Nghiên cứu, cải tiến công thức pha vắc xin rotavin thành phẩm để bảo quản được ở nhiệt độ 2 8 độ c

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu, cải tiến công thức pha vắc xin Rotavin thành phẩm để bảo quản nhiệt độ 2-8 oC NGUYỄN PHƯƠNG THẢO Ngành Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thúy Hường PGS.TS Nguyễn Thị Xuân Sâm Viện: Công nghệ sinh học Thực phẩm HÀ NỘI, 2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Nghiên cứu, cải tiến công thức pha vắc xin Rotavin thành phẩm để bảo quản nhiệt độ 2-8 oC NGUYỄN PHƯƠNG THẢO Ngành Công nghệ sinh học Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thúy Hường Chữ ký GVHD PGS.TS Nguyễn Thị Xuân Sâm Chữ ký GVHD Viện: Công nghệ sinh học Thực phẩm HÀ NỘI, 2020 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc BẢN XÁC NHẬN CHỈNH SỬA LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên tác giả luận văn: Nguyễn Phương Thảo Đề tài luận văn: Nghiên cứu, cải tiến công thức pha vắc xin Rotavin thành phẩm để bảo quản nhiệt độ 2-8oC Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số SV: CA180127 Tác giả, Người hướng dẫn khoa học Hội đồng chấm luận văn xác nhận tác giả sửa chữa, bổ sung luận văn theo biên họp Hội đồng ngày 29/10/2020 với nội dung sau: - Phần tổng quan: + Chỉnh sửa mục 1.5 “Tá dược vắc xin” thành “Các thành phần vắc xin” + Bổ sung trích dẫn tài liệu tham khảo vào hình ảnh phần tổng - - quan Chỉnh sửa định nghĩa, thuật ngữ chưa sử dụng xác Phần kết thảo luận: + Bỏ ghi nồng độ gốc hóa chất công thức pha vắc xin + Bổ sung phần sở thiết lập công thức pha vắc xin Rotavin + Đưa số bảng phần Kết vào phần Phụ lục Phần Kết luận: Viết lại số kết luận cho ngắn gọn Giáo viên hướng dẫn Ngày 29 tháng 10 năm 2020 Tác giả luận văn CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Thị Xuân Sâm - Giảng viên Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, Trường đại học Bách khoa Hà Nội ln tận tình hướng dẫn bảo tạo điều kiện tốt giúp tơi hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Thúy Hường, Phó Giám Đốc Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế (POLYVAC) ân cần bảo giúp đỡ tơi q trình học tập trình thực luận văn Những ý kiến chị sở để tơi hồn thiện luận văn tốt Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới: Các thầy cô Viện Công nghệ Sinh học – Công nghệ Thực phẩm, Trường Đại học Bách Khoa Hà Nội tận tình truyền đạt kiến thức tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập Ban lãnh đạo Trung tâm Nghiên cứu Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm y tế tạo điều kiện cho thực luận văn Th.S Trần Thị Bích Hạnh tập thể phịng kiểm định chất lượng vắc xin thuộc Trung tâm Nghiên cứu, Sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế, anh chị tận tình tạo điều kiên bảo giúp tiếp thu nhiều kiến thức