Xác định hàm lượng vitamin b2 bằng phương pháp trắc quang

Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch Bé gi¸o dôc vµ ®µo t¹o Trêng ®¹i häc vinh khoa ho¸ häc   X¸c ®Þnh hµm lîng vitamin B2 b»ng ph¬ng ph¸p tr¾c quang luËn v¨n tèt nghiÖp ®¹i häc s ph¹m ngµnh ho¸ häc kho¸ 39, 1998 - 2002 Gi¸o viªn híng dÉn: Th¹c sÜ NguyÔn Quang TuÖ Sinh viªn thùc hiÖn: NguyÔn V¨n Thä - 39A Ho¸ Vinh, 5-2002 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch Lêi c¶m ¬n T«i xin bµy tá lßng biÕt ¬n s©u s¾c ®èi víi:  ThÇy gi¸o híng dÉn Th¹c sÜ NguyÔn Quang TuÖ ®· giao ®Ò tµi vµ híng dÉn tËn t×nh, chu ®¸o, t¹o mäi ®iÒu kiÖn thuËn lîi trong qu¸ tr×nh thùc hiÖn ®Ò tµi  §Ó hoµn thµnh ®îc ®Ò tµi nµy em cßn ®îc sù gióp ®ì vµ gãp ý cña c¸c thÇy c« gi¸o : TS NguyÔn Kh¾c NghÜa; Ths Vâ ThÞ Hoµ; c« Ph¹m ThÞ §øc - c¸n bé phô t¸ phßng thÝ nghiÖm, cïng nhiÒu thÇy c« gi¸o kh¸c trong khoa Vinh, th¸ng 5 n¨m 2002 NguyÔn V¨n Thä Sinh viªn líp 39 A - Ho¸  Më ®Çu Cã thÓ ®Þnh nghÜa vÒ vitamin mét c¸ch tãm t¾t nh sau: vitamin lµ mét nhãm c¸c hîp chÊt h÷u c¬ cã khèi lîng ph©n tö bÐ, cã cÊu t¹o ho¸ häc rÊt kh¸c nhau vµ cã c¸c tÝnh chÊt lÝ häc còng nh ho¸ häc rÊt kh¸c nhau Chóng ®Òu gièng nhau ë chç lµ rÊt cÇn thiÕt cho ho¹t ®éng sèng b×nh thêng cña bÊt k× mét c¬ thÓ nµo Trong c¸c c¬ thÓ sinh vËt, vitamin hoµn thµnh c¸c chøc n¨ng xóc t¸c 1 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch Nhê sù cè g¾ng cña nhiÒu nhµ ho¸ sinh häc vµ nhiÒu nhµ sinh lÝ häc mµ gÇn 100 n¨m nµy trong nhµnh vitamin häc ngêi ta ®· chiÕt xuÊt vµ ph©n lËp ®îc trªn 30 lo¹i vitamin kh¸c nhau Ngêi ta còng ®· tæng hîp ®îc mét sè lín c¸c vitamin b»ng con ®êng tæng hîp ho¸ häc trong phßng thÝ nghiÖm C¨n cø vµo tÝnh hoµ tan cña vitamin mµ ngµy nay ngêi ta chia vitamin ra lµm c¸c nhãm sau: + C¸c vitamin hoµ tan trong níc (B1, B2, B5, B6, B12, C, B3, H ) + C¸c vitamin hoµ tan trong chÊt bÐo (A, D, E, K, Q, ) ViÖc cung cÊp kh«ng ®Çy ®ñ c¸c vitamin cho c¬ thÓ sÏ cã ¶nh hëng xÊu kh«ng nh÷ng ®èi víi sù lµm viÖc cña hÖ thÇn kinh mµ cßn ®èi víi mét sè lo¹i c¬ quan kh¸c ë bªn trong c¬ thÓ V× thÕ, trong khÈu phÇn ¨n cña con ngêi ph¶i cã gi¸ trÞ hoµn chØnh kh«ng nh÷ng vÒ ph¬ng diÖn calo, vÒ ph¬ng diÖn chÊt ®¹m, mµ cßn vÒ ph¬ng diÖn vitamin n÷a §èi víi vitamin B1, B2 nãi riªng còng cã vai trß rÊt quan träng §Ó cung cÊp ®Çy ®ñ vµ hîp lÝ ®èi víi c¬ thÓ th× vÊn ®Ò ®Æt ra lµ cÇn ph¶i biÕt ®îc hµm l- îng cña nã trong c¸c mÉu thuèc, c¸c lo¹i thøc ¨n Do ®ã, cÇn ph¶i t×m ra c¸c ph¬ng ph¸p x¸c ®Þnh hµm lîng cña chóng Vitamin B1, B2 