Nghiên cứu khả năng tổng hợp pectinase của nấm mốc phân lập từ cơ chất giàu pectin và ứng dụng trong công nghệ thực phẩm

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG NGUYỄN THỊ THÚY HÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TỔNG HỢP PECTINASE CỦA NẤM MỐC PHÂN LẬP TỪ CƠ CHẤT GIÀU PECTIN VÀ ỨNG DỤNG TRONG CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Chuyên ngành: Công nghệ Thực phẩm Đồ uống Mã số: 60.54.02 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Đà Nẵng – Năm 2011 Cơng trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS TRẦN THỊ XÔ Phản biện 1: TS ĐẶNG MINH NHẬT Phản biện 2: PGS TS PHẠM NGỌC ANH Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ kỹ thuật họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 26 tháng 11 năm 2011 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Trung tâm Học liệu, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Qua nhiều nghiên cứu gần ñây cho thấy enzym pectinase ngày có nhiều ứng dụng quan trọng lĩnh vực sống: công nghiệp chế biến thực phẩm (như sản xuất rượu vang nước giải khát, sản xuất nước quả, sản xuất cà phê), y học, công nghiệp dệt sợi, sản xuất giấy, xử lý nước thải…[3] Bên cạnh đó, pectinase cịn mang đến bước tiến cho nông nghiệp Việc khám phá khả kháng bệnh thực vật ñã ñược kiểm tra với số chủng gây bệnh Kết cho thấy, dưa chuột cà chua non xử lý với enzym pectinase thơ có sức ñề kháng chống lại bệnh tốt [20] Thế nhưng, thực tế việc ứng dụng pectinase sản xuất chiếm tỷ lệ khơng đáng kể Theo thống kê tình hình ứng dụng pectinase cơng nghiệp giới chiếm 3% tổng số enzym sử dụng [6], enzym có nhiều ý nghĩa sản xuất Trên thị trường nay, nước châu Âu châu Mỹ sản xuất bán thị trường enzym pectinase loại enzym khác với số lượng lớn Ở Việt Nam, enzym pectinase chủ yếu ñược nhập ngoại Xuất phát từ khía cạnh trên, chúng tơi chọn ñề tài “Nghiên cứu khả tổng hợp pectinase nấm mốc phân lập từ chất giàu pectin ứng dụng công nghệ thực phẩm” nhằm phân lập chủng nấm mốc có khả tổng hợp enzym pectinase cao, từ tiến hành khảo sát số điều kiện ni cấy thích hợp cho q trình sinh tổng hợp enzym ñể tiến hành thử nghiệm ứng dụng MỤC ĐÍCH NGHIÊN CỨU - Phân lập chủng nấm mốc có khả sinh tổng hợp pectinase cao - Xác định thành phần mơi trường, thơng số thích hợp (nhiệt độ, pH, thời gian ni cấy) ñể nấm mốc sinh tổng hợp pectinase cao môi trường sử dụng - Đánh giá khả xử lý lớp nhớt cà phê enzym pectinase quy mơ phịng thí nghiệm ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU - Các chủng nấm mốc phân lập từ vỏ cam hư thu nhận chợ Hịa Khánh - Liên Chiểu – Đà Nẵng - Nghiên cứu ứng dụng enzym pectinase ñể xử lý lớp nhớt cà phê quy mơ phịng thí nghiệm PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Phương pháp phân lập nấm mốc - Phương pháp quan sát hình thái vi sinh vật - Phương pháp thu nhận