Nghiên cứu thành phần hóa học và thăm dò hoạt tính sinh học của lá cây bần ổi sonneratia ovata bark, họ bần (sonneraticeae)

1 B Cơng trình đư c hồn thành t i: GIÁO D C VÀ ĐÀO T O Đ I H C ĐÀ N NG Đ I H C ĐÀ N NG Ngư i hư ng d n khoa h c: GS.TS NGUY N KIM PHI PH NG NGUY N TH NG C HI N NGHIÊN C U THÀNH PH N HĨA H C VÀ THĂM DỊ HO T TÍNH SINH H C C A LÁ CÂY B N SONNERATIA OVATA BARK, H Ph n bi n 1: GS.TS ĐÀO HÙNG CƯ NG I B N (SONNERATICEAE) Ph n bi n 2: GS.TS NGUY N BIN Chuyên ngành: Hóa h u Mã s : 60.44.27 Lu n văn ñư c b o v t i H i ñ ng ch m Lu n văn t t nghi p th c sĩ Khoa H c h p t i Đ i h c Đà N ng vào ngày 25 tháng năm 2011 TÓM T T LU N VĂN TH C SĨ KHOA H C ĐÀ N NG - 2011 * Có th tìm hi u lu n văn t i: - Trung tâm Thông tin - H c li u, Đ i h c Đà N ng - Thư vi n trư ng Đ i h c Sư ph m, Đ i h c Đà N ng 3 M Đ U LÝ DO CH N Đ TÀI N n y h c c truy n Vi t Nam v i b dày l ch s lâu ñ i phong phú, đa s thu c ñư c bào ch t lo i c thiên nhiên Ngày v i s phát tri n c a n n dư c h c hi n đ i n n dư c h c c truy n không ng ng phát tri n ñ i m i Các lo i thu c ngày hi n ñư c t ng h p hay bán t ng h p, n n s n xu t thu c th gi i Vi t Nam ch y u bán t ng h p t h p ch t ñư c phân l p t thiên nhiên Vì lý đó, ngành hóa h u chuyên v h p ch t thiên nhiên ñang phát tri n m t cách m nh m góp ph n vào vi c cung c p nhi u lo i thu c có ích cho ngư i R ng ng p m n C n Gi v i ñ c thù h d tr sinh quy n ñư c th gi i công nh n, vùng r ng ng p m n v i qu n th th c v t ña d ng ph i xanh c a thành ph H Chí Minh Đ ng Nai R ng ng p m n C n Gi có u ki n mơi trư ng r t ñ c bi t, h sinh thái trung gian gi a h sinh thái th y v c v i h sinh thái c n, h sinh thái nư c ng t h sinh thái nư c m n H sinh thái th c v t v i nhi u lo i cây, ch y u b n tr ng, m m tr ng, qu n h p đư c đơi - b n tr ng xu i, ñư c…; lo i nư c l b n chua, b n i, ô rô, d a lá, ráng V i l i th nơi b o t n ñư c nhi u lo i ñ ng th c v t quý hi m, r ng ng p m n C n Gi ñang ñư c nhà khoa h c c a ngành ñ u tư nghiên c u R ng ng p m n C n Gi v i sinh kh i loài th c v t l n v n chưa ñư c khai thác hi u qu , ph c v l i ích cho ngư i m t s h p ch t h u phân l p t ñ c h u c a r ng ng p m n như: h p ch t phorbol ester ñư c cô l p t thân Excoecaria agallocha L [15] có ho t tính kháng virus HIV; h p ch t benzoxazolin v i d n xu t đư ng ribose có ho t tính kháng ung thư đư c l p t rơ - Acanthus illicifolius L [16]; h p ch t cineol, eucalyptol đư c tìm th y tinh d u tràm dài- Malaleuca leucadendran có tác d ng sát trùng m nh ñ i v i nhi u lo i vi khu n gây b nh [2,3] Các nghiên c u sinh h c g n ñây ch r ng vùng r ng ng p m n ch a nhi u h p ch t có giá tr bào ch thu c triterpen, steroid, glycosid, alkaloid h p ch t quinon V i hy v ng có th l p ñư c nhi u h p ch t có giá tr t m t nh ng lồi c a r ng ng p m n khơng đ lãng phí ngu n sinh kh i l n này, chúng tơi đ nh hư ng nghiên c u thu c chi B n có t i r ng ng