Báo Cáo Thực Hành hóa Sinh - ENZYME

tuyển tập báo cáo thực hành Hóa Sinh

BÀI I: KHẢO SÁT ENZYME

Hóa chất:

- Hạt lúa nảy mầm (dung dịch enzyme)

- Hồ tinh bột 1%

- Dung dịch đệm pH 5

- Dung dịch iod 1%

- Nước cất

1 Ly trích và khảo sát hoạt tính tương đối của amylase mầm lúa

1.1 Tiến trình và kết quả thí nghiệm

a Ly trích amylase

Dùng khoảng 100 hạt lúa nẩy mầm cho vào cối sứ, nghiền nhuyễn với 3-5ml nước cất

Tiếp tục nghiền và thêm dần đến hết 50 ml nước cất để hòa tan enzyme Lọc dung dịch

bằng giấy lọc Thu dịch lọc có chứa enzyme amylase Giữ lại để tiến hành thí các nghiệm

sau

b Khảo sát hoạt tính tương đối của dịch chiết amylase mầm lúa

Chuẩn bị 8 ống nghiệm pha hóa chất như trong bảng dưới ,sau khi pha xong dung dịch,

ổn định nhiệt độ ở bể nước nóng ở 50C, sau đó cho các ống nghiệm từ 1 đến 4 vào ổn định

5 phút Sau khi kết thúc ống nghiêm 1, lấy ra khỏi bể nước nóng ta đưa ống 5 vào

Hút 1,6 mL dịch enzyme cho vào ống 1, đồng thời ghi nhận thời điểm đó Dùng pipet

loại 1 ml khuấy nhẹ dung dịch và lấy ra 1 giọt để thử màu với iod Khi màu của dung dịch

iod không thay đổi thì sự thủy phân tinh bột được coi là kết thúc Ghi lại thời điểm kết thúc

Kết quả của các lần đo được ghi ở bảng sau:

Ống nghiệm

Dung dịch

cho vào

111 2 3 4 5 6 7 8

Hồ tinh bột 1% (ml) 1 1 1 1 1 1 1 1

Nước cất ( ml) 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8

Dung dịch đệm pH 5 (ml) 2 2 2 2 2 2 2 2

Để ổn định ở 50 o C

Thể tích dịch Enzyme (ml) 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2

Thời gian kết thúc thủy phân (s) 250 197 145 66 42 36 42 56

1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2

0

50

100

150

200

250

300

HOẠT TÍNH TƯƠNG ĐỐI CỦA ENZYME AMYLASE

Thể tích enzyme (ml)

Th

ờ

i g

ia

n

ết

t

ú

th

ủ

p

ân

(

Nhận xét: Dựa vào đồ thị ta thấy rằng

- Dung dịch amylase thu được thường có họat tính xúc tác ít ổn định Nó thay đổi tùy

theo vào điều kiện thí nghiệm và các yếu tố môi trường

- Hoạt tính ổn định nhất ở thể tích V= 1ml Khi nồng độ enzyme cao thì thời gian thủy

phân chậm, ta giảm dần nồng độ enzyme dưới 1ml thì thời gian kết thúc thủy phân tăng

chậm Vì nếu nồng độ enzyme quá cao hoặc quá thấp có thể dẫn đến giảm hoạt tính xúc tác

của enzyme.

1.2 Hiện tượng, giải thích.

a Hiện tượng:

Những giọt đầu tác dụng với iod cho màu xanh,những giọt sau tác dụng với iod cho

màu tím đến tím đỏ cuối cùng là không màu

b Giải thích :

Do ban đầu enzyme chưa thủy phân tinh bột nên khi tác dụng với iod cho ra màu xanh

chính là tinh bột chưa thủy phân tác dụng với enzyme , enzyme vào thúc nhanh qua trình

thuỷ phân tạo thành amylodextrin (màu tím với iod) tiếp tục thuỷ phân tạo thành

erythrodextrin (màu tím đỏ với iod) ,tiếp tục tạo thành acrodextrin (không kết hợp với iod

nên không cho màu) tiếp tục tạo thành maltodextrin (không kết hợp vơi iod) cuối cùng tạo

thành maltose và glucose (không kết hợp với iod)

1 Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ cơ chất lên tốc độ thủy giải của amylase.

