Bệnh sốt Zika hiện nay đã không còn mang cấp độ đại dịch như cách đây 3 năm (năm 2016), tuy nhiên việc phòng tránh cũng như chẩn đoán vẫn phải luôn được kiểm soát sắt sao. Do những mối nguy hại biến chứng ảnh hưởng lớn đến cộng đồng, nhất là trẻ em với bệnh teo não. Dựa vào những nghiên cứu trên, với phương pháp RT-PCR ta có thể chẩn đoán được các mẫu bệnh phẩm như máu, nước tiểu, huyết thanh có chứa virus Zika ở các giai đoạn. Hiện nay bệnh sốt Zika vẫn chưa có biện pháp để điều trị đặc hiệu, phần lớn vẫn dựa trên việc chẩn đoán để có các biện pháp xử lý khác nhau. Các phương pháp phát hiện vật liệu di truyền vẫn là phương pháp hiệu quả, tuy nhiên vẫn có nhiều trường hợp sai sót trong quá trình chẩn đoán so với một số phương pháp về miễn dịch học, vì vậy cần cải thiện các phương pháp chẩn đoán, có thể kết hợp nhiều phương pháp thực hiện song song cũng như tìm kiếm, nghiên cứu các phương pháp điều trị mới cũng là 1 hướng phát triển tiềm năng.
MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ẢNH GIỚI THIỆU I Tổng quan Tình hình dịch Zika xảy giới: Tình hình dịch Zika xảy nước: II Đặc điểm chung 1.Virus Zika 1.1.Hình thái cấu trúc 1.1.1.Hình thái 1.1.2.Cấu trúc a.Cấu trúc hạt virus: b.Sức đề kháng virus Đặc điểm gây bệnh 3.Muỗi Aedes Aegypti 11 III Phương pháp chẩn đoán 11 Kỹ thuật sinh học phân tử PCR 12 1.1 Nguyên lý 12 1.2 Hóa chất 13 1.3 Mẫu bệnh phẩm 14 1.4 Các bước tiến hành 14 1.5 Kết 18 Nhuộm miễn dịch huỳnh quang phát kháng thể 19 2.1 Nguyên lý 19 2.2 Các bước tiến hành 20 2.3 Kết 20 IV Dự phòng điều trị vaccin 20 1.Dự phòng 20 2.Vaccin 20 Phương pháp khác 21 V Kết luận……………………………………………………………… 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO……………………………………………… 22 DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 : Bộ mồi cho phản ứng RT-PCR……………………………………… 12 Bảng 3.2: Bộ mồi cho phản ứng realtime RT-PCR……………………………….12 Bảng 3.3: Số lượng thành phần Agarose chuẩn bị……….………………….13 Bảng 3.4 : Cài đặt chương trình cho máy Realtime RT-PCR…………………… 15 Bảng 3.5: Ưu nhược điểm phương pháp………… ………………………16 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 : Cấu trúc bên Virus Zika cấp độ phân tử……………… Hình 1.2: Cấu trúc hạt virus thuộc họ Flaviviridae…………………………….8 Hình 1.3: Cấu trúc gen virus thuộc họ Flaviviriddae………………………9 Hình 2.1: Sơ đồ chu trình lây truyền virus zika…………………………………….9 GIỚI THIỆU Virus Zika thuộc chi Flavivirus thuộc họ Flaviviridae, bao gồm loại virus gây bệnh khớp khác sốt xuất huyết, sốt vàng da viêm não nhật Zika ban đầu phân lập từ loài khỉ Raveus rừng Zika Uganda vào năm 1947 sau phát vụ dịch người lẻ tẻ Châu Phi, Đông Nam Á quần đảo Thái Bình Dương trước xác định miền đơng Brazil vào đầu năm 2015 Kể từ đó, Zika nhanh chóng lam rộng khắp giới Trọng tâm khắp bán cầu tây, bao gồm Đông Nam Hoa Kỳ, củng Châu Âu Đông Nam Á Mặc dù lây truyền chủ yếu qua vết cắn muỗi Aedes bị nhiễm bệnh, Zika phát chất dịch thể nước tiểu, sữa mẹ, nước bọt tinh dịch người bị nhiễm bệnh Khả lây lan qua đường tình dục thiết lập Nhiễm Zika thường khơng có triệu chứng dấu hiệu triệu chứng tương đối nhẹ bao gồm sốt, đau khớp, phát ban viêm kết mạc Hội chứng Guillain – Barre (hội chứng làm tê liệt thần kinh người lớn) có liên quan đến