p m n C n Gi mà n hình b n i- Sonneratia ovata Bak M C ĐÍCH NGHIÊN C U Lu n văn đ t m c tiêu tìm hi u thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c c a B n i - Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae) Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U Trong lu n văn tơi sâu vào tách, tinh ch xác đ nh c u trúc c a m t s h p ch t hóa h c cao eter d u h a B n i Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae), thu hái C n Gi - TPHCM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 4.1 Nghiên c u v lý thuy t - T ng quan v m t s loài h B n (Sonneratiaceae) - Tìm hi u B n i – Sonneratia ovata Bak v hình thái th c v t, phân b , thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c 4.2 Phương pháp th c nghi m - Phân l p ch t s ch b ng phương pháp SKC, SKBM - Xác đ nh c u trúc hóa h c h p ch t cô l p ñư c b ng phương pháp ph hi n ñ i như: Ph 1H - NMR, 13C - NMR, DEPT - 135 90: Ghi máy c ng hư ng t h t nhân Bruker t n s 500 MHz cho ph 1H NMR 125 MHz cho ph 13C- NMR T t c ph ñư c ghi t i: Phịng phân tích trung tâm, trư ng Đ i H c Khoa H c T Nhiên, s 227, ñư ng Nguy n Văn C , qu n 5, TPHCM Ý NGHĨA KHOA H C VÀ TH C TI N C A Đ TÀI T k t qu nghiên c u, lu n văn ñã thu ñư c m t s k t qu v i nh ng đóng góp thi t th c sau: - Cây B n i – Sonneratia ovata Bak ñư c nghiên c u v thành ph n hóa h c ho t tính sinh h c - Cao eter d u h a, cao etyl acetat, cao metanol ñã ñư c th ho t tính gây ñ c t bào ưng thư ngư i Hela, NCI-H46, MCF-7 K t qu cho th y, t t c cao đ u khơng có kh gây đ c t bào ung thư c t cung Hela, t bào ung thư ph i NCI-H46 t bào ung thư vú MCF-7 n ng đ 100µg/ml sau 48 gi c m ng - T cao eter d u h a, b ng s c ký c t silica gel nhi u l n, k t h p v i s c ký b n m ng l p ñư c ch t s ch HE 2.2.4, HE7.1 HE8.1 Các k t qu nghiên c u s góp ph n vào vi c ch ng minh b o v s ña d ng sinh h c c a th m th c v t Vi t Nam C U TRÚC C A LU N VĂN Ngồi ph n m đ u, k t lu n tài li u tham kh o lu n văn g m có chương sau : Chương 1: T ng quan Chương : Các phương pháp nghiên c u, th c nghi m CHƯƠNG Chương 3: K t qu th o lu n T NG QUAN V M T S LOÀI TRONG H B N (SONNERATIACEAE) Chi Sonneratia th gi i có kho ng 20 lồi Theo Ph m Hồng H [1] , Vi t Nam hi n có loài thu c chi là: - B n tr ng – Sonneratia alba J.E Smith - B n vô cánh – Sonneratia apetala Buch – Ham in Sim - B n chua – Sonneratia caseolaris (L.) Engl - B n ñ ng - Sonneratia griffithii Kurz - B n i - Sonneratia ovata Bak V i gi i h n m t ñ tài lu n văn t t nghi p, l a ch n kh o sát thành ph n hóa h c c a B n i- m t lồi đ c h u c a r ng ng p m n C n Gi CHƯƠNG CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U VÀ TH C NGHI M 2.1 Hóa ch t thi t b 2.2 Phương pháp nghiên c u 2.2.1 Phương pháp chi t ngâm d m 2.2.2 Phương pháp tách tinh ch ch t 2.2.3 Phương pháp xác đ nh c u trúc hóa h c c a m t h p ch t 2.3 Th c nghi m 2.3.1 X lý nguyên li u B n i 2.3.2 