPC 3.3.140 HBH 3.3.142 OD 3.3.144 231 P HỤ LỤC 232 233 234 235 236 Phục lục Gen codA tổng hợp nhân tạo gen codA A globiformis 237 238 P1.1 Trình tự gen codA tổng hợp nhân tạo gen codA A globiformis [79] 239 240 241 242 243 244 245 P1.2 So sánh trình tự amino acid choline oxidase mã hóa gen codA tổng hợp nhân tạo với gen codA A globiformis [79] 246 247 Phục lục Quy trình chuyển gen codA vào giống đậu tương ĐT22 248 249 Bước 1: Chuẩn bị vật liệu chuyển gen 250 - Hạt đậu tương khử trùng khí clo, sau gieo trên251 mơi -7 ngày 252.trường GM 253 254 255 256 Bước 2: Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A tumefaciens - Nuôi cấy tạo khuẩn lạc từ khuẩn trừ -80°C - Nuôi lỏng khuẩn từ khuẩn lạc đơn 257 2-3 ngày 258 - Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A tumefaciens C58 đến OD650 0,6 259 260 261 262 Bước 3: Gây nhiễm đồng nuôi cấy 263 - Loại bỏ thân mầm rẻ mầm hạt đậu tương 264 - Tách dọc hai mầm, loại bỏ đỉnh sinh trường, tạo 3- vết thương 265 mầm vị trí loại bỏ định sinh trưởng ngày 266 - Ngâm mầm tổn thương dịch huyền phù vi khuẩn 30 phút 267 - Đồng nuôi cấy ngày mơi trường CCM, tối hồn tồn 25°C 268 269 270 271 272 273 Bước 4: Diệt khuẩn, cảm ứng tạo đa chồi chọn lọc - Diệt khuẩn cefotaxime 500 mg/l 10 phút - Tạo chồi môi trường tạo chồi chứa cefotaxime 500mg/l 275 - Chọn lọc chồi mơi trường SIM có PPT mg/l cefotaxime 276.500mg/l 277 278 279 274 28 ngày 280 Bước 5: Tái sinh hoàn chỉnh 281 - Các cụm chồi chọn lọc kéo dài chồi mơi trường SEM có PPT 1,5 mg/l cefotaxime 500 mg/l 282 60- 90 ngày 283.- Chồi dài 3-5 cm cắt cấy mơi trường RM có cefotaxime 250 284.mg/1 để tạo hoàn chỉnh 285 286 287 288 Bước 6: Ra nhà lưới - Cây hoàn chỉnh in vitro trồng giá thể TN1 trộn với Tribat theo tỷ lệ 3:1 289 20 – 30 ngày 290 291 292 120 – 160 ngày 293 294 295 Bước Chuẩn bị vật liệu chuyển gen 296 Hạt đậu tương (ĐT22) to tròn đều, màu vàng sáng, vỏ hạt không bị nứt chọn làm vật liệu chuyển gen Hạt chín khử trùng khí Chlore (Cl2) chất độc cực mạnh có khả khử trùng cao, khí clo tạo cách bổ sung ml HCl đậm đặc vào 100 ml javen thương phẩm Việc khử trùng thực bình kín đặt tủ hút 14- 16 Sau khử trùng, hạt gieo môi trường GM thời gian 5-7 ngày 297 Bước Tạo dịch huyền phù vi khuẩn A tumefaciens 298 Nuôi cấy tạo khuẩn lạc: cấy trải A tumefaciens mang gen codA từ ống giữ chủng lên mơi trường YEP đặc, có bổ sung kháng sinh phù hợp, nuôi tủ ổn nhiệt 28oC thời gian 48 299 Nuôi lỏng khuẩn: dùng que cấy chọn khuẩn lạc riêng biệt đĩa khuẩn cấy vào