Ảnh hưởng của 2 tác nhân vật lí quan trọng là nhiệt độ và pH đến khả năng sinh tổng hợp, hoạt tính và độ bền của α-amylase từ chủng vi khuẩn Bacillus subtilis V37 đã được nghiên cứu trong bài báo này. Kết quả nghiên cứ cho thấy, hoạt tính enzyme thu được đạt giá trị lớn nhất khi nuôi chủng vi khuẩn B. subtilis V37 ở nhiệt độ 35 oC và pH 7,0.
HNUE JOURNAL OF SCIENCE Natural Sciences 2021, Volume 66, Issue 1, pp 72-79 This paper is available online at http://stdb.hnue.edu.vn DOI: 10.18173/2354-1059.2021-0009 ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ VÀ pH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP, HOẠT TÍNH VÀ ĐỘ BỀN CỦA α-AMYLASE TỪ CHỦNG VI KHUẨN Bacillus subtilis V37 Đoàn Văn Thược Nguyễn Phúc Hưng Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Tóm tắt Ảnh hưởng tác nhân vật lí quan trọng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase từ chủng vi khuẩn Bacillus subtilis V37 nghiên cứu báo Kết nghiên cho thấy, hoạt tính enzyme thu đạt giá trị lớn nuôi chủng vi khuẩn B subtilis V37 nhiệt độ 35 oC pH 7,0 Hoạt tính enzyme đạt giá trị cực đại thực phản ứng pH 6,0 nhiệt độ 70 oC Dịch enzyme thô giữ hoạt tính tốt bảo quản dung dịch đệm có pH từ 5,0 đến 7,0 Alpha-amylase từ chủng vi khuẩn B subtilis V37 tương đối bền nhiệt: enzyme giữ khoảng 100% hoạt tính sau ủ nhiệt độ 30 40 oC, giữ lại khoảng 34% hoạt tính sau ủ nhiệt độ 80 oC Với đặc tính này, α-amylase từ chủng vi khuẩn B subtilis V37 có tiềm ứng dụng nhiều lĩnh vực sống ví dụ sản xuất thực phẩm, công nghệ lên men, thức ăn chăn ni Từ khóa: α-amylase, Bacillus subtilis, nhiệt độ, pH Mở đầu Tinh bột polymer đơn phân glucose, tinh bột tổng hợp dự trữ nhiều loài thực vật đặc biệt thuộc họ ngũ cốc Tinh bột cấu tạo từ thành phần amylose amylopectin, hàm lượng thành phần khác tùy nguồn tinh bột; tinh bột từ gạo, khoai tây, ngơ thường có khoảng 20 - 30% amylose amylopectin chiếm khoảng 70 - 80% [1] Amylose dạng polymer mạch thẳng, không tan nước cấu tạo từ đơn phân glucose thơng qua liên kết α-1,4 glucoside Trong amylopectin dạng polymer tan nước, cấu trúc ngồi liên kết α-1,4 glucoside cịn có liên kết α-1,6 glucoside để hình thành cấu trúc mạch nhánh [1, 2] Các enzyme thủy phân tinh bột thuộc nhóm hydrolase thường có tên gọi chung amylase Hệ enzyme amylase chia thành loại α-amylase, β-amylase γ-amylase Alpha-amylase (EC 3.2.1.1) enzyme có khả phân cắt ngẫu nhiên liên kết α-1,4 glucoside mạch để tạo sản phẩm glucose, maltose dextrin Beta-amylase (EC 3.2.1.2) enzyme có khả phân cắt liên kết α-1,4 glucoside thứ từ đầu tận không khử nên sản phẩm tạo chủ yếu maltose Gamma-amylase (EC 3.2.1.3) có khả phân cắt liên kết α-1,6 glucoside α-1,4 glucoside từ đầu tận không khử mạch amylose amylopectin để tạo sản phẩm cuối phân tử glucose [3] Amylase enzyme có thị phần lớn thị trường thương mại, amylase chiếm khoảng 17% tổng lượng enzyme sản xuất giới [4] Trong α-amylase enzyme ứng dụng nhiều cơng nghiệp nay, ví dụ công nghiệp sản xuất ethanol, công nghệ thực phẩm, chăn nuôi, giặt tẩy, công nghiệp giấy dệt may [5] Ngày nhận bài: 19/1/2021 Ngày sửa bài: 12/3/2021 Ngày nhận đăng: 19/3/2021 Tác giả liên hệ: Đoàn Văn Thược Địa e-mail: thuocdv@hnue.edu.vn 72 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase Rất nhiều sinh vật có khả sinh tổng hợp α-amylase động vật, thực vật, nấm, vi khuẩn Tuy nhiên nguồn α-amylase dùng công nghiệp chủ yếu từ vi sinh vật (vi khuẩn nấm) Các chủng vi khuẩn sinh tổng hợp α-amylase công nghiêp chủ yếu thuộc chi Bacillus, điển hình lồi B subtilis, B amyloliquefaciens, B licheniformis hay B stearothermophilus [3, 5] Alpha-amyase từ chủng vi khuẩn thuộc loài B subtilis thường hoạt động tối ưu dải pH từ - khoảng nhiệt độ từ 55 đến 60 oC [6-8] Hiện lưu giữ chủng vi khuẩn Bacillus sublitis V37 có khả sinh tổng hợp α-amylase mạnh Để ứng dụng α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 vào thực tiễn cần có nghiên cứu sơ đánh giá hoạt tính độ bền enzyme Trong báo tập trung nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng pH nhiệt độ đến khả sinh trưởng sinh tổng hợp α-amylase chủng B sublitis V37, đồng thời nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng pH nhiệt độ đến hoạt tính độ bền α-amylase thu Nội dung nghiên cứu 2.1 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Vật liệu nghiên cứu Các hóa chất sử dụng nghiên cứu bao gồm: cao thịt, peptone, NaCl, (NH4)6 Mo7O24, Na2HAsO4, H2SO4, CuSO4·5H2O, Na2CO3·10H2O, NaHCO3, KNaC4H4O6·4H2O, Na2SO4, CH3COONa, CH3COOH, K2HPO4 KH2PO4 Các hóa chất cung cấp hãng Merck (Đức) Chủng vi khuẩn B sublitis V37 sử dụng cho nghiên cứu lưu giữ dung dịch 15% glycerol bảo quản -80oC 2.1.2 Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến khả sinh tổng hợp α-amylase chủng B subtilis V37 Chủng vi khuẩn B sublitis V37 nuôi cấy giữ giống mơi trường MPA đặc có thành phần chất dinh dưỡng tính theo lít: g cao thịt, g peptone; g NaCl, 20 g thạch, pH 7,0 Để nghiên cứu ảnh hưởng pH đến khả sinh tổng hợp α-amylase sử dụng mơi trường MPA lỏng có giá trị pH khác từ 4,0 đến 8,0 (bước nhảy 0,5) Chủng B sublitis V37 ni mơi trường có pH khác 30oC với tốc độ lắc 180 vòng/phút 24 Dịch nuôi cấy thu lại tiến hành li tâm với tốc độ 8000 vòng/phút 10 phút, dịch lỏng thu được sử dụng để đánh giá hoạt tính α-amylase Mơi trường MPA lỏng có pH 7,0 sử dụng để nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh tổng hợp α-amylase Chủng B sublitis V37 nuôi nhiệt độ khác (30, 35, 40 45 oC) với tốc độ lắc 180 vịng/phút 24 Dịch ni cấy thu lại tiến hành li tâm với tốc độ 8000 vòng/phút 10 phút, dịch lỏng thu được sử dụng để đánh giá hoạt tính α-amylase Hoạt tính enzyme thí nghiệm xác định điều kiện pH 7,0 nhiệt độ 50 oC, lượng đường khử tạo phương pháp Nelson-Somogyi 2.1.3 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính độ bền α-amylase Ảnh hưởng pH đến hoạt tính enzyme: Trộn 50 µL dịch enzyme pha lỗng với 450 µL dung dịch 1% tinh bột tan pha dung dịch đệm có pH khác từ 3,5 - 8,0 (bước nhảy 0,5) Các dung đệm sử dụng là: dung dịch đệm acetate có pH từ 3,5 - 5,5 dung dịch đệm phosphate có pH từ 5,5 - 8,0 Ủ dung dịch phản ứng 50 oC phút sau xác định lượng đường khử tạo phương pháp Nelson-Somogyi Dựa vào lượng đường tạo để xác định hoạt tính enzyme Ảnh hưởng pH đến độ bền enzyme: Trộn dịch enzyme với dung dịch đệm 0,2 M có pH khác từ 3,5 - 8,0 theo tỉ lệ 1:1 ủ 30 