Đi u ch lo i cao 2.3.3 Cô l p h p ch t có cao eter d u h a (E) CHƯƠNG trưng c a n i đơi >C=CH- khung sư n ursan t i δC 139,2 (>C=) 126,3 (-CH=) Đi u phù h p v i ph K T QU VÀ TH O LU N H-NMR (δppm), vùng t trư ng th p xu t hi n tín hi u c a m t proton olefin t i δH 3.1 Cô l p h p ch t cao eter d u h a T B n i (40kg) ñi u ch cao metanol (1,5 kg), s d ng 5,23 (dd; 3,5Hz; 3,5Hz) k thu t trích pha r n silica gel ñã phân cao metanol thành nh ng cao 30 có tính phân c c khác cao eter d u h a (246,7 g), cao etyl 29 20 acetat (389,3 g), cao metanol (800 g) 19 Ch n cao eter d u h a ñ s c ký c t, cô l p h p ch t, ñã thu ñư c 12 22 18 11 h p ch t, ký hi u l n lư t HE2.2.4, HE7.1 HE8.1 25 26 13 17 COOH 14 Các h p ch t có tính ch t v t lý trình bày sau: O H p ch t HE2.2.4 (972,1 mg) ñư c l p t phân đo n HE2.2 H3C 1' 28 27 O 2' 23 24 - Tr ng thái: ch t r n d ng b t, màu tr ng ngà Acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) - Nhi t đ nóng ch y: 287-289oC (k t tinh l i CHCl3) - S c kí l p m ng gi i ly h dung ly E : EA (8:2), hi n hình b n m ng b ng dung d ch H2SO4 25% nung nóng b n, cho m t v t δC = 78,8 cho bi t nguyên t 13 Tín hi u ph C-NMR carbon C-3 mang nhóm -OH b acyl hóa b d ch chuy n v vùng t trư ng th p bình thư ng (>CH-O-CO-) trịn, màu h ng, v i giá tr Rf = 0,69 (hình 2.4) H-NMR (500MHz, CD3OD + CDCl3, δppm)( Hình 3.3): Đư c Ph 1 H-NMR, vùng trư ng cao, th y xu t hi n tín hi u proton (5 tín hi u d ng mũi đơn tín hi u d ng mũi đơi, khơng k trình bày b ng 3.1 - Ph có ñ c ñi m sau: - Ph 10 16 15 3.1.1 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE2.2.4 21 13 C-NMR (Hình 3.4) k t h p v i DEPT-NMR (125MHz, tín hi u c a proton metyl nhóm acetoxy -OCOCH3 c ng hư ng CD3OD + CDCl3, δppm) (Hình 3.5, hình 3.6): Đư c trình bày t i b ng 3.1 -CH3 ñ c trưng c a triterpen có khung sư n ursan Bi n lu n c u trúc hóa h c Ph 13C-NMR k t h p v i DEPT-NMR (δppm) cho th y vùng t trư ng th p, ngồi tín hi u c ng hư ng c a nguyên t carbon c a acid carboxylic t i δC 181,3 (-COOH) cịn có tín hi u c a nguyên t carbon carboxylat t i 172,7 (-COO-) Bên c nh c p tín hi u ñ c δH 2,03) ng v i proton nhóm Nh ng nh n đ nh cho th y h p ch t HE2.2.4 m t d n xu t d ng acetyl c a m t acid triterpen có khung sư n ursan-12-en So sánh v i tài li u tham kh o[17], h p ch t HE2.2.4 ñư c xác ñ nh acid 3β-O-acetylursolic 10 B ng 3.1 S li u ph NMR c a h p ch t HE2.2.4 so sánh 15 28,8 16 25,0 [17] v i acid 3β-O-acetylursolic Acid 3β-O- HE 2.2.4 acetylursolic 13 C-NMR 38,4 δH ppm (J, Hz) 1,65 (m); 1,07 1,87 (m); 1,07 24,3 -CH2- - 40,4 >C< 18 53,6 2,18 (d; 11,0) 53,9 >CH- 19 39,6 1,33 (m) 39,2 >CH- 20 39,6 1,33 (m) 39,9 >CH- 21 31,2 1,50 (m) 31,5 -CH2- 22 C- NMR 37,6 1,70 (m) 37,7 -CH2- 23 28,3 0,86 (s) 28,9 -CH3 24 17,1 0,85 (s) 17,1 -CH3 O- 25 15,7 0,95 (s) 15,9 -CH3 DEPT 38,4 -CH2- 28,6 -CH2- (m) 24,1 4,0) -CH2- 48,2 13 V trí C 1,99 (dd; 13,5; 25,0 17 (CD3OD + CDCl3) (pyridin-d5) 1,25 (m) (m) -CH- 80,9 4,49 (dd; 7,5; 6,5) 78,8 38,0 - 37,7 >C< 26 17,5 0,85 (s) 17,1 -CH3 55,7 0,82 (m) 56,3 >CH- 27 24,1 1,63 (s) 24,1 -CH3 18,6 1,52 (m); 1,36 19,0 -CH2- 28 180,1 - 181,3 -COOH 29 17,7 0,76 (d; 11,0) 17,5 -CH3 30 21,6 0,94 (d; 6,5) 21,3 -CH3 1’ 170,7 - 172,5 -COO- 2’ 21,3 2,04 (s) 24,3 -CH3 (m) 33,5 40,0 10 11 0,92 (dd; 11,5; 33,8 -CH2- - 39,9 >C< 47,9 1,54 (m) 42,9 >CH- 37,2 - 37,7 >C< 23,7 1,91 (m); 1,07 21,5 -CH2- 8,5) (m) 12 125,6 5,23 (dd; 3,5; 3,5) 126,3 -CH= 13 139,4 - 139,2 >C= 14 42,6 - 40,0 >C< 11 12 * Nhi t đ nóng ch y 192-1930C (k t tinh h n h p dung môi clorofom : metanol (1:1) * S c kí l p m ng cho m t v t nh t có Rf = 0,62 v i h dung mơi clorofom: etyl acetat (8:2), hi n hình b ng dung d ch H2SO4 50% cho m t v t tím, sau chuy n thành xanh đ m (Hình 2.3) H-NMR (DMSO-d6) (Hình 3.1), δppm: đư c trình bày * Ph b ng 3.2 * Ph 13 C-NMR (DMSO-d6) (Hình 3.2) k t h p v i DEPT-NMR 90 135 (Hình 3.3): đư c trình bày b ng 3.2 Bi n lu n c u trúc Ph Hình 3.3: Ph c ng hư ng t h t nhân H-NMR c a HE2.2.4 13 H-NMR k t h p v i ph C-NMR DEPT-NMR cho th y tín hi u c ng hư ng ñ c trưng c a H-1’, H-6, C1’, C-5, C-6 c a h p ch t β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside nên ch n s li u ph c a β-Sitosterol D-glucose ñ so sánh ñ i chi u K t qu đư c trình bày b ng 3.2 cho th y có s trùng kh p V y h p ch t HE7.1 β-Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid có c u trúc hóa h c sau: 21 H3C 20 18 12 CH3 OH 4' 6' 2' O 3' Hình 3.4: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR c a HE2.2.4 3.1.2 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE7.1 H p ch t HE7.1 (26.911,5mg) thu ñư c t phân ño n HE7 c a cao eter d u h a có ñ c ñi m sau: * D ng b t màu tr ng 10 O 5' HO HO 16 14 15 23 13 CH3 28,29 C2H5 26 17 11 19 H 22 OH 1' β -Sitosterol-3-O-β-D-glucopyranosid (HE7.1) CH3 24 25 27 CH3 13 B ng 3.2 So sánh ph NMR c a h p ch t HE7.1 v i β-Sitosterol-3- V trí CDEPT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 -CH2-CH2>CH-CH2=C< =CH-CH2>CH>CH>C< -CH2-CH2>C< >CH-CH2-CH2>CH-CH3 -CH3 >CH-CH3 -CH2-CH2>CH>CH-CH3 -CH3 -CH2-CH3 1’ >CH- O-D-glucopyranosid[12, 16] 13 H-NMR, ppm C-NMR, ppm HE7.1 HE7.1 β-Sitosterol [12, 16] (DMSO-d6) (DMSO-d6) 36,80 37,1 29,23 31,5 3,62 (1H, m) 70,07 71,5 39,33 42,1 140,10 140,1 5,31 (1H, brd) 121,19 121,1 31,34 31,8 31,34 31,8 49,58 50,1 36,17 36,3 20,56 21,0 38,29 39,6 41,82 42,1 56,15 56,5 23,82 24,2 27,74 28,1 55,41 55,8 0,63 (3H, s) 11,62 11,2 0,89 (3H, s) 19,04 19,3 35,44 36,0 18,57 18,7 33,33 33,8 25,45 26,0 45,13 45,6 28,69 29,0 18,90 19,0 19,65 19,7 22,59 23,0 11,74 11,9 D-glucose 4,83 (2H, d, J=5,0) 100,79 104,0 14 2’ 3’ 4’ 5’ 6’ >CH>CH>CH>CH-CH2- 4,80 (1H, dd, J=2,5; 5,0) 73,43 76,74 76,69 76,93 61,06 74,1 76,8 70,6 76,8 61,8 Hình 3.1: Ph c ng hư ng t h t nhân 1H-NMR (DMSO-d6) c a HE7.1 Hình 3.2: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR (DMSO-d6) c a HE7.1 15 3.1.3 Kh o sát c u trúc hóa h c c a HE8.1 H p ch t HE8.1 (120 mg) ñư c l p t phân đo n HE8 Phân đo n thu ñư c sau s c ký c t cao eter d u h a, có ñ c 16 - Ph HSQC (CD3OD) (hình 3.15), ph HMBC (CD3OD) (hình 3.16) Bi n lu n c u trúc c a HE8.1 ñi m sau: * Xác ñ nh HE8.1 m t cerebrosid - H p ch t d ng b t vơ đ nh hình, màu tr ng - Ph - SKLM cho m t v t nh t màu tím đen có Rf 0,38 v i h gi i ly carbon t c p >C=O amid (δC 177,2; C-1’), b n carbon olefin –CH= cloroform : metanol (8: 2), hi n hình b ng thu c th H2SO4 30%, (δC 130,6; 131,1; 131,9; 134,3), carbon lo i >CH-O- (δC 77,96 - nung nóng b n 71,6), hai carbon lo i –O-CH2 (δC 62,7; 69,8), m t carbon lo i -CH- - Ph HR-ESI-LC-MS h p ch t HE8.1 (hình 3.7) cho mũi ion gi NH (δC 54,7), nhóm metylen –CH2- (δC 23,0-33,0) hai carbon phân t v i m/z 736,5346 [M+Na]+ (∆ = 1,2 mili mass), ng v i –CH3 n m 13 C k t h p v i DEPT-NMR cho th y h p ch t có m t cu i m ch dài (δC 14,5) H-NMR xu t hi n tín hi u c a b n proton olefin t i δH 5,4-5,8; công th c phân t C40H75NO9Na V y MHE8.1 C40H75NO9 - Ph - Ph HR-ESI-LC-MS c a m nh HE8.1-B (hình 3.8) cho mũi ion gi proton c a nhóm metylen –CH2– t i δC 1,33-1,29 proton phân t v i m/z 298,2744 [M+H]+ (∆ = 0,4 mili mass), ng v i cơng c a hai nhóm metyl –CH3 (n m cu i hai m ch dài) δC 0,91 [6H (t, δH 4,27 th c phân t C18H36NO2 V y MHE8.1-B C18H35NO2 8,6 Hz)] Ph - Ph GC-MS c a m nh HE8.1-A (hình 3.9) cho bi t ester béo [1H (d, 8,4 Hz, H-1’’)] tương ng v i m t carbon anomer có δC metyl 2-hydroxyhexadecanoat C17H34O3 v i th i gian lưu tR 21,262 103,0 nên phân t h p ch t HE8.1 có ch a m t phân t ñư ng V y MHE8.1-A C17H34O3 H-NMR cho th y có m t proton anomer V y có th k t lu n r ng h p ch t HE8.1 m t cerebrosid - Ph GC-MS c a m nh HE8.1-C (hình 3.10) cho bi t acid béo ph n ceramid g m hai dây dài n i v i ngang qua n i amid, acid (9E)-tetradecenoic C14H26O2 v i th i gian lưu tR 19,784 V y c u trúc HE8.1 cịn ch a m t phân t đư ng hai n i đơi MHE8.1-C C14H26O2 Tuy nhiên d li u ph NMR chưa cho thông tin c th đ xác - Ph UV-Vis (hình 3.7) h p ch t HE8.1: ph ESI-MS v i ñ u ñ nh ñư c chi u dài, c u trúc c a hai m ch carbon v trí c a n i dò UV cho bi t h p ch t HE8.1 không h p thu UV, v y h p ch t đơi mà ph i d a vào d li u MS GC-MS c a s n ph m thu HE8.1 s khơng có n i đơi liên h p đư c sau th c hi n ph n ng th y gi i HE8.1 ph n ng oxy - Ph H-NMR (CD3OD) (hình 3.11), trình bày b ng 3.3; ph 13 C-NMR (CD3OD) (hình 3.12), ph DEPT (hình 3.13), trình bày b ng 3.3 - Ph COSY (hình 3.14) hóa HE8.1-B * Xác đ nh c u trúc c a m nh HE8.1-A HE8.1-A s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng th y gi i HE8.1 v i dung môi n-hexan K t qu GC-MS c a s n ph m HE8.1-A este methyl 2-hydroxyhexadecanoat C17H34O3 (M 17 = 286) (Hình 3.7), v i đ tương h p 18 RMF = 888 V y có th xác ñ nh ñư c chi u dài c a m ch carbon đ u tiên