kĩ thuật chun mơn, để tơi hồn thành tốt luận văn Thạc sĩ Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn Gia đình bạn bè ln bên tơi, tạo điều kiện động viên giúp phấn đấu trình học tập trình thực luận văn Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày tháng Tác giả năm 2020 Nguyễn Phương Thảo MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH iii DANH MỤC BẢNG v BẢNG VIẾT TẮT vi MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Virus Rota 1.2 Bệnh tiêu chảy cấp tình hình tiêu chảy cấp virus Rota 1.2.1 Triệu chứng bệnh tiêu chảy cấp virus Rota 1.2.2 Chẩn đoán bệnh 1.2.3 Phương pháp điều trị 1.2.4 Khả lây lan 1.2.5 Điều trị phòng bệnh 1.3 Tình hình phát triển vắc xin phòng bệnh virus Rota 1.3.1 Vắc xin sản xuất từ chủng virus Rota có nguồn gốc từ động vật 1.3.2 Vắc xin Rota tái tổ hợp 1.3.3 Vắc xin Rota người 10 1.4 Vắc xin Rotavin-M1 phòng tiêu chảy virus Rota (Việt Nam) 10 1.5 Các thành phần vắc xin 12 1.5.1 Chất ổn định 12 1.5.2 Chất bổ trợ 15 1.5.3 Chất kháng sinh 18 1.5.4 Chất bảo quản 18 1.6 Đánh giá độc tính vắc xin thành phẩm 18 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.2 Vật liệu nghiên cứu 21 2.2.1 Nguyên vật liệu 21 2.2.2 Mơi trường, hóa chất 22 2.2.3 Động vật thí nghiệm 22 2.3 Phương pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Thiết lập công thức dung dịch chất ổn định vắc xin thành phẩm 24 i 2.3.2 Nghiên cứu tính ổn định nhiệt mẫu vắc xin thành phẩm 24 2.3.3 Sản xuất loạt vắc xin Rotavin 25 2.3.4 Thử nghiệm độc tính vắc xin Rota công thức cải tiến 26 2.4 Phương pháp thực 27 2.4.1 Phương pháp chuẩn độ hiệu giá 27 2.4.2 Phương pháp đo pH 28 2.4.3 Phương pháp xác định khả trung hòa axit dày 28 2.4.4 Phương pháp đánh giá độc tính vắc xin Rotavin công thức cải tiến (thử nghiệm tiền lâm sàng) 29 2.4.5 Phương pháp phân tích thống kê 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Nghiên cứu thiết lập công thức pha vắc xin Rotavin thành phẩm dạng dung dịch để bảo quản nhiệt độ 2-8ºC 33 3.1.1 Nghiên cứu tính ổn định vắc xin Rota công thức cải tiến 35 3.1.2 Thử nghiệm xác định khả trung hòa axit dịch vị dày 41 3.1.3 Đánh giá tính ổn định lô vắc xin sản xuất thử nghiệm pha theo công thức cải tiến 42 3.2 Kết nghiên cứu đánh giá độc tính vắc xin Rotavin cơng thức cải tiến thỏ thí nghiệm 49 3.2.1 Kết quan sát lâm sàng 49 3.2.2 Mức độ tiêu thụ thức ăn 49 3.2.3 Kết tăng trọng thể 50 3.2.4 Kết theo dõi thân nhiệt thỏ 53 3.2.5 Kết xét nghiệm huyết học sinh hóa máu 55 3.2.6 Kết giải phẫu bệnh 56 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1 Kết luận 58 4.2 Kiến nghị 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC 64 ii DANH MỤC HÌNH Hình 1 Hình ảnh virus Rota chụp kính hiển vi điện tử Hình Hình minh họa thành phần hóa học cấu trúc virus Rota Hình Tiêu chảy cấp virus Rota