nhiễm Zika người lớn Biến chứng trẻ em gây hội chứng đầu nhỏ, hệ thần kinh không phát triển Các nhà nghiên cứu tiếng dịch tễ học, miễn dịch học -và lĩnh vực khác hợp tác với để hỗ trợ tốt cho vô số bác sĩ lâm sàng bệnh nhân chiến đấu với mầm bệnh Virus lây truyền cho người qua vector trung gian muỗi Aedes Aegypti, dân gian gọi muỗi vằng Ngồi có số dịng muỗi chi với Aedes Aegypti A africanus, A apicoargenteus, A furcifer,…củng lan truyền virus I Tổng quan Tình hình dịch Zika xảy giới: Vào ngày 2/9/2016, tổ chức y tế giới (WHO) có họp diễn biến bất thường dịch Zika bùng phát mạnh số nước cho dịch Zika mối quan ngại ngành y tế giới Trong họp Thụy Sỹ, ông David Heymann chủ tịch ủy ban khẩn cấp WHO nói đợt bùng phát dịch Zika xảy nhiều khu vực giới có nguy ngày lan rộng Các đợt bùng phát dịch xác nhận khu vực địa lý Guinea Singapore Số ca lây nhiễm tiếp tục gia tăng Virus Zika phát Brazil năm 2015 đến năm 2016 lan rộng khắp Châu Mỹ Loại virus lan truyền qua muỗi Aedes Aegypti, quan hệ tình dục truyền máu Đặc biệt, Virus Zika bùng phát mạnh Singapore, cụ thể ngày 27/8/2016 nước phát trường hợp nhiễm Virus Zika Nhưng đến ngày 2/9/2016, y tế nước xác nhận có 189 ca nhiễm Virus Zika, có phụ nữ mang thai Thái Lan củng nước có số người nhiễm Virus Zika cao khu vực với gần 100 ca nhiễm 10 tỉnh thành vòng năm (năm 2016) Vào năm 2016, Virus Zika xuất 50 quốc gia giới Tuy nhiên, giới chưa tìm vaccine Tình hình dịch Zika xảy nước: Trong năm 2016, tình hình dịch bệnh Virus Zika diễn biến phức tạp khắp giới Việt Nam củng nước chịu ảnh hưởng đại dịch Tính đến gày 28/11/2016 thành phố Hồ Chí Minh ghi nhận 83 trường hợp nhiễm Virus Zika 17/24 quận huyện, có thai phụ theo dõi thai kì Thành phố Hồ Chí Minh trung tâm kinh tế du lịch nước, chiếm 40 – 60% khách quốc tế đến Việt Nam, củng khách khu vực khác nước, nên Virus Zika dễ dàng xâm nhập lây lan cộng đồng Ngày 20/10/2016, Cục Y tế dự phòng, Bộ Y tế cho biết phát trường hợp nhi nhiễm Virus Zika Việt Nam Kết xét nghiệm viện Pasteus thành phố Hồ Chí Minh khẳng định bệnh nhi tuổi sống huyện Bến Lức, tỉnh Long An mắc chứng dị tật bẩm sinh đầu nhỏ Virus Zika gây Trong vịng tuần Việt Nam có thêm trường hợp nhiễm Virus Zika, lại phát thêm bé gái tháng tuổi huyện Krông Buk, Đắk Lắk, em bé tuổi em bé tuổi II Đặc điểm chung Virus Zika 1.1 Hình thái cấu trúc 1.1.1 Hình thái Virus Zika thuộc chi Flavachus thuộc họ Flaviviridae Virus Zika có dạng hình cầu, tương đồng với chủng virus khác nhóm Flavivirus như: viêm não nhật bản, sốt xuất huyết, sốt vàng da Lớp màng dày bao bọc bên Virus Zika lớp protein đa diện, lớp vỏ bên ngồi có nhiều giác hút mọc bề mặt gọi Eglycoprotein, cho phép virus bám dính lây nhiễm sang tế bào khác vật chủ Có dịng Zika: dịng Châu Phi dịng Châu Á Nghiên cứu loài cho thấy virus lây lan Châu Mỹ có liên quan chặt chẽ đến dịng Châu Á, có đợt bùng nỗ dịch Pháp Hình 1.1 : Cấu trúc bên ngồi Virus Zika cấp độ phân tử Hình B : Cấu trúc bên ngồi Virus Zika, Hình C : Cấu trúc bên virus zika cắt 1.1.2 a Cấu trúc Cấu trúc hạt virus: Cấu trúc hạt Virus Zika giống virus thuộc họ Flaviviridae khác Capsid (lớp vỏ protein bên ngồi virus) có đối chứng khối, lõi bên RNA sợi, bao quanh màng lipid kép chứa protein vỏ E M Hạt virus