oC giờ, mẫu đối chứng dịch enzyme giữ oC Sau ủ, pha loãng dịch enzyme dung dịch đệm phốt phát pH 6,0, trộn 50 µL 73 Đồn Văn Thược Nguyễn Phúc Hưng dịch enzyme pha lỗng với 450 µL dung dịch 1% tinh bột tan pha dung dịch đệm phốt phát pH 6,0 Ủ dung dịch phản ứng 50 oC phút sau xác định lượng đường khử tạo phương pháp Nelson-Somogyi Dựa vào lượng đường tạo để xác định hoạt tính cịn lại enzyme 2.1.4 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính độ bền α-amylase Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính enzyme: Trộn 50 µL dịch enzyme pha loãng với 450 µL dung dịch 1% tinh bột tan pha dung dịch đệm phốt phát pH 6,0 Ủ dung dịch phản ứng nhiệt độ khác từ 30 đến 100 oC (bước nhảy 10 oC) phút sau xác định lượng đường khử tạo phương pháp Nelson-Somogyi Dựa vào lượng đường tạo để xác định hoạt tính enzyme Ảnh hưởng nhiệt độ đến độ bền enzyme: Trộn dịch enzyme với dung dịch đệm phốt phát 0,2M có pH = 6,0 theo tỉ lệ 1:1 ủ nhiệt độ khác từ 30 đến 100 oC (bước nhảy 10 oC) giờ, mẫu đối chứng giữ oC Sau ủ, pha loãng dịch enzyme dung dịch đệm phốt phát pH 6,0, trộn 50 µL dịch enzyme pha lỗng với 450 µL dung dịch 1% tinh bột tan pha dung dịch đệm phốt phát pH 6,0 Ủ dung dịch phản ứng 70 oC phút sau xác định lượng đường khử tạo phương pháp Nelson-Somogyi Dựa vào lượng đường tạo để xác định hoạt tính cịn lại enzyme 2.1.5 Phương pháp xác định hoạt tính enzyme Hoạt tính enzyme xác định theo phương pháp Nelson-Somogyi, phương pháp Nelson đề xuất năm 1944 [9] Somogyi cải tiến vào năm 1952 [10] Dung dịch hóa chất dùng cho phản ứng gồm có phần dung dịch Nelson dung dịch Somogyi, dung dịch chuẩn bị theo hướng dẫn [9, 10] Bổ sung 500 µL dung dịch Somogyi vào hỗn hợp 500 µL dung dịch enzyme-cơ chất (sau phút phản ứng nhiệt độ pH thích hợp), giữ nồi nước sơi 10 phút, sau cho vào nước lạnh phút Bổ sung dung dịch 500 µL Nelson giữ nhiệt độ phòng 20 phút Bổ sung 2,5 ml nước cất lần, lắc đo mật độ quang (OD) bước sóng 500 nm Glucose (Merck, Đức) sử dụng để xây dựng đồ thị chuẩn Một đơn vị hoạt độ amylase (1 IU) qui định hàm lượng amylase cần thiết để giải phóng µmol đường khử phút điều kiện thí nghiệm Tất thí nghiệm lặp lại lần, số liệu trình bày báo giá trị trung bình lần thí nghiệm 2.2 Kết nghiên cứu thảo luận 2.2.1 Ảnh hưởng pH nhiệt độ đến khả sinh tổng hợp amylase Nhiệt độ pH yếu tố mơi trường có tách dụng mạnh mẽ đến sinh trưởng sinh tổng hợp enzyme vi sinh vật [11, 12] Giá trị pH môi trường nuôi cấy không ảnh hưởng đến sinh trưởng vi sinh vật, pH mơi trường cịn có ảnh hưởng đến độ bền enzyme [11] Do ảnh hưởng pH đến khả sinh tổng hợp α-amylase chủng vi khuẩn B sublitis V37 nghiên cứu Kết Hình 1A cho thấy, hoạt tính amylase đạt giá trị cực đại 16,5 IU/mL pH = 7,0 Hoạt tính amylase thu giá trị pH acid yếu (6,5 6) cao so với hoạt tính thu pH kiềm yếu (7,5 8) Kết nghiên cứu thu nghiên cứu tương tự nghiên cứu gần đây, chủng vi khuẩn Bacillus subtilis thường sinh tổng hợp amylase tốt mơi trường có pH trung tính acid yếu [12, 13] Hình 1B thể hoạt tính enzyme chủng vi khuẩn B sublitis V37 nuôi cấy mơi trường có nhiệt độ khác Hoạt tính α-amylase tăng từ 16,5 IU/mL nhiệt độ 30 oC lên giá trị cực đại 24,6 IU/mL