Mục đích của nghiên cứu là đánh giá tác dụng của bột chiết sâm Việt Nam trồng 6 tuổi trên tổn thương oxy hóa tế bào não gây bởi stress cô lập. Bột chiết nhân sâm trồng 6 tuổi và majonosid R2 (hoạt chất chính trong sâm Việt Nam) được sử dụng như chất đối chiếu.
www.vanlongco.com cứu cung cấp chứng tác dụng chống trầm cảm, tác dụng biết đến hoạt chất Kết luận l-THP thể tác dụng làm giảm hành vi trầm cảm chuột không chịu stress test treo đuôi mức liều 0,2 0,4 mg/kg Trên chuột chịu stress nhẹ, kéo dài, không báo trước, sử dụng l-THP liều 0,2 mg/kg tuần giúp đảo ngược ảnh hưởng stress đến hành vi liên quan đến trầm cảm bao gồm giảm thích thú với dung dịch saccharose, giảm hành vi chải lông tăng trạng thái bất động test treo đuôi Để làm sáng tỏ chế liên quan đến tác dụng chống trầm cảm l-THP, cần thực thêm nghiên cứu dược lý phân tử hoạt chất Tài liệu tham khảo Mathers C., Fat D M., Boerma J T (2008), The global burden of disease: 2004 update, World Health Organization, Geneva Yan H C., Cao X., Das M., Zhu X H., Gao T M (2010), Behavioral animal models of depression, Neuroscience Bulletin, 26(4), 327-37 Rosenzweig-Lipson S., Beyer C E., Hughes Z A., Khawaja X., Rajarao S J., Malberg J E., Rahman Z., Ring R H., Schechter L E (2007), Differentiating antidepressants of the future: efficacy and safety, Pharmacology & Therapeutics, 113(1), 134-53 Lê Dỗn Trí, Đỗ Văn Qn, Nguyễn Thu Hằng, Nguyễn Quốc Huy, Nguyễn Hoàng Anh (2014), Đánh giá tác dụng giải lo âu động vật thực nghiệm l-tetrahydropalmatin, Tạp chí Dược học, 54(464), 64 - 68 Qu Z., Zhang J., Yang H., Huo L., Gao J., Chen H., Gao W (2016), Protective effect of tetrahydropalmatine against D-galactose induced memory impairment in rat, Physiology & Behavior, 154, 114-125 Lee B., Sur B., Yeom M., Shim I., Lee H., Hahm D H (2014), L-tetrahydropalmatine ameliorates development of anxiety and depression-related symptoms induced by single prolonged stress in rats, Biomolecules & Therapeutics (Seoul) 22(3), 213-22 Gronli J., Murison R., Fiske E., Bjorvatn B., Sorensen E., Portas C M., Ursin R (2005), Effects of chronic mild stress on sexual behavior, locomotor activity and consumption of sucrose and saccharine solutions, Physiology & Behavior, 84(4), 571-7 Steru L., Chermat R., Thierry B., Simon P (1985), The tail suspension test: A new method for screening antidepressants in mice, Psychopharmacology, 85(3), 367-370 Frisbee J C., Brooks S D., Stanley S C., d’Audiffret A C (2015), An unpredictable chronic mild stress protocol for instigating depressive symptoms, behavioral changes and negative health outcomes in rodents, Journal of Visualized Experiments, 106(12), doi: 10.3791/53109 10 Phạm Đức Vịnh, Nguyễn Thu Hằng, Đỗ Văn Quân, Lê Ngọc Quỳnh Giao, Nguyễn Hoàng Anh (2016), Nghiên cứu tác dụng giải lo ltetrahydropalmatin động vật thực nghiệm gây lo âu phương pháp nuôi cô lập, Tạp chí Dược liệu, 21(1+2), 106 - 110 11 Krishnan V., Nestler E J (2011), Animal models of depression: molecular perspectives, Current Topics in Behavioral Neurosciences, 7, 