có đường kính khoảng 40nm B A Hình 1.2: Cấu trúc hạt virus thuộc họ Flaviviridae A: Hình cắt cấu trúc hạt virus, B: Hình cấu trúc hạt virus (Nguồn: Chambers T cộng sự, năm 1990) Lõi RNA virus Zika dài 10.749bp với vùng khơng mã hóa gọi 5’ NCR 3’ NCR (non-coding regions) Khung đọc mở virus Zika đọc sau : 5’-C-prM-E-NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5-3’ mã hóa cho polyprotein sau cắt thành capsid (C), màng tiền thân (prM), vỏ (E), protein không cấu trúc (NS) Các protein E tạo nên bề mặt hạt virus tham gia vào trình chép cách gắn lên thụ thể tế bào cảm thụ NS1, NS3 NS5 protein kích thước lớn có tính bảo tồn cao protein NS2A, NS2B, NS4A, NS4B protein nhỏ kỵ nước Vùng 3’NCR tạo thành cấu trúc vòng lặp 5’NCR cho phép dịch mã thông qua nucleotide methyl protein gắn kết gen (Đồn Bình Minh, 2016) Hình 1.3: Cấu trúc gen virus thuộc họ Flaviviriddae (Nguồn: Chambers T cộng sự, năm 1990) b Sức đề kháng virus Do có cấu trúc bao ngồi có chất lipid nên virus nhạy cảm với ether, dung mơi hữu natri desoxycholat Nó dễ bị phá hủy nhiệt độ, nhiệt độ 40C Virus huyết bệnh nhân giữ -700C hay dạng đơng khơ 5oC tồn – 10 năm Virus bị phá hủy tia cực tím vịng vài phút Virus bất hoạt focmol hết tính chất sinh miễn dịch Đặc điểm gây bệnh Hình 2.1: Sơ đồ chu trình lây truyền virus zika Ngồi lây truyền qua muỗi đốt đường chủ yếu, nhiều đường lây truyền khác làm truyền virus Zika như: Truyền từ mẹ sang thai nhi trình mang thai sinh, nhà khoa học phát RNA virus Zika có nước ối sữa người mẹ bị nhiễm Zika Đứa trẻ sinh bị ảnh hưởng virus Zika gây dị tật đầu nhỏ bẩm sinh Lây truyền qua đường tình dục, truyền từ người đàn ơng cho đối tác tình dục họ RNA virus Zika phát có tinh dịch Tính đến tháng năm 2016 phương thức lây truyền ghi nhận quốc gia Argentina, Chile, Pháp, Ý, New Zealand, Hoa Kỳ đợt dịch năm 2015 Năm 2009, Brian Foy, nhà sinh học Đại học bang Colorado truyền virus Zika sang vợ qua đường tình dục Ơng trước đến thăm Senegal để nghiên cứu muỗi, bị muỗi đốt vài lần Một vài ngày sau trở Mỹ, ông bị bệnh xác định bệnh gây virus Zika Sau quan hệ tình dục khơng an tồn với vợ mình, bà ta phát triển triệu chứng bệnh Zika Foy người biết tới truyền virus Zika qua đường tình dục sang người khác Một người đàn ông Texas (Mỹ) phát nhiễm virus Zika quan hệ với bệnh nhân vừa trở từ vùng dịch Venezuela Thơng tin trung tâm kiểm sốt phòng tránh dịch bệnh Mỹ (CDC) xác nhận ngày 2/2 Đây trường hợp lây nhiễm qua đường tình dục Mỹ Tổ chức Y tế giới (WHO) tuyên bố virus Zika là“ tình trạng khẩn cấp y tế công cộng quốc tế “bởi lo ngại ngày tăng khả gây dị tật bẩm sinh Tổ chức đưa số dấu hiệu nhận biết lâm sàng bị nhiễm virus Zika, thời gian ủ bệnh Zika khoảng – 12 ngày sau bị muỗi đốt Đến thời kì phát bệnh có triệu chứng sốt nhẹ từ 37,8 – 38,50C, mệt mõi, mọc ban rát sẩn da, đau khớp nhỏ bàn tay bàn chân, viêm xung huyết kết mạc, đau cơ, nhức đầu, đau hố mắt, thể suy nhược Một số bệnh nhân đau bụng, buồn nơn, tiêu chảy, loét niêm mạc hay ngứa 10 Mọi người biết virus Zika muỗi vằn Aedes Aegyti lây truyền ra, loại virus gây tật đầu nhỏ trẻ sơ sinh phụ nữ mang thai nhiễm bệnh Nó khơng gây tật đầu nhỏ trẻ sơ sinh mà nguyên nhân dẫn đến hội chứng làm tê liệt thần kinh người lớn (thường gọi hội chứng tự miễn dịch Guillain – Barre) Dị tật đầu nhỏ: virus Zika gây ảnh hưởng đến trẻ sơ sinh, làm đầu trẻ không phát triển bình thường, gọi tật đầu nhỏ Tật đầu nhỏ định ghĩa thối hóa hay dị dạng não trẻ sơ sinh với kích thước đầu nhỏ bình thường đơi dẫn đến tử vong Brazil quốc gia bị ảnh hưởng nặng nề virus Zika, có gần 4.000 ca bị bệnh đầu nhỏ, với 49 ca tử vong Hội chứng làm tê liệt thần kinh người lớn (hội chứng Guillain – Barre): theo chuyên gia WHO hội chứng Guillain – Barre bệnh lí gặp hệ thống miễn dịch công phần hệ thần kinh ngoại biên Những triệu chứng chứng rối loạn bao gồm nhiều cấp độ cảm giác suy yếu tê buốt chân tay phần thể Những triệu chứng gia tăng khơng cịn sử dụng người bệnh gần liệt hoàn toàn Mặc dù có bệnh nhân hồi phục song phần lớn tiếp tục cảm nhận mức độ suy yếu Muỗi Aedes Aegypti Muỗi Aedes Aegypti thuộc chi Aedes họ Cuicidae dân gian gọi muỗi vằn Ngoài củng có số dịng muỗi chi với Aedes Aegypti A.africanus, A.apicoargenteus, A.furcifer,… Khi hút máu người hay động vật bị nhiễm virus Zika, virus nhân lên thể muỗi ủ bệnh sau 10 ngày để gây truyền virus cho người động vật khác Mỗi cá thể muỗi nhiễm virus Zika truyền virus cho hệ muỗi cháu Sự phân bố muỗi Aedes Aegypti đánh giá rộng lớn ghi nhận, loài muỗi có mặt châu lục, bao gồm Bắc Mỹ ngoại vi Châu Âu III Phương pháp chẩn đoán 11 Kỹ thuật sinh học phân tử PCR 1.1 Nguyên lý Quy trình xét nghiệm virus Zika dựa xét nghiệm phát vật liệu di truyền phương pháp sinh học phân tử Hiện nay, kỹ thuật Realtime RT-PCR hay RT-PCR ứng dụng rộng rãi lĩnh vực chẩn đoán bệnh với tác nhân virus Kỹ thuật RT-PCR RNA tổng số tách từ mẫu bệnh phảm lâm sàng nghi nhiễm Zika Sau đó, RNA cho vào hỗn hợp RT-PCR với cặp mồi đặc hiệu cho virus Zika RNA tách chiết từ mẫu bệnh phẩm lâm sàng (máu, huyết thanh…) từ dịch nuôi cấy tế bào Kỹ thuật realtime RT-PCR Quy trình xét nghiệm virus Zika dựa xét nghiệm phát vật liệu di truyền phương pháp sinh học phân tử, phương pháp phản ứng chuỗi polymerase (realtime PCR) Hiện nay, realtime RT-PCR trở thành ứng dụng rộng rãi lĩnh vực chẩn đoán bệnh với tác nhân virus Phương pháp sử dụng thêm mẫu dị phát huỳnh quang (probe) có khả phát sản phẩm (vật liệu di truyền virus) q trình tổng hợp sản phẩm Mẫu dị đoạn oligonucleotit (vd: Taqman®probe) gắn với chất nhuộm phát tín hiệu huỳnh quang đầu 5’ ®, đầu gắn với tuốc nhuộm tắt huỳnh quang (Q) Khi mẫu nguyên vẹn, Q co vai trò nhận lượng phát từ R (hiệu ứng chuyển lượng huỳnh quang) Nếu có trình tự đích, mẫu dị mồi gắn vào khn, q trình tổng hợp bắt đầu Trong trình tổng hợp, enzym Taq DNA polymerase với hoạt tính exonuclease cắt nucleotid mẫu dị từ đầu 5’, giải phóng R khỏi Q, làm tăng tín hiệu huỳnh quang R Càng nhiều sản phẩm tạo thành nhiều mẫu bị phân cắt tín hiệu R phát nhiều Mắt đọc tín hiệu huỳnh quang mãy thu tín hiệu R, xử lý phần mềm đưa kết cuối 1.2 Hóa chất Hóa chất 12 — Cồn — Dung dịch đệm TBE 10 — Thạch điện di Bộ mồi cho phản ứng RT-PCR Bảng 3.1: Bộ mồi cho phản ứng RT-PCR Mồi Nhóm Cfd2 Trình tự (5’ – 3’) S5 GTGTCCCAGCCGGCGGTGTCA 50µM TCAGC Flavivirus MAMD Nồng độ Vị trí S5 50µM ACATGATGGGRAARAGRGAR AA ZIKA nhóm ZIKVF 538 - 1558 GCTGGDGCRGACACHGGRAC Chung ZIKVR 1902 – 1883 T 50µM 50µM