dẫn đến tình trạng trẻ bị nước nghiêm trọng Hình Hình minh họa thành phần vắc xin RotaTeq Merck Hình Vắc xin tái tổ hợp UK Hình ROTAVIN-M1 - Vắc xin ngừa tiêu chảy Rotavirus (Việt Nam) 11 Hình Các đám tế bào hủy hoại khơng bắt màu đỏ trung tính 28 Hình Biểu đồ kết hiệu giá mẫu vắc xin 37°C 21 ngày 36 Hình Biểu đồ kết pH mẫu vắc xin 37°C 21 ngày 37 Hình 3 Biểu đồ kết hiệu giá mẫu vắc xin 25°C 153 ngày 38 Hình Biểu đồ kết pH mẫu vắc xin 25°C 153 ngày 39 Hình Biểu đồ kết hiệu giá mẫu vắc xin 2-8°C 30 tháng 40 Hình Biểu đồ kết pH mẫu vắc xin 2-8°C 30 tháng 40 Hình Biểu đồ kết hiệu giá vắc xin Rotavin bảo quản 21 ngày 37oC 44 Hình Biểu đồ kết pH vắc xin Rotavin bảo quản 21 ngày 37oC 44 Hình Biểu đồ kết hiệu giá vắc xin Rotavin bảo quản 63 ngày (9 tuần) 25oC 45 Hình 10 Biểu đồ kết pH vắc xin Rotavin bảo quản 63 ngày (9 tuần) 25oC 46 Hình 11 Biểu đồ kết hiệu giá vắc xin Rotavin bảo quản 24 tháng ~ 80C 47 Hình 12 Biểu đồ kết pH vắc xin Rotavin bảo quản 24 tháng ~ 80C 48 Hình 13 Biều đồ tăng trọng trung bình thỏ nhóm I 50 Hình 14 Biều đồ tăng trọng trung bình thỏ nhóm II 51 Hình 15 Biều đồ tăng trọng trung bình thỏ nhóm III 51 Hình 16 Biều đồ tăng trọng trung bình thỏ nhóm IV 52 Hình 17 Biều đồ tăng trọng trung bình nhóm thỏ 52 Hình 18 Biểu đồ theo dõi thân nhiệt thỏ nhóm I 53 Hình 19 Biểu đồ theo dõi thân nhiệt thỏ nhóm II 53 iii Hình 20 Biểu đồ theo dõi thân nhiệt thỏ nhóm III 54 Hình 21 Biểu đồ theo dõi thân nhiệt thỏ nhóm IV 54 Hình 22 Biểu đồ theo dõi thân nhiệt trung bình nhóm 54 Hình 3.23 Hình ảnh não I)………………………………….……59 Hình 3.24 Hình ảnh não thỏ số (nhóm thỏ số 13 (nhóm thỏ số 23 (nhóm thỏ số 40 (nhóm (nhóm II)………………………… …………59 Hình 3.25 Hình ảnh não III)………………………… ……… 59 Hình 3.26 Hình ảnh não IV)……………………………………59 Hình 3.27 Hình ảnh phổi I)…………………………………… 60 thỏ số Hình 3.28 Hình ảnh phổi II)………………………………… 60 thỏ số 13 (nhóm Hình 3.29 Hình ảnh phổi III)………………………….….…….60 thỏ số 23 (nhóm Hình 3.30 Hình ảnh phổi IV)………………………….….…….60 thỏ số 40 (nhóm iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1 Tốc độ phản ứng VVM theo mức độ ổn định nhiệt (WHO) [54] 11 Bảng Cơ chế ổn định Vắc xin đệm/chất ổn định [47] 14 Bảng Chia bảo quản mẫu nghiên cứu bước đầu đánh giá tính ổn định 25 Bảng 2 Chia bảo quản mẫu vắc xin Rotavin nhiệt độ để đánh giá tính ổn định 26 Bảng Tóm tắt thiết kế nghiên cứu độc tính vắc xin Rotavin 26 Bảng Tỷ lệ trộn cho lần thử nghiệm xác định khả trung hòa axit dày (Buffer capacity tests) 29 Bảng Công thức dung dịch chất ổn định vắc xin Rotavin thành phẩm 33 Bảng Công thức pha vắc xin thành phẩm 34 Bảng 3 Kết nghiên cứu tính ổn định mẫu vắc xin nghiên cứu pha theo công thức cải tiến 37°C 21 ngày 35 Bảng Nghiên cứu tính ổn định mẫu vắc xin nghiên cứu theo công thức cải tiến 25°C 37 Bảng Nghiên cứu tính ổn định mẫu