121-47 12 Frazer A., Morilak D A (2005), What should animal models of depression model?, Neuroscience & Biobehavioral Reviews, 29(4-5), 515-23 13 Willner P (2005), Chronic mild stress (CMS) revisited: consistency and behavioural-neurobiological concordance in the effects of CMS, Neuropsychobiology, 52(2), 90110 14 American Psychiatric Association (2013), Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition (DSM-5), American Psychiatric Association, Arlington 15 Liu G Q., Algeri S., Garattini S (1982), D-Ltetrahydropalmatine as monoamine depletor, Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie, 258(1), 39-50 16 Liu X P., Yang Z., Li R P., Xie J., Yin Q., Bloom A S., Li S J (2012), Responses of dopaminergic, serotonergic and noradrenergic networks to acute levo-tetrahydropalmatine administration in naive rats detected at 9.4 T, Magnetic Resonance Imaging, 30(2), 261-70 Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 (Trang 93 -98) KHẢO SÁT TÁC DỤNG CỦA BỘT CHIẾT SÂM VIỆT NAM TRỒNG TRÊN TỔN THƯƠNG OXY HÓA TẾ BÀO NÃO GÂY BỞI STRESS CƠ LẬP Nguyễn Hồng Minh1, Nguyễn Thị Thu Hương1,*, Dương Hồng Tố Quyên2, Nguyễn Minh Đức3,4 Trung tâm Sâm Dược liệu Hồ Chí Minh; 2Bệnh viện Y Học Cổ truyền Hồ Chí Minh; Khoa Dược, Đại Học Y Dược Hồ Chí Minh; 4Khoa Dược, Đại Học Tơn Đức Thắng Hồ Chí Minh *Email: huongsam@hotmail.com (Nhận ngày 14 tháng năm 2017) Tóm tắt Mục đích nghiên cứu đánh giá tác dụng bột chiết sâm Việt Nam trồng tuổi tổn thương oxy hóa tế bào não gây stress lập Bột chiết nhân sâm trồng tuổi majonosid R2 (hoạt chất sâm Việt Nam) sử dụng chất đối chiếu Kết cho thấy stress cô lập gây tổn thương peroxy hóa tế bào não việc cho uống bột chiết sâm Việt Nam trồng liều thử nghiệm 200 mg/kg 500 mg/kg 14 ngày làm giảm hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 93 www.vanlongco.com não 23,5% (p < 0,05), 34,6% (p < 0,05) hàm lượng glutathion (GSH) não tăng 60,6% (p < 0,05), 63,2% (p < 0,05), đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng stress Bột chiết nhân sâm liều 200 mg/kg, 500 mg/kg 14 ngày làm giảm hàm lượng MDA não 24% (p < 0,05), 30,4% (p < 0,05) hàm lượng GSH não tăng 110,5% (p < 0,05), 68,6% (p < 0,05), đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng stress Kết nghiên cứu cho thấy bột chiết sâm Việt Nam trồng có tác dụng bảo vệ tế bào não, chống lại tổn thương oxy hóa gây stress lập Từ khóa: Sâm Việt Nam trồng, Nhân sâm, Stress cô lập, Malonyl dialdehyd (MDA), Glutathion (GSH), Panax vietnamensis, P.ginseng Summary Study on the Effect of Cultivated Vietnamese Ginseng Extract on Social Isolation Stress–Induced Oxidative Damage in Mouse Brain The aim of this study was designed to investigate the effect of total powdered extract from six-year-old cultivated Vietnamese ginseng (Panax vietnamensis Ha et Grushv.) on social isolation stress-induced oxidative damage in mouse brain Simultaneously, six-year-old cultivated Panax ginseng powdered extract was used as a reference Majonoside R2, a major component of Vietnamese ginseng also was used as a reference