enzym - Phương pháp xác ñịnh hoạt tính enzym pectinase - Phương pháp xác định hoạt ñộ enzym pectinase - Phương pháp tinh pectinase chủng NM1 - Phương pháp xác ñịnh hàm lượng protein Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI 5.1 Ý nghĩa khoa học ñề tài - Xác định chủng nấm mốc có hoạt tính enzym pectinase cao - Xác định thành phần mơi trường dinh dưỡng, điều kiện ni cấy thích hợp để chủng nấm mốc sinh tổng hợp enzym pectinase có hoạt độ cao - Thiết lập ñược sở khoa học cho việc ứng dụng enzym thu ñược chế biến cà phê Việt Nam 5.2 Ý nghĩa thực tiễn ñề tài Đặt sở cho việc xây dựng quy trình sản xuất enzym pectinase, góp phần phát triển ngành công nghệ vi sinh nước ta Đồng thời, với việc sản suất ñược enzym pectinase nước giúp chủ ñộng nguồn enzym giảm giá thành sản phẩm Ngoài ra, việc sử dụng chế phẩm enzym trình sản xuất cà phê giai ñoạn tách nhớt cho sản phẩm cà phê thóc nhớt thuận tiện cho phơi sấy, nâng cao chất lượng sản phẩm CẤU TRÚC CỦA LUẬN VĂN Ngồi phần mở đầu, kết luận tài liệu tham khảo, luận văn bao gồm chương sau: + Chương 1: Tổng quan + Chương 2: Đối tượng phương pháp nghiên cứu + Chương 3: Kết thảo luận CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 ENZYM PECTINASE Pectinase nhóm enzym thủy phân pectin, sản phẩm tạo thành acid galacturonic, galactose, methanol Đây nhóm enzym ñược ứng dụng rộng rãi kỹ thuật ñứng sau amylase protease 1.1.1 Cơ chất enzym pectinase Pectin chất enzym pectinase Pectin phổ biến tự nhiên, ñặc biệt giới thực vật 1.1.2 Phân loại enzym pectinase 1.1.3 Ứng dụng enzym pectinase 1.2 TỔNG QUAN VỀ NẤM MỐC 1.2.1 Hình dạng, kích thước, cấu tạo nấm mốc 1.2.2 Dinh dưỡng tăng trưởng nấm mốc 1.2.3 Sinh sản nấm mốc 1.2.4 Nấm mốc sinh tổng hợp enzym pectinase 1.3 TỔNG QUAN VỀ CHẾ BIẾN CÀ PHÊ 1.3.1 Các chủng loại / giống cà phê 1.3.2 Cấu tạo cà phê 1.3.3 Các phương pháp tách nhớt cà phê 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ THẾ GIỚI VỀ ENZYM PECTINASE 1.4.1 Các cơng trình nước 1.4.2 Các cơng trình ngồi nước CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2.1.1 Nguyên liệu - Vỏ cam thu mua từ chợ Hòa Khánh – Liên Chiểu – Đà Nẵng ñược sử dụng ñể phân lập chủng nấm mốc sinh tổng hợp pectinase - Quả cà phê Robusta (cà phê vối) ñược thu mua vườn huyện Bảo Lâm, tỉnh Lâm Đồng 2.1.2 Hoá chất 2.1.3 Dụng cụ - Thiết bị 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phân lập nấm mốc phương pháp pha loãng thập phân 2.2.2 Phương pháp giữ giống 2.2.3 Phương pháp quan sát hình thái vi sinh vật 2.2.4 Phương pháp thu nhận enzym 2.2.5 Phương pháp xác định hoạt tính enzym pectinase 2.2.6 Phương pháp xác ñịnh hoạt ñộ theo phương pháp so màu với thuốc thử DNS (acid – 3,5- dinitrosalicylic) 2.2.7 Tinh pectinase chủng NM1 sắc ký lọc gel 2.2.8 Định lượng protein phương pháp quang phổ CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 