Nghiên cứu đặc điểm sinh học của các chủng vi khuẩn Streptococcus suis phân lập được gây viêm phổi ở lợn tại huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang

Nghiên cứu này nhằm xác định một số đặc điểm dịch tễ, đặc tính sinh vật hóa học của các chủng vi khuẩn S. suis ở lợn mắc bệnh viêm phổi tại huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang. Đã xác định được tỷ lệ mắc viêm phổi ở đàn lợn tại huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang là 30,8% và tỷ lệ chết 17,8%. Tỷ lệ mắc bệnh và chết do viêm phổi khác nhau ở các lứa tuổi; Lợn nhỏ hơn 3 tháng tuổi có tỷ lệ mắc, chết cao nhất, tiếp đến là lợn 3 - 6 tháng tuổi và thấp nhất ở lợn trên 6 tháng.

TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 STUDY ON CHARACTERISTICS OF ISOLATES OF STREPTOCOCCUS SUIS STRAINS CAUSING PNEUMONIA IN PIGS IN TAN YEN DISTRICT, BAC GIANG PROVINCE Nguyen Quang Tinh1*, Le Van Hung2, Do Bich Due3 1TNU - University of Agriculture and Forestry, 2Nutrition Joint Stock company, 3TNU - Life Sciences Institute ARTICLE INFO Received: 05/6/2021 Revised: 31/7/2021 Published: 31/7/2021 KEYWORDS Biological characteristics Pig Tan Yen Bac Giang Streptococcus suis ABSTRACT This study aims to determine some epidemiological and biochemical characteristics of S suis strains in pigs with pneumonia in Tan Yen district, Bac Giang province The prevalence of pneumonia in pigs in Tan Yen district, Bac Giang province was determined to be 30.8% and the mortality rate was 17.8% Pneumonia morbidity and mortality rates vary by age group; Pigs younger than months old had the highest morbidity and mortality rates, followed by 3-6 month old pigs and the lowest in pigs over months old In 130 patient samples, all bacteria, S suis, were isolated; overall is 63.85%, in which, the highest in piglets after weaning at 1.5 - months old accounts for 72.50% and the lowest in newborn piglets - 1.5 months old, accounting for 46.87% The bacteria S suis isolated in this study has the same biological characteristics as described in domestic and foreign literature on this bacterium Among 83 isolates of S suis bacteria identified serotype: none of them belonged to serotype 1; the number of strains belonging to serotype accounted for the highest rate of 54.22% and the lowest rate of serotype 21 was 2.40% Bacterial strains are highly susceptible to antibiotics such as ceftiofur, florfenicol, amoxicillin, ofloxacin and are resistant to some antibiotics such as neomycin, colistin, tetracycline NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CÁC CHỦNG VI KHUẨN STREPTOCOCCUS SUIS PHÂN LẬP ĐƯỢC GÂY VIÊM PHỔI Ở LỢN TẠI HUYỆN TÂN YÊN, TỈNH BẮC GIANG Nguyễn Quang Tính1*, Lê Văn Hưng2, Đỗ Bích Duệ3 1Trường 2Cơng Đại học Nông Lâm - ĐH Thái Nguyên, ty Cổ phần dinh dưỡng Hải Thịnh, 3Viện Khoa học sống - ĐH Thái Ngun THƠNG TIN BÀI BÁO TĨM TẮT Nghiên cứu nhằm xác định số đặc điểm dịch tễ, đặc tính sinh vật Ngày nhận bài: 05/6/2021 hố học chủng vi khuẩn S suis lợn mắc bệnh viêm phổi Ngày hoàn thiện: 31/7/2021 huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Đã xác định tỷ lệ mắc viêm phổi đàn lợn huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang 30,8% tỷ lệ chết 17,8% Ngày đăng: 31/7/2021 Tỷ lệ mắc bệnh chết viêm phổi khác lứa tuổi; lợn nhỏ tháng tuổi có tỷ lệ mắc, chết cao nhất, tiếp đến lợn - tháng tuổi TỪ KHÓA thấp lợn tháng Trong 130 mẫu bệnh