cã thÓ ®îc ®Þnh lîng b»ng nhiÒu ph¬ng ph¸p nh: ph¬ng ph¸p sinh vËt häc, ph¬ng ph¸p ho¸ häc, ph¬ng ph¸p lÝ häc, Ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng vitamin B1, B2 hÇu hÕt chØ tiÕn hµnh b»ng ph¬ng ph¸p ho¸ häc Trong ®iÒu kiÖn thùc tÕ cña phßng thÝ nghiÖm hiÖn nay, chóng t«i ®Þnh l- îng vitamin B2 b»ng ph¬ng ph¸p tr¾c quang Ph¬ng ph¸p nµy kh¸ phæ biÕn v× cã tÝnh chÝnh x¸c cao nÕu nh t×m ®îc c¸c thuèc thö thÝch hîp vµ x¸c ®Þnh ®äc c¸c ®iÒu kiÖn tèi u cho phÐp ph©n tÝch Trong ph¹m vi ®Ò tµi nµy, chóng t«i ®Þnh lîng vitamin B2 theo 2 ph¬ng ph¸p: + Ph¬ng ph¸p dùa trªn thiÕt bÞ quang phæ tö ngo¹i cña TT KiÓm nghiÖm Dîc phÈm + Ph¬ng ph¸p cæ ®iÓn: x©y dùng quy tr×nh ®Ó ®Þnh lîng hµm lîng vitamin B2 ë phßng thÝ nghiÖm khoa Ho¸ häc Tõ kÕt qu¶ cña 2 ph¬ng ph¸p cã thÓ rót ra so s¸nh nªn sö dông ph¬ng ph¸p nµo ®Ó ®Þnh lîng vitamin, tõ ®ã øng dông ®Ó ®Þnh lîng vitamin B2 trong mét sè thùc phÈm vµ dîc phÈm trªn thÞ trêng hiÖn nay 2 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch PhÇn I Tæng quan tµi liÖu 1 Ph©n lo¹i vitamin B - Nguån gèc vµ vai trß cña chóng Vitamin B cã nhiÒu lo¹i, mçi lo¹i cã vai trß riªng, cã ý nghÜa rÊt quan träng ®èi víi sù sèng 1.1 Vitamin B1 (Tiamin) C«ng thøc cÊu t¹o: NH2 C H2C + CH3 NC NC C CH HC C 3 LuËn v¨n tèt nghiÖp cHö nCh©n s phN¹m ngµnh Ho¸ häc S H2C CH2OH 3 Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch (d¹ng cã vßng thiazon) + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: Khi kÕt hîp víi hai gèc photphat, vitamin B1 sÏ t¹o thµnh tiamin pyrophotphat (TPP) §ã lµ coenzym cña enzym ®ecacboxylaza vµ transxetolaza (c¸c enzym nµy tham gia vµo qu¸ tr×nh trao ®æi gluxit) ThiÕu vitamin B1 sÏ ¶nh hëng ®Õn sù trao ®æi gluxit, viªm d©y thÇn kinh, bÞ bÖnh tª phï (beri - beri) Khi m¾c bÖnh, hµm lîng axit piruvic vµ -xetoglutaric trong m¸u cao h¬n møc b×nh thêng + Nguån cung cÊp, nhu cÇu: Vitamin B1 cã nhiÒu trong thùc vËt nh men bia, c¸m g¹o, g¹o cha x¸t, ng«, ®Æc biÖt nhiÒu h¬n trong ®ç t¬ng, l¹c, ngoµi ra cßn cã trong c¸c lo¹i rau nh b¾p c¶i, rau dÒn, xµ l¸ch Trong ®éng vËt, vitamin B1 cã nhiÒu trong gan, s÷a, lßng tr¾ng trøng Nhu cÇu vitamin B1 cña ngêi lín lµ 1,5 - 3mg, ®èi víi trÎ em lµ 0,5 - 2mg 1.2 Vitamin B2 (riboflavin, lactoflavin) + C«ng thøc cÊu t¹o: (trang sau) + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: Vitamin B2 lµ thµnh phÇn cÊu t¹o nªn c¸c coenzym sau: Flavin mono nucleotit (FMN) Flavin a®enin ®inucleotit (FAD) §ã lµ c¸c coenzym tham gia vµo qu¸ tr×nh oxy ho¸ - khö V× vËy, thiÕu