vắc xin nghiên cứu theo công thức cải tiến bảo quản 2-8oC 30 tháng 39 Bảng Kết thử nghiệm pH phương pháp BRR xác định khả trung hòa axit dịch vị dày công thức pha 41 Bảng Kết sản xuất lô vắc xin Rotavin thành phẩm công thức cải tiến 43 Bảng Kết nghiên cứu tính ổn định vắc xin Rotavin cơng thức cải tiến 37°C 21 ngày 43 Bảng Kết nghiên cứu lão hóa cấp tốc vắc xin Rotavin công thức cải tiến 25°C 63 ngày 45 Bảng 10 Kết nghiên cứu tính ổn định loạt vắc xin Rotavin công thức cải tiến nhiệt độ bảo quản 2-8oC 24 tháng 47 Bảng 11 Lượng tiêu thụ thức ăn trung bình hàng tuần thỏ 49 v BẢNG VIẾT TẮT BRR Baby Rossett-Rice DNA Deoxyribonucleic acid DMEM Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium dsRNA double-stranded Ribonucleic Acid EDTA Ethylendiamintetra acetic ELISA Enzyme-Linked ImmunoSorbent Phương pháp xác định tính đề kháng axit Kỹ thuật miễn dịch gắn enzyme Assay Hiệu giá HG mRNA Messenger Ribonucleic Acid NICVB National Institute for Control of Vaccines and Biologicals NXB Nhà xuất NSP Non-Structural Protein Protein phi cấu trúc PBS Phosphate Buffered Saline Dung dịch muối đệm PCR Polymerase Chain Reaction Phản ứng tổng hợp chuỗi PFU Plaque forming unit Đơn vị tạo đám hoại tử Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế POLYVAC Center for Research and Production Trung tâm nghiên cứu, Sản xuất of Vaccines and Biologicals Vắc xin Sinh phẩm Y tế PW Pure water Nước tinh khiết RBM Rota bulk material Rota bán thành phẩm RNA Ribonucleic Acid RT-PCR Real-Time Polymerase Chain Reaction Phản ứng tổng hợp chuỗi thời gian thực RV Rotavirus Virus Rota TCMR Tiêm chủng mở rộng VVM Vaccine Vial Monitor VX WHO Chỉ thị nhiệt lọ vắc xin Vắc xin World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới vi Phụ lục 6: Kết so sánh trị số huyết học trung bình nhóm phục hồi (tiếp) Mức ý nghĩa thống kê (p) Giá trị trung bình Chỉ số (giới hạn bình thường thỏ) Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN 31/05/2018 03/06/2018 17/06/2018 02/07/2018 14/07/2018 Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược MON 0,040,65x109/L 0,31 0,37 0,4 0,36 0,33 0,26 0,43 0,36 0,41 0,34 0,16 0,3 0,29 0,46 0,54 RBC 3,8-7,9 x 106/L 5,843 6,051 5,535 5,501 5,558 5,684 5,698 5,837 5,822 5,942 0,31 0,81 0,45 0,44 0,38 12,22 12,51 12,01 11,87 11,91 12,15 12,24 12,72 12,18 12,7 0,39 0,59 0,489 0,34 0,18 38,05 38,68 36,74 36,33 36,46 37,64 37,58 39,16 40,34 41,28 0,57 0,70 0,41 0,19 0,40 65,2 64 66,3 66,1 65,6 66,2 66 67 69,4 69,5 0,35 0,83 0,58 0,55 0,96 20,91 20,69 21,74 21,57 21,43 21,4 21,48 21,78 20,97 21,38 0,45 0,58 0,91 0,59 0,53 MCHC30,034,2 g/dL 32,1 32,33 32,75 32,68 32,73 32,35 32,55 32,45 30,16 30,78 0,47 0,88 0,42 0,86 0,1 RDW 10- 14,56 14,47 14,16 13,61 14,85 14,94 14,87 14,19 14,11 13,44 0,80 0,25 0,84 0,11 0,32 Hb 9,4-17,4 g/dl