Bài giảng Nghiên cứu đánh giá hoạt tính ức chế sự tăng sinh, di cư và xâm lấn của Prodigiosin trên dòng tế bào ung thư gan HEP3B in vitro - TS. Đỗ Minh Trung

Bài giảng Nghiên cứu đánh giá hoạt tính ức chế sự tăng sinh, di cư và xâm lấn của Prodigiosin trên dòng tế bào ung thư gan HEP3B in vitro do TS. Đỗ Minh Trung trình bày các nội dung chính sau: Đánh giá hoạt tính Prodigiosin ức chế sự tăng sinh tế bào ung thư Hep 3B; Đánh giá khả năng ức chế sự di cư và xâm lấn tế bào ung thư Hep 3B của prodigiosin. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm nội dung chi tiết.

HỘI NGHỊ KHOA HỌC NỘI KHOA TOÀN QUỐC 2020: NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ SỰ TĂNG SINH, DI CƢ VÀ XÂM LẤN CỦA PRODIGIOSIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƢ GAN HEP3B IN VITRO Báo cáo viên: TS Đỗ Minh Trung Đơn vị: Viện NC Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y Hà Nội – Tháng 12.2020 Đặt vấn đề o Prodigiosin (PG): C20H25N3O, KLPT: 323.4 Da o Hoạt tính PG: kháng khuẩn, kháng nấm, kháng lại tế bào ung thư o Wier.R.H et.al (1952): thử tác dụng kháng nấm Kết phục hồi 14 bệnh nhân o Campas.C et.al (2003): thử nghiệm PG mẫu 32 BN ung thư máu dòng lympho mãn tính, kết Prodigiosins gây chết dịng tế bào lympho o Maheswarappa.G et.al (2013): khả ức chế miễn dịch tế bào lympho thu nhận từ máu ngoại vi người Serratia marcescens Nguồn://fineartamerica.com/fe atured/1-serratia-marcescens  PG từ vi khuẩn tái tổ hợp: NC tách dòng và biểu PG E coli (Steven A Dauenhauer et.al.,1984); NC Biểu PG P putida (Andreas Domröse et.al., 2015)  Trong năm gần đây, prodigiosin nguồn tổng hợp Serratia sp, PG quan tâm nhiều  Hiện người ta phát nhiều tác dụng PG:  Kháng nhiều dòng tế bào ung thư  Ức chế miễn dịch  Gây apoptosis dòng tế bào ung thư tạo máu và không ảnh hưởng tới tế bào lành  Ức chế tăng sinh, di cư và xâm lấn tế bào ung thư (Zhang et.al.,2011; Yongze Liua et.al., 2018) Kháng ung thƣ  Con đƣờng axit hóa nội bào PG có khả kích thích kênh H+/ Cl- giúp tách rời vị proton,  Con đƣờng ứcchuyển chế chu kỳ tế bào gây axit nội bàotrong và cuối Vai trị hóa prodigiosin cuối pha apoptosis G1 thể qua kích tính sản sinh cyclin E, cdk2, cdk4, tất biểu hiệnphân cuốimảnh pha G1 từ  Con đƣờng ADN đến cuối chu kỳ tế bào Với có mặt đồng, chúng thúc đẩy q trình oxy hóa phân mảnh DNA Ngoài ra, PG vận chuyển vào tế  bào Connhanh đƣờng kích chóng vàhoạt đượccác tích caspase lũy nhân, cho phép PG tương tác với ADN PG có nguồn gốc từ Serratia marcescens báo cáo làm tăng nồng độ caspase-3 tế bào ung thư bạch cầu Ứng dụng PG  Kem chống nắng (Suryawanshi et.al (2015)  Công nghệ thực phẩm (Shahla Namazkar et.al (2013) PG đóng gói thành viên nang sấy khơ có sử dụng kappa-carrageenan và maltodextrin làm chất phủ Các viên nang áp dụng thành công cho sữa chua, sữa và đồ uống có ga  PG làm chất nhuộm (Alihosseini et.al (2008)  Điều trị kháng nấm lâm sàng (Lach, 1949)  PG làm chất tạo màu cho polyolefines (Ryazantseva, 2014) ảnh PGmàu sảnvới phẩm sấy khô VảiHình multifibers cácsau sắckhi tố màu đỏ từ Vibrio sp chủng KSJ45 Quá trình sinh tổng hợp PG