PHÂN LẬP CÁC CHỦNG NẤM MỐC CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PECTINASE Sau nhiều lần phân lập chủng nấm mốc thu nhận từ vỏ cam hư mơi trường thạch Czapek, chúng tơi thu chủng nấm mốc có hình thái khuẩn lạc khác ñược ký hiệu NM1, NM2, NM3 Sau ñó, chúng tơi tiến hành soi nấm mốc kính hiển vi ñể quan sát ñặc ñiểm cấu tạo bào tử sợi nấm chủng nấm mốc Hình thái chủng nấm mốc MN1, NM2, NM3 có ñặc ñiểm: - Chủng NM1: khuẩn lạc tròn, bề mặt lồi, mép khuẩn lạc mịn, khơng làm thay đổi màu mơi trường Bào tử màu đen, khối bào tử hình cầu, sợi nấm ăn sâu vào mơi trường, có vách ngăn, cuống đính bào tử khơng phân nhánh Bào tử đính tỏa đầu sợi nấm - Chủng NM2: khuẩn lạc tròn, bề mặt lồi, xốp, mép khuẩn lạc dày, làm đổi màu mơi trường (mơi trường có màu vàng) Bào tử màu xanh lục, khối bào tử dạng chổi (chuổi bào tử đính hướng lên phía trơng giống chổi), sợi nấm khơng ăn sâu vào mơi trường, có vách ngăn, cuống đính bào tử phân nhánh - Chủng NM3: khuẩn lạc tròn, bề mặt lồi, mép khuẩn lạc cưa, không làm thay đổi màu mơi trường Bào tử ban đầu có màu vàng nhạt sau chuyển thành màu xanh lục Khối bào tử hình cầu, sợi nấm ăn sâu vào mơi trường, có vách ngăn, cuống đính bào tử khơng phân nhánh Bào tử đính tỏa đầu sợi nấm Như vậy, vào đặc điểm hình thái chủng NM1, NM2 NM3 nhận ñịnh chủng A.niger, P.italicum A.flavus 3.2 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG PHÁT TRIỂN TRÊN MÔI TRƯỜNG CZAPEK CỦA CÁC CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP ĐƯỢC Sự phát triển nấm mốc ñược xác ñịnh trực tiếp ñường kính phát triển khuẩn lạc môi trường Czapek theo thời gian Bảng 3.2: Tổng hợp đường kính khuẩn lạc trung bình chủng nấm mốc NM1, NM2, NM3 nuôi thời gian khác ĐK khuẩn Chủng lạc (mm) Thời gian nuôi môi trường Czapek (h) 24 36 48 NM1 8,33 13,39 18,72 NM2 1,70 4,28 NM3 9,78 14,05 60 72 96 26,72 32,39 35,50 6,33 8,00 9,67 10,39 20,45 27,33 35,11 37,77 nấm mốc Dựa vào số liệu bảng 3.2 thấy khả phát triển hai chủng nấm mốc NM1 NM3 gần mạnh hẳn so với chủng NM2, kết giống với kết khảo sát tốc ñộ phát triển chủng nấm mốc A.flavus, P.digitatum P.italicum tác giả Đào Thiện cộng [13] 3.3 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH ENZYM PECTINASE CỦA CÁC CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP ĐƯỢC Để ñánh giá khả sinh enzym pectinase chủng nấm mốc phân lập được, chúng tơi tiến hành ni mơi trường: bán rắn lỏng Khả sinh enzym pectinase đánh giá gián tiếp qua đường kính vịng phân giải pectin 10 Bảng 3.3: Đường kính trung bình vòng thủy phân pectin chủng nấm mốc NM1, NM2, NM3 mơi trường lỏng (mm) Đường kính trung bình vịng thủy phân pectin chủng nấm mốc môi trường lỏng (mm) Chủng NM NM1 14,5 NM2 12,4 NM3 15,2 Bảng 3.4: Đường kính trung bình vịng thủy phân pectin chủng nấm mốc NM1, NM2, NM3 mơi trường bán rắn (mm) Đường kính trung bình