vitamin B2, sù sinh trëng cña c¬ thÓ diÔn ra kh«ng b×nh thêng Ngoµi ra nã cßn ¶nh hëng ®Õn sù ph¸t triÓn cña nhiÒu m« kh¸c trong c¬ thÓ nh da, mµng nhÇy, bµo thai, m¸u CH2 -(CHOH)3-CH2OH N NO H3C HC NH 3N O 4 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch + Nguån cung cÊp, nhu cÇu: Vitamin B2 cã nhiÒu trong nÊm men, trong rau qu¶ nh rau dÒn, da hÊu, hµnh t©y, sópl¬, ®Ëu, thÞt, s÷a, gan, lßng ®á trøng Nhu cÇu vitamin B2 hµng ngµy cña ngêi lµ 2 - 2,5mg §èi víi ®éng vËt nhai l¹i, nhê c¸c vi sinh vËt ®êng ruét cã thÓ tæng hîp ®îc vitamin B2 cung cÊp cho c¬ thÓ nªn chóng kh«ng cã nhu cÇu hÊp thô B2 tõ ngoµi 1.3 Vitamin B3 (axit pantoteric): + C«ng thøc cÊu t¹o: O H H CH3 C CH2 CH2 N C C C CH2OH O- N O OH CH3 + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: Vitamin B3 lµ mét thµnh phÇn cÊu t¹o cña coenzym A tham gia vµo sù chuyÓn ho¸ lipit trong c¬ thÓ ThiÕu vitamin B3 sÏ bÞ bÖnh viªm da + Nguån cung cÊp: Trong thùc vËt, vitamin nµy cã nhiÒu trong nÊm men, trong líp al¬ron cña h¹t lóa, trong chåi c©y linh l¨ng, h¹t l¹c, ®ç t¬ng, cµ chua, gÊc, 1.4 Vitamin PP (vitamin B5) + C«ng thøc cÊu t¹o: COOH axit nicotinic (niaxin, vitamin B5, PP) N + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: Vitamin PP ng¨n ngõa ®îc bÖnh da sÇn sïi ThiÕu vitamin nµy da sÏ bÞ viªm loÐt, sÉn sïi, nhÊt lµ nh÷ng n¬i tiÕp xóc nhiÒu víi ¸nh s¸ng Vitamin PP lµ thµnh phÇn cÊu t¹o nªn c¸c coenzym: Nicotinait a®enin ®inucleotit (NAD+) Nicotinamit a®enin ®inucleotit photphat (NADP+) 5 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch §ã lµ nh÷ng coenzym tham gia vµo qu¸ tr×nh oxy ho¸ - khö, v× vËy thiÕu vitamin nµy th× qu¸ tr×nh oxy ho¸ - khö trong c¬ thÓ bÞ vi ph¹m + Nguån cung cÊp, nhu cÇu: Vitamin PP cã nhiÒu trong gan, thÞt, trøng, h¹t ®Ëu ®ç, g¹o, b¸nh m×, nÊm men Nhu cÇucña ngêi ®èi víi vitamin PP trong mét ngµy kh¸ cao: 15 - 25mg Tuy nhiªn, mét sè loµi vi sinh vËt cã thÓ tæng hîp ®îc vitamin PP tõ axit amin kh«ng thay thÕ lµ triptophan 1.5 Vitamin B6 (piri®oxin) + C«ng thøc cÊu t¹o: CH2OH CHO CH2NH2 CH2OH CH2OH CH2OH OH oxy ho¸ OH OH CH3 NH3 CH3 CH3 N N N piri®oxin piri®oxal piri®oxemin + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: Khi piri®oxal ®îc ho¹t ho¸ bëi ATP ®Ó t¹o thµnh photphopiri®oxal, nã sÏ tham gia vµo nhãm ngo¹i cña enzym aminotransferaza, xóc t¸c cho sù chuyÓn ho¸ nhãm NH2 tõ axit amin ®Õn axetoaxit Nhê ®ã c¸c xetoaxit míi vµ axit amin míi ®îc t¹o thµnh ThiÕu vitamin B6 sÏ biÓu hiÖn c¸c triÖu chøng nh viªm thÇn kinh, c¸c bÖnh ngoµi