môi trường YEP lỏng bổ sung loại kháng sinh ni đặc Bình ni lỏng lắc 200 v/p 28 oC 16 điều kiện tối hoàn toàn 300 Tạo dịch huyền phù vi khuẩn: dịch khuẩn thu từ q trình ni lỏng hịa lỗng - lần tiếp tục ni phục hồi - Sau dịch khuẩn ly tâm 5000 v/p 10 phút oC Loại bỏ phần dịch hòa tan cặn khuẩn mơi trường CCM lỏng có bổ sung acetosyrigone để đạt mật độ huyền phù vi khuẩn OD650 0,6 301 Các loại mơi trường sử dụng cho q trình nuôi cấy tạo dịch huyền phù vi khuẩn gồm: môi trường nuôi khuẩn đặc, môi trường nuôi khuẩn lỏng môi trường tạo dịch huyền phù vi khuẩn 302 Bước Gây nhiễm đồng nuôi cấy: 303 Hạt đậu tương sau 5-7 ngày gieo, phần thân mầm rễ mầm bị loại bỏ, hai mầm tách ra, đỉnh sinh trưởng bị loại bỏ, tạo 3-5 vết thương mầm vị trí loại bỏ đỉnh sinh trưởng Lá mầm sau tạo tổn thương ngâm 304 305 dịch huyền phù vi khuẩn thời gian 30 phút Tiếp theo, mẫu đặt môi trường đồng nuôi cấy đặt mẫu 25 oC điều kiện tối thời gian ngày 306 Bước Diệt khuẩn, cảm ứng tạo đa chồi chọn lọc: 307 Mẫu biến nạp sau thời gian đồng nuôi cấy lắc môi trường SIM lỏng có bổ sung cefotaxime 500 mg/l 10 phút, sau thấm khơ giấy thấm khử trùng cấy mẫu lên mơi trường tạo chồi có bổ sung cefotaxime 500 mg/l Sau tuần, mẫu chuyển sang môi trường chọn lọc SIM có bổ sung cefotaxime 500 mg/l, PPT mg/l nuôi tuần 308 Bước Tái sinh hoàn chỉnh: 309 Các cụm chồi tạo môi trường chọn lọc SIM chuyển sang mơi trường kéo dài chồi SEM có bổ sung 500 mg/l cefotaxime 1,5 mg/l PPT Các chồi phát triển đạt chiều cao từ - cm cắt cấy môi trường rễ RM có bổ sung cefotaxime 250 mg/l để tạo hồn chỉnh 310 Bước Ra nhà lưới: 311 Khi in vitro có lá, có rễ đảm bảo (thường sau tuần nuôi cấy) lấy khỏi bình ni cấy, rửa phần agar bám rễ trồng giá thể TN1 trộn với Tribat theo tỷ lệ 3:1 Cây sống sót giá thể đưa chậu đất có bổ sung phân bón điều kiện nhà lưới Khi xuất mới, PPT 250mg/l phết lên nhằm đánh giá biểu gen chọn lọc (bar) Mẫu chuyển gen thu thập phân tích đánh giá mức độ phân tử Phụ lục Kết kiểm tra PPT 250mg/l PCR dòng T 0, T1 312 313 P3.1 Kết kiểm tra dòng rd29A-codA T0, T1 PPT 250mg/l PCR 314 315 317 ST T 325 326 T0 318 Tên dòng 316 T1 319 PC R 320 P 321 Tên dòng PT 327 329 331 328 rd29A- 330 codA 332 + + 345 346 rd29A- 347 codA 354 rd29A- 355 codA 353 361 362 + 348 + ++ + 356 ++ 363 365 367 364 rd29A- 366 + codA 368 + + 381 382 383 384 387 390 385 388 386 rd29A- 389 + 391 codA 392 + + 413 414 415 416 419 422 417 420 418 rd29A- 421 + 423 codA 424 + ++ 445 446 447 449 451 448 rd29A- 450 + codA 452 + ++ 322 P 323 PT 333 rd29A- codA 1.1 341 rd29AcodA 1.2 349 rd29AcodA 2.1 357 rd29AcodA 369 rd29AcodA 4.1 377 rd29AcodA 4.2 393 rd29AcodA 5.1 401 rd29AcodA 5.2 409 rd29AcodA 5.3 425 rd29AcodA 6.1 433 rd29AcodA 6.2 441 rd29AcodA 6.3 453 rd29AcodA 7.1 461 rd29AcodA 7.2 PC R 334 - 335 + 358 +359 ++ + 370 - 371 + 394 - 395 +- + 462 - 463 396 404 412 428 436 444 - 454 - 455 -+ - 150 - 442 - 443 380 100 - 434 - 435 372 - 426 - 427 - 150 360 100 - 150 - 410 - 411 352 100 - 402 +403 344 - 378 +379 ++ 336 - 350 +351 ++ hạt thu - 342 - 343 324 Số - 456 100 - 150 464 Phụ lục Kết kiểm tra PPT 250mg/l PCR dòng T 0, T1 465 467 469 471 473 rd29A474 - 475 466 468 rd29A- 470 + codA 8.1 -8 codA 472 + 481 rd29A482 - 483 ++ codA 8.2 485 486 rd29A- 487 + 488 + 489 rd29A9 codA ++ codA 493 498 500 rd29A495 rd29A 496 494 497 + codA 10.1 -codA 10 499 + 508 rd29A10 + codA 10.2 512 -: Kết âm tính; +: Kết dương tính; 503 - 509 - 510 492 - 501 - 502 484 - 490 - 491 476 - 511 P3.2 Kết kiểm tra dòng 35S-codA T0, T1 PPT 250mg/l PCR 513 514 516 S TT 524 T0 517 Tên 518 P 519 P dòng CR PT 526 527 35S-codA 525 552 515 554 528 529 + - 531 556 555 35S-codA557 553 530 558 + 580 582 559 584 586 583 35S-codA 585 + 581 608 648 - 619 650 651 35S-codA 649 587 611 614 617 612 615 613 35S-codA 616 + 618 609 610 + 652 654 653 + - 655 T1 520 Tên dòng 532 35S-codA 2.1 + 540 35S-codA 2.2 548 35S-codA 2.3 560 35S-codA 6.1 +568 35S-codA 6.2 576 35S-codA 6.3 588 35S-codA 7.1 +596 35S-codA 7.2 604 35S-codA 7.3 620 35S-codA 8.1 628 35S-codA 8.2 + 636 35S-codA 8.3 644 35S-codA 8.4 656 35S-codA 9.1 +664 35S-codA 9.2 672 35S-codA 9.3 521 P 522 P523 Số PT CR hạt thu 533 - 534 -535 -541 - 542 -543 -549 - 550 -551 -561 - 562 -563 -569 - 570 -571 -577 - 578 -579 -589 - 590 -591 -597 - 598 -599 -605 - 606 -607 -621 - 622 -623 -629 - 630 -631 -637 - 638 -639 -645 - 646 -647 -657 - 658 -659 -665 - 666 -667 -673 - 674 -675 P3.2 Kết kiểm tra dòng 35S-codA T0, T1 PPT 250mg/l PCR 676 678 680 682 684 35S-codA 685 - 686 -687 679 35S-codA 11.1 681 - +692 35S-codA 693 11.2 -700 35S-codA 701 11.3 -704 706 708 710 712 35S-codA 713 707 35S-codA 709 13.1 -705 13 + 711 +720 35S-codA 721 13.2 -677 11 + 683 - 694 -695 - 702 -703 - 714 -715 - 722 -723 724 725 726 728 S TT T0 729 Tên 730 P 731 P dòng CR PT 727 T1 732 Tên dòng 736 737 738 739 740 35S-codA 13.3 744 746 748 750 752 35S-codA 20.1 747 35S-codA749 + 745 20 751 +760 35S-codA 20.2 768 35S-codA 20.3 772 775 778 781 784 35S-codA 776 779 23.1 773 777 35S-codA 