RTCYACYGCCATYTGGRCTG ZIKA nhóm ZIKVF9 Asia 027a 9121 - 9141 CCTTGGATTCTTGAACGAGGA 50µM 9312 – 9290 AGAGCTTCATTCTCCAGATCA ZIKVR9 50µM A 197c Bộ mồi cho phản ứng realtim RT-PCR Trình tự cặp mồi probe cho zika Bảng 3.2: Bộ mồi cho phản ứng realtime RT-PCR Mồi probe Trình tự (5’ – 3’) Nồng độ Mồi định Zika1087 5’-CCGCTGCCCAACACAAG-3’ 100µM chung Zika1108FAM 5’AGCCTACCTTGACAAGCAGTCAGACACTCAA- 100µM nhóm 3’ (Genotype) Zika1163c 5’-CCACTAACGTTCTTTTGCAGACAT-3’ 25µM 5’-CTGTGGCATGAACCCAATAG-3’ 100µM Mồi định Zika4481 13 nhóm Zika4507Cfam 5’-CCACGCTCCAGCTGCAAAGG-3’ Asian Zika4552c 5’-ATCCCATAGAGCACCACTCC-3’ Genotype 1.3 Mẫu bệnh phẩm Loại mẫu : máu Điều kiện bảo quản : bảo quản lạnh từ – 80C 1.4 Các bước tiến hành BƯỚC : Tách chiết mẫu Kiểm tra độ đồng 560µl đệm AVL có chứa chất mang ARN tube ↓ Thêm 140µl mẫu vào 560µl dung dịch ly giải virus AVL, mix 15 giây ↓ Ủ nhiệt độ phòng 10 phút Ly tâm nhanh tube hỗn hợp khoảng 10 giây ↓ Thêm 560µl ethanol (96 – 100%), mix hỗn hợp ↓ Ly tâm nhanh 10 giây Cho hỗn hợp vào cột QIAamp, ly tâm 8000 vòng phút Chuyển cột sang tube ↓ Thêm vào cột chứa hỗn hợp 500µl đệm AW2 Ly tâm 12.000 vòng phút, chuyển cột sang tube 2ml ↓ Ly tâm 12000 vòng phút để loại bỏ hoàn toàn đệm AW2 Chuyển cột vào tube 1,5ml loại bỏ tube chứa dịch lọc cũ 14 100µM 25µM ↓ Thêm vào cột 60µl đệm AVE ủ hiệt độ phịng phút ↓ Ly tâm 8000 vòng phút để toàn ARN tách khỏi màng silicagel Sau ly tâm toàn ARN mẫu thu hồi dịch lọc ↓ Lưu giữ -200C -800C BƯỚC 2: Pha môi trường Pha thạch điện di Bảng 3.3: Số lượng thành phần Agarose chuẩn bị Nồng độ Agarose 1% 2,5% TBE 100 100 Agarose (g) 2,5 Ethidium bromid 10mg/ml (µl) 10 10 (ml) BƯỚC 3: Quy trình RT-PCR / Realtime RT-PCR Quy trình RT-PCR Tra mẫu chạy máy + Cho 5µl mẫu RNA bệnh phẩm vào hỗn hợp sinh phẩm chuẩn bị cho phản ứng RT-PCR Mẫu chứng dương : thực tủ an toàn mẫu + Đặt tube vào máy, khỏi động kiểm tra chương trình trước chạy máy luân nhiệt cổ điển theo yêu cầu xét nghiệm + Ghi chép ma thiết bị sử dụng, block sử sụng (nếu có) + Sau kết thúc trình chạy máy, mang mẫu sang phòng điện di tiến hành điện di sản phẩm RT-PCR Điện di sản phẩm + Chuyển sản phẩm PCR vào thạch 15 + Đặt thach vào bể điện di theo chiều dòng điện từ âm sang dương cho TBE ngập thạch cho dung dịch đệm cách mặt thạch từ – 2mm + Cho dung dịch đệm đặt mẫu(loading dye)vào giếng đĩa microtitre giấy parafilm với số lượng tương ứng với số mẫu cần phân tích Đệm loading chưa 50% Glycerol có tác dụng kéo AND xuống đáy giếng điện di chứa Bromophenol Blue có tác dụng đánh dấu AND q trình chạy + Trộn 9µl sản phẩm PCR với 1µl đệm đặt mẫu + Chuyển dung dịch trộn với vào giếng thạch + Đóng nắp bể điện di,chọn dòng điện 110V thời gian 30 phút + Tắt máy điện di, chuyển thạch sang máy đọc – soi chụp kết + Đặt thạch ngắn máy đọc gel, bật đèn tím để đọc gel Quy trình realtime RT-PCR Bảng 3.4: Cài đặt chương trình cho máy Realtime RT-PCR Nhiệt độ (0C) Thời gian Chu kỳ Tên chương trình lặp 50 30 : 00 95 15 : 00 95 : 15 60 : 00 } ZIKV.CDC.LANKIOTI } 45 Thu tín hiệu huỳnh quang 10 Tra mẫu chạy máy Cho 5µl mẫu RNA bệnh phẩm vào tube chưa hỗn hợp phản ứng realtime RTPCR, ly tâm nhanh giữ giá tích lạnh Khi tra mẫu phải nhập mã số mẫu vào vị trí khung 96 giếng Chú ý: chưa chạy nên