tăng nhiệt độ lên 35 oC, hoạt tính enzyme giảm dần tăng nhiệt độ lên 40 45 oC Như vậy, thấy nhiệt độ khoảng 35 oC thích hợp cho sinh trưởng sinh tổng hợp amylase chủng vi khuẩn B sublitis V37 Trong số trường hợp đặc biệt, số chủng vi khuẩn B sublitis sinh trưởng sinh tổng hợp amylase điều 74 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase Hoạt tính amylase (IU/mL) kiện nhiệt độ cao: ví dụ chủng B sublitis T41a sinh tổng hợp amylase tốt nhiệt độ 58 oC [13], chủng B sublitis Y25 sinh tổng hợp amylase cực đại 45 oC [6] Tuy nhiên, đa số trường hợp chủng vi khuẩn thuộc lồi B sublitis thường sinh enzyme tốt khoảng nhiệt độ 35 - 37 oC [7, 12] (A) 20 16 12 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 pH 6.5 35 Nhiệt độ (oC) 40 7.0 7.5 8.0 Hoạt tính amylase (IU/mL) (B) 30 25 20 15 10 30 45 Hình Ảnh hưởng pH (A) nhiệt độ (B) đến khả sinh tổng hợp α-amylase chủng vi khuẩn B sublitis V37 2.2.2 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính độ bền α-amylase thô Kết nghiên cứu ảnh hưởng pH đến hoạt tính α-amylase thể Hình 2A α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 biểu hoạt tính tốt điều kiện pH từ 5,5 đến 6,5, hoạt tính enzyme đạt giá trị cực đại (30,7 IU/mL) pH Emzyme giữ 79,5% hoạt tính pH 22,1% hoạt tính pH 4, enzyme giữ 61,2% hoạt tính pH so với hoạt tính cực đại pH (100%) Không hoạt động tốt pH 6, α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 bền giữ pH Enzyme giữ 100% hoạt tính sau ủ 30 oC đệm phosphate pH Khoảng 78% hoạt tính giữ lại pH giảm xuống khoảng 6% giữ pH 4; 79% 47,8% hoạt tính giữ lại ủ đệm phốt phát pH pH (Hình 2B) Các kết nghiên cứu cho thấy α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 bền hoạt động tốt khoảng pH từ 5,0 đến 6,5 Rất nhiều nghiên cứu trước nhận thấy rằng, α-amylase sinh tổng hợp từ B sublitis bền hoạt động tốt pH từ 5,0 đến 6,5 [7, 14, 15] Alpha-amylase hoạt động tốt khoảng pH thường thích hợp ứng dụng liên quan đến công nghiệp sản xuất ethanol, công nghệ thực phẩm, chăn ni dệt may [3, 15] 75 Đồn Văn Thược Nguyễn Phúc Hưng (A) Đệm acetate Đệm phosphate 35 Hoạt tính amylase (IU/mL) 30 25 20 15 10 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 pH (B) Đệm acetate Đệm phosphate Hoạt tính lại (%) 100 80 60 40 20 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 pH Hình Ảnh hưởng pH đến hoạt tính (A) độ bền (B) α-amylase thô thu từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 2.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính độ bền α-amylase thơ Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 nghiên cứu Kết hình 3A cho thấy α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 thể hoạt tính dải nhiệt độ rộng từ 30 đến 90 oC; nhiên, enzyme hồn tồn hoạt tính 100 oC Ở 30 oC, α-amylase thể 64% hoạt tính, hoạt tính tăng lên 90% 60 oC, 100% 70 oC, sau giảm xuống cịn 70% 80 oC khoảng 5,6% 90oC Đa số α-amylase từ vi khuẩn B sublitis thể hoạt tính mạnh khoảng nhiệt độ từ 50 đến 60 oC [7, 8, 13, 15, 16], cá biệt có chủng B sublitis thể hoạt tính tốt 37 oC [8] 76 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase Hoạt tính amylase (IU/mL) (A) 40 30 20 10 30 40 50 60 70 Nhiệt độ (oC) 80 90 100 