Tài liệu CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN VIRUS VIÊM GAN A (HAV) TRONG THỰC PHẨM doc

[...]... độ nhiễm HAV tại các khu vực trên thế giới Sau khi xâm nhiễm vào cơ thể người HAV định vị ở gan gây nhiễm virus máu khởi phát sự nhiễm trùng  Thời gian ủ bệnh khoảng 14-50 ngày  Triệu chứng: chán ăn, mỏi mệt, sốt, nhức đầu, vàng da xuất hiện 1-2 tuần sau khi bị nhiễm bệnh, nước tiểu đậm màu, gan đau, enzyme aminotransferase tăng cao trong máu  Virus HAV chỉ gây bệnh cấp tính  Hiện nay trên thế... Trong kỹ thuật này có hai cặp primer khác nhau được sử dụng nhằm khuếch đại đặc hiệu một đoạn gen  Phản ứng PCR sau khi thực hiện bước sao mã ngược tạo cDNA phải được thực hiện qua hai giai đoạn  Giai đoạn 1: phản ứng PCR được thực hiện trong 15 đến 30 chu kì với cặp mồi thứ nhất  Giai đoạn 2: sản phẩm PCR giai đoạn 1 được dùng làm khuôn mẫu cho PCR giai đoạn 2 Cặp mồi thứ hai sẽ bắt cặp ph a trong. .. vẫn ch a có thuốc đặc trị, nên sử dụng vaccine là biện pháp cần thiết Các giai đoạn nhiễm bệnh c a bệnh viêm gan A A- Vật liệu:  Virus và việc nuôi cấy: - HAV được nhân lên trong fetal rhesus kidney-4 (FRhK-4)-derived cells - Dịch nổi tế bào nuôi cấy ch a 105 TCID50 HAV trên 1 ml được sử dụng làm đối chứng dương  Mẫu shellfish (động vật vỏ giáp: trai, sò, tôm, cua) Mytilus galloprovincialis  Ly... đoán dịch tễ a Phương pháp miễn dịch liên kết enzyme (ELISA)  Phương pháp ELISA được sử dụng chủ yếu để phát hiện sự có mặt c a kháng thể IgM trong máu bệnh nhân nghi nhiễm HAV  Nguyên lí: tương tự như ELISA, nhưng RIA sử dụng các kháng nguyên có đánh dấu phóng xạ làm chỉ thị thay cho việc sử dụng chỉ thị enzyme như ELISA  Có thể phát hiện lượng kháng nguyên chỉ vài picrograms (10-12 g) trong một tube... trích RNA virus: RNA virus được ly trích bằng bộ kit FastTrack 2.0 Kit  Kháng thể kháng HAV: - IgM xuất hiện sớm, tăng nhanh đến cực đại và kéo dài 60-90 ngày sau lây bệnh, rồi giảm - IgG xuất hiện muộn, tồn tại nhiều năm Miễn dịch đặc hiệu bền (IgG Anti-HAV )  Chẩn đoán (giai đoạn cấp tính) d a vào IgM anti-HAV bằng phương pháp miễn dịch phóng xạ hoặc miễn dịch enzyme  Tìm IgG anti - HAV có giá... ứng Các bước tiến hành kỹ thuật RIA a RT-PCR:  Phản ứng RT-PCR là phản ứng khuếch đại một đoạn khuôn mẫu RNA theo nguyên lý c a PCR  Phản ứng gồm 2 giai đoạn: - Giai đoạn 1: phiên mã ngược khuôn mẫu RNA thành sợi đôi RNA – cDNA, sau đó dùng sợi này làm khuôn mẫu để tổng hợp sợi đôi DNA thứ hai - Giai đoạn 2: dùng sợi đôi DNA v a làm được tổng hợp làm khuôn mẫu để thực hiện phản ứng PCR theo các. .. sẽ bắt cặp ph a trong (nested) c a sản phẩm PCR giai đoạn 1 Phản ứng PCR giai đoạn 2 sẽ khuếch đại đoạn gen cần xác định Gồm 2 giai đoạn:  Giai đoạn 1: phiên mã ngược rồi tổng hợp sợi đôi DNA  Giai đoạn 2: thực hiện phản ứng PCR; hnRTPCR chỉ sử dụng một primer nested và 1 trong 2 primer đã sử dụng trong PCR giai đoạn 1 Quy trình phát hiện HAV bằng hnRT-PCR  Sản phẩm RT-PCR và hnRT-PCR lần lượt... RT-PCR với độ pha loãng 10 lần chủng HAV có thể phát hiện được 1 TCID50 (50% tissue culture infective doses) trên 25g dịch shellfish  Độ nhạy c a RT-PCR cho những mẫu shellfish bị nhiễm HAV ngoài thực tế:  Kết quả RT-PCR được xác minh lại bằng hnRT-PCR:        http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPag es/R/Radioimmunoassay.html http://www.who.int/csr/disease/hepatitis/whocdscsre... http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPag es/R/Radioimmunoassay.html http://www.who.int/csr/disease/hepatitis/whocdscsre dc2007/en/index2.html www.virology-online.com/viruses/HepatitisA.htm http://www.idph.state.ia.us/adper/hepatitis _a _virus. a sp www.microbiologybytes.com www.en.wikipedia.org www.microbiology.suite101.com . cho người III. CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN HAV 1. Phương pháp miễn dịch học 2. Phương pháp PCR 1. Cấu tạo:  Virus HAV thuộc chi Hepatovirus (trước. tính  Hiện nay trên thế giới vẫn ch a có thuốc đặc trị, nên sử dụng vaccine là biện pháp cần thiết. Các giai đoạn nhiễm bệnh c a bệnh viêm gan A A- Vật liệu:  Virus