vịng thủy phân pectin chủng nấm mốc môi trường bán rắn (mm) Chủng NM NM1 25,1 NM2 17,1 NM3 26,7 Kết bảng 3.3 bảng 3.4 cho thấy khả sinh enzym pectinase chủng nấm mốc phân lập mơi trường bán rắn cao so với môi trường lỏng Kết hoàn toàn phù hợp với lý thuyết rằng: lượng enzym tạo thành từ mơi trường ni cấy bề mặt thường cao nhiều so với ni cấy chìm [5] Với ba chủng nấm mốc phân lập chủng NM3 có khả sinh tổng hợp pectinase mạnh sau chủng NM1 cuối chủng NM2, hai chủng NM1 NM3 có khả phân giải pectin cao hẳn so với chủng NM2 Kết tương ứng ñối với chủng nấm mốc hai môi trường: lỏng bán rắn Mặc dù chủng NM3 cho hàm lượng pectinase cao theo nhận ñịnh chúng tơi chủng NM3 A.flavus, chủng 12 vi sinh vật xảy nhanh chóng vịng vài ba phút sau cho chất cảm ứng vào môi trường nuôi cấy [6] Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 8,49 3 3,83 3,04 Pectin Bột cà rốt Bột vỏ bưởi Nguồn cung cấp chất cảm ứng Hình 3.13: Hoạt độ pectinase canh trường ni cấy có bổ sung nguyên liệu cảm ứng khác Trái lại, bột cà rốt bột vỏ bưởi nguồn cung cấp pectin cao có chứa nhiều thành phần khác, lên men nấm mốc sử dụng thành phần dễ hấp thụ trước Mặt khác, pectin dạng liên kết với chất khác cellulose, hemicellulose nên ñể hấp thụ ñược pectin nấm mốc địi hỏi phải tiết enzym để phân giải liên kết sử dụng Vì vậy, nghiên cứu tơi chọn pectin tinh khiết làm nguồn chất cảm ứng, chủng NM1 ni cấy với hàm lượng pectin khác là: 1g, 2g, 3g, 4g, 5g 100g môi trường 13 Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 12 11,05 10 9,18 8,63 1,91 Hàm lượng pectin (g/100g mơi trường) Hình 3.14: Hoạt độ pectinase canh trường ni cấy có chất cảm ứng pectin với hàm lượng khác Từ kết thấy hàm lượng pectin có ảnh hưởng rõ rệt ñến hoạt ñộ pectinase Điều giải thích sau: Khi tăng nồng độ chất từ – 3g/100g mơi trường chủng NM1 sinh tổng hợp enzym pectinase nhiều ñể thủy phân lượng chất mơi trường, hoạt ñộ enzym tăng lên Nhưng tiếp tục tăng nồng độ chất lên hoạt ñộ enzym giảm xuống Sự giảm hoạt ñộ enzym ngun nhân sau: Pectin có tính nhớt làm cho độ nhớt mơi trường tăng, làm giảm độ thơng thống mơi trường gây ảnh hưởng ñến trao ñổi chất, sinh trưởng phát triển vi sinh vật q trình sinh tổng hợp giảm 14 Kết nghiên cứu cho thấy nồng độ pectin thích hợp để bổ sung vào 100g môi trường nuôi cấy chủng NM1 sinh tổng hợp pectinase 3g 3.4.2 Khảo sát ảnh hưởng nguồn nitơ ñến khả sinh tổng hợp pectinase Bảng 3.6: Thành phần môi trường nuôi cấy sinh tổng hợp pectinase với nguồn niơ khác Thành phần Môi trường Môi trường Môi trường Cám 78% 78% 78% Trấu 20% 20% 20% Pectin 3g/100g 3g/100g 3g/100g môi trường môi trường môi trường (NH4)2SO4 2% NH4NO3 2% Pepton 2% môi trường Nguồn nitơ Kết nghiên cứu hình 3.15 cho thấy chủng NM1 có khả sinh tổng hợp pectinase cao sử dụng nguồn nitơ (NH4)2SO4 sau đến pepton cuối NH4NO3 Điều phù hợp với lý thuyết