phẩm phân lập Đặc điểm sinh học vi khuẩn S suis; tính chung 63,85%, đó, cao lợn sau cai sữa 1,5 - tháng tuổi chiếm 72,50% thấp lợn sơ sinh Lợn 1,5 tháng tuổi, chiếm 46,87% Vi khuẩn S suis phân lập Tân n nghiên cứu có đặc tính sinh học giống mô tả tài liệu Bắc Giang nước loài vi khuẩn Trong số 83 chủng vi khuẩn S Vi khuẩn Streptococcus suis suis phân lập xác định serotype: khơng có chủng thuộc serotype 1; số chủng thuộc serotype chiếm tỷ lệ cao 54,22% thuộc serotype 21 thấp 2,40% Các chủng vi khuẩn mẫn cảm cao với loại kháng sinh ceftiofur, florfenicol, amoxicillin, ofloxacin kháng với số loại kháng sinh neomycin, colistin, tetracycline DOI: https://doi.org/10.34238/tnu-jst.4559 * Corresponding author Email: nguyenquangtinh@tuaf.edu.vn http://jst.tnu.edu.vn 356 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Giới thiệu Tân n huyện có nghề chăn ni lợn phát triển, đem lại nguồn thu nhập cao cho nhiều hộ gia đình góp phần phát triển chăn ni lợn bền vững, tạo sản phẩm an tồn có sức cạnh tranh cao thị trường Tuy nhiên, vài năm gần đây, hội chứng viêm phổi xuất phổ biến đàn lợn huyện gây thiệt hại lớn kinh tế sinh trưởng chậm, hiệu sử dụng thức ăn thấp, bệnh thường kéo dài, chi phí thuốc thú y cao; đặc biệt nghiêm trọng bệnh xảy đồng thời với hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp làm tổn thất nặng nề kinh tế, gây hoang mang cho người chăn nuôi Hội chứng viêm phổi lợn nhiều nguyên nhân gây ra, phải kể đến bệnh viêm phổi lợn thường loại vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae Streptococcus suis gây Nghiên cứu Nguyễn Hữu Nam Nguyễn Thị Lan (2007) [1], Cù Hữu Phú (2011) [2] cho thấy, vi khuẩn Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Streptococcus suis serotype 2, Bordelella bronchiseptica làm cho lợn bị bệnh trầm trọng xuất bệnh lý nặng, kéo dài với tỷ lệ mắc bệnh chết cao Nguyễn Quang Tính cộng (2020) [3] cho biết, tỷ lệ mắc viêm phổi đàn lợn huyện Hiệp Hòa, tỉnh Bắc Giang chiếm từ 18,41 - 28,91% tỷ lệ chết 18,41%, tỷ lệ phân lập vi khuẩn A pleuropneumoniae cao lợn sau cai sữa 30% thấp lợn sơ sinh đến 1,5 tháng tuổi 8% Các chủng vi khuẩn S suis thuộc serotype từ lâu xác định serotype thường gặp gây bệnh cho lợn người hầu giới [4] Ở Anh, bệnh S suis serotype chủ yếu gây bại huyết viêm não lợn cai sữa [5] Ngoài serotype 2, vi khuẩn S suis thuộc serotype khác phân lập từ lợn bị viêm phổi - màng phổi Đan Mạch [6] Mỹ [7] Do đó, để làm rõ thêm đặc tính vi khuẩn Streptococcus suis yếu tố quan trọng gây bệnh viêm phổi huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang, thực nghiên cứu để từ làm sở cho nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên liệu Mẫu bệnh phẩm lấy bao gồm: máu tim, gan, lách, phổi lợn bị ốm chết có triệu chứng, bệnh tích nghi mắc bệnh viêm phổi; loại môi trường dùng để nuôi cấy, phân lập vi khuẩn hãng Oxoid (Anh) Merck (Pháp) sản xuất; môi trường nước thịt, thạch thường, nước thịt gan yếm khí, thạch Sabauraud, SCD (Soybean Casein Digest); mơi trường phân lập vi khuẩn tăng sinh; môi trường xác định đặc tính sinh hóa; vật liệu hóa chất khác; chuột nhắt trắng 2.2 Địa điểm nghiên cứu Lợn bị viêm phổi xã Ngọc Châu, Ngọc Vân, Liên Chung; Bộ mơn Hóa sinh Viện Khoa học sống, Đại học Thái Nguyên 2.3 Phương pháp nghiên cứu Được sử dụng phương pháp nghiên cứu dịch tễ học mô tả (Descriptive study) dịch tễ học phân tích (Analysic study) dịch tễ học thực nghiệm