The result revealed that social isolation stress induced oxidative damage in the mouse brain and oral administration with Vietnamese ginseng extract at doses of 200 mg/kg and 500 mg/kg in 14 days expressed a decrease in malonyl dialdehyd levels by 23.5% (p < 0.05), 34.6% (p 98% Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 www.vanlongco.com (theo HPLC) cung cấp từ Ban nghiên cứu khoa học – Thư viện Khoa Dược, Đại học Y Dược Hồ Chí Minh 2.2 Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực khỏe mạnh chủng Swiss albino (4 -5 tuần tuổi) trọng lượng 18 – 20 g cung cấp Viện Vaccin & Sinh Phẩm Y Tế Nha Trang, ni theo chu kì 12 sáng - tối; chuột ni ổn định tuần trước thử nghiệm Chuột nuôi đầy đủ thức ăn: thực phẩm viên cung cấp Viện Vaccin & Sinh Phẩm Y Tế Nha Trang, có bổ sung nước uống Thể tích cho chuột uống hay tiêm phúc mạc 10 ml/kg thể trọng chuột 2.3 Phương pháp nghiên c u 2.3.1 Gây mơ hình stress tâm lý chuột nhắt trắng [4] Chuột thí nghiệm chia thành nhóm: Nhóm bình thường nhóm ni lập Nhóm bình thường: 7-8 chuột ni lồng nuôi c ng điều kiện thời gian với nhóm stress Nhóm bị gây stress lập: Chuột nuôi cô lập (mỗi lồng nuôi riêng biệt với kích thước lồng 22 x 34 x 25 cm) 4-5 tuần Mỗi lồng nuôi ngăn cách bìa cứng để tránh có tiếp xúc chuột thị giác Các lồng chuột ni lập đặt phịng thí nghiệm riêng biệt để hạn chế âm nhiễu với nhiệt độ phòng khoảng 26 ± 1oC, độ ẩm 75 ± 5% chế độ chiếu sáng theo chu kì 12 sáng - tối Vào tuần thứ chuột hai nhóm chia lơ ngẫu nhiên tiêm phúc mạc majonosid R2 liều 10 mg/kg (i.p) ngày hay cho uống bột chiết sâm Việt Nam bột chiết nhân sâm hai liều 200 mg/kg 500 mg/kg 14 ngày Lô chứng cho uống nước cất c ng điều kiện thử nghiệm Lần cuối sau sử dụng mẫu thử 60 phút, chuột bị giết để tách lấy não đem xác định hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) glutathion (GSH) 2.3.2 Định lượng malonyl dialdehyd (MDA) glutathion (GSH) não chuột Chuột gây chết nhanh tách não chuột (toàn não) điều kiện nhiệt độ lạnh 0-5oC Tạp chí Dược liệu, tập 22, số 2/2017 Rửa mẫu nước muối sinh lý lạnh bảo quản mẫu não -20oC định lượng Nghiền đồng thể mẫu não dung dịch đệm phosphat (PBS) mM theo tỉ lệ 1: 10 (não : đệm) với tốc độ 13.000 vòng phút nhiệt độ – 5oC Lấy dịch đồng thể để định lượng MDA GSH - Định lượng MDA: lấy 0,5 ml dịch đồng thể cho vào 1,5 ml PBS mM, ủ 37oC 15 phút sau kết thúc phản ứng với ml dung dịch acid tricloacetic 10% Ly tâm 10.000 vòng phút nhiệt độ - 5oC, lấy ml dịch cho vào ml thuốc thử acid thiobarbituric 0,8% cho phản ứng 95oC 15 phút Làm lạnh nhanh ống nghiệm sau tiến hành đo quang bước sóng λ = 532 nm Hàm lượng MDA (nM/ml) tính theo phương trình hồi quy tuyến tính chất chuẩn MDA: y = 0,042x + 0,007 (R2 = 0,986) Sau tính nồng độ MDA (nM/ml dịch đồng thể) suy hàm lượng MDA (nM/g protein): C = (CMDA (nM/ml dịch đồng thể) * 1000)/Cprotein - Định lượng GSH: lấy ml dịch đồng thể cho vào 1,5 ml PBS mM, ủ 37oC 15 phút sau kết thúc phản ứng với ml dung dịch acid tricloacetic 10% Ly tâm 10.000 vòng phút nhiệt độ -5oC Lấy ml dịch cho vào 1,8 