có 16 carbon có m t nhóm ceton -C=O v trí 1’ m t nhóm –OH v trí 2’, u s n ph m HE8.1-C acid tetradeca-9-en-oic (C14H26O2, M = 226) (hình 3.10), v i đ tương h p RMF = 781 [ Theo tài li u tham kh o [51] phân tích acid béo thu đư c sau ph n ng oxy hóa s s phù h p v i tương quan HMBC c a H-3’ [1,75 (m)] v i C-2’ d ng c t DB-1, nhiên v i u ki n phịng thí nghi m GC-MS (73,13) c a b mơn Hóa h u s d ng c t HP-5 (là c t chuyên d ng ñ * Xác ñ nh c u trúc c a m nh HE8.1-B phân tích tinh d u) nên ñ tương h p gi a ph c a thư vi n ph HE8.1-B s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng th y gi i HE8.1 v i dung môi cloroform K t qu LC-MS c a c a h p ch t th p 800, v y k t qu GC-MS c a s n ph m HE8.1-C có th ch p nh n ñư c] s n ph m HE8.1-B cho mũi ion gi phân t m/z 298,2744 [M+H]+ V y m nh HE8.1-B m t aminoalcol có 18C v i hai nhóm – (∆ = 0,4 mili mass), phù h p v i công th c phân t C18H35NO2 (M = OH t i v trí s 3, m t nhóm –NH2 t i v trí s 2, hai n i đơi 297) (hình 3.8) V y có th xác ñ nh ñư c chi u dài c a m ch carbon trí C-4 C-13 (do H-13 H-14 ch ng ch p lên cho tín hi u th hai có 18C; d a tương quan HMBC c a H-2 [4,00 (dd, 3,7; d ng mũi ña t i δH 5,43 có h ng s ghép J nh nên n i đơi t i C-13 có 7,4)] v i C-3 (72,9), H-2 v i C-1 (69,8), H-1 [3,72 (dd; 3,4; 10,2)] c u hình Z) v i C-2 (54,7) tương quan COSY c a H-2 v i H-1, H-2 v i H-3 * Xác ñ nh lo i đư ng v trí đư ng g n vào ceramid [4,14 (m)] cho th y HE8.1-B mang hai nhóm –OH - Ph m t nhóm –NH2 v trí và v H-NMR, cho th y H-1” [4,27 (d; 8,4)], H-2” [3,20 (t; 9,7; 5,6)], H-3” [3,34 (t; 8,11; 9,7)], v y ñư ng phân t h p ch t v trí s H p ch t HE8.1 có hai n i đơi C=C c u trúc c a HE8.1 đư ng glucose có c u hình β (b ng 3.1) Ph HMBC cho m nh HE8.1-A khơng có s hi n di n c a n i đơi v y hai n i đơi th y có tương quan gi a proton anomer H1’’ (δH 4,27 ) v i carbon s n m C-1 (δC 69,8), v y phân t đư ng s g n vào v trí C-1 c a ceramid m ch carbon c a m nh HE8.1-B; d a vào tương quan HMBC c a H-2 v i C-4 (131,2), H-3 v i C-4, H-6 [2,07 (m)] v i C-5 * K t lu n c u trúc hóa h c c a h p ch t HE8.1 (134,4), H-5 [5,48 (d; 16,3)] v i C-3, H-4 [5,72 (dd; 7,6;16,3)] v i C- HE8.1 m t cerebrosid v i ph n ceramid g m hai dây dài 16C 3, v y n i đơi ñ u tiên ñư c xác ñ nh t i v trí C-4, H-4 H-5 18C n i v i qua m t n i amid, có h ng s ghép J = 16,3 nên n i đơi C-4 có c u hình E Cịn m t g n v trí s 2, n i đơi n a khơng th xác đ nh đư c c th v trí khơng cho tương đơi C-4, C-13 v i c u hình l n lư t E, Z M t phân t ñư ng quan HMBC, nên mu n xác đ nh n i đơi ph i ti n hành ph n ng glucose có c u hình β g n vào ceramid t i v trí C-1 b ng n i O- oxy hóa n i đơi m nh HE8.1-B b ng dung d ch KMnO4/H+ glucosid * HE8.1-C s n ph m thu đư c sau trích dung d ch sau ph n ng oxy hóa HE8.1-B v i dung môi cloroform K t qu GC-MS c a dây 16C có m t nhóm –OH dây 18C có m t nhóm –OH v trí s hai n i 19 - Ph 20 MS c a