Nguyễn Như Thanh (2001) [8], Nguyễn Văn Thiện (1997) [9] Các phương pháp đo lường dịch tễ: Số lợn viêm phổi Tỷ lệ lợn mắc viêm phổi (%) = x 100 Tổng số lợn điều tra Số lợn mắc viêm phổi theo độ tuổi Tỷ lệ mắc viêm phổi theo độ tuổi (%) = x 100 Tổng số lợn theo độ tuổi điều tra Số lợn chết viêm phổi Tỷ lệ tử vong viêm phổi (%) = x 100 Tổng số lợn mắc viêm phổi http://jst.tnu.edu.vn 357 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Phương pháp kiểm tra đặc tính sinh hố khả lên men đường chủng vi khuẩn phân lập được: Thử phản ứng oxydase: Tiến hành giấy thấm 1% dung dịch tetrametyl-pphenylenediamine hydrochloride; dùng que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch bôi lên mặt giấy thấm thuốc thử; thấy xuất màu tím đen sau 30 giây phản ứng dương tính; khơng thấy xuất màu tím đen khơng đổi màu phản ứng âm tính Thử phản ứng catalase: Dùng phiến kính sạch, nhỏ giọt dung dịch oxy già 3% lên trên, que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc từ môi trường thạch trộn với giọt oxy già 3%, có tượng sủi bọt phản ứng dương tính Thử phản ứng sinh Indol: Cấy chủng vi khuẩn cần kiểm tra vào môi trường nước thịt Để tủ ấm 37oC/24 Nhỏ 0,5 ml dung dịch Kovac’s vào, phản ứng dương tính quan sát thấy vịng màu đỏ mặt môi trường Thử phản ứng lên men đường: Cấy chủng vi khuẩn cần kiểm tra vào môi trường nước thịt, nuôi tủ ấm 37oC/24 giờ, sau nhỏ 0,2 ml canh khuẩn vào dung dịch đường chuẩn bị trước; sau 24 giữ tủ ấm 37oC, quan sát thấy màu môi trường thay đổi thành màu đỏ dương tính, vi khuẩn có sinh thấy ống Durham đẩy mực nước ống Durham xuống Xác định số đặc tính sinh học hệ thống nhận biết API 20 Strep: Tất mẫu vi khuẩn S suis, sau đạt yêu cầu phản ứng nhận biết cấp I, tiếp tục tiến hành kiểm tra qua phản ứng nhận biết cấp II hệ thống định danh vi khuẩn gồm phản ứng sinh hố chế sẵn, có tên API 20 Strep Hệ thống dùng để nhận biết phân biệt vi khuẩn nhóm Streptococcus Xác định serotype vi khuẩn S suis phương pháp PCR: Được thực dựa vào hướng dẫn Quy trình chẩn đốn bệnh vi khuẩn Streptococcus suis gây lợn [10] Các chủng vi khuẩn S suis xác định số serotype gây bệnh thường gặp lợn (serotype 1, 2, 7, 9) phản ứng MP-PCR (Microsatellite-Primed PCR) Phản ứng MPPCR cho phép nhận khác loại gen cps mã hoá sản sinh thành phần polysaccharide giáp mô, tương đương với serotype 1, 2, Các cặp mồi dùng để xác định serotype 1, 2, S suis lựa chọn dựa vào chuỗi gen mã hố q trình sinh tổng hợp thành phần polysaccharide giáp mô (cps), gồm cặp mồi: cps 1J-F cps 1J-R để xác định serotyp 1, cps 2J-F cps 2J-R để xác định serotyp 2, cps 7H-F cps 7H-R để xác định serotyp 7, cps 9H-F cps 9H-R để xác định serotyp Trình tự cặp mồi sản phẩm tương ứng chúng trình bày bảng Bảng Trình tự cặp mồi dùng để xác định serotype 1, 2, vi khuẩn S suis Serotype Ký hiệu mồi cps1J-F cps1J-R cps2J-F cps2J-R cps7H-F cps7H-R cps9H-F cps9H-R Trình tự mồi 5'-TGG CTC TGT AGA TGA TTC TGC T -3' 5'-TGA TAC GTC AAA ATC CTC ACC A-3' 5'-TTT GTC GGG AGG GTT ACT TG-3' 5'-TTT GGA AGC GAT TCA TCT CC -3' 5'-AAT GCC CTC GTG GAA TAC AG-3' 5'-TCC TGA CAC CAG GAC ACG TA-3' 5'-GGG ATG ATT GCT CGA CAG AT-3' 5'-CCG AAG TAT CTG GGC TAC TGA-3' Sản phẩm (bp) 637 498 379 303 Phương pháp xác định độc lực chủng vi khuẩn phân lập thực theo phương pháp Cù Hữu Phú cs (2004) [11] Mỗi chuột nhắt trắng đủ điều kiện thí nghiệm tiêm 0,5 ml canh trùng nuôi cấy 37°C/24 (~2 x 106 vi khuẩn/chuột) vào