780 - 782 792 35S-codA 23 + 23.2 774 783 + 800 35S-codA 23.3 808 35S-codA 23.4 812 814 816 818 820 35S-codA 27.1 815 35S-codA 817 + 813 27 - 819 +828 35S-codA 27.2 836 35S-codA 27.3 840 -: Kết âm tính; +: Kết dương tính; 733 P 734 P735 Số PT CR hạt thu 741 - 742 -743 -753 - 754 -755 -761 - 762 -763 -769 - 770 -771 -785 - 786 -787 -793 - 794 -795 -801 - 802 -803 -809 - 810 -811 -821 - 822 -823 -829 - 830 -831 -837 - 838 -839 841 842 P3.3 Kết kiểm tra dòng HSP-codA T0, T1 PPT 250mg/l PCR 843 846 847 STT n dòng 844 845 T0 Tê T1 854 855 856 857 HSP- codA 874 875 876 877 878 879 HSP- codA 848 849 850 PCR P P T dòng 858 860 862 HSP859 + + 861 codA 1.1 863 - 864 - 865 870 HSP- 871 - 872 - 873 codA 1.2 886 HSPcodA 3.1 894 HSPcodA 3.1 902 HSPcodA 3.2 910 HSPcodA 3.3 922 HSPcodA 4.1 930 HSPcodA 4.2 938 HSPcodA 4.3 946 HSPcodA 954 HSPcodA 966 HSPcodA 8.1 974 HSPcodA 8.2 982 HSPcodA 8.3 + 880 883 881 884 882 + + 885 + 914 916 918 920 915 917 HSP- 919 - + 921 codA + - 942 943 HSP- 944 + - 945 + codA 951 HSPcodA + + 958 960 962 964 959 961 HSP- 963 - 965 codA 950 Tên 851 P 852 P853 Số PT CR hạt thu + 952 + + 953 + 887 - 888 - 889 -895 - 896 - 897 -903 + 904 +905 250 ++ -300 911 - 912 - 913 -923 - 924 - 925 -931 - 932 - 933 -939 - 940 - 941 -947 - 948 - 949 -955 - 956 - 957 -967 - 968 - 969 -975 - 976 - 977 -983 - 984 - 985 986 987 HSP- 988 - + 989 codA 11 995 HSPcodA 12 + 994 1002 1003 1022 1023 1024 10 1062 + 990 HSP- codA 11 996 + 997 998 HSP+ codA 12 1004 1006 1008 1010 HSP1005 HSP1007 - + codA 14.1 codA 14 1009 1018 HSP+ codA 14.2 1025 1028 1031 1034 HSP1026 1029 codA 17.1 1027 HSP1030 - - 1032 1042 HSPcodA 17 + codA 17.2 1033 - 1050 HSPcodA 17.3 1058 HSPcodA 17.4 -: Kết âm tính; +: Kết dương tính; 991 + 992 +993 ++ 999 - 1000 - 1001 -1011 - 1012 - 1013 -1019 - 1020 - 1021 -1035 - 1036 - 1037 -1043 - 1044 - 1045 -1051 - 1052 - 1053 -1059 - 1060 - 1061 ... giống đậu tương có khả chống chịu hạn công nghệ chuyển gen, lựa chọn thực đề tài luận án ? ?Nghiên cứu chuyển gen codA nhằm nâng cao khả chịu hạn đậu tương (Glycine max (L.) Merrill)” Mục tiêu nghiên. .. chồi đậu tương 3.3 Nghiên cứu biến nạp cấu trúc mang gen codA vào giống đậu tương ĐT22 tạo đậu tương chuyển gen chịu hạn 1) Biến nạp di truyền tạo đậu tương chuyển gen codA 2) Phân tích đậu tương. .. nghiên cứu ` 20 3.3.259 Biến nạp cấu trúc mang gen chuyển codA vào đậu tương tạo đậu tương chuyển gen codA mã hóa choline oxydase có khả chịu hạn cao khơng chuyển gen Nội dung nghiên cứu 3.1 Nghiên