BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC BÙI THỊ CẨM NHUNG DÙNG CỘT SẮC KÝ ÁI LỰC MIỄN DỊCH VÀ HUỲNH QUANG KẾ ĐỊNH LƢỢNG OCHRATOXIN A LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC DÙNG CỘT SẮC KÝ ÁI LỰC MIỄN DỊCH VÀ HUỲNH QUANG KẾ ĐỊNH LƢỢNG OCHRATOXIN A LUẬN VĂN KỸ SƢ CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực PGS.TSKH NGUYỄN LÊ TRANG BÙI THỊ CẨM NHUNG TS NGUYỄN NGỌC HẢI KHÓA: 2002 – 2006 Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 9/2006 MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING NONG LAM UNIVERSITY, HCMC FACULTY OF BIOTECHNOLOGY USING THE IMMUNO AFFINITY CHROMATOGRAPHY AND FLUOROMETER TO QUANTIFY OCHRATOXIN A GRADUATION THESIS MAJOR: BIOTECHNOLOGY Professor Student PhD NGUYEN LE TRANG BUI THI CAM NHUNG Dr MGUYEN NGOC HAI TERM: 2002 - 2006 HCMC, 09/2006 iii LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn: Ban Giám Hiệu trường Đại học Nơng Lâm TP.Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho em suốt thời gian học tập Các Thầy Cô Bộ môn Công nghệ sinh học Thầy Cơ ln tận tình hướng dẫn, giảng dạy, giúp đỡ động viên em PGS TSKH Nguyễn Lê Trang TS Nguyễn Ngọc Hải tận tâm bảo, hướng dẫn đóng góp nhiều ý kiến q báu suốt thời gian em thực tập hồn thành khóa luận BGĐ Viện Pasteur, phòng Miễn Dịch Viện Pasteur: Th.s Nguyễn Thị Nguyệt Thu, CN Dương Ngọc Diễm, KTV Lạc Ngọc Thêm, KS Đỗ Thị Châm, KS Võ Thị Mỹ Duyên, chị Dỗn Thị Sim tận tình giúp đỡ, bảo em suốt thời gian thực khố luận Tồn thể lớp CNSH 28 hỗ trợ, giúp đỡ động viên suốt thời gian học trường Sau xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Ba Mẹ người thân gia đình góp phần tạo cho kiến thức ngày hơm Tháng 08 năm 2006 Bùi Thị Cẩm Nhung iv TÓM TẮT KHÓA LUẬN BÙI THỊ CẨM NHUNG, Đại Học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, tháng 08/2006, “DÙNG CỘT SẮC KÝ ÁI LỰC MIỄN DỊCH VÀ HUỲNH QUANG KẾ ĐỊNH LƯỢNG OCHRATOXIN A” Hướng dẫn khoa học: PGS TSKH Nguyễn Lê Trang TS Nguyễn Ngọc Hải Đề tài tiến hành từ ngày 06/02/2006 đến ngày 30/06/2006 Phòng Miễn Dịch – Viện Pasteur TPHCM Đối tượng nghiên cứu đề tài độc tố ochratoxin A Ochratoxin độc tố gây tác hại vào quan quan trọng thể như: thần kinh, gan, thận hệ miễn dịch OTA gây hậu nghiêm trọng người động vật nuôi nồng độ cực thấp (ppb) Sắc ký lực miễn dịch (Immuno Affinity Chromatography – IAC) sử dụng với mục đích chính: Đồng thời vừa tinh vừa cô đặc độc tố Định lượng trực phương pháp huỳnh quang kế Mục đích đề tài: Tạo cột sắt ký lực bắt ochratoxin Xác định điều kiện tối ưu việc dùng cột sắc ký lực miễn dịch huỳnh quang kế định lượng ochratoxin A (OTA), cụ thể xác định hiệu suất thu hồi cột IAC OTA Kết đạt sau: Tạo cột IAC có khả bắt giữ OTA Hiệu suất thu hồi cột IAC OTA chuẩn tốt (đạt 90%) Hiệu suất thu hồi OTA mẫu tự tạo (bia) đạt yêu cầu OTA nhiễm mẫu 20 ng (đạt 90%) lượng 38 Chiết mẫu lọc dịch chiết Cho dịch chiết chảy qua cột IAC Giải hấp Định lượng huỳnh quang kế 39