giữ tube điều kiện 40C Đặt tuýp vào máy, khởi động chương trình theo yêu cầu xét nghiệm 16 1.5 Kết Nhận định kết RT-PCR Kết chấp nhận khi: Chứng dương: có băng đặc hiệu tương đương với kích thước cặp mồi thiết kế Chứng âm phản ứng (NTC), chứng âm tách chiết (NEC): âm tính Âm tính: xuất sản phẩm PCR vị trí khơng đặc hiệu khơng có diện sản phẩm PCR Dương tính: sản phẩm PCR đặc hiệu có kích thước theo kích thước chuẩn Nhận định kết realtime RT-PCR Kết đọc khi: Chứng âm: khơng có tín hiệu huỳnh quang Chứng âm tách chiết: khơng có tín hiệu huỳnh quang Mẫu dương tính: tín hiệu huỳnh quang thu nhận trước chu kỳ thứ 38 phản ứng Bảng 3.5: Ưu nhược điểm phương pháp Ưu điểm Kỹ thuật RT-PCR Kỹ thuật realtime RT-PCR Chi phí thấp Khơng cần điện di Thiết bị dễ xử lí Là hệ thống đóng : giảm thiểu nguy tạp nhiễm Nhanh, có độ xác đặc hiệu cao Nhược điểm Độ nhạy thấp Không phân biệt tác Khả ngoại nhiễm nhân gây bệnh sống hay chết cao Bất tiện 17 Đòi hỏi kỹ Mất nhiều thời gian Thiết bị Nhuộm miễn dịch huỳnh quang phát kháng thể 2.1 Nguyên lý Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang chất đánh dấu kháng nguyên gắn với chất nhuộm huỳnh quang (fluorochrome) có đặc tính phát quang kích thích nguồn sáng tia cực tím Trong phương pháp nhuộm miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, mảnh cắt kháng nguyên biết Nhỏ lên mảnh cắt giọt huyết người bệnh (huyết pha lỗng) Nếu huyết người bệnh có kháng thể tương ứng với kháng nguyên mảnh cắt phức hợp kháng nguyên – kháng thể hình thành Phức hợp phát nhỏ lên giọt globulin huỳnh quang Vì vậy, kháng nguyên bắt màu huỳnh quang có nghĩa huyết người bệnh có kháng thể 2.2 Các bước tiến hành Bước 1: Bệnh phẩm tươi (chưa cố định) tiến hành cắt lạnh Bước 2: Bệnh phẩm cắt lát mỏng, có độ dày 5µm sau cố định mảnh cắt lên phiến kính Bước 3: Ly tâm máu người bệnh lấy huyết Bước : Nhỏ lên mảnh cắt cố định phiến kính từ – giọt huyết thanh, để 30 phút tủ ấm 370C Bước 5: Đổ huyết thừa đi, tráng kỹ nhẹ nhàng dung dịch đệm photphat Ph 7,2 Bước 6: Ngâm 30 phút dung dịch đệm photphat ph 7,2, thay đổi lần, để khô nhiệt độ thường Bước 7: Khi mảnh cắt ẩm, nhỏ lên mảnh cắt giọt kháng globulin huỳnh quang để 30 phút tủ ấm 370C Bước 8: Đổ globulin – kháng globulin huỳnh quang thừa đi, tráng kỹ 18 Bước 9: Ngâm 10 phút dung dịch đệm photphat ph 7,2, thay đổi lần, để khô nước nhiệt độ thường Bước 10: Khi mảnh cắt ẩm, nhỏ lên giọt glycerin đệm photphat 1%, đậy kính Gắn xung quanh kính parafin loại nhựa nào, đảm bảo không làm khô mảnh cắt 2.3 Đọc kết Kháng thể cần phát có màu xanh VI Dự phòng điều trị vaccin Dự phòng Hiện chưa có vaccine đặc trị virus Zika Việc điều trị chủ yếu dựa điều trị triệu chứng Còn việc phịng chống lây nhiễm chủ yếu thơng qua kiểm soát cac vector truyền bệnh Diệt vector truyền bệnh: muỗi nơi sinh sản chúng yếu tố nguy quan trọng nhiễm virus Zika Phòng ngừa kiểm soát dựa việc giảm muỗi Tại vùng có dịch cần triển khai biện pháp diệt muỗi, lăng quăng, bọ gậy như: vệ sinh môi trường, loại bỏ vật dụng đọng nước mảnh vỡ chai lọ, lốp xe, vỏ lon, vũng nước đọng…Thả cá diệt lăng quăng, phun thuốc diệt muỗi Phòng lây qua tình dục: tất người bị nhiễm virus Zika bạn tình họ nên thực hành tình dục an toàn, cách sử dụng bao