HCT35-48% MCV 50-75 mm3 MCH 18,1-22,4pg Mức ý nghĩa thống kê (p) Giá trị trung bình Chỉ số (giới hạn bình thường thỏ) Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN 31/05/2018 03/06/2018 17/06/2018 02/07/2018 14/07/2018 Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược 383,2 358,9 410,7 374,8 279,4 320 476,7 357,9 462,7 359,8 Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN 0,59 0,43 0,35 0,37 0,30 16,5% PLT 200650x109/L Ghi chú: WBC (white blood cells): Số lượng bạch cầu thể tích máu; MPV (mean platelet volume): thể tích trung bình tiểu cầu; PCT (plateletcrit): tỷ lệ thể tích tiểu cầu thể tích máu tồn bộ; PDW (platelet disrabution width): độ phân bố tiểu cầu; NEUT% (% neutrophils): tỷ lệ % bạch cầu trung tính; LYM% (% lymphocytes): tỷ lệ % bạch cầu lympho; MON% (% monocytes): tỷ lệ % bạch cầu mono; NEUT (neutrophils): số lượng bạch cầu trung tính; LYM (lymphocytes): số lượng bạch cầu lympho; MON (monocytes): số lượng bạch cầu mono; RBC (red blood cell count): số lượng hồng cầu thể tích máu; Hb (hemoglobin): Lượng huyết sắc tố thể tích máu; HCT (hematocrit): Tỷ lệ thể tích hồng cầu thể tích máu tồn bộ; MCV (mean corpuscular volume): thể tích trung bình hồng cầu; MCH (mean corpuscular hemoglobin): Số lượng trung bình huyết sắc tố có hồng cầu; MCHC (mean corpuscular hemoglobin concentration): Nồng độ trung bình huyết sắc tố thể tích máu; RDW (red distribution width): độ phân bố hồng cầu; PLT (platelet count): Số lượng tiểu cầu thể tích máu Phụ lục 7: So sánh số sinh hóa trung bình nhóm phục hồi Mức ý nghĩa thống kê (p) Giá trị trung bình Chỉ số (giới hạn bình thường thỏ) BILIRUBIN TP 0-8,55 µmol/L GLUCOSE 4,2-8,9 mmol/l URE 3,93-8,92 mmol/L CREA 53-124 µmol/l CHOLESTEROL 0,2 – 2,5 mmol/L PROTEIN TP 50 – 75 g/L ALBUMIN 35 - 55 g/L Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN 31/05/2018 03/06/2018 17/06/2018 02/07/2018 14/07/2018 Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược 0,37 0,39 0,7 0,7 0,41 0,39 0,85 0,79 0,58 0,52 0,37 0,39 0,7 0,7 0,41 6,97 6,63 6,13 6,32 6,25 6,22 6,13 6,17 6,28 5,89 0,29 0,25 0,91 0,87 0,27 5,97 5,62 6,20 6,04 6,39 5,51 5,90 6,29 6,97 6,79 0,23 0,64 0,00 0,22 0,63 70,14 68,75 64,59 66,12 69,54 68,86 76,37 80,24 86,93 85,12 0,50 0,41 0,88 0,50 0,81 2,02 2,29 2,13 2,19 2,09 2,21 2,72 2,52 2,95 2,58 0,11 0,71 0,53 0,65 0,49 53,99 51,12 54,51 52,36 54,99 51,91 56,94 55,52 57,83 56,42 0,06 0,08 0,00 0,46 0,45 27,46 26,61 28,21 27,81 51,27 50,43 27,08 28,02 57,83 56,23 0,11 0,37 0,54 0,35 0,44 Mức ý nghĩa thống kê (p) Giá trị trung bình Chỉ số (giới hạn bình thường thỏ) GLOBULIN 25 – 40 g/L A/G 0,7-1,89 Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN 31/05/2018 03/06/2018 17/06/2018 02/07/2018 14/07/2018 Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Lần