PG tạo từ phản ứng MAP và MBC với xúc tác PigC và ATP Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá hoạt tính Prodigiosin ức chế tăng sinh tế bào ung thư Hep 3B Đánh giá khả ức chế di cư xâm lấn tế bào ung thư Hep 3B prodigiosin CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NC 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu  Chế phẩm Prodigiosin thu nhận từ dịch môi trường nuôi cấy vi khuẩn tái tổ hợp Serratia marcescens HVQY (Đề tài mã số 07.17/CNSHCB Học viện Qn y chủ trì)  Dịng Tế bào ung thư gan HEP3B, (ATCC, Mỹ) sử dụng làm mơ hình đánh giá hoạt tính PG Quy trình thu nhận PG 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Kết đánh giá hoạt tính PG đến khả tăng sinh tế bào ung thƣ quản HEP 3B Bảng giá trị đo OD tương ứng với nồng độ Nồng độ PG (μg/ml) 10 Giá trị đo OD (595nm)(Means ± SD) 0.7 0.6 0.0837 ± 0.0104 0.1326 ± 0.0255 0.1851 ± 0.0336 0.3562 ± 0.0379 OD (595nm) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.4074 ± 0.0186 0.4787 ± 0.0202 0,5 0.4887 ± 0.0097 0,25 0.4807 ± 0.0106 DMSO 0.4894 ± 0.0203 Đối chứng dƣơng 0.5765 ± 0.0828 0.1 10 0.5 0.25 DMSO DC Nồng độ PG (μg/ml) Biểu đồ kết thí nghiệm MTT mẫu HEP 3B Kết đánh giá hoạt tính PG đến khả tăng sinh tế bào ung thƣ gan HEP 3B Tỷ lệ tế bào sống tương ứng với nồng độ 10 Tỷ lệ tế bào sống (%) 14.5 23 31.5 61.7 70.7 84.8 83 80 83.4 70.7 70 % Tế bào sống Nồng độ PG (μg/ml) 90 61.7 60 50 40 31.5 30 23 y = -7.8045x + 87.549 R² = 0.9729 IC 50= 4.8 20 10 14.5 0 10 83 Nồng độ PG (μg/ml) 0,5 84.8 0,25 83.4 Phương trình hồi quy tuyến tính sau 24 tiếp xúc PG 12 Kết đánh giá hoạt tính PG đến khả di cƣ xâm lấn tế bào ung thƣ gan HEP 3B Hình ảnh tế bào HEP 3B tiếp xúc PG 140 Diện tích (μm2) Biểu đồ diện tích di cư nồng độ tế bào HEP 3B 120 100 [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% 80 0h 60 [VALUE]% 24h 48h 40 [VALUE]% 20 Đối chứng dương Nồng độ PG (μg/ml) Bảng thống kê diện tích xâm lấn Nồng độ PG (μg/ml) Diện tích (μm2) 24 48 S1 (μm2) % S2 (μm2) % S3 (μm2) % 720925,64 100 650416.33 90.2 802461.82 111.3 634932,7 100 649833.89 102.3 736655.31 116.0 69008,53 100 584453.11 84.7 537903.145 77.9 DC 748165,96 100 382428.54 51.1 165835.66 22.2 3.4 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH CỦA PG TRÊN z DỊNG TẾ BÀO UNG THƢ THANH QUẢN HEP Kết đánh giá hoạt tính pG dịng tb ung thƣ quản HEP DMSO DC + PG 0.25 PG 0.5 PG PG PG PG PG PG10 Hình ảnh tế bào HEP tiếp xúc với PG Kết đánh giá hoạt tính PG dòng tb ung thƣ quản HEP Tỷ lệ tế bào sống tương ứng với nồng độ 10 Giá trị đo OD (595nm)(Means ± SD) 0,1436 ± 0,0106 0,1796 ± 0,0187 0,3202 ± 0,0317 0,5009 ± 0,0288 0,5101 ± 0,0584 0.2 0,5511 ± 0,0713 0.1 0,5 0,5312 ± 0,0717 0,25 0,5578 ± 0,0599 DMSO 0,6786 ± 0,0577 Đối chứng dƣơng 0,5962 ± 0,0154 0.8 0.7 0.6 OD (595nm) Nồng độ PG (μg/ml) 0.5 0.4 0.3 10 0.5 0.25 DMSO Nồng độ PG (μg/ml) Kết thí nghiệm MTT mẫu HEP ĐC Kết đánh giá hoạt tính PG dịng tế bào ung thƣ quản HEP Tỷ lệ tế bào sống tương ứng với nồng độ Tỷ lệ tế bào sống (%) 10 21,16 26,47 47,18 73,81 90 82.2 78.28 75.17 60 47.18 50 40 30 75,17 20 81,21 10 0,25 73.81 70 0,5 81.21 