Hoạt tính cịn lại (%) (B) 100 80 60 40 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Nhiệt độ (oC) Hình Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính (A) độ bền (B) α-amylase thơ thu từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 Không thể hoạt tính enzyme dải nhiệt độ rộng cao, α-amylase từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 bền giữ nhiệt độ cao Hoạt tính enzyme giữ lại nguyên vẹn 100% sau ủ nhiệt độ 30 oC 40 oC so sánh với mẫu đối chứng giữ oC, hoạt tính enzyme cịn lại 91,6% 34% sau ủ nhiệt độ 70 80 oC, hoạt tính enzyme hồn tồn giữ 90 100 oC (Hình 3B) Trong nghiên cứu gần đây, Trabelsi cộng [15] giữ α-amylase tinh từ chủng B sublitis US586 nhiệt độ 50, 55 60 oC Sau thời gian giờ, hoạt tính enzyme giảm cịn khoảng 96% 50oC, 82% 55 oC khoảng 40% 60 oC Trong nghiên cứu α-amylase giữ lại 96,5% hoạt tính sau ủ 60 oC Bền nhiệt độ cao (60 - 80 oC) có khả hoạt động dải nhiệt rộng ưu điểm α-amylase sinh tổng hợp chủng vi khuẩn B sublitis V37 Ưu điểm đảm bảo để enzyme ứng dụng nhiều lĩnh vực khác đời sống Kết luận Chủng vi khuẩn B sublitis V37 sinh tổng hợp α-amylase tốt nuôi cấy 35 oC, môi trường có pH ban đầu 7,0 Enzyme sinh tổng hợp thể hoạt tính tốt pH 6,0 nhiệt độ 70 oC Hoạt tính enzyme gần không thay đổi giữ pH từ 5,5 đến 6,5, nhiệt độ 70 oC Lời cảm ơn Nghiên cứu tài trợ kinh phí từ Bộ Giáo dục Đào tạo (đề tài mã số B2020-SPH-07) 77 Đoàn Văn Thược Nguyễn Phúc Hưng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Y I Cornejo-Ramírez, O Martínez-Cruz, C L D Toro-Sánchez, F J Wong-Corral, J Borboa-Flores and F J Cinco-Moroyoqui, 2018 The structural characteristics of starches and their functional properties CYTA - J Food, 16, pp.1003-1017 [2] R F Tester, J Karkalas and X Qi, 2004 Starch-composition, fine structure and architecture J Cereal Sci., 39, pp 151-165 [3] D Mehta and T Satyanarayana, 2016 Bacterial and Archaeal α-amylases: diversity and amelioration of the desirable characteristics for industrial applications Front Microbiol., 7, 1129 [4] M A Uygut and M S Tanyuldizi, 2018 Optimization of alpha-amylase production by Bacillus amyloliquefaciens grown on orange peels Iran J Sci Tachnol Trans Sci., 42, pp 443-449 [5] B E Far, Y Ahmadi, A Y Khosroushahi and A Dilmaghani, 2020 Microbial alphaamylase production: progress, challenges and perspectives Adv Pharm Bull., 10, pp 350-358 [6] S Tavallaie, M Khomeiri, M Mousivand, Y Maghsoudlou and M Hashemi, 2019 Starches from different sources hydrolysis using a new thermo-tolerant amylase complex produced by Bacillus subtilis T41a: characterization and efficiency evaluation LWT-Food Sci Technol., 112, 108218 [7] O M Aladejana, O Oyedeji, O O Omoboye and M K Bakare, 2020 Production, purification and characterization of thermostable alpha amylase from Bacillus subtilis Y25 isolated from decaying yam (Dioscorea rotundata) tuber Not Sci Biol., 12, pp 154-171 [8] S Bano, S A U Qader, A Aman, M N Syed and A Azhar, 2011 Purification and characterization of novel α-amylase from Bacillus subtilis KIBGE HAS AAPS Pharm Sci Tech., 12, pp 255-261 [9] N Nelson, 1944 A photometric adaptation of the somogyi method for the