HE8.1 cho mũi ion gi phân t NH2 m/z 736,5346 [M+Na]+ (∆ = 1,2 mili mass), phù h p v i công th c phân t C40H75NO9 (M = 713) (hình 4.7) đư c thiên nhiên thư ng có mang b n nhóm –OH t i v trí C-2, 15 17 Các tài li u tham kh o [46,47,48,49,50] cho th y cerebrosid cô l p C-3, C-4, C-2’ n cho phân t 12 HO 16 14 13 18 OH có b n carbon th tính t i C-2, CHE8.1-B (C18H35NO2) 3, C-4 C-2’ v i c u hình 2S, 3S, 4R 2’R Tuy nhiên, h p ch t HE8.1 t i C-4 có m t n i đơi s kh m t phân t nư c nên lúc tâm th tính ch cịn l i C-2, C-3, C-2’ v i c u hình 2S, 3R 2’R (do có xu t hi n n i đơi t i v trí s nên làm cho th t 1''' 3''' HOOC ưu tiên s b thay ñ i làm cho C-3 s khơng cịn mang c u hình S n a 5''' 7''' 4''' 2''' 6''' 13''' 11''' 9''' 10''' 8''' 12''' 14''' mà s mang c u hình R [46,48,49,50]) So sánh d li u ph NMR c a h p ch t HE8.1 v i h p ch t Soya-cerebroside I [47] tương ñ ng; ngo i tr h p ch t HE8.1 có hai n i đơi cịn Soya-cerebroside I có hai n i đơi Đ ngh HE8.1-C (C14H26O2) cho th y có m C-4 C-13, C-4 C-8 (b ng 3.3) c u trúc c a h p ch t HE8.1 là: 1-O-β-D- O HO glucopyranosyl-(2S,3R,2’R,4E,13Z)-2-N-[2'hydroxyhexadecanoylamino]-octadeca-4,13-dien-1,3-diol O OH 1'' (CH)12CH3 2' 16' 2' 4' OH HE8.1-A (C17H34O3) 10 10 OH 3' O 1' 2'' 3'' O HN O 5'' HO HO Scifinder t i ñ i h c Saskatchewan, Canada (tháng 7/2011) 1' 3' 4'' H p ch t HE8.1 h p ch t m i, ñã ñư c ki m tra b ng ph n m m H3C OH 6'' C u trúc h p ch t Soya cerebroside I [47] (CH2)7CH3 21 22 O HO HO HO 3" 2,07 (m) 33,7 18 7-11 1,29-1,33 (m) 30,2-30,8 - 12 1,29-1,33 (m) 33,1 - 5,43 (t; 5,3) 129,9 12 5,43 (t; 5,3) 131,9 13, 15 15 1,29-1,33 (m) 33,3 - 1,29-1,33 (m) 23,7 - 0,91 (t; 8,6) 14,5 17 - 177,2 - 2’ 3,98 (dd) 73,1 1’, 3’ 3’a 1,75 (m) 35,9 1’, 2’, 4’ 3’b 1,58 (m) - - 4’a 1,30 (m) 26,2 - 4’b 1,41 (m) - - 5’-15’ 1,29-1,33 (m) 23,0-33,0 - 16’ 1’ O 0,91 (t; 8,6) 14,5 15’ HMBC H 13C 1’’ 4,27 (d; 8,4) 104,7 1, 2’’ 10' 8' 13' 12' 14' 10 15' 4' 16' 18 5" O 2" 3, 11' 9' 7' 6' 2' 134,4 17 HN 5' 3' 5,48 (d; 16,3) 14 6" 4" OH 13 1' 17 11 12 15 13 1" 14 HO OH Tương quan HMBC HE8.1 Công th c c u t o h p ch t HE8.1 B ng 3.3: S li u ph c a h p ch t HE8.1 HE8.1 No 16 δH (CD3OD) δC (CD3OD) 2’’ 3,20 (t; 9,67; 5,6) 75,0 1’’, 3’’ 1a 4,12 (m) 69,8 1’’, 3’’ 3,34 (t; 8,11; 9,7) 78,0 2’’, 4’’ 1b 3,72 (dd; 3,4; 10,2) - - 4’’ 3,27 (m) 71,6 3’’, 5’’ 4,0 (dd, 3,7; 7,4) 54,7 1’, 1, 3, 5’’ 3,30 (m) 78,0 4’’, 6’’ 4,14 (m) 72,9 1, 2, 6’’a 3,87 (d; 11,8) 62,7 5’’ 5,72 (dd; 7,6;16,3) 131,2 2, 6’’b 3,70 (m) - - 23 24 3.2 Th ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư c a cao u ch t b n i Cao metanol cao eter d u h a, cao etyl acetat, cao metanol sơ ñ 2.1 ñã ñư c g i th ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) K t q a (b ng giá tr I%) đư c trình bày b ng 3.5 Nh n xét Các cao ñ u khơng cho th y có ho t tính dòng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) Trong đó, t cao eter d u h a, lu