phúc xoang Số chuột theo dõi thời gian chết vòng ngày Chuột chết tiến hành mổ khám, kiểm tra bệnh tích phân lập lại vi khuẩn từ máu tim http://jst.tnu.edu.vn 358 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Phương pháp xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập phương pháp khuếch tán đĩa thạch đánh giá kết theo Hội đồng quốc gia Hoa Kỳ tiêu chuẩn lâm sàng phịng thí nghiệm NCCLS (1999) [12] Chuẩn bị môi trường thạch đĩa Muller Hinton; vi khuẩn S suis nuôi cấy môi trường thạch TSA qua đêm; khuẩn lạc vi khuẩn tạo huyền phù nước muối sinh lý 0,9% để độ đục tương đương ống McFarland (3 x 108 CFU/ml); dùng tăm vô trùng, tẩm dung dịch pha loãng dàn lên thạch đĩa Muller Hinton; dùng máy tự động đặt khoanh giấy tẩm kháng sinh hãng Oxoid (Anh) lên mặt đĩa thạch; bồi dưỡng đĩa thạch 37oC/18 - 24 (5% CO2); đọc kết so sánh với bảng chuẩn Kết thảo luận 3.1 Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh viêm phổi lợn vi khuẩn S suis Đánh giá tình hình bệnh viêm phổi lợn theo địa dư hành chính, nghiên cứu tiến hành xác định tỷ lệ mắc bệnh tỷ lệ chết bệnh viêm phổi xã: Ngọc Châu, Ngọc Vân, Liên Chung Kết điều tra thể bảng Bảng Tỷ lệ lợn mắc bệnh chết viêm phổi số xã huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Tên xã Tổng số lợn điều tra (con) Ngọc Châu Ngọc Vân Liên Chung Tính chung 940 730 1110 2748 Tỷ lệ lợn viêm phổi Số lượng (con) Tỷ lệ (%) 324 34,5 233 31,9 290 26 847 30,8 Tỷ lệ lợn chết viêm phổi Số lượng (con) Tỷ lệ (%) 64 19,75 43 18,45 44 15,2 151 17,8 Kết bảng cho thấy, tỷ lệ mắc viêm phổi chung tổng số lợn điều tra 30,8% tỷ lệ chết 17,8% Tỷ lệ lợn mắc viêm phổi chết có khác xã huyện, xã Ngọc Châu tỷ lệ mắc chết cao (tương ứng 34,5% 19,75%); thấp Liên Chung (tương ứng 26% 15,2%) Kết giải thích sau, chăn nuôi lợn Ngọc Châu chủ yếu theo hộ gia đình, điều kiện chăm sóc, ni dưỡng, vệ sinh cịn hạn chế Kết tương đồng với nghiên cứu Đặng Xuân Bình cs (2007) [13], đàn lợn Hà Tây Thái Nguyên cho thấy, mắc bệnh viêm phổi chiếm tỷ lệ 100% theo đàn trung bình 36,53% theo cá thể Như vậy, địa phương khác tỷ lệ lợn mắc bệnh viêm phổi khác giải thích vùng sinh thái, điều kiện chăn ni trình độ người chăn ni khác ảnh hưởng đến tỷ lệ mắc viêm phổi lợn vùng Như vậy, địa phương khác tỷ lệ lợn mắc bệnh viêm phổi khác giải thích vùng sinh thái, điều kiện chăn nuôi trình độ người chăn ni khác ảnh hưởng đến tỷ lệ mắc viêm phổi lợn vùng 3.2 Phân lập, xác định số đặc tính sinh vật hóa học số chủng vi khuẩn S suis Nghiên cứu tiến hành phân loại mẫu bệnh phẩm từ lợn mắc bệnh viêm phổi huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang theo bốn nhóm tuổi Kết phân lập trình bày bảng Bảng Kết phân lập vi khuẩn S suis từ mẫu bệnh phẩm lợn mắc bệnh viêm phổi lứa tuổi khác huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Đối tượng Lợn SS - 1,5 tháng tuổi Lợn sau cai sữa >1,5-3 tháng tuổi Lợn vỗ béo >3-6 tháng tuổi Lợn > tháng tuổi Tính chung http://jst.tnu.edu.vn Số mẫu kiểm tra 32 40 38 20 130 359 S Suis Số mẫu dương tính 15 29 26 13 83 Tỷ lệ (%) 46,87 72,50 68,42 65,00 63,85 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Kết bảng cho thấy, mẫu bệnh phẩm lợn mắc bệnh viêm phổi theo bốn lứa tuổi phân lập vi khuẩn S suis Tính chung, bốn lứa tuổi (130 mẫu bệnh phẩm): Tỷ lệ phân lập vi khuẩn S suis 63,85%; tỷ lệ phân lập vi khuẩn S suis từ lợn sau cai sữa 1,5 - tháng tuổi cao (72,50%) thấp lợn sơ sinh - 1,5 