da, n«n möa, ®au c¬, suy nhîc + Nguån cung cÊp, nhu cÇu: Vitamin B6 cã nhiÒu trong thÞt, s÷a, lßng ®á trøng, c¸, men bia vµ c¸c h¹t ngò cèc Nhu cÇu vitamin B6 hµng ngµy cña ngêi lín lµ 1,5 - 2,8mg, trÎ em lµ 0,5 - 2mg 1.6 Vitamin B12 (cobalamin) CÊu t¹o cña vitamin B12 rÊt phøc t¹p + Vai trß, chøc n¨ng sinh häc: 6 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch Vitamin B12 cã t¸c dông ch÷a bÖnh thiÕu m¸u ¸c tÝnh, nã gióp cho sù h×nh thµnh huyÕt cÇu tè vµ hång cÇu, nã tham gia vµo c¸c qu¸ tr×nh sinh tæng hîp c¸c nucleotit, gióp cho c¸c ph¶n øng metyl ho¸ + Nguån cung cÊp, nhu cÇu: Cã trong thÞt, c¸, trøng, s÷a, ë ngêi, vitamin B12 ®îc dù tr÷ ë gan (vµi mg), ®îc tæng hîp nhê hÖ vi khuÈn ®êng ruét, vi khuÈn nµy còng thÊy ë ao, hå, trong nguån níc th¶i nhµ m¸y Nhu cÇu 10 - 20  /ngµy.ngµy 2 TÝnh chÊt ho¸ häc cña thiamin - Kh¸i qu¸t vÒ ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng 2.1 TÝnh chÊt + §iÓm nãng ch¶y: 246 - 2500C cho ®Õn khi ph¸ huû + §é hoµ tan:: 100g/ngµy.100ml níc 1g/ngµy.100ml etanol 960 kh«ng tan trong hexan, ete, axeton + Trong m«i trêng kiÒm, thiamin rÊt dÔ bÞ ph¸ huû PhÇn thiazol trong ph©n tö rÊt dÔ dµng bÞ ph¸ huû Thiamin trong m«i trêng trung tÝnh vµ ®Æc biÖt lµ trong m«i trêng axit t¬ng ®èi v÷ng bÒn Ngoµi kh«ng khÝ b×nh thêng, thiamin trong dung dÞch rÊt dÔ bÞ oxy ho¸ Sù oxy ho¸ dÇn dÇn ph¸t sinh ra d¹ng ®isunfua, cã t¸c dông vÒ ph¬ng diÖn sinh vËt häc B»ng c¸ch dïng c¸c thuèc thö oxy ho¸ m¹nh nhÊt ph¸t sinh ra thiocrom lµ mét chÊt cã huúnh quang xanh l¬ rÊt râ Ph¶n øng nµy coi nh ®îc dïng c¬ b¶n cho ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng thiamin rÊt nh¹y vµ t¬ng ®èi ®¬n gi¶n 2.2 Kh¸i qu¸t vÒ ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng Ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng thiamin cã thÓ ph©n chia thµnh 3 nhãm: + Ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng sinh vËt häc vµ vi trïng häc + Ph¬ng ph¸p ho¸ häc + Ph¬ng ph¸p lý häc Ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng thiamin trªn sóc vËt, trªn c¬ së lµm chøng (test) vÒ sù trëng thµnh nhanh chãng ViÖc thiÕu vitamin B1 ë chuét èm g©y nªn mét sù b¹i liÖt phÇn díi mµ sau ®ã ®îc ®iÒu trÞ b»ng c¸ch cho mÉu chuÈn ®ång thêi víi mÉu thö §é nh¹y cña ph¬ng ph¸p vi sinh vËt gi¶m ®i ®¸ng kÓ, ®iÒu ®ã ®îc x¸c 7 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch ®Þnh r»ng ®«i khi do ¶nh hëng cña vi sinh vËt t¹o nªn thiamin ë bé m¸y tiªu ho¸ cña chuét Thùc tÕ khi ®Þnh lîng thiamin trong c¸c nguyªn liÖu thiªn