Cải tiến phương pháp tách chiết thuốc trừ sâu họ carbamat trong hoa quả nhập khẩu để phân tích nhanh bằng kit enzym và khả năng ứng dụng trong công tác kiểm định hải quan

TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SĨ Cải tiến phƣơng pháp tách chiết thuốc trừ sâu họ carbamat hoa nhập để phân tích nhanh kit enzym khả ứng dụng công tác kiểm định hải quan NGUYỄN VŨ LÂM Lam.NVCA180125@sis.hust.edu.vn Ngành Công nghệ sinh học Giảng viên hƣớng dẫn: TS Đỗ Biên Cương Chữ ký GVHD Viện: Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm Hà Nội, 04/2021 LỜI CẢM ƠN Trước hết, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới TS Đỗ Biên Cương- Viện Công nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm- Trường Đại học Bách khoa Hà Nội tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn bạn Vũ Thị Phương Thủy, Đinh Văn Mạnh, Vũ Thị Lan nhóm nghiên cứu TS Đỗ Biên Cương hỗ trợ nhiều trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo cán công tác Viện Công Nghệ Sinh học Công nghệ Thực phẩm - Trường Đại học Bách khoa Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập trường Tôi xin chân thành cảm ơn tới giúp đỡ tận tình ý kiến đóng góp hữu ích bạn bè, đồng nghiệp Cục Kiểm định hải quan – Tổng cục Hải quan để giúp tơi hồn thành luận văn Trong q trình thực hồn thành đề tài tốt nghiệp, thời gian kiến thức hạn chế nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận đóng góp ý kiến, bảo tận tình q thầy để luận văn hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn./ HỌC VIÊN Kí ghi rõ họ tên Nguyễn Vũ Lâm LỜI CAM ĐOAN Tôi Nguyễn Vũ Lâm, học viên cao học khoá 2018A, mã số học viên: CA180125, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội, chuyên ngành Công nghệ Sinh học, xin cam đoan: Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn TS Đỗ Biên Cương Công trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thông tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp thuận sở nơi nghiên cứu Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết TÓM TẮT LUẬN VĂN Vấn đề an toàn thực phẩm kiểm sốt dư lượng hóa chất trừ sâu điểm mấu chốt cho việc hội nhập vào thị trường nông sản giới nông nghiệp Việt Nam Hiện nay, việc kiểm tra dư lượng thuốc trừ sâu trình phức tạp, tốn kém, nhiên ảnh hưởng đến sức khỏe người tiêu dùng nên việc kiểm tra dư lượng thuốc trừ sâu quan trọng Có nhiều phương pháp để phân tích dư lượng thuốc trừ sâu hoa nhập nhiên phương pháp thường gây tốn thời gian phân tích, cần nhiều thiết bị máy móc đại Phương pháp phân tích dư lượng thuốc trừ sâu kit enzym phát triển để giúp giảm thời gian kiểm tra sàng lọc mẫu hoa nhiễm thuốc trừ sâu, nhiên phương pháp chưa có tính pháp lý cao chưa có phương pháp đánh giá hiệu để áp dụng thực tế Chính tơi lựa chọn nghiên cứu đề tài “Cải tiến phƣơng pháp tách chiết thuốc trừ sâu họ carbamat hoa nhập để phân tích nhanh kit enzym khả ứng dụng công tác kiểm định hải quan” Nghiên cứu nhằm khảo sát yếu tố ảnh hưởng như: chọn dung mơi chiết thích hợp, tỷ lệ dung môi, thời gian chiết, nhiệt độ chiết loại tạp chất liên quan đến hoạt động phát kit Bên cạnh