1.1 Tiến trình và kết quả thí nghiệm:

- Chuẩn bị dung dịch thí nghiệm theo bảng dưới, tiến hành tương tự thí nghiệm đầu

- Kết quả các lần đo được ghi ở bản sau:

ống nghiệm

Dung dịch cho vào 1 2 3 4 5 6 7

Nồng độ tinh bột tương ứng

(mg/mL) 2 3 4 5 6 7 8

Hồ tinh bột 1% (mL) 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6

Nước cất (mL) 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4

Dung dịch đệm pH 5 (mL) 2 2 2 2 2 2 2

Để ổn định ở 500 C

Thể tích enzyme (mL) Thể tích đã chọn ở thí nghiệm 1 (V=1ml)

Thời gian kết thúc thủy phân 241 222 216 201 166 131 92

0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6

0

50

100

150

200

250

300

241

222 216

201

166

131

92

ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CƠ CHẤT ĐẾN TỐC ĐỘ THỦY PHÂN CỦA AMYLASE

N ng đ c ch t (ml) ồng độ cơ chất (ml) ộ cơ chất (ml) ơ chất (ml) ất (ml)

T

i g

ia

n

kế

t t

hú

c

th

ủy

p

hâ

n

(s

)

Nhận xét: Dựa vào đồ thị ta thấy rằng

- Khi tăng nồng độ cơ chất, thời gian kết thúc thủy phân giảm dần nghĩa là tốc độ phản

ứng tăng

- Khi ta tăng nồng độ cơ chất đến giới hạn xác định nào đó, tốc độ phản ứng đạt giá trị

cực đại Vmax thì vận tốc phản ứng sẽ không tăng nữa nếu ta tiếp tục thêm nồng độ cơ chẩt

1.2 Giải thích:

- Trong quá trình tạo phức trung gian ES, do ảnh hưởng của enzyme, cơ chất được hoạt

hóa, cấu tạo của cơ chất bị biến đổi, phân tử của cơ chất bị phân cực, các electron được

phân phối lại, do đó điện tích của cơ chất cũng thay đổi Các liên kết bên trong phân tử cơ

chất trở nên lỏng lẻo hơn, năng lượng họat hóa để vượt qua hàng rào năng lượng giảm,

tốc độ phản ứng tăng lên

- Khi tốc độ phản ứng đạt giá trị cực đại nếu ta tiếp tục thêm cơ chất vào thì tốc độ sẽ

không tăng nữa do tất cả các trung tâm hoạt động của enzyme đã được bão hòa bở cơ

chất

1.3 Kết luận:

- Với cùng một lượng enzyme xác định, nếu tăng dần lượng cơ chất trong dung dịch

thì thoạt đầu hoạt tính của Enzyme tăng nhưng đến một lúc nào đó thì sự gia tăng về nồng

độ cơ chất cũng không làm tăng hoạt tính enzyme Đó là vì tất cả các trung tâm hoạt động

của enzyme đã được bão hòa bởi cơ chất

- Tốc độ phản ứng của phần lớn các phản ứng biến đổi theo nồng độc của cơ chất và

nồng độ enzyme Khi tăng nồng độ cơ chất thì tốc độ phản ứng tăng chỉ khi nồng độ cơ

chất tương đối thấp Khi nồng độ cơ chất lớn tốc độ phản ứng ít phụ thuộc vào nồng độ

cơ chất và có khuynh hướng đạt cực đại do nồng độ enzyme có mặt quyết định

- Nồng độ Enzim: Với một lượng cơ chất xác định, nồng độ Enzim càng cao thì tốc độ

phản ứng xảy ra càng nhanh Tế bào có thể điều hoà tốc độ chuyển hoá vật chất bằng việc

tăng giảm nồng độ Enzim trong tế bào