Trần Xuân Ngạch cho nguồn nitơ từ muối amoni kim loại kiềm hay từ pepton, cazein thủy phân ức chế tạo thành enzym pectinase [7] Đồng thời, theo kết nghiên cứu Vinod Kunar Joshi cộng cho biết hoạt ñộ enzym PE nuôi cấy môi trường rắn sử dụng nguồn nitơ (NH4)2SO4 (6,46 ñơn vị) cao sử dụng pepton (5,40 đơn vị) [22] Bên cạnh đó, kết nghiên cứu Z.H Bai cộng sự tổng hợp enzym pectinase môi trường rắn sử dụng nguồn nitơ (NH4)2SO4 cao dùng NH4NO3 pepton [20] 15 Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 11,23 12 10,39 11,05 10 (NH4)2SO4 NH4NO3 Pepton Nguồn cung cấp nitơ Hình 3.15: Hoạt độ pectinase canh trường ni cấy có bổ sung nguồn nitơ khác Từ kết chọn nguồn cung cấp nitơ cho nghiên cứu (NH4)2SO4 Tiếp theo, tiến hành nuôi cấy chủng NM1 môi trường bảng 3.6 với hàm lượng (NH4)2SO4 khác là: 1%; 1,5%, 2%; 2,5%; 3% Từ kết hình 3.16 thấy rằng, hoạt ñộ pectinase bị ảnh hưởng lớn hàm lượng (NH4)2SO4 Theo nhận ñịnh chúng tơi điều do: nồng độ chất tăng, tốc ñộ sinh trưởng vi sinh vật tăng lên khả sinh tổng hợp enzym pectinase tăng theo Tuy nhiên, tiếp tục tăng nồng độ chất lên hoạt độ enzym giảm xuống chất tạo áp lực làm giảm trình sinh tổng hợp enzym Khi tăng nồng ñộ chất vượt giới hạn ñịnh dẫn ñến áp suất thẩm thấu tăng lên, gây khó khăn cho q trình hấp thụ chất dinh dưỡng từ bên Điều 16 hạn chế sinh trưởng phát triển nấm mốc mà khả sinh tổng hợp enzym giảm ñi Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 10 11,27 10 8,71 7,05 1,0% 1,5% 2,0% 2,5% Hàm lượng (NH4)2SO4 3,0% Hình 3.16: Hoạt độ pectinase canh trường ni cấy có nguồn nitơ (NH4)2SO4 với hàm lượng khác 3.4.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian ñến khả tổng hợp enzym pectinase Môi trường nuôi cấy ñược sử dụng ñể khảo sát ảnh hưởng thời gian sau: cám 78%, trấu 20%, (NH4)2SO4 2%, pectin 3g/100g mơi trường 17 Hoạt độ pectinase (U/ml) 18 16,91 16 14 12 10 8,05 7,51 8,72 7,89 24 36 48 60 72 84 96 108 120 132 Thời gian nuôi cấy (h) Hình 3.17: Hoạt độ pectinase ni cấy thời gian khác Nhìn vào hình 3.17, ta thấy thay đổi thời gian hoạt độ enzym pectinase thay đổi theo Điều giải thích bởi: ngày đầu chất dinh dưỡng mơi trường nhiều nên khả sinh tổng hợp pectinase chủng NM1 tăng lên theo thời gian Nhưng sau ngày thứ hoạt độ pectinase giảm chất dinh dưỡng môi trường dần cạn kiệt, sản phẩm tiết nhiều nên khả sản xuất pectinase chủng NM1 giảm ñi Như vậy, ñể thu ñược pectinase có hoạt độ cao nên kết thúc q trình sinh tổng hợp pectinase thời gian 72h 18 3.4.4 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt ñộ ñến khả tổng hợp enzym pectinase Tiến hành nuôi cấy mơi trường xác định mục 3.4.3 nhiệt ñộ khác nhau: 20oC, 25oC, 30oC, 35oC, 40oC thời gian ngày 18 Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 16,95 16 14 12 10 10,45 9,21 20 25 30 35 40 Nhiệt ñộ ni cấy ( C) Hình 3.18: Hoạt độ pectinase ni