đó, cịn tiến hành thực nghiệm với mẫu thị trường Quy trình đưa mong muốn phù hợp, dễ dàng với người sử dụng để đáp ứng tính ứng dụng kit phát nhanh Mặt khác có so sánh đối chứng dựa kết phân tích máy sắc ký lỏng khối phổ lần MS (LC/MS/MS) để kiểm tra hiệu tách chiết; qua giúp sàng lọc, tạo sở ứng dụng công tác kiểm tra chất lượng, kiểm tra vệ sinh an toàn thực phẩm quan hải quan, đáp ứng công tác phát triển, nhu cầu hội nhập Việt Nam yêu cầu đặt Chính phủ nhằm rút ngắn thời gian thơng quan hàng hóa, tạo thuận lợi cho doanh nghiệp xuất nhập Kết đạt nghiên cứu là: - Đã đề xuất quy trình chiết thuốc trừ sâu carbamat hoa phù hợp để phân tích nhanh kit enzym cholinesterase - Sử dụng quy trình chiết chiết đề xuất, tiến hành kiểm tra kit Dr.Carbamat, phân tích thuốc trừ sâu hoa kết hợp với phần mềm Colorimeter phân tích hình ảnh phiến thử phân tích bán định lượng carbamat thuốc trừ sâu ức chế cholinesterase tồn dư trái xác, nhanh chóng, đơn giản HỌC VIÊN Kí ghi rõ họ tên Nguyễn Vũ Lâm MỤC LỤC PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 An toàn hoa nhập vai trò Hải quan 1.2 Các thuốc trừ sâu tồn dƣ hoa nhập 1.2.1 Nhóm clo hữu .3 1.2.2 Nhóm pyrethroit tổng hợp .4 1.2.3 Nhóm lân hữu .4 1.2.4 Nhóm carbamate 1.3 Phân tích dƣ lƣợng thuốc trừ sâu hoa 1.3.1 Xử lý mẫu 1.3.2 Chiết mẫu 1.3.3 Làm mẫu 10 1.3.4 Định tính định lượng chất phân tích 12 1.4 Các nghiên cứu phân tích tồn dƣ thuốc trừ sâu hoa Việt Nam 12 1.5 Cơ sở lý thuyết đo màu 16 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Vật liệu, hóa chất thiết bị máy móc 18 2.1.1 Nguyên vật liệu, hóa chất 18 2.1.2 Thiết bị 19 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Chiết thuốc trừ sâu từ trái 19 2.2.2 Phân tích thuốc trừ sâu kit cholinesterase .20 2.2.3 Đo màu máy đo thực phẩm phần mềm Colorimeter .20 2.2.4 Phân tích thuốc trừ sâu phương pháp LC/MS/MS .20 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 3.1 Xác định điều kiện chiết làm mẫu để phân tích thuốc trừ sâu carbamate tồn dƣ trái kit enzym 22 3.1.1 Chiết làm carbamate tồn dư táo 22 3.1.2 Chiết làm carbamate tồn dư số loại trái khác 26 3.1.3 Đề xuất quy trình tách chiết thuốc trừ sâu carbamate hoa để phân tích nhanh kit enzym 27 3.1.4 Đánh giá quy trình tách chiết thuốc trừ sâu carbamate hoa để phân tích nhanh kit enzym…………………………………………………………………….28 3.2 Ứng dụng phân tích nhanh thuốc trừ sâu carbamate hoa nhập 31 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 4.1 Kết luận 36 4.2 Kiến nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO .37 PHỤ LỤC .39 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT KĐHQ TCHQ BNNPTNT BYT TTS BVTV AChE ACh ChE BChE BCh BTB ChE FAO MRL UHPLC LC/MS-MS PSA Kiểm định hải quan Tổng cục hải quan Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn Bộ Y tế Thuốc trừ sâu Bảo vệ thực vật Acetylcholinesterase Acetylcholine Cholinesterase Butyrylcholinesterase Butyrylcholine Bromthylmol xanh Cholinesterase Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc Mức dư lượng tối đa cho phép Sắc ký lỏng siêu cao áp Sắc ký lỏng ghép nối khối phổ lần MS Primary secondary amine DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 1.1: Quy định Việt Nam quốc tế dư lượng tối đa thuốc trừ sâu carbamate hoa Bảng 1.2: Các dung mơi thường sử dụng q trình chiết thuốc trừ sâu từ mẫu hoa rau củ Bảng 2.1: Các hóa chất sử dụng Bảng 2.2: Máy, thiết bị Bảng 3.1: Kết phân tồn dư thuốc trừ sâu mẫu táo thị trường Hà Nội 10 18 19 34 DANH MỤC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1: Biểu đồ nhập mặt hàng rau với đối tác lớn năm 2020 Hình 1.2: Kiểm dịch hoa nhập Hình 1.3: Sự kết gắn carbamate vào trung tâm hoạt động AchE Hình 1.4: Các loại thuốc trừ sâu họ carbamat điển hình Hình 1.5: Các bước trình phân tích để xác định dư lượng thuốc trừ sâu hoa rau củ Hình 1.6: Các kỹ thuật chiết thuốc trừ sâu từ trái rau củ Hình 1.7: Phương pháp chiết Quechers Hình 1.8: Cấu trúc kít enzym màu cửa sổ kit đọc kết phân tích thuốc trừ sâu với nồng độ khác Hình 1.9: Quy trình chiết thuốc trừ sâu để phân tích kit enzym ĐH Bách khoa Hà Nội sản xuất Hình 2.1: Kit enzym Dr.Carbamat Hình 2.2: Mẫu táo trước chiết Hình 2.3: Đường chuẩn Carbofuran Hình 2.4: Đường chuẩn Propoxur Hình 3.1: Ảnh hưởng dung mơi chiết đến khác biệt màu ô kiểm tra kiểm chứng phiến thử Hình 3.2: Ảnh hưởng tỉ lệ chiết đến khác biệt màu ô thí nghiệm kiểm chứng Hình 3.3: Ảnh hưởng thời gian chiết đến khác biệt màu thí nghiệm kiểm chứng Hình 3.4: Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khác biệt màu thí nghiệm kiểm chứng Hình 3.5: Ảnh hưởng nồng độ PVPP xử lý mẫu đến khác biệt màu thí nghiệm kiểm chứng Hình 3.6: Dịch chiết táo sử dụng C18 PSA khác biệt ô kiểm chứng thí nghiệm phiến thử kit enzym Hình 3.7: Dịch chiết long khác biệt ô kiểm chứng ô thí nghiệm phiến thử kit enzym Hình 3.8: Các dịch chiết cam, lê nho khác biệt kiểm chứng thí nghiệm phiến thử kit enzym Hình 3.9: Sơ đồ quy trình sử dụng KIT để phát độc tố Carbamate hoa để phân tích nhanh kit enzym Hình 3.10: Hiệu suất chiết Carbofuran nồng độ 20-1000ppb bốn mẫu hoa Hình 3.11: Hiệu suất chiết Propoxur nồng độ 20-1000ppb bốn mẫu hoa 11 15 16 18 19 21 21 22 23 24 24 25 26 26 27 28 29 29 Hình 3.12: Đánh giá mối quan hệ tuyến tính nồng độ quy ước nồng độ thực tế số thuốc trừ sâu carbamat dịch chiết hoa nồng độ 20-1000ppb 30 Hình 3.13: Đánh giá mối quan hệ tuyến tính nồng độ quy ước nồng độ thực tế thuốc trừ sâu carbofuran propoxur có dịch chiết hoa nồng độ 20-80ppb 31 Hình 3.14: Quan hệ tuyến tính nồng độ Carbofuran mẫu táo Δb đo máy so màu 32 Hình 3.15: Xử lý hình ảnh phần mềm Colorimeter 32 Hình 3.16: Quan hệ tuyến tính nồng độ Carbofuran mẫu táo Δb đo phần mềm Colorimeter 33 Hình 3.17: Kết kiểm tra táo, lê, nho qua cửa phía Bắc 34 Nồng độ Carbofuran thực tế (ppb) 60 (A) yTáo = 0,5999x + 2,436 R² = 0,999 50 40 yNho = 0,6578x - 0,9015 R² = 0,998 30 Táo Nho 20 Linear (Táo) 10 Linear (Nho) 0 20 40 60 80 100 Nồng độ Propoxur thực tế (ppb) Nồng độ Carbofuran quy ước (ppb) 70 (B) yNho = 0.7324x - 1.848 R² = 0.998 60 50 yTáo = 0.7269x - 0.5295 R² = 0.998 40 Táo 30 Nho 20 Linear (Táo) 10 Linear (Nho ) 0 20 40 60 80 100 Nồng độ Propoxur quy ước (ppb) Hình 3.13 Đánh giá mối quan hệ tuyến tính nồng độ quy ước