cao su cách qn khơng quan hệ tình dục Còn người trở từ vùng dịch xảy nên áp dụng thực hành tình dục an tịan khơng quan hệ tình dục xác định khơng bị nhiễm dịch Phịng qua thai nhi: thời gian dịch khuyến cáo phụ nữ không mang thai Vaccine Trong việc tiếp cận lâm sàng phát triển vaccine phòng Zika, nhà khoa học áp dụng phương tiện hiệu để tạo liệu có chất lượng cao tính an tồn, tính gây miễn dịch tính hiệu Trong q trình nghiên cứu nhà khoa học đưa chiến lược tiềm việc phát triển vaccine.(Hilary D Marston cộng sự, năm 2018) 19 Chiến lược sử dụng cách tiếp cận phát triển vaccine truyền thống, nghiên cứu giai đoạn giai đoạn đánh giá tính an tồn tính gây miễn dịch, bao gồm ảnh hưởng việc tiếp xúc với Flavivirus trước đáp ứng với vaccine Zika Có thể áp dụng điểm cuối để đánh giá hiệu nghiên cứu giai đoạn 2b giai đoạn Các triệu chứng triệu chứng nhiễm trùng đơn độc (được khẳng định phản ứng chuỗi polymerase), phân biệt Virus Zika với aborvirus lưu hành chikungunya Flavivirus khác Dengue có huyết phản ứng chéo với Zika.(Hilary D Marston cộng sự, năm 2018) Chiến lược 2, nghiên cứu mang tính định người tiến hành sau pha pha Cách tiếp cận chứng minh thay khả thi cho chiến lược tỷ lệ mắc Zika giảm xuống mức thấp trước nghiên cứu lớn tính hiệu vaccine bắt đầu Ngày 22/9/2016 nhà nghiên cứu Mỹ thông báo hai loại vaccine phòng chống virus Zika Viện Y tế Quốc gia Mỹ điều chế cho kết khả quan thử nghiệm khỉ đuôi ngắn Sau tiêm liều vaccin VRC5288 VRC5383 với liều lượng khác nhau, khỉ thí nghiệm có khả tạo kháng thể chống virus Zika cách hiệu Trong đó, theo nghiên cứu đăng tạp chí Science cho biết vaccine VRC5288 bắt đầu tiến hành thử nghiệm lâm sàng người Nếu xác định hiệu an tồn, VRC5288 thử nghiệm nước có dịch virus Zika Còn vaccine VRC5283 chờ đưa vào thử nghiệm giai đoạn 1.(Hilary D Marston cộng sự, năm 2018) Phương pháp khác Zika lây truyền qua vết đốt muỗi nhiễm virus Loại virus gây chứng teo não trẻ sơ sinh Căn bệnh ảnh hưởng trình thai nhi hình thành đe dọa khoảng triệu người trước vaccine nghiên cứu Nhưng nhà khoa học công ty cơng nghệ sinh học Oxitec, có trụ sở Anh Quốc có kế hoạch đối phó với loại virus mà không cần dùng đến vaccin Họ muốn thả muỗi đột biến gen vào khu rừng Brazil để tiêu diệt muỗi mang mầm bệnh 20 Muỗi Aedes Aegypti biến đổi gen phịng thí nghiệm sau thả vào tự nhiên để giao phối với muỗi hoang dã Loại gen bị biến đổi làm cho muỗi sinh chết sớm, trước chúng có khả sinh sản Các thí nghiệm Oxitec tiến hành nhiều địa điểm khác Châu Mỹ La Tinh Châu Á Kết cho thấy muỗi đột biến gen làm quần thể muỗi tự nhiên giảm số lượng đến 90%.(Billvn, 2016) V Kết luận Bệnh sốt Zika khơng cịn mang cấp độ đại dịch cách năm (năm 2016), nhiên việc phịng tránh chẩn đốn phải ln kiểm sốt sắt Do mối nguy hại biến chứng ảnh hưởng lớn đến cộng đồng, trẻ em với bệnh teo não Dựa vào nghiên cứu trên, với phương pháp RT-PCR ta chẩn đoán mẫu bệnh phẩm máu, nước tiểu, huyết có chứa virus Zika giai đoạn Hiện bệnh sốt Zika chưa có biện pháp để điều trị đặc hiệu, phần lớn dựa việc chẩn đốn để có biện pháp xử lý khác Các phương pháp phát vật liệu di truyền phương pháp hiệu quả, nhiên có nhiều trường hợp sai sót trình chẩn đốn so với số phương pháp miễn dịch học, cần cải thiện