tháng tuổi (46,87%) Kết nghiên cứu phù hợp với kết nghiên cứu Vecht cs (1985) [14], Hà Lan tỉ lệ nhiễm vi khuẩn S suis 42%, tỷ lệ lại thấp so với kết Trịnh Phú Ngọc (2002) [15], tiến hành phân lập vi khuẩn S suis từ hạch phổi lợn ốm, chết nghi mắc bệnh vi khuẩn S suis gây nên số sở chăn nuôi (tỷ lệ phân lập bình quân chung 95,45%) Nghiên cứu bệnh đường hô hấp lợn Cù Hữu Phú cộng (2004) [11] cho biết, tỷ lệ phân lập vi khuẩn S suis từ phổi hạch phổi 72% Như vậy, với tỷ lệ phân lập S suis cao cho thấy vi khuẩn đóng vai trò quan trọng gây viêm phổi lợn địa phương huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang thời gian qua Từ 83 mẫu dương tính tiến hành kiểm tra số đặc tính sinh học vi khuẩn S suis thu kết trình bày bảng Bảng Kết kiểm tra số đặc tính sinh học S suis phân lập Chỉ tiêu kiểm tra Gr (+) Indol Oxidase Catalase Glucose Galactose Lactose Maltose Mannitol Sorbitol Trehalose Số mẫu kiểm tra 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 Số mẫu dương tính 83 0 83 83 83 83 0 79 Tỷ lệ (%) 100,0 0,0 0,0 0,0 100,0 100,0 100,0 100,0 0,0 0,0 95,18 Quinn cs (2004) + + + + + + Bảng Kết xác định số đặc tính sinh vật hóa học S suis phân lập hệ thống API 20 Strep Tên phản ứng TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Kết Số mẫu dương tính 63 40 68 72 55 83 79 0 78 80 56 77 81 79 Voges Proskauer Thuỷ phân Hippuric acid Esculin Pyrrolidonyl Arylamidase -Galactosidase -Glucuronidase -Galactosidase Alkaline Phosphatase Leucine AminoPeptidase Arginine Dihydrolase Ribose Arabinose Mannitol Sorbitol Lactose Trehalose Inulin Raffinose Amidon Glycogen Tỷ lệ (%) 1,20 75,90 48,19 81,92 86,75 66,26 2,41 100,0 95,18 0 3,61 2,41 93,97 96,38 67,47 92,77 97,59 95,18 Kết bảng cho thấy, vi khuẩn mẫu bắt màu gram dương Tất mẫu âm tính với phản ứng Indol, oxidase, catalase 100% mẫu lên men đường http://jst.tnu.edu.vn 360 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 glucose, galactose, lactose, maltose 95,18% số mẫu lên men đường trehalose 100% mẫu không lên men đường mannitol, sorbitol, mannit Kết bảng cho thấy, 100% số mẫu kiểm tra cho kết âm tính phản ứng Voges Proskauer khơng lên men loại đường Ribose Arabinose Các phản ứng khác, bao gồm phản ứng thủy phân acid Hippuric, Alkaline Phosphatase phản ứng lên men đường Sorbitol có 1-3 mẫu có phản ứng dương tính, chiếm tỷ lệ 1,20 -3,61% Hầu hết mẫu kiểm tra lên men loại đường: raffinose, lactose, glycogen, trehalose, Amidon với tỷ lệ dương tính từ 92,77 - 97,6% Riêng phản ứng thủy phân L-leucine--naphthylamide tất mẫu kiểm tra cho kết dương tính, chiếm tỷ lệ 100% Để khẳng định chắn vi khuẩn phân lập vi khuẩn S Suis hệ thống API 20 Strep, chọn 30 chủng vi khuẩn S suis đại diện loại lợn lấy mẫu, loại mẫu thực giám định phản ứng PCR cặp mồi Str2- F Str2- R, cặp mồi đặc hiệu dùng để xác định gen gdh mã hóa cho q trình sinh tổng hợp glutamate dehydrogenase, enzym có thành phần ty thể vi khuẩn S suis cần thiết cho trình sinh tổng hợp urea Kết trình bày bảng Bảng Kỹ thuật PCR giám định gen glutamate dehydrogenase (gdh) Loại mẫu Số chủng kiểm tra Số chủng cho sản phẩm 688 bp Cuống họng 5 Phổi 5 Cuống họng 5 Phổi 5 Cuống họng 5 Phổi 5 Tính chung 30 30 Đối tượng Lợn sau cai sữa – tháng tuổi Lợn vỗ béo – tháng tuổi Lợn nái Tỷ lệ (%) 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 100,0 Kết bảng cho thấy, 100% chủng xác định vi khuẩn S suis hệ thống định danh API 20 