80 % Tế bào sống Nồng độ PG (μg/ml) y = -6.6506x + 87.079 R² = 0.9386 IC 50= 5.6 26.47 21.16 78,28 82,2 10 Nồng độ PG (μg/ml) Phương trình hồi quy tuyến tính sau 24 tiếp xúc PG 12 Kết đánh giá hoạt tính PG đến khả di cƣ xâm lấn tế bào ung thƣ quản HEP in vitro Hình ảnh tế bào HEP tiếp xúc PG 200 160 Diện tích (μm2) Biểu đồ diện tích di cư nồng độ tế bào HEP2 [VALUE]% 180 140 120 100 [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% 80 [VALUE]% [VALUE]% [VALUE]% 24 48 60 40 [VALUE][VALUE] % % 20 Đối chứng dương Nồng độ PG (μg/ml) Bảng thống kê diện tích xâm lấn Nồng độ PG (μg/ml) Diện tích (μm2) 24 48 S1 (μm2) % S2 (μm2) % S3 (μm2) % 521307.71 100 574438 110.2 914004.38 175.3 458758.89 100 359867.05 78.4 587666.65 128.1 519896.49 100 435013.78 83.7 513939.64 98.9 DC 561296.75 100 156953.73 28.0 162077.37 28.9 Kết đánh giá tác dụng ức chế tế bào Vero:  Xâm lấn và di khối u ác tính là giai đoạn quan trọng tiến triển khối u Chìa khóa để kiểm sốt phát triển khối u là ức chế tăng sinh tế bào ung thư và di  PG có khả ức chế tăng sinh, di cư, xâm lấn tế bào ung thư HEP HEP 3B  Yongze Liu et.al., (2018) chứng minh PG có khả ức chế tăng sinh, xâm lấn và di cư của tế bào ung thư vòm họng  Trong nghiên cứu Campas và CS chứng minh PG gây apoptosis tế bào lympho B và T mẫu bệnh bạch cầu lympho mãn tính  Montaner và cộng cho thấy PG gây apoptosis tế bào ung thư biểu mô đại trạng người DLD-1 SW-620, HGT-1 KẾT LUẬN Đánh giá đƣợc khả ức chế prodigiosin dòng tế bào ung thƣ HEP 3B o PG ức chế sinh trưởng tế bào ung thư, làm biến đổi hình dạng tế bào ung thư sau 24 tiếp xúc o Giá trị 50% (IC50) dòng tế bào HEP 3B là: 4,8 μg/ml Đánh giá đƣợc khả ức chế xâm lấn, di cƣ PG dòng tế bào ung thƣ HEP 3B o PG có hoạt tính ức chế di cư và xâm lấn tế bào HEP HEP 3B nồng độ thử nghiệm o Sau 48 thử nghiệm, dòng tế bào HEP HEP 3B diện tích che phủ bề mặt dụng cụ đĩa nuôi cấy bị giảm so với nhóm đối chứng có ý nghĩa thống kê với p < 0,05 Xin trân trọng cảm ơn ! Nhóm nghiên cứu: Đỗ Minh Trung, Đỗ Quyết Hồ Anh Sơn, Phạm Thế Tài Nguyễn Lĩnh Toàn, Đỗ Thị Tuyên Mai Thị Minh Ngọc, Nguyễn Thị Ngọc Hà HỘI NGHỊ KHOA HỌC NỘI KHOA TOÀN QUỐC 2020 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ SỰ TĂNG SINH, DI CƢ VÀ XÂM LẤN CỦA PRODIGIOSIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO UNG THƢ GAN HEP3B IN VITRO Báo cáo viên: TS Đỗ Minh Trung Đơn vị: Viện NC Y Dược học Quân sự, Học viện Quân y Hà Nội – Tháng 12.2020 ... ATP Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá hoạt tính Prodigiosin ức chế tăng sinh tế bào ung thư Hep 3B Đánh giá khả ức chế di cư xâm lấn tế bào ung thư Hep 3B prodigiosin CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP... thư và di  PG có khả ức chế tăng sinh, di cư, xâm lấn tế bào ung thư HEP HEP 3B  Yongze Liu et.al., (2018) chứng minh PG có khả ức chế tăng sinh, xâm lấn và di cư của tế bào ung thư vòm... Đỗ Thị Tuyên Mai Thị Minh Ngọc, Nguyễn Thị Ngọc Hà HỘI NGHỊ KHOA HỌC NỘI KHOA TOÀN QUỐC 2020 NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ SỰ TĂNG SINH, DI CƢ VÀ XÂM LẤN CỦA PRODIGIOSIN TRÊN DÒNG TẾ BÀO