phương pháp chẩn đốn, kết hợp nhiều phương pháp thực song song tìm kiếm, nghiên cứu phương pháp điều trị hướng phát triển tiềm 21 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng anh A Diagnostic Polymerase Chain Reaction Assay for Zika Virus Michelle N.D Balm, Chun Kiat Lee, Hong Kai Lee, Lily Chiu, Evelyn S.C Koay, and Julian W Tang Beaubien, Jason (ngày 22 tháng năm 2016) “The Zika Virus Takes A Frightening Turn – And Raises Many Questions” NPR Chambers T, Hahn C, Galler R, Rice C (1990) Flavivirus genome organization, expression, and replication.Annual Reviews of Microbiology “CDC Zika: Transmission” U.S Centers for Disease Control and Prevention 15 tháng năm 2016 Enfissi, Antoine; Codrington, John; Roosblad, Jimmy (16 tháng năm 2016) “Zika virus genome from the Americas” J.Paul Robinson PhD, Jennifer Sturgis BS and George L Kumar PhD(Chapter 10), Immunoflorescence Lanciotti, Robert S.; Lambert, Amy J.; Holodniy, Mark (2016) “Phylogeny of Zika Virus in Western Hemisphere, 2015” Oster, Alexandra M.; Russell, Kate; Stryker, Jo Ellen (1 tháng năm 2016) “Update: Interim Guidance for Prevention of Sexual Transmission of Zika Virus” Sealy Institute for Vaccines Sciences and Deparment for Pathology, University of Texas Medical Branch, Galveston, TX, 77555-0436, USA Alan D.T.Barrett, ngày 11 tháng năm 2018 Tài liệu internet Alan DT Barrett,< https://www.nature.com/articles/s41541-018-0061-9>, truy cập ngày 19/3/2019 Billvn (1 tháng năm 2016) “Phương pháp ngăn chặn Virus Zika: Dùng muỗi diệt muỗi” Truy cập ngày 20 tháng năm 2019 22 http://ttvn.vn/games/phuong-phap-ngan-chan-virus-zika-dung-muoi-diet-muoi720161211939579.htm Báo tin tức giới, 2016 “ WHO ban bố tình trạng khẩn cấp tồn cầu virus Zika , truy cập 20/3/2019 Báo khoahoc247.net, 2016, WHO : nghiên cứu virus zika đáng lo ngại, https://khoahoc247.net/who-cac-nghien-cuu-moi-nhat-ve-virus-zikarat-dang-lo-ngai-60517.html, truy cập ngày 20/3/2019 Đồn Bình Minh, 2016, Viện Sốt rét ký sinh trùng côn trùng Hồ Chí Minh, http://www.impehcm.org.vn/noi-dung/tin-y-te/benh-do-vi-rut-zika.html, xem ngày 19/3/2019 CDC, 2018, https://www.cdc.gov/zika/symptoms/symptoms.html , xem ngày 20/3/2019 Enserink, M (ngày tháng năm 2011) “Sex After a Field Trip Yields Scientific First” Science News AAAS Hilary D Marston, M.D, M.P.H, Nghiên cứu phát triển vaccin phòng Virus Zika, truy cập ngày 23/3/2019 https://capnhatykhoa.org/chuyen-khoa/nghien-cuu-phat-trien-vaccin-phong-viruszika.html Thu Hường (ngày tháng năm 2016)“ Virus Zika công mạnh vào nhiều nước giới’’ 23 ... thành vòng năm (năm 2 016 ) Vào năm 2 016 , Virus Zika xuất 50 quốc gia giới Tuy nhiên, giới chưa tìm vaccine Tình hình dịch Zika xảy nước: Trong năm 2 016 , tình hình dịch bệnh Virus Zika diễn biến phức... ……………………? ?16 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1. 1 : Cấu trúc bên ngồi Virus Zika cấp độ phân tử……………… Hình 1. 2: Cấu trúc hạt virus thuộc họ Flaviviridae…………………………….8 Hình 1. 3: Cấu trúc gen virus thuộc họ Flaviviriddae………………………9... 1. 1 .1 Hình thái Virus Zika thuộc chi Flavachus thuộc họ Flaviviridae Virus Zika có dạng hình cầu, tương đồng với chủng virus khác nhóm Flavivirus như: viêm não nhật bản, sốt xuất huyết, sốt vàng