Strep, kết PCR điện di cho sản phẩm đặc hiệu giống 688 bp Như vậy, thấy phản ứng định danh hệ thống API 20 Strep phản ứng PCR cho kết đồng cách giám định vi khuẩn S suis Tuy nhiên, phản ứng sinh hóa có số nhược điểm như: tốn thời gian thực (2 ngày), địi hỏi phải có mơi trường nuôi cấy đặc hiệu (thạch máu Columbia) số trường hợp cho kết không rõ ràng Trong đó, phản ứng PCR thể vượt trội nhiều ưu điểm như: độ nhạy độ đặc hiệu cao, tiết kiệm thời gian, thực với số lượng mẫu lớn, cho kết thời gian ngắn dễ dàng thực điều kiện phịng thí nghiệm Việt Nam 3.3 Xác định Serotype S suis phân lập Kết bảng cho thấy, số 83 chủng vi khuẩn S suis phân lập lợn mắc viêm phổi huyện Tân Yên, Bắc Giang xác định serotype: Khơng có chủng xác định thuộc serotype 1; số chủng thuộc serotype chiếm tỷ lệ cao 54,22% (45/83 chủng); tiếp đến serotype 9, chiếm 15,66% (13/83 chủng); serotype 7, chiếm 4,81% (4/83 chủng); serotype 29 chiếm 3,61% (3/83 chủng); serotype 21 chiếm 2,40% (2/83) 3.4 Kiểm tra độc lực số chủng vi khuẩn S suis phân lập Căn vào kết xác định serotype chủng vi khuẩn S.suis phân lập được, chọn 10 chủng vi khuẩn đại diện cho serotype khác (2, 7, 9, 21 29) chủng thuộc nhóm khơng thể xác định serotype tiến hành kiểm tra độc lực chuột nhắt trắng thu kết trình bày bảng http://jst.tnu.edu.vn 361 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Bảng Kết xác định serotype số chủng vi khuẩn S suis phân lập Loại lợn SS- 1,5 tháng tuổi >1,5- tháng tuổi >3- tháng tuổi Lợn nái Cộng Tỷ lệ (%) Số chủng VK 15 9 22, 27a 29 15 26 13 13 83 15 21 Kết định serotype 25 28 29 30 29, 31 30, 31, 31, 34 KXĐ 33b 32c 33d 8 1 45 13 54,2 4,81 15,7 2,4 0 3,6 0 0 0 16 19,28 Bảng Kết kiểm tra độc lực số vi khuẩn S suis phân lập chuột nhắt trắng T T Ký hiệu mẫu 10 11 12 S-VY1 S-VY2 S-VY3 S-VY4 S-VY5 S-VY6 S-VY7 S-VY8 S-VY9 S-VY10 S-VY11 S-VY12 Thuộc serotype 2 7 9 21 21 29 29 - Số chết/ Số tiêm (con) 2/2 2/2 1/2 1/2 2/2 2/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 0/2 Kết Thời gian Tỷ lệ chuột chuột chết (h) chết (%) 12 - 24 100,0 20 - 24 100,0 36 50,0 48 50,0 18 - 24 100,0 12 - 24 100,0 0 0 0 Ghi Tất chuột chết mổ khám để kiểm tra bệnh tích phân lập lại vi khuẩn khiết từ máu tim Kết bảng cho thấy, chủng vi khuẩn S suis thuộc serotype serotype gây chết 100% số chuột thí nghiệm thời gian ngắn, từ 12 - 24 Trong đó, chủng thuộc serotype kiểm tra gây chết 50% số chuột, chủng S-VY3 gây chết chuột vòng 36 chủng S-VY4 gây chết chuột vòng 48 sau tiêm Riêng chủng thuộc serotyp 29, 21 chủng không xác định rõ serotype không gây chết chuột Những chuột chết có bệnh tích tương đối giống nhau: phủ tạng bị sung huyết, tim sưng, mềm, nhão, tích nước xoang bao tim, vùng xung quanh chỗ tiêm, đơi có tượng áp xe Khi cấy máu tim vào loại môi trường khác phân lập vi khuẩn S suis khiết Nguyễn Ngọc Nhiên cs (1994) [16], tiêm 0,2 ml vi khuẩn Streptococcus vào da cho chuột nhắt trắng, chuột chết sau 24 - 36 giờ, chỗ tiêm áp xe có mủ phân lập lại vi khuẩn từ máu tim Khương Bích Ngọc (1996) [17], kiểm tra độc lực vi khuẩn Streptococcus chuột nhắt trắng thấy vi khuẩn gây chết cấp tính chuột Những chuột khơng chết có triệu chứng thần kinh, mệt mỏi, ủ rũ 3.5 Xác định khả mẫn cảm kháng sinh số chủng vi khuẩn S suis phân lập Kiểm tra khả mẫn cảm với số loại kháng sinh loại vi khuẩn gây bệnh nói chung vi khuẩn S suis phân lập nói riêng cần thiết, sở đưa hướng dẫn để lựa chọn kháng sinh thích