XN Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược Vắc xin Giả dược 26,53 24,51 26,3 24,55 30,52 34,51 29,86 27,5 27,95 28,52 0,13 0,11 0,69 0,29 0,53 1,05 1,09 1,09 1,14 3,72 1,48 0,95 1,02 29,88 27,71 0,39 0,21 0,12 0,28 0,42 Phụ lục Kết quan sát đại thể hình ảnh giải phẫu số quan nội tạng thỏ Mã số thỏ Não Phổi Tim Gan Lách Thận (T) Thận (P) Dạ dày Ruột Non Ruột Peyer Kết luận Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 10 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 10 Mã số thỏ Não Phổi Tim Gan Lách Thận (T) Thận (P) Dạ dày Ruột Non Ruột Peyer Kết luận 11 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 12 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 13 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 14 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 15 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 16 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 17 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 18 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 19 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 20 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 11 Mã số thỏ Não Phổi Tim Gan Lách Thận (T) Thận (P) Dạ dày Ruột Non Ruột Peyer Kết luận 21 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 22 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 23 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 24 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 25 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 26 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 27 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 28 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 29 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 30 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 12 Mã số thỏ Não Phổi Tim Gan Lách Thận (T) Thận (P) Dạ dày Ruột Non Ruột Peyer Kết luận 31 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 32 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 33 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 34 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 35 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 36 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 37 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 38 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 39 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 40 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường 13 Phụ lục 9: Tăng trọng trung bình thỏ nhóm I nghiên cứu độc tính Mã số Giới thỏ Thời gian cân trọng lượng nhóm I Nhóm tính 25/05 01/06 02/06 03/06 08/06 15/06 16/06 17/06 22/06 30/06 01/07 02/07 8h30 8h30 8h30 8h 8h 8h 8h 15h 8h30 8h30 8h30 15h00 ~9h ~9h ~9h ~9h ~16h30 ~9h30 ~9h45 ~9h15 ~16h35 ~9h30 ~10h00 ~9h30 Đực I 2,1 2,2 2,2 2,2 2,3 2,4 2,4 2,4 2,5 2,5 2,5 2,5 Đực I 1,6 1,7 1,6 1,6 1,7 1,8 1,9 1,8 1,8 1,9 2 Đực I 1,7 1,8 1,8 1,9 2,1 2,1 2,1 2,2 2,3 2,3 2,3 Đực I 1,9 2 2 2,1 2,1 2,1 2,3 2,3 2,3 Đực I 1,8 1,9 1,9 2,1 2,2 2,2 2,2 2,3 2,5 2,5 2,5 Cái I 1,6 1,8 1,8 1,8 1,9 2,1 2,1 2,2 2,4 2,3 2,3 Cái I 2 2,1 2,1 1,9 2 2,2 2,2 2,3 2,2 Cái I 1,9 2,1 2 2,1 2,2 2,2 2,2 2,3 2,4 2,4 2,3 Cái I 1,5 1,7 1,7 1,7 1,9 1,9 2,1 2,3 2,4 2,5 2,5 10 Cái I 1,8 2 2,1 2,1 2,4 2,2 2,3 2,3 2,6 2,6 2,6 0,1 0,12 0,14 0,21 0,31 0,33 0,34 0,43 0,56 0,58 0,56 Tăng trọng trung bình nhóm I so với ngày (kg) 14 Phụ lục 10: Tăng trọng trung bình thỏ nhóm II nghiên cứu độc tính Mã số thỏ Giới tính Thời gian cân trọng lượng nhóm II Nhóm 25/05 01/06 02/06 03/06 08/06 15/06 16/06 17/06 22/06 30/06 01/07 02/07 03/07 8h 8h 8h 8h 15h 8h30 8h30 8h30 15h00 8h30 8h30 8h30 15h30 ~9h ~9h ~9h ~9h ~16h3 ~9h3 ~ 9h45 ~9h1 ~16h3 ~9h3 ~10h0 ~9h3 ~16h30 11 Đực II 2,2 2,3 2,3 2,3 2,3 2,4 2,3 2,3 2,4 2,4 2,4 2,4 2,5 12 Đực II 1,8 1,9 1,9 1,9 2,1 2,2 2,2 2,3 2,3 2,4 2,4 2,5 13 Đực II 1,6 2 2,2 2,3 2,3 2,3 2,5 2,6 2,6 2,6 2,7 14 Đực II 1,7 1,9 1,8 1,9 2,1 2 1,9 1,8 1,7 1,7 1,7 1,5 15 Đực II 1,7 1,8 1,9 1,9 2,2 2,2 2,2 2,4 2,4 2,4 2,4 2,5 16 Cái II 1,9 1,8 1,8 1,8 2,1 2,1 2,1 2,3 2,4 2,4 2,4 2,5 17 Cái II 2,1 2,3 2,3 2,3 2,4 2,6 2,6 2,6 2,6 2,8 2,8 2,9 2,9 18 Cái II 1,5 1,7 1,7 1,7 1,9 2 2,1 2,1 2,3 2,3 2,3 2,4 19 Cái II 1,6 1,8 1,8 1,9 2,1 2,1 2,2 2,2 2,3 2,3 2,4 2,4 20 Cái II 1,8 1,9 1,9 1,9 2,1 2,1 2,2 2,2 2,4 2,4 2,4 2,5 0,15 0,15 0,17 0,3 0,4 0,4 0,42 0,49 0,57 0,58 0,6 0,65 Tăng trọng trung bình nhóm II so với ngày (kg) 15 Phụ lục 11: Tăng trọng trung bình thỏ nhóm III nghiên cứu độc tính Mã số Giới tính thỏ Thời gian cân trọng lượng nhóm III Nhóm 25/05 01/06 02/06 03/06 8h 8h 8h 8h ~9h ~9h ~9h ~9h 08/06 15/06 16/06 17/06 22/06 30/06 01/07 02/07 15h 8h30 8h30 8h30 15h00 8h30 8h30 8h30 ~ 9h45 ~9h15 ~16h35 ~9h30 ~10h ~9h30 ~16h30 ~9h30 21 Đực III 2,1 2,1 2,2 2,2 2,3 2,4 2,4 2,4 2,5 2,6 2,6 2,6 22 Đực III 1,8 1,7 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,8 1,8 1,8 23 Đực III 1,6 1,6 1,7 1,7 1,7 1,9 1,9 1,9 2 2 24 Đực III 1,7 1,9 1,8 1,9 2,2 2,2 2,2 2,3 2,3 2,4 2,4 25 Đực III 1,7 1,9 1,9 2,1 2,3 2,3 2,3 2,4 2,5 2,5 2,6 26 Cái III 2,2 2,3 2,3 2,3 2,4 2,6 2,3 2,5 2,6 2,7 2,7 2,7 27 Cái III 1,8 1,9 1,9 1,9 2,3 2,6 2,2 2,4 2,4 2,5 2,5 28 Cái III 1,6 1,8 1,8 1,8 2,1 2,1 2,1 2,2 2,3 2,3 2,3 29 Cái III 1,7 1,9 1,9 1,9 2,1 2,2 2,1 2,3 2,4 2,4 2,4 30 Cái III 1,6 1,7 1,7 1,7 1,9 2,1 2,1 2,1 2,2 2,3 2,3 2,3 0,1 0,1 0,12 0,22 0,38 0,39 0,36 0,47 0,55 0,57 0,58 Tăng trọng trung bình nhóm III so với ngày (kg) 16 Phụ lục 12: Tăng trọng trung bình thỏ nhóm IV nghiên cứu độc tính Mã số thỏ Giới tính Thời gian cân trọng lượng nhóm IV Nhóm 25/05 01/06 02/06 03/06 08/06 15/06 16/06 