nồng độ thực tế thuốc trừ sâu carbofuran propoxur có dịch chiết hoa nồng độ 20-80ppb 3.2 Ứng dụng phân tích nhanh thuốc trừ sâu carbamate hoa nhập 3.2.1 Lựa chọn cơng cụ phân tích hình ảnh phân tích bán định lƣợng thuốc trừ sâu hoa Kết nghiên cứu kết hình 3.14 cho thấy sai khác Δb màu thị thí nghiệm ô kiểm chứng đo máy so màu thực phẩm có mối quan hệ tuyến tính với nồng độ thuốc trừ sâu ức chế cholinesterase phạm vi định, với hệ số tương quan R2 = 0.96 Do dựa vào Δb để phân tích bán định lượng thuốc trừ sâu mẫu Chi cục Kiểm định hải quan cửa chưa có máy so màu sắc Trang 31 12 11 y = 3,8453x + 6,8638 R² = 0,956 Δb 10 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 Nồng độ thuốc trừ sâu táo (ppm) Hình 3.14 Quan hệ tuyến tính nồng độ Carbofuran mẫu táo Δb (Màu sắc ô kiểm tra ô kiểm chứng phiến thử sau phản ứng đo máy đo màu thực phẩm, so sánh với màu giấy thiếc Tính tốn hiệu số Δb mẫu từ giá trị b trung bình lần thí nghiệm) Đối chiếu so sánh sử dụng phần mềm Colorimeter để phân tích màu sắc kiểm tra ô kiểm chứng phiến thử sau phản ứng (hình 3.15) Tính tốn hiệu số Δb mẫu từ giá trị trung bình lần thí nghiệm Từ giá trị Δb trung bình xác định, sử dụng đường đồ thị chuẩn xây dựng cho loại trái cụ thể, dễ dàng suy tổng lượng thuốc trừ sâu ức chế cholinesterase có mặt mẫu kiểm tra Kết độ tương quan R2= 0,92 (hình 3.16) cho thấy sử dụng phần mềm Colorimeter cho xác tương đối cao, khơng cho sai khác so với máy so mầu thực phẩm cho kết khả quan Hình 3.15 Xử lý hình ảnh phần mềm Colorimeter Trang 32 12 11 y = 3,7991x + 6,5704 R² = 0,923 Δb 10 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 Nồng độ thuốc trừ sâu táo (ppm) Hình 3.16 Quan hệ tuyến tính nồng độ Carbofuran mẫu táo Δb (Màu sắc ô kiểm tra ô kiểm chứng phiến thử sau phản ứng đo phần mềm Colorimeter, so sánh với màu giấy thiếc Tính tốn hiệu số Δb mẫu từ giá trị b trung bình lần thí nghiệm) 3.2.2 Phân tích tồn dư thuốc trừ sâu mẫu táo thị trường Hà Nội Sử dụng lô kít thử (đã dùng xây dựng đường chuẩn hình 3.16) kiểm tra táo thuộc nhãn hàng (theo tem dán quả) bán cửa hàng hoa Hà Nội Kết cho thấy mẫu táo có tồn dư hóa chất ức chế cholinesterase mức thấp khơng có Dựa vào giá trị Δb đo mẫu táo đường chuẩn hình 3.16, hàm lượng độc tố mẫu A, E tương đương 0,53-0,82 mg carbofuran/kg táo Mẫu A có hàm lượng chất ức chế cholinesterase cao mẫu thu thời điểm (0,82 ppm) Bảng 3.1 Kết phân tồn dư thuốc trừ sâu mẫu táo thị trường Hà Nội Mẫu táo Ambrosia (A) Jazz (J1) Stas (S) Gala (G1) Envy (E) Jazz (J2) NZ Quee n (N) Gala (G2) 9,68 4,50 6,62 5,25 8,58 5,09 3,23 4,64 b Độc tố 0,82 N N N 0,53 N N N TTS (0,02) (ppm) Ghi chú: N- Giá trị Δb nhỏ cận đường chuẩn KC: mẫu táo không chứa TTS Trang 33 3.2.3 Phân tích tồn dƣ thuốc trừ sâu số mẫu hoa nhập qua cửa phía Bắc (A) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 (B) Mẫu 11 Mẫu 12 Mẫu 13 Mẫu 14 Mẫu 15 Mẫu 16 Mẫu 17 Mẫu 18 Mẫu 19 Mẫu 20 (C) Mẫu 21 Mẫu 26 Mẫu 22 Mẫu 27 Mẫu 23 Mẫu 28 Mẫu 24 Mẫu 25 Mẫu 29 Mẫu 30 Hình 3.17 Kết kiểm tra táo (A), lê (B), nho (C) qua cửa phía Bắc Trang 34 Kết kiểm tra mẫu trái 30 tờ khai hải quan (xem phụ lục) với 