hợp để điều trị bệnh vi khuẩn gây lợn có hiệu Kết trình bày bảng http://jst.tnu.edu.vn 362 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 Bảng Kết tính mẫn cảm với số loại kháng sinh chủng vi khuẩn S suis phân lập TT 10 Tên kháng sinh Penicillin G Amikacin Ceftriaxone Tetracycline Ceftiofur Ofloxacin Streptomycin Amoxicillin Neomycin Colistin Số chủng thử 5 5 5 5 5 Rất mẫn cảm + % 60,00 60,00 100,00 40,00 100,00 80,00 0,00 80,00 0,00 20,00 Đánh giá mức độ mẫn cảm Mẫn cảm trung bình + % 20,00 40,00 0,00 40,00 0,00 20,00 0,00 20,00 0,00 40,00 Kháng thuốc + % 20,00 0,00 0,00 20,00 0,00 0,00 100,00 0,00 100,00 40,00 Kết bảng cho thấy, vi khuẩn S suis phân lập mẫn cảm cao với loại kháng sinh như: ceftriaxone, ceftiofur, amoxicillin; đồng thời kháng lại với loại kháng sinh như: streptomycin, neomycin, colistin Cụ thể, mẫu vi khuẩn S suis mẫn cảm cao với loại kháng sinh ceftiofur, ceftriaxone với tỷ lệ 100,00%, amoxicillin với tỷ lệ 80%, đồng thời kháng lại với streptomycin neomycin với tỷ lệ 100,00% Nếu so sánh kết nghiên cứu với kết nghiên cứu Trịnh Quang Hiệp cs (2004) [18], chủng vi khuẩn S suis phân lập từ đường hô hấp lợn mẫn cảm cao với loại kháng sinh neomycin, amikacin hay amoxicillin; kết thu chúng tơi có đơi chút khác biệt cho thấy loại kháng sinh có mẫn cảm thấp bị kháng với tỷ lệ cao Điều giải thích theo thời gian, có tượng kháng thuốc loại vi khuẩn Kết luận Tỷ lệ mắc viêm phổi đàn lợn huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang 30,8% tỷ lệ chết 17,8% Tỷ lệ mắc bệnh chết cao xã Ngọc Châu tương ứng 34,5%, 19,75%; thấp xã Liên Chung tương ứng 26%, 15,2% Tỷ lệ phân lập vi khuẩn S suis 63,85%; cao lợn sau cai sữa 1,5 - tháng tuổi (72,50%) thấp lợn sơ sinh - 1,5 tháng tuổi (46,87%) Vi khuẩn S suis phân lập có đặc tính sinh học đặc trưng giống tài liệu ngồi nước mơ tả 83 chủng vi khuẩn S suis phân lập lợn mắc viêm phổi xác định serotype: khơng có chủng thuộc serotype 1; số chủng thuộc serotype chiếm tỷ lệ cao nhất, chiếm 54,22%; tiếp đến serotype 9, 7, 29, 21 chiếm 15,66%, 4,81%, 3,61%, 2,40% Vi khuẩn S suis mẫm cảm cao với loại kháng sinh ceftiofur, florfenicol, amoxicillin, ofloxacin kháng với số loại kháng sinh neomycin, colistin, tetracycline TÀI LIỆU THAM KHẢO/REFERENCES [1] N H Nguyen and L T Nguyen, “Respiratory and reproductive discorders syndrome in pig,” Scientific conferencen on respiratory and reproductive disorders syndrome and streptococcal disease in pig, Hanoi Agriculture University, 2007 [2] H P Cu, Study the relationship between respiratory and reproductive disorders syndrome in pigs and the pathogenics bacteria and identify preventive and treatment measures, National veterinary science report, 2011 [3] Q T Nguyen, M H Nguyen, and B D Do, "Study on biological characteristics of Actinobacillus pleuropneumoniae strains isolated from pigs with pneumonia raised in Hiep Hoa district, Bac Giang province," TNU Journal of Science Technology, vol 225, no 08, pp 142-148, 2020 [4] Z R Lun, Q P Wang, X G Chen, A X Li, and X Q Zhu, “Streptococcus suis: an emrging zoonotic pathogen,” Lancet Infect Dis., vol 7, no 3, pp 201-209, 2007 http://jst.tnu.edu.vn 363 Email: jst@tnu.edu.vn TNU Journal of Science and Technology 226(10): 356 - 364 [5] R S Windsor, and S D Elliott, “Streptococcal infection in young pigs IV An outbreak of Streptococcal meningitis in weaned pigs,” J Hyg Camb, no 75, pp 69-78, 