nhiªn hay trong c¸c chÕ phÈm dîc, hÇu hÕt ngêi ta dïng ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng ho¸ häc Ph¬ng ph¸p ho¸ häc ®Ó ®Þnh lîng thiamin dùa trªn sù ®o huúnh quang cña s¶n phÈm oxy ho¸ cña thiamin (thiocrom) Sau ®ã ngêi ta dïng ph¬ng ph¸p so mµu ®Ó ®Þnh lîng Ph¬ng ph¸p nµy cho s¶n phÈm ngng kÕt cña thiamin víi nh÷ng amin th¬m D.Melnik vµ H Field nghiªn cøu ph¬ng ph¸p nµy dïng s¶n phÈm ngng kÕt víi p-aminoaxetophenon Mµu ph¸t sinh ®em l¾c víi butanol, xylen hay axeton Nång ®é mµu t¨ng lªn khi cã mÆt etanol hay phenol Ph¬ng ph¸p nµy ®- îc c¶i tiÕn b»ng c¸ch dïng axit sunfanilic ®iazo ho¸ vµ kaliferixianua C«ng tr×nh nµy lµm t¨ng ®é nh¹y cña ph¶n øng bëi v× sù cã mÆt cña kaliferixianua t¸c dông víi axit sunfanilic ®iazo ho¸ trong nguyªn liÖu cã amin giao thoa víi thiamin Tõ nång ®é mµu tríc vµ sau khi cho ferixianua, cã thÓ ®Þnh lîng mét c¸ch t¬ng ®èi chÝnh x¸c lîng thiamin VÒ c¸c ph¶n øng mµu kh¸c ®èi víi thiamin cã thÓ cho biÕt mét c¸ch ®¬n s¬ Vitamin B1 víi p- ®imetylamino benzaldehyd t¹o nªn mét kÕt tña ®á g¹ch khi cho bèc h¬i trong m«i trêng axit Víi 2,6- ®ibromquinon clorimit trong m«i trêng dung dÞch ®Öm borat pH 9,6 thiamin cho mµu da cam §Þnh lîng vitamin B1 b»ng ph¬ng ph¸p c©n cã thÓ tiÕn hµnh theo B Naiman b»ng c¸ch tña dung dÞch thiamin víi iodo bitmuto kali Tña mµu da cam t¹o thµnh thùc tÕ kh«ng tan trong níc Sau khi lÊy ®îc, ®em sÊy kh« vµ c©n Ph¬ng ph¸p nµy tuy vËy ®«i khi dïng ®Ó ®Þnh lîng thiamin trong c¸c chÕ phÈm dîc §Þnh lîng thiamin tù do bªn c¹nh d¹ng este ho¸ dùa trªn ®é hoµ tan kh¸c nhau cña s¶n phÈm oxy ho¸ cocacboxylaza víi thiamin Tõ m«i trêng kiÒm thiocrom cã thÓ lÊy ®îc h¼n ®Ó ®Þnh lîng b»ng c¸ch l¾c víi izobutanol, trong khi ®ã, s¶n phÈm oxy ho¸ cocacboxylaza vÉn ë trong pha níc §Þnh lîng thiamin ®· ®îc c©n s½n ®¸p øng tõ mét lîng lín cocacboxylaza ®îc tiÕn hµnh trªn c¬ së ®Þnh lîng thiamin tríc vµ sau sù thuû ph©n enzym 2.2.1 Ph¬ng ph¸p lý häc ®Ó ®Þnh lîng thiamin 2.2.1.1 Ph¬ng ph¸p quang phæ 8 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc Chuyªn ngµnh Ho¸ ph©n tÝch Ph¬ng ph¸p quang phæ cã thÓ dïng ®Ó ®Þnh tÝnh hay ®Þnh lîng thiamin trong c¸c chÕ phÈm dîc, ®Æc biÖt trong thuèc tiªm Quang phæ hÊp thô vïng tö ngo¹i cña thiamin rÊt ®Æc hiÖu vµ chÞu sù thay ®æi ®¸ng kÓ trong m«i trêng níc á c¸c pH kh¸c nhau Sù thay ®æi s©u xa vÒ quang phæ theo pH rÊt ®iÓn h×nh víi nh©n pyrimidin Trong m«i trêng HCl 0,1N thiamin cho mét quang phæ hÊp thô ®¬n gi¶n víi ®é cùc ®¹i ë bíc sãng 253nm Trong m«i trêng ®Öm axetat pH 3,5 cã 2 cùc ®¹i ë c¸c bíc sãng 245 nm vµ 261nm Trong m«i trêng ®Öm photphat pH 6,6 cã 2 cùc ®¹i ë c¸ch xa nhau mµ ë ®ã ®é t¾t cña cùc ®¹i ë kho¶ng 265nm thÊp xuèng ®¸ng kÓ 2.2.1.2 Ph¬ng ph¸p cùc phæ K Wiesner lµ ngêi ®Çu tiªn nghiªn cøu ®Þnh lîng thiamin b»ng ph¬ng ph¸p cùc phæ ®· nhËn thÊy trong dung dÞch thiamin cã 2 lo¹i sãng cùc phæ: sãng xóc t¸c trong dung dÞch ®Öm, vµ sãng anot trong m«i trêng kiÒm Dung dÞch ®Öm photphat pH 7,3 thÝch hîp cho viÖc ®Þnh lîng Cßn vÒ ®é nh¹y, th× pH nµy rÊt thÝch hîp bëi v× cã thÓ dïng nång ®é thiamin ë mg/ngµy.ml Tuy vËy, viÖc lùa chän ph¬ng ph¸p nµy còng rÊt Ýt v× tÊt c¶ chÊt g©y t¸c nh©n ph¸t hiÖn hi®ro trªn ®iÖn cùc thuû ng©n nhá giät ®Òu cho lµn sãng gièng nhau V× thÕ chØ dïng ph- ¬ng ph¸p nµy cho viÖc ®Þnh lîng c¸c chÕ phÈm dîc, trong khi kh¶ n¨ng ®Þnh l- îng trong c¸c nguyªn liÖu thiªn nhiªn bÞ h¹n chÕ 2.2.1.3 Ph¬ng ph¸p s¾c kÝ ®Þnh lîng thiamin Ph¬ng ph¸p s¾c kÝ lµ ph¬ng ph¸p rÊt c¨n b¶n ®Ó ®¹t tíi viÖc ®Þnh lîng thiamin trong c¸c nguyªn liÖu thiªn nhiªn Vµ nh vËy kÓ c¶ ph¬ng ph¸p s¾c kÝ hÊp phô trªn cét ®Õn ph¬ng ph¸p s¾c kÝ míi nhÊt trªn giÊy Trong sù chän läc c¸c ph¬ng ph¸p ®Þnh lîng thiamin trong nguyªn liÖu thiªn nhiªn, ph¬ng ph¸p trao ®æi ion tõ nhãm zeolit do L.R Cevecedo vµ D.J Henessy ®· dïng chÊt nµy ®Ó chiÕt thiamin tõ chÊt dîc liÖu Trong thêi gian gÇn ®©y, viÖc dïng ph¬ng ph¸p s¾c kÝ trªn giÊy rÊt thÝch hîp vµ cã gi¸ trÞ ®èi víi viÖc ®Þnh lîng thiamin trong nguyªn liÖu thiªn nhiªn Ph¬ng ph¸p s¾c kÝ giÊy cã kh¶ n¨ng dÔ t¸ch thiamin khái c¸c cocacboxylaza VÊn ®Ò nµy ®îc ®Æt ra do A Baldantoni, M Spaoloni Dung m«i ®îc dïng lµ hçn hîp izo- butanol, pyridin víi níc, víi tû lÖ 1 : 1 : 1 vµ 1,1% axit axetic kÕt tinh ®îc, ngêi ta tiÕn hµnh ph¸t hiÖn ph¶n øng thiocrom sau khi oxy ho¸ thiamin vµ cocacboxylaza b»ng ferixianua kali VÞ trÝ cña vÕt thiocrom ®îc ph¸t hiÖn do 9 LuËn v¨n tèt nghiÖp cö nh©n s ph¹m ngµnh Ho¸ häc ... phơng pháp xác định hàm lợng chúng Vitamin B1, B2 đợc định lợng nhiều phơng pháp nh: phơng pháp sinh vật học, phơng pháp hoá học, phơng pháp lí học, Phơng pháp định lợng vitamin B1, B2 hầu hết... hành phơng pháp hoá học Trong điều kiện thực tế phòng thí nghiệm nay, định l- ợng vitamin B2 phơng pháp trắc quang Phơng pháp phổ biến có tính xác cao nh tìm đợc thuốc thử thích hợp xác định đọc... này, định lợng vitamin B2 theo phơng pháp: + Phơng pháp dựa thiết bị quang phổ tử ngoại TT Kiểm nghiệm Dợc phẩm + Phơng pháp cổ điển: xây dựng quy trình để định lợng hàm lợng vitamin B2 phòng