cấy nhiệt độ khác Từ kết biểu diễn hình 3.18 cho thấy nhiệt ñộ nuôi cấy ảnh hưởng rõ rệt lên tạo thành enzym pectinase Điều giải thích rằng: giai ñoạn ñầu nhiệt ñộ tăng làm tăng chuyển động cấu tử có mơi trường, làm tăng va chạm có hiệu dẫn ñến vận tốc phản ứng xảy nhanh Tuy nhiên, enzym có chất protein tăng nhiệt độ tới giới hạn vận tốc phản ứng enzym bị giảm biến tính enzym 19 3.4.5 Khảo sát ảnh hưởng pH ñến khả tổng hợp enzym pectinase Tiến hành ni cấy mơi trường ñược mô tả mục 3.4.3 với nhiệt ñộ 300C thời gian ngày giá trị pH khác Hoạt ñộ pectinase (U/ml) 18 17,10 16 14 12 11,89 10 7,07 2,5 3,0 3.5 4,0 4,5 5,0 16,83 11,74 5,5 6,0 6,5 pH mơi trường ni cấy Hình 3.19: Hoạt độ pectinase nuôi cấy giá trị pH khác Từ hình 3.19 cho thấy thay đổi pH hoạt ñộ enzym bị biến ñổi Điều lý giải bởi: pH có ảnh hưởng đến vận tốc phản ứng enzym thay ñổi pH làm cho hoạt ñộ enzym thay đổi Ở pH mà trạng thái ion hóa trung tâm hoạt động enzym chất thể cách tốt ñược gọi pH thích hợp Từ kết nghiên cứu cho thấy, pH thích hợp cho hoạt động enzym pectinase chủng NM1 nằm khoảng 5,0 – 5,5 ñạt giá trị cực ñại pH =5,0 20 Như vậy, với việc tiến hành khảo sát ảnh hưởng ñiều kiện nuôi cấy ñến khả sinh tổng hợp enzym pectinase, chúng tơi thiết lập điều kiện sinh tổng hợp pectinase thích hợp chủng nấm mốc NM1 để dịch lên men thu có hoạt ñộ pectinase cao 17,10U/ml ứng với môi trường có thành phần sau: cám 78%, trấu 20%, (NH4)2SO4 2%, pectin 3g/100g môi trường Các thành phần mơi trường ni cấy nhiệt độ 300C pH=5,0 thời gian ngày 3.5 Phân tích chế phẩm enzym qua cột sephadex G-50 Hoạt ñộ pectinase Hàm lượng protein (U/ml) (mg/ml) 20 18 16 14 12 10 17,978 1,212 0,915 7,474 0,543 4,551 1,179 0,151 2 10 11 1213 1415 16 1718 1920 2122 23 1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 Hoạt ñộ pectinase Hàm lượng protein Phân ñoạn chạy sắc ký Hình 3.20: Hoạt độ pectinase hàm lượng protein đo ñược phân ñoạn chạy sắc ký Từ phân ñoạn ñến phân ñoạn 23, có peak tương ứng ñạt ñỉnh phân ñoạn 9, 13, 22 với hàm lượng protein 0,915mg/ml, 0,543mg/ml, 0,151mg/ml, nhiên peak protein phân giải không rõ ràng Điều cho thấy phân ñoạn có protein số protein có kích thước phân tử ... enzym pectinase chủ yếu nhập ngoại Xuất phát từ khía cạnh trên, chúng tơi chọn đề tài ? ?Nghiên cứu khả tổng hợp pectinase nấm mốc phân lập từ chất giàu pectin ứng dụng công nghệ thực phẩm? ?? nhằm phân. .. 1.1.1 Cơ chất enzym pectinase Pectin chất enzym pectinase Pectin phổ biến tự nhiên, ñặc biệt giới thực vật 1.1.2 Phân loại enzym pectinase 1.1.3 Ứng dụng enzym pectinase 1.2 TỔNG QUAN VỀ NẤM MỐC... KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 PHÂN LẬP CÁC CHỦNG NẤM MỐC CÓ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP PECTINASE Sau nhiều lần phân lập chủng nấm mốc thu nhận từ vỏ cam hư môi trường thạch Czapek, thu chủng nấm mốc có