1975 [6] B Perch, K B Pedersen, and J Henrichsen, “Serology of capsulated Streptococci pathogenic for pigs: Six new serotypes of Streptococcus suis,” J Clin Microbiol, no 17, pp 993-996, 1983 [7] R Y Reams, L T Glickman, D D Harrington, H L Thacker, and T L Bowersock, “Streptococcus suis infection in swine: A retrospective study of 256 cases Part II Clinical signs, gross and microcopic lessions, and coexisting microorganisms,” J Vet Diagn Invest, no 6, pp 326-334, 1994 [8 N T Nguyen, Textbook of veterinary epidemiology Agricultural Publishing House, Hanoi, 2001 [9] V T Nguyen, Research methods in animal husbandry Agriculture Publishing House, Hanoi, 1997 [10]TCVN 8400-2:2010 Part 2, Diseases caused by Streptococcus suis bacteria in pigs, 2010 [11] H P Cu, N N Nguyen, T H Nguyen, X T Au, B T Nguyen, N Q Vu, and N B Pham, "Selection of autovaccinated bacteria strains to prevent respiratory diseases of pigs raised in some provinces in the North," Institute of Veterinary Medicine 35 years of construction and development 1969-2004, 2004, pp 108-109 [12] National committees for clinical laboratory standards: Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals, Approved Standard, Pennsylvania, USA: The National Committee for Clinical Laboratory Standards, 1999 [13] X B Dang, T N Nguyen, and H P Phan, "Actinobacillus pleuropneumoniae infection and pleurisy in pigs," Journal of Veterinary Science and Technology, vol 14, no 2, pp 56-59, 2007 [14] U Vecht, L A M G Van Leengoed, and E R M Verheijen, “Streptococcus suis infections in pigs in the Netherlands (part I),” Vet Quart, no 7, pp 315-321, 1985 [15] T B N Khuong, “Coccidiosis in some concentrated pig breeding facilities and measures for prevention and treatment,” Agricultural science PTS thesis, National Institute of Veterinary Medicine, Hanoi, 1996 [16] N N Nguyen, T N Nguyen, and B N Khuong, "Research and manufacture of vaccines against infectious cough and respiratory syndrome in pigs and results of application in production," Journal of Science and Technology” vol 9, pp 356-357, 1994 [17] P N Trinh, “Research on some biological characteristics and virulence of Streptococcus bacteria causing diseases in pigs in some provinces,” Doctoral thesis of agricultural science, National Institute of Veterinary Medicine, Hanoi, 2002 [18] Q H Trinh, H P Cu, T H Nguyen, and X T Au, "Determining the biochemical and virulent characteristics of Actinobacillus, Pasteurella and Streptocococcus bacteria causing pneumonia in pigs," Journal of Science science and technology of the Ministry of Agriculture and Rural Development, no 4, pp 476-477, 2004 http://jst.tnu.edu.vn 364 Email: jst@tnu.edu.vn ... tỷ lệ phân lập vi khuẩn S suis từ phổi hạch phổi 72% Như vậy, với tỷ lệ phân lập S suis cao cho thấy vi khuẩn đóng vai trị quan trọng gây vi? ?m phổi lợn địa phương huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang. .. làm rõ thêm đặc tính vi khuẩn Streptococcus suis yếu tố quan trọng gây bệnh vi? ?m phổi huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang, thực nghiên cứu để từ làm sở cho nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 2.1 Nguyên... khuẩn S suis Nghiên cứu tiến hành phân loại mẫu bệnh phẩm từ lợn mắc bệnh vi? ?m phổi huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang theo bốn nhóm tuổi Kết phân lập trình bày bảng Bảng Kết phân lập vi khuẩn S suis