Nghiên cứu về nấm mốc gây bệnh thối nõn dứa tại một số địa phương thuộc xã quỳnh thắng và quỳnh tân, huyện quỳnh lưu, tỉnh nghệ an

Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Mục lục Mở đầu Ch-ơng I Tổng quan tài liệu I Đặc điểm chung vỊ c©y døa II Sơ l-ợc nấm đất gây hại trồng III Những bệnh th-ờng gặp dứa 4.1 BÖnh thèi nân døa 4.2 Một số bệnh hại dứa khác IV Đặc điểm phân loại nấm mốc Phytophthora 10 Ch-ơng II Đối t-ợng ph-ơng pháp nghiên cứu 12 I Đối t-ợng nghiªn cøu 12 II Thời gian địa điểm nghiên cứu 12 2.1 Thêi gian nghiªn cøu 12 2.2 Địa điểm nghiên cứu: 12 III Ph-ơng pháp nghiªn cøu 12 2.1 Ph-ơng pháp điều tra tr-ờng 12 2.2 Ph-ơng pháp thu mÉu c©y døa 12 2.3 Ph-ơng pháp phân lập nấm mốc 13 2.4 Ph-ơng pháp định loại nÊm mèc 13 2.5 Ph-ơng pháp nghiên cứu sinh tr-ởng nấm mốc điều kiện pH khác 13 Ch-¬ng III KÕt nghiên cứu thảo luận 15 I T×nh h×nh trång døa ë x· Quỳnh Thắng xà Quỳnh Tân 15 1.1 ë x· Quúnh Th¾ng 15 1.2 ë x· Quúnh T©n 16 II Bệnh thối nõn dứa xà Quỳnh Thắng Xà Quỳnh Tân 16 2.1.1 Kết điều tra đợt 16 2.1.2 Kết điều tra đợt 17 2.1.3 Tình trạng bệnh thèi nân døa mèi quan hƯ víi ®iỊu kiƯn thêi tiÕt 18 III Kết điều tra thành phần nấm mốc dứa 20 3.1 Thành phần chủng nấm mốc đ-ợc phát dứa 20 3.2 Những chủng nấm tác nhân gây bệnh thối nõn dứa 23 3.3 Kết định loại chủng NN6 , NN8 , NN11 24 3.3.1 Chñng NN6 24 3.3.2 Chñng NN8 24 3.3.3 Chñng NN11 25 3.4 Kết nghiên cứu ảnh h-ởng pH môi tr-ờng nuôi cấy nấm đến sinh tr-ởng phát triĨn cđa chđng NN11 26 KÕt luận đề nghị 28 I KÕt luËn 28 II Đề nghị 29 Tµi liƯu tham kh¶o 30 PhÇn phơ lơc 31 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Phụ lục Số liệu điều tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Thắng (Đợt 1- th¸ng 9/2005) 31 Phơ lơc Sè liƯu ®iỊu tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Tân - Quỳnh L-u Nghệ An (Đợt – Th¸ng 3/2006) 32 Phơ lơc3: Sè liệu điều tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Thắng- Quỳnh L-u Nghệ An (đợt th¸ng – 2006) 33 Phơ lục Một số hình ảnh dứa nấm mốc 34 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Mở đầu Cây dứa chiến l-ợc phát triển nông nghiệp Việt Nam, việc chuyển đổi cấu trồng để nâng cao hiệu kinh tế đơn vị diện tích đất đai yêu cầu thiết sản xuất Thực tế việc chuyển đổi mô hình từ trồng loại ăn khác sang trồng dứa đà mang lại hiệu cao cho ng-ời sản xuất Cây dứa phía Bắc Nghệ An đ-ợc trồng rộng rÃi để phục vụ cho nhu cầu tiêu thụ hoa t-ơi đóng hộp n-ớc xuất Điển hình nông tr-ờng Tổng đội Thanh niên Xung phong thuộc x· Qnh Th¾ng – hun Qnh L-u – tØnh NghƯ An, nông tr-ờng dứa với gần 700 Bệnh thối nõn dứa đà xuất nông tr-ờng xà Quỳnh Thắng nhiều năm Triệu chứng bệnh có màu vàng đỏ, phần gốc bị thối nhũn, có mùi thối, dễ dàng nhổ lên, phần gốc có màu thấm n-ớc, ranh giới phần bị thối phần ch-a bị thối có đ-ờng viền màu nâu sẫm Cây bệnh héo chết nhanh chóng Theo điều tra chúng tôi, bệnh thối nõn dứa đà gây hại diện tÝch lín ë c¸c vïng trång døa thc x· Quỳnh Thắng Quỳnh Tân huyện Quỳnh L-u - Nghệ An Các loại nấm gây hại thực vật, gây hại dứa nhFusarium, Phytophthora, Aspegillus đà tồn tàn d- đất, gặp điều kiện thuận lợi vụ sau, nấm phát triển tiếp tục gây hại trồng Hạch nấm đ-ợc xác định phytophthora Huyện Quỳnh L-u huyện trọng điểm kinh tế Nghệ An Là huyện có nhiều vùng đồi núi, điều kiện thuận lợi để phát triển vùng dứa nguyên liệu Diện tích đất trồng dứa ngày đ-ợc mở rộng nhu cầu n-ớc xuất đặc biệt vùng cung cấp nguyên liệu cho nhà máy ép hoa xà Quỳnh Thắng Trong năm gần tình hình sâu bệnh gây Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng hại dứa, đặc biệt bệnh thối nõn dứa đà làm giảm suất gây thiệt hại không nhỏ kinh tế thu nhập ng-ời sản xuất Nh-