ml dung dịch đệm phosphat- EDTA 50 mM, tiếp tục thêm vào 0, ml thuốc thử Ellman (5-5'dithiobis[2-nitrobenzoic acid]) 10 mM; để hổn hợp phản ứng sau phút, tiến hành đo quang với bước sóng λ = 412 nm Hàm lượng GSH (nM/ml) tính theo phương trình hồi quy tuyến tính chất chuẩn GSH: y = 0,008x + 0,042 (R2 = 0,997) Sau tính nồng độ GSH (nM/ml dịch đồng thể) suy hàm lượng GSH (nM/g protein): C = (CGSH (nM/ml dịch đồng thể) * 1000)/Cprotein 2.3 Đánh giá kết Các số liệu biểu thị trị số trung bình: Mean ± SEM (Standard error of the mean – sai số chuẩn giá trị trung bình) Xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One- Way ANOVA với hậu kiểm Dunnett test (Sigma Stat 3.5) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% p < 0,05 95 www.vanlongco.com Kết - Bàn luận 3.1 Tác dụng bột chiết sâm Việt Nam majonosid R2 hàm lượng malondialdehyd (MDA) não chuột bị stress Hình Hình cho thấy địa chuột bình thường (khơng bị stress), bột chiết sâm Việt Nam hay bột chiết nhân sâm liều uống 200 mg/kg hay 500 mg/kg trọng lượng chuột sau 14 ngày majonosid R2 tiêm phúc mạc ngày không làm thay đổi hàm lượng MDA GSH não chuột đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý Chuột bị gây stress cô lập uống nước cất (lơ chứng stress) có hàm lượng MDA não tăng 31,4% (p < 0,05) hàm lượng GSH giảm 35% (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng sinh lý Điều chứng tỏ bị stress tâm lý ảnh hưởng đến trình hình thành gốc tự thể, làm gia tăng q trình oxy hóa lipid màng tế bào não chuột Khi điều trị với bột chiết sâm Việt Nam liều uống 200 mg/kg hay 500 mg/kg trọng lượng chuột sau 14 ngày, hàm lượng MDA não chuột giảm 23,5% (p < 0,05), 24,6% (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng stress Đồng thời với liều làm tăng hàm lượng GSH 60,6% (p < 0,05), 63,2% (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Khi điều trị với bột chiết nhân sâm liều 200 mg/kg, 500 mg/kg hàm lượng MDA não giảm 24% (p < 0,05), 30,4% (p < 0,05) so với lô chứng stress; hàm lượng GSH tăng 110,5% (p < 0,05), 68,6% (p < 0,05) đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng stress So sánh thống kê hàm lượng MDA, GSH não chuột lô uống bột chiết sâm Việt Nam bột chiết nhân sâm liều sử dụng cho thấy khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê Khi điều trị majonosid R2 liều tiêm phúc mạc 10 mg/kg trọng lượng chuột sau ngày làm giảm 33,6% (p < 0,05) hàm lượng MDA hàm lượng GSH tăng 80,6% (p < 0,05) não chuột đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng stress Hàm lượng MDA não chuột lô chuột bị gây stress điều trị bột chiết sâm Việt Nam, bột chiết nhân sâm hay majonosid 96 R2 không khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng sinh lý Hình Hàm lượng malonyl dialdehyd (MDA) não chuột lô thử nghiệm Vào tuần th mơ hình stress lập, bột chiết sâm Việt Nam bột chiết nhân sâm liều uống 200 mg/kg 500 mg/kg cho chuột uống 14 ngày, majonosid R2 liều 10 mg/kg tiêm phúc mạc ngày Biểu đồ cột đậm: nhóm bình thường (n = 10), biểu đồ cột sọc: nhóm bị gây stress cô lập (n = 10) # p