17/06 22/06 30/06 01/07 02/07 03/07 8h 8h 8h 8h 15h 8h30 8h30 8h30 15h00 8h30 8h30 8h30 15h30 ~9h ~9h ~9h ~9h ~16h3 ~9h3 ~9h45 ~9h1 ~16h3 ~9h3 ~10h ~9h3 ~16h30 31 Đực IV 2,2 2,2 2,2 2,4 2,5 2,5 2,5 2,6 2,8 2,7 2,7 2,8 32 Đực IV 1,6 1,8 1,8 1,8 2,2 2,2 2,1 2,4 2,5 2,5 2,5 2,6 33 Đực IV 1,9 2,1 2,1 2,1 2,3 2,5 2,5 2,5 2,6 2,7 2,8 2,7 2,8 34 Đực IV 1,5 1,7 1,8 1,8 2,1 2,2 2,2 2,3 2,4 2,4 2,4 2,5 35 Đực IV 1,7 1,9 1,9 1,9 2,1 2,2 2,2 2,2 2,3 2,5 2,5 2,5 2,6 36 Cái IV 2,2 2,2 2,2 2,3 2,4 2,5 2,5 2,6 2,7 2,7 2,8 2,9 37 Cái IV 1,9 2 2,2 2,3 2,3 2,4 2,5 2,7 2,6 2,6 2,7 38 Cái IV 1,7 1,8 1,8 1,8 1,9 2,1 2,1 2,1 2,2 2,4 2,3 2,3 2,4 39 Cái IV 1,6 1,8 1,8 1,9 2,1 2,2 2,2 2,3 2,4 2,4 2,4 2,5 40 Cái IV 1,7 1,8 1,8 1,7 2,2 2,2 2,2 2,4 2,3 2,4 2,4 2,5 0,17 0,18 0,18 0,36 0,5 0,53 0,53 0,66 0,78 0,77 0,77 0,87 Tăng trọng trung bình nhóm IV so với ngày (kg) 17 Phụ lục 13: Tăng trọng trung bình nhóm thỏ Thời gian cân trọng lượng trung bình 25/05 01/06 02/06 03/06 08/06 15/06 16/06 17/06 22/06 30/06 01/07 02/07 03/07 15h 8h30 8h30 8h30 15h00 8h30 15h30 ~16h30 ~9h30 ~9h45 ~9h15 ~16h35 ~9h30 ~10h ~9h30 ~16h30 8h 8h 8h 8h 8h30 8h30 ~9h ~9h ~9h ~9h Tăng trọng trung bình nhóm I so với ngày (kg) 0,14 0,12 0,14 0,21 0,31 0,33 0,34 0,43 0,56 0,58 0,56 Tăng trọng trung bình nhóm II so với ngày (kg) 0,15 0,15 0,17 0,3 0,4 0,4 0,42 0,49 0,57 0,58 0,6 0,1 0,1 0,12 0,22 0,38 0,39 0,36 0,47 0,55 0,57 0,58 0,17 0,18 0,18 0,36 0,5 0,53 0,53 0,66 0,78 0,77 0,77 0,65 Tăng trọng trung bình nhóm III so với ngày (kg) Tăng trọng trung bình nhóm IV so với 0,87 ngày (kg) 18 Phụ lục 14: Phân loại phản ứng tăng thân nhiệt sốt thỏ Liều Phân loại phản ứng tăng thân nhiệt (số lượng thỏ) Thân nhiệt Vắc xin Rotavin 6h 24 h Liều Vắc xin Rotavin Giả dược Liều Vắc xin Rotavin Giả dược Giả dược 48h 6h 24h 48 h 6h 24 h 48h 6h 24 h 48 h 6h 24 h 48 h h 24 h 48h 6 11 10 13 12 13 13 13 10 11 10 Tăng từ 0,1 đến ≤ 0,3oC 3 2 3 2 Tăng từ > 0,3 đến ≤ 0,6oC 1 4 2 2 Tăng > 0,6oC (sốt) 7 3 7 3 Số thỏ tăng thân nhiệt 14 14 12 10 11 11 12 11 7 12 10 10 Tổng số thỏ nhóm 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ≤ nhiệt độ 19 ... lgPFU/ml Kết pha, kiểm tra pH hiệu giá mẫu v? ?c xin thể bảng 3 .2 Bảng C? ?ng th? ?c pha v? ?c xin thành phẩm Thành phần C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c 21 9 21 9 21 9 21 9 21 9 21 9 DMEM... ổn định v? ?c xin Rotavin thành phẩm Nồng độ cuối c? ?ng th? ?c (wt/vol) % C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c RotavinM1 Axit Citric 0,50% - - - - - - Kẽm Clorua 0,05%... 0 ,8 1,44 1 ,85 2, 85 1 ,88 1,51 Hiệu giá v? ?c xin bảo quản 153 ngày 25 ? ?C lgPFU/mL C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c 3 C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c C? ?ng th? ?c Tiêu chuẩn 14 21 36 45 54 63 72 81 90 99 1 08 117 126