03 loại hoa táo, nho lê nước Mỹ, Hàn Quốc, Mỹ, Nam Phi, New Zealand, Peru, Pháp, Trung Quốc cửa Hà Nội, Hải Phòng, Lạng Sơn cho thấy mẫu trái nhập ngạch khơng có tồn dư thuốc trừ sâu carbamate độc tố ức chế cholinesterae Quá trình kiểm tra thực địa cho thấy quy trình phân tích đơn giản, thời gian phân tích nhanh, chi phí thấp; điều giúp ích lớn công tác kiểm tra chất lượng chi cục Kiểm định hải quan nói riêng lực lượng hải quan nói chung, sàng lọc mẫu hàng chất lượng cửa khẩu, nơi khơng có phịng thí nghiệm đại Trang 35 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua q trình nghiên cứu, chúng tơi rút số kết luận sau: Đã đề xuất quy trình chiết thuốc trừ sâu carbamat hoa phù hợp để phân tích nhanh kit enzym cholinesterase: 10 gam vỏ (có kích thước 1-2 cm2/miếng) chiết với dung dịch ethanol 5% với tỷ lệ 1/3 (trong phút); Dịch chiết sau loại bỏ tạp chất PSA (0,15g) C18 (0,15g) lọc thu dịch Quy trình cho hiệu suất chiết carbofuran propoxur mẫu trái (táo, cam, nho, lê) đạt 6075% với độ lặp lại tốt; Quy trình chiết có độ tuyến tính chặt khoảng nồng độ 20-80ppb (với R2= 0,998) Khoảng nồng độ làm việc quy trình chiết 20-1000 ppb (tức từ 0,02-1 mg/kg) Sử dụng quy trình chiết chiết đề xuất, tiến hành kiểm tra kit Dr.Carbamat, phân tích thuốc trừ sâu hoa kết hợp với phần mềm Colorimeter phân tích hình ảnh phiến thử phân tích bán định lượng carbamat thuốc trừ sâu ức chế cholinesterase tồn dư trái xác, nhanh chóng, đơn giản cửa Hải Quan cửa hàng hoa nhập 4.2 Kiến nghị Một số nội dung cần tiếp tục tiến hành: Đánh giá quy trình chiết thuốc trừ sâu ức chế cholinesterase mẫu hoa khác bơ, chanh… Hồn thiện cơng cụ bán định lượng thuốc trừ sâu sở kit enzym Triển khai kiểm tra chất lượng Cục KĐHQ để sàng lọc mẫu hoa không đạt chất lượng Trang 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 10 11 12 13 14 Phi Hùng (29/11/2016), “Sử dụng hóa chất cấm, nơng sản Việt trả giá đắt”, Pháp luật Việt Nam [Online] Available: http://baophapluat.vn/tiengnoi-da-chieu/su-dung-hoa-chat-cam-nong-san-viet-dang-tra-gia-dat307577.html Nguyễn Hiền (27/12/2019), “Trái nhập tăng nhanh, xuất đuối sức”, Hải quan Online [Online] Available: https://haiquanonline.com.vn /trai-cay-nhap-khau-tang-nhanh-xuat-khau-duoi-suc-117895-117895.html Quang Thuần, Chí Nhân (14/6/2014), “30% mẫu trái Trung Quốc nhiễm thuốc trừ sâu”, Pháp luật Việt Nam [Online] Available: http://baophapluat.vn/dien-dan/30-mau-trai-cay-trung-quoc-nhiem-thuoc-trusau-187573.html “Thủ tục nhập trái tươi: táo, cam, nho, cherry…”, Vinalogs Container Transportation [Online] Available: https://www.containertransportation.com/thu-tuc-nhap-khau-trai-cay-tuoi.html Trần Văn Hai, “Giáo trình hóa bảo vệ thực vật”, Trường đại học Cần Thơ, 2007 “Carbamate pesticides: a general introduction”, IPCS Inchem Home, [Online] Available: http://www.inchem.org/documents/ehc/ehc/ ehc64.htm#SectionNumber:2.2 truy cập ngày 20/4/2021 Thông tư 50/2016/TT-BYT việc Quy định giới hạn tối đa dư lượng thuốc trừ sâu thực phẩm, Bộ Y tế, 2016 “EU Pesticede database”, European Commission [Online] Available: https://ec.europa.eu/food/plants/pesticides/eu-pesticides-database_en “Pesticide Index”, FAO [Online] Available: http://www.fao.org/fao-whocodexalimentarius/codex-texts/dbs/pestres/pesticides/en/, ngày 19/5/2021 “Maximum Residue limits (MRLs) list of agricultural chemicals in food”, The Japan Food chemical research foudation [Online] Available: https://db.ffcr.or.jp/front/, ngày 19/5/2021 Jolanta F., Maciej T., Marek B, “Properties and determination of pesticides in fruits and vegetables”, Trends in Analytical Chemistry, 30 (6) 2011, 814826 Narenderan.S.T, Meyyanathan S.N, Babu.B (2020), "Review of pesticide residue analysis in fruits and vegetables Pre-treatment, extraction and detection techniques”, Food Resarch international volumn 133 AOAC Official Method 2007.01 (2007), “Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate Gas Chromatography/Mass Spectrometry and Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry”, AOAC International Lehotay, S.J., et al (2010), "Comparison of QuEChERS sample preparation methods for the analysis of pesticide residues in fruits and vegetables", Journal of Chromatography A, 1217(16), 2548-2560 Trang 37 15 Nguyễn Thanh Vy, Phạm Thanh Châu, Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ, “Nghiên cứu xây dựng quy trình phân tích đồng thời dư lượng thuốc trừ sâu sinh học sử dụng phổ biến rau ăn lá, phương pháp LCMS/MS”, Dược học 2020, số 530, 2020 16 Nguyễn Thùy Trang, Vũ Đình Lư, Vũ Lư, Trần Ngọc Hân “Ứng dụng phương pháp thử sinh học nhanh thuốc BVTV sản phẩm rau enzym” Tuyển tập cơng trình bảo vệ thực vật 1996-2000, Viện Bảo vệ thực vật, 2000, trang 181-186 17 “KIT kiểm tra nhanh dư lượng thuốc trừ sâu VPR10”, NPSCientific [Online] Available: https://npsc.vn/cua-hang/kit-kiem-tra-nhanh-du-luongthuoc-tru-sau-vpr10 18 Do Bien Cuong, Cao Ngoc Tan, “Cholinesterase immobilization for large scale production of high sensitive test cards for rapid detection of organophosphorus and carbamate pesticides in agricultural products”, Tạp chí khoa học công nghệ, 2016, 54 (4A) 189-195 19 Đỗ Biên Cương, Đặng Thị Thu, Bằng độc quyền Giải pháp hữu ích số 771: Phương pháp chế tạo Kit axetylcholinesteraza huyết lợn để phát nhanh dư lượng thuốc trừ sâu Cục Sở hữu trí tuệ, 01/06/2009 20 Markus Pietsch, Leonie Christian, Therese Inhester, Susanne Petzold, Michael Gütscho (2009), "Kinetics of inhibition of acetylcholinesterase in the presence of acetonitrile", The FEBS Journal 21 “Tính chất màu thực phẩm”, Viện Cơng nghệ sinh học thực phẩm Trường Đại học Công nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh [Online] Available: http://ibf.iuh.edu.vn/wp-content/uploads/2019/03/Tính-chất-màu-của-thựcphẩm.pdf, 22 “Validation data of five selected pesticides using QuEChERS by liquid chromatography tandem mass spectrometry”, EU Reference Laboratories for residuces of Pesticides [Online] Available: https://www.eurlpesticides.eu/userfiles/file/ Validation_5_new_compounds%20(1).pdf, ngày 19/5/2021 23 Trần Cao Sơn, Phạm Xuân Đà, Lê Thị Hồng Hảo, Nguyễn Thành Trung, “Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật” Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia, 