determination of glucose J Biol Chem., 153, pp 375-380 [10] M Somogyi, 1952 Notes on sugar determination J Biol Chem., 195, pp 19-23 [11] P Deb, S A Talukdar, K Mohsina, P K Sarker and S M A Sayem, 2013 Production and partial characterization of extracellular amylase enzyme from Bacillus amyloliquefaciens P-001 Springer Plus, 2, 154 [12] D A Bukhari and A Rehman, 2015 Purification and characterization of α-amylase from Bacillus subtilis isolated from local environment Pakistan J Zool., 47, pp 905-911 [13] M F Najafi, D Deobagkar and D Deobagkar, 2005 Purification and characterization of an extracellular α-amylase from Bacillus subtilis AX20 Protein Expr Purif., 41, pp 349-354 [14] J L Marco, L A Bataus, F F Valencia, C J Ulhora, S Astolfi and C R Felix, 1996 Purification and characterization of a truncated Bacillus subtilis α-amylase produced by Escherichia coli Appl Microbiol Biotechnol., 44, pp 746-752 [15] S Trabelsi, S B mabrouk, M Kriaa, R Ameri, M Sahnoun, M Mezghani and S Bejar, 2019 The optimized production, purification, characterization, and application in the bread making industry of three acid-stable alpha-amylases isoforms from new isolated Bacillus subtilis strain US586 J Food Biochem., 43, e12826 [16] J K Roy, S K Rai and A K Mukherjee, 2012 Characterization and application of a detergent-stable alkaline alpha-amylase from Bacillus subtilis strain AS-S01a Int J Biol Macromol., 50, pp 219-229 78 Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase ABSTRACT Effect of temperature and pH on the production, activity, and stability of α-amylase from Bacillus subtilis V37 Doan Van Thuoc and Nguyen Phuc Hung Faculty of Biology, Hanoi National University of Education The effect of physical parameters such as temperature and pH on the production, activity, and stability of α-amylase from Bacillus subtilis V37 was investigated The results indicated that the optimum culture conditions for enzyme activity were pH 7.0 and 35 oC The optimum pH and temperature for enzyme activity were 6.0 and 70 oC The crude enzyme was found to be stable in the pH range of 5.0 to 7.0 The enzyme was stable for h at a temperature from 30 to 80 oC; nearly 100% of enzyme activity remained at temperatures of 30 - 40 oC, and about 34% of original activity remained at a temperature of 80 oC These features demonstrated that α-amylase from B subtilis V37 can be applied in many areas such as the food, fermentation, and animal feed industries Keywords: α-amylase, Bacillus subtilis, pH, temperature 79 ... Hình Ảnh hưởng pH đến hoạt tính (A) độ bền (B) α-amylase thô thu từ chủng vi khuẩn B sublitis V37 2.2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính độ bền α-amylase thô Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính α-amylase. .. Hình Ảnh hưởng pH (A) nhiệt độ (B) đến khả sinh tổng hợp α-amylase chủng vi khuẩn B sublitis V37 2.2.2 Ảnh hưởng pH đến hoạt tính độ bền α-amylase thô Kết nghiên cứu ảnh hưởng pH đến hoạt tính α-amylase. . .Ảnh hưởng nhiệt độ pH đến khả sinh tổng hợp, hoạt tính độ bền α-amylase Rất nhiều sinh vật có khả sinh tổng hợp α-amylase động vật, thực vật, nấm, vi khuẩn Tuy nhiên nguồn α-amylase