n văn l p đư c h p Hình 3.11: Ph c ng hư ng t h t nhân 1H-NMR c a HE8.1 ch t acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) h p ch t ñã ñư c ch ng minh có ho t tính kháng vài dịng t bào ung thư bi u bì ngư i ung thư vòm mũi HONE-1, ung thư vòm mi ng KB ung thư ñ i tràng HT29[22], kí sinh trùng s t rét Plasmodium falciparum dịng t bào MRC-5[64] Đi u có th lý gi i h p ch t HE2.2.4 hi n di n hàm lư ng h p ch t khơng có ho t tính v i nh ng dịng t bào ung thư th nghi m Hình 3.12: Ph c ng hư ng t h t nhân 13C-NMR c a HE8.1 25 26 K T LU N VÀ KI N NGH bi n ñây l n ñ u tiên h p ch t ñư c tìm th y có s hi n T 10,9 kg b t khô, thu hái khu sinh quy n r ng ng p m n C n Gi - TP HCM, ñã ñi u ch ñư c cao methanol thô (1,5 kg) T cao phân thành nh ng cao có đ phân c c khác cao eter d u h a (246,7g), cao etyl acetat (389,3g), cao metanol (800g), ph n l i mu i vơ Các cao đư c th nghi m ho t tính c ch vài dòng t bào ung thư Hela (ung thư c t cung), NCI-H460 (ung thư ph i), MCF-7 (ung thư vú) K t qu cho th y cao ñ u khơng có ho t tính c ch s phát tri n c a dòng t bào ung thư th nghi m T 246,7 gam cao eter d u h a, b ng s c ký c t silica gel l p l i nhi u l n, k t h p v i s c ký b n m ng l p đư c ch t s ch acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4); β-Sitosterol-3-O-β-D- glucopyranoside (HE7.1) 1-O-β-D-glucopyranosyl-(2S,3S,4E)-2N-[(2’R)-2'-hydroxyhexadecanoylamino-4-octadecadien-1,3-diol (HE8.1) C u trúc c a ch t ñã ñư c xác ñ nh b ng vi c k t h p phương pháp ph hi n ñ i ph c ng hư ng t h t nhân H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC HMBC H p ch t acid 3β-O-acetylursolic (HE2.2.4) ñã ñư c cô l p t i, qu c a Ilex paraguariensis (Maté)[17], trái tươi B n Ternstroemia japonica[46], Ilex affinis Ilex buxifolia[18], r Ficusmicrocarpa[22], r [70] Smith Craibiodendron henryi W W Eucalyptus globulus[28], Rabdosia japonica (Burm F.), Hara var Glaucocalyx (Maxim.) Hara[71] Dù ph di n B n i M t khác lu n văn ñã l p đư c h p ch t HE8.1 h p ch t m i, ñã ñư c ki m tra b ng ph n m m Scifinder t i ñ i h c Saskatchewan, Canada (tháng 7/2011) Các nghiên c u hóa h c cao cịn l i v n cịn đư c ti p t c th c hi n đ góp ph n minh ch ng cho tính đa d ng sinh h c c a khu h th c v t r ng ng p m n C n Gi TP HCM  ... bi t, h sinh thái trung gian gi a h sinh thái th y v c v i h sinh thái c n, h sinh thái nư c ng t h sinh thái nư c m n H sinh thái th c v t v i nhi u lo i cây, ch y u b n tr ng, m m tr ng, qu... ñ t m c tiêu tìm hi u thành ph n hóa h c thăm dị ho t tính sinh h c c a B n i - Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae) Đ I TƯ NG VÀ PH M VI NGHIÊN C U Trong lu n văn tơi sâu vào tách,... eter d u h a B n i Sonneratia ovata Bak (thu c h B n, Sonneratiaceae), thu hái C n Gi - TPHCM PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 4.1 Nghiên c u v lý thuy t - T ng quan v m t s loài h B n (Sonneratiaceae) -