2010 24 Chanda Sivanandha Reddy, Gopireddy V Subba Reddy (2017), "Pesticide Residues Recovery studies by QuEChERS Sample Technique Using Gas Chromatography", Maldras Agricultural Journal, 104(1-3):64-67 Trang 38 PHỤ LỤC 1: PHỔ SẮC KÍ CHẤT CHUẨN CARBOFURAN Trang 39 PHỤ LỤC 2: PHỔ SẮC KÍ CHẤT CHUẨN PROPOXUR Trang 40 PHỤ LỤC 3: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH HOẠT CHẤT CARBOFURAN TRÊN MẪU TÁO (n=6) Trang 41 PHỤ LỤC 4: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH HOẠT CHẤT PROPOXUR TRÊN MẪU TÁO (n=6) Trang 42 PHỤ LỤC 5: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH DƢ LƢỢNG THUỐC TRỪ SÂU TRÊN MẪU THỰC TẾ Trang 43 PHỤ LỤC 6: KẾT QUẢ PHÂN TÍCH Bảng PL1: Kết phân tích nồng độ thực tế nồng độ quy ước hoạt chất Carbofuran hoa Nồng độ thực tế (ppb) Nồng độ quy ước (ppb) Táo Nho 20 14,596 13,567 40 27,691 27,028 80 57,011 58,11 200 125.764 130,736 400 283,695 289,184 800 472,779 481,811 1000 691,706 701,601 Bảng PL2: Kết phân tích nồng độ thực tế nồng độ quy ước hoạt chất Propoxur hoa Nồng độ thực tế (ppb) Nồng độ quy ước (ppb) Táo Nho 20 14,742 13,525 40 27,449 26,362 80 57,992 57,108 200 125,01 124,257 400 291,688 289,184 800 474,13 475,955 1000 681,87 693,54 Trang 44 PHỤ LỤC DANH MỤC TỜ KHAI HẢI QUAN STT Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu 10 Mẫu 11 Mẫu 12 Mẫu 13 Mẫu 14 Mẫu 15 Mẫu 16 Mẫu 17 Mẫu 18 Mẫu 19 Mẫu 20 Mẫu 21 Mẫu 22 Mẫu 23 Mẫu 24 Mẫu 25 Mẫu 26 Mẫu 27 Mẫu 28 Mẫu 29 Mẫu 30 Số tờ khai 103268536120/A11 103232794821/A11 103092898200/A11 103113251250/A11 103105099050/A11 102413683960/A11 102895394120/A11 102450920720/A11 102451167930/A11 102597946401/A11 103383932960/A11 103131366812/A11 103280495840/A11 103091545652/A41 103181891630/A41 103303333121/A41 103370357050/A41 103178056810/A11 103225117441/A11 103092954421/A11 103286198742/A11 103342276112/A11 103083381552/A11 103112915730/A11 103194679452/A11 103299945561/A11 103205063953/A11 103383932960/A11 103132497310/A11 103170878420/A11 Cửa Hải Phòng Lạng Sơn Hải Phòng Hải Phòng Lạng Sơn Lạng Sơn Lạng Sơn Hải Phòng Hải Phòng Hải Phòng Hà Nội Hải Phòng Hà Nội Hải Phòng Hà Nội Hà Nội Hà Nội Hải Phòng Hà Nội Hà Nội Hà Nội Hà Nội Hà Nội Hà Nội Lạng Sơn Lạng Sơn Hà Nội Hải Phòng Hải Phòng Hải Phòng Nƣớc xuất NewZealand China Japan USA China China China China China Pháp Hàn Quốc USA Nam Phi USA Nam Phi Hàn Quốc Nam Phi Peru Hàn Quốc Nam Phi Nam Phi Nam Phi Hàn Quốc Hàn Quốc Trung Quốc Trung Quốc Hàn Quốc USA USA USA Trang 45 ... hiệu để áp dụng thực tế Chính lựa chọn nghiên cứu đề tài ? ?Cải tiến phƣơng pháp tách chiết thuốc trừ sâu họ carbamat hoa nhập để phân tích nhanh kit enzym khả ứng dụng công tác kiểm định hải quan? ??... thực tế Chính em lựa chọn nghiên cứu đề tài ? ?Cải tiến phƣơng pháp tách chiết thuốc trừ sâu họ carbamat hoa nhập để phân tích nhanh kit enzym khả ứng dụng công tác kiểm định hải quan? ?? với mục tiêu... Đánh giá quy trình tách chiết thuốc trừ sâu carbamate hoa để phân tích nhanh kit enzym? ??………………………………………………………………….28 3.2 Ứng dụng phân tích nhanh thuốc trừ sâu carbamate hoa nhập