Nghiên cứu tác dụng điều trị viêm đại tràng từ cao chiết cây dâu (morusalba l)

x ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI TRÀ MY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ VIÊM ĐẠI TRÀNG TỪ CAO CHIẾT CÂY DÂU (Morus Alba L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Hà Nội – 2021 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI TRÀ MY NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ VIÊM ĐẠI TRÀNG TỪ CAO CHIẾT CÂY DÂU (Morus Alba L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa: QH2016.Y Người hướng dẫn: PGS.TS Bùi Thanh Tùng ThS Phan Hồng Minh Hà Nội – 2021 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài nghiên cứu này, thân em nhận nhiều hỗ trợ quan tâm từ gia đình, bạn bè thầy Nghiên cứu hoàn thành dựa tham khảo kinh nghiệm anh chị khóa trước, nghiên cứu, báo liên quan, tổ chức Việt Nam giới Đặc biệt hỗ trợ, tạo điều kiện vật chất chuyên môn cán giảng viên trường Đại học Y Dược – Đại học Quốc gia Hà Nội Lời đầu tiên, em xin trân trọng cảm ơn hai thầy cô hướng dẫn em khóa luận PGS.TS Bùi Thanh Tùng Th.S Phan Hồng Minh toàn thể thầy cô môn Dược lý – Dược lâm sàng Thầy cô người hướng dẫn trực tiếp hướng dẫn em suốt trình thực nghiên cứu giúp em hồn thành đề tài nghiên cứu Em xin trân trọng cảm ơn tất thầy cô giáo công tác trường tận tình truyền đạt kiến thức quý báu, giúp đỡ em suốt trình học tập nghiên cứu trường Trong trình thực nghiên cứu này, khơng tránh khỏi thiếu sót, em kính mong thầy cơ, chun gia người quan tâm đến đề tài đóng góp ý, đưa ý kiến để đề tài em hồn thiện Một lần nữa, em xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2021 Sinh viên Bùi Trà My MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC TỪ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC BẢNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Bệnh viêm đại tràng 1.2 Triệu chứng 1.3 Phân loại 1.4 Yếu tố nguy bệnh viêm đại tràng 1.5 Cơ chế bệnh sinh 1.6 Biến chứng bệnh viêm đại tràng 1.7 Các phương pháp điều trị Các dạng mơ hình gây viêm đại tràng Tổng quan Stress oxy hóa phương pháp định lượng MDA 10 3.1 Stress oxy hóa bệnh viêm đại tràng 10 3.2 Phương pháp định lượng MDA 12 Sơ lược phương pháp sắc kí khí ghép nối hai lần khối phổ 13 Cây dâu (Morus alba L.) 14 5.1 Vị trí phân loại: 14 5.2 Đặc điểm thực vật phân bố dâu 14 5.3 Thành phần hóa học dâu: 15 5.4 Tác dụng dược lý 16 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 Đối tượng nghiên cứu 19 1.1 Mẫu nghiên cứu 19 1.2 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 19 1.3 Động vật thí nghiệm 19 1.4 Hóa chất 20 1.5 Thiết bị sử dụng: 20 Phương pháp nghiên cứu: 20 2.1 Xác định thành phần chất có cao dâu 20 2.2 Xây dựng mơ hình chuột viêm đại tràng 21 2.3 Đánh giá tác dụng điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu: 21 2.4 Phương pháp xử lý số liệu: 22 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 Kết 23 1.1 Kết cao chiết dâu 23 1.2 Kết điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu 26 Bàn luận: 29 2.1 Về cao chiết dâu: 29 2.2 Về khả điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu: 29 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 32 Kết luận: 32 Đề xuất: 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC TỪ VIẾT TẮT SCFA Acid béo chuỗi ngắn 5-ASA Acid 5-aminosalicylic TNF-α Yếu tố hoại tử u alpha IL Interleukin MHC Phức hợp hịa hợp mơ chủ yếu ROS Oxy phản ứng RNS Nitơ phản ứng GC Sắc ký khí GC- MS/MS Sắc ký khí ghép hai lần khối phổ MDA Malondialdehyde PUFA Acid béo chưa no có nhiều liên kết đơi HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao TBA Thiobarbituric acid HDL Lipoprotein tỉ trọng cao LDL Lipoprotein tỉ trọng thấp EtOH Ethanol BHT Butylated hydroxytoluene NIST Viện Tiên chuẩn Cơng nghệ Quốc gia Mỹ DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình Tên hình Trang Hình Phân loại Viêm đại tràng Hình Sử dụng thuốc cho nhóm bệnh nhân viêm đại tràng từ nhẹ đến trung bình Hình Sử dụng thuốc nhóm bệnh nhân viêm đại tràng từ trung bình đến nặng Hình Cấu trúc hóa học cysteamin 10 Hình Cấu trúc hóa học Malondialdehyde 11 Hình Hình thái dâu 14 Hình Các flavonoid phân lập từ dâu 15 Hình Hình ảnh dâu 19 Hình Sắc kí đồ GC - MS / MS chiết xuất ethanol dâu 24 Hình 10 Hình ảnh đại diện cho đại tràng nhóm nghiên cứu 27 Hình 11 Kết định lượng MDA 28 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Các chất xác định chiết xuất ethanol dâu GC – MS / MS 25 MỞ ĐẦU Trong xã hội đại, bệnh lý đường tiêu hoá vấn đề đáng báo động giới Việt Nam Trong đó, bệnh lý viêm đại tràng ngày phổ biến có gia tăng tỉ lệ mức độ ảnh hưởng đến chất lượng sống người bệnh Các biến chứng bệnh viêm đại tràng gặp như: tắc ruột, thủng tuột ung thư đại tràng [17, 46] Mặc dù thuốc điều trị thuốc nhóm 5-ASA, thuốc corticosteroid, thuốc sinh học ức chế miễn dịch, tác dụng phụ thuốc gan, thận lớn Vì việc nghiên cứu để tìm thuốc tối ưu hiệu điều trị giảm thiểu tác dụng không mong muốn tiến hành Tại Việt Nam, bệnh nhân mắc bệnh mãn tính có xu hướng sử dụng loại thuốc Đông Y thuốc Y học cổ truyền có nguồn gốc tự nhiên tác dụng phụ, chi phí thấp để giảm bớt gánh nặng kinh tế sử dụng thuốc tân dược Việt Nam nước khí hậu ưu ái, có thảm thực vật phong phú, đặc biệt lồi có khả chữa bệnh Cây dâu (Morus alba L.) loài phổ biến nước ta, trồng hầu khắp vùng để lấy nuôi tằm sử dụng số phận lá, rễ, thân, để làm thuốc [1] Một số nghiên cứu giới rằng, dâu có hoạt tính chống oxy hóa, điều trị viêm đại tràng Tuy nhiên, Việt Nam, nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng điều trị viêm đại tràng dâu cịn Do đó, đề tài: « Nghiên cứu tác dụng điều trị viêm đại tràng từ cao chiết dâu (Morus alba l.)» thực nhằm mục tiêu sau: Xác định sơ chất có dâu (Morus alba L.) Đánh giá tác dụng điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu mơ hình chuột viêm đại tràng cysteamin CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Bệnh viêm đại tràng 1.1 Khái niệm Theo Hiệp hội Tiêu hóa Hoa Kỳ năm 2020 (American Gastroenterological Association – AGA): “Viêm đại tràng dạng bệnh viêm ruột, ảnh hưởng đến đại tràng trực tràng, gây đau bụng dội, co rút, tiêu chảy chảy máu.”[8] Tạp chí The Lancet năm 2017, “Viêm đại tràng rối loạn mãn tính niêm mạc đại tràng, bắt đầu trực tràng thường kéo dài liên tục qua phần toàn đại tràng, với triệu chứng đặc trưng tiêu chảy máu.”[46] Như vậy, viêm đại tràng dạng bệnh viêm ruột mãn tính xuất trực tràng đại tràng, thường gây tình trạng tiêu chảy máu 1.2 Triệu chứng Các triệu chứng viêm loét đại tràng bao gồm từ nhẹ đến nặng khác người Các triệu chứng thay đổi theo thời gian, giai đoạn thuyên giảm, bệnh nhân cảm thấy sức khỏe tốt khơng có triệu chứng, xen kẽ đợt bùng phát Viêm đại tràng dạng bệnh diễn biến tùy thuộc vào cá nhân người Một số người trì tình trạng sức khỏe tốt nhiều năm, số khác lại bùng phát thường xuyên [17] Các triệu chứng bện nhân thay đổi theo quy mơ mức độ ruột bị viêm, triệu chứng phổ biến bệnh bùng phát bao gồm [17]: - Tiêu chảy: thường kèm theo máu chất nhày, bệnh nhân có nhu cầu khẩn cấp vào nhà vệ sinh - Đau quặn bụng: nghiêm trọng, thường xảy trường bệnh nhân đại tiện - Mệt mỏi: điều thiếu máu ngủ bệnh nhân phải thức dậy vào ban đêm đau bụng tiêu chảy gây - Thiếu máu: bệnh nhân bị giảm số lượng hồng cầu bị máu nhiều ăn không ngon, gây cảm giác mệt mỏi cho bệnh nhân Hình 9: Sắc kí đồ GC - MS / MS chiết xuất ethanol dâu 24 Pic sắc kí Thời gian lưu (tR) Tên hợp chất Độ tin cậy (%) Công thức phân tử Phân tử khối (g/mol) 11,94 1H-1,2,3-Triazole, 4-methyl-5(5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)- 68,75 C7H9N5 163 12.32 4H-Benzo[def]carbazole 60,34 C14H9N 191 13.12 1H-1,2,3-Triazole, 4-methyl-5(5-methyl-1H-pyrazol-3-yl)- 68,52 C7H9N5 163 14,76 Anthracene, 9,10-dihydro-9(1-methylpropyl)- 66,84 C18H20 236 15,16 7-Methoxy-2,3-dimethylindole 68,87 C11H13N O 175 16,23 Anthracene, 9,10-dihydro-9(1-methylpropyl)- 61,72 C18H20 236 16,79 Phenol, 2,5-bis(1methylethyl)-, acetate 63,92 C14H20O2 220 17,32 Dibenz[b,f]][1,4]oxazepine 81,52 C13H9NO 175 18,70 6-Methyl-3-[3-oxo-3phenylprop-1-en-1yl]chromen-4-one 61,14 C19H14O3 290 10 27,54 Isophthalic acid, 3,5difluorophenyl octyl ester 66,25 C22H24F2 O4 390 Bảng 1: Các chất xác định chiết xuất ethanol dâu GC – MS / MS 25 1.2 Kết điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu  Đánh giá đại thể: Sau ngày, tất chuột bị giết tách phần đại tràng, mở đại tràng, rửa nước muối sinh lý Hình 10 hình ảnh đại diện cho đại tràng nhóm nghiên cứu - Nhóm chứng sinh lý: khơng quan sát thấy vết lt, đại tràng bình thường - Nhóm bệnh lý: quan sát thấy rõ ổ loét - Nhóm chứng thuốc: không loét, không suất huyết, ruột phù nề - Nhóm cao dâu (sử dụng cao chiết dâu liều 100 mg/kg thể trọng): xuất huyết nhẹ, phù nề - Nhóm cao dâu (sử dụng cao chiết dâu liều 200 mg/kg thể trọng): xuất huyết nhẹ, phù nề Như vậy, từ góc nhìn đại thể mà nói, sử dụng cao dâu mức liều 100 mg/kg thể trọng 200 mg/kg thể trọng cho kết khả quan điều trị viêm đại tràng 26 Sinh lý Bệnh lý Chứng thuốc Liều 100mg/kg Liều 200mg/kg Hình 10: Hình ảnh đại diện cho đại tràng nhóm nghiên cứu 27  Đánh giá mức độ chống oxy hóa: Tác dụng điều trị viêm đại tràng cao chiết dâu tằm chuột nhắt trắng đánh giá qua khả chống peroxy hóa lipid Khả đánh giá thông qua việc định lượng MDA – sản phẩm q trình peroxy hóa lipid Kết định lượng MDA thể cụ thể hình 11 8.00 MDA (nmol/mg protein) 7.00 6.00 5.00 4.00 5.98# 3.00 2.00 1.00 2.79* 3.12* 2.88* 1.76 0.00 Sinh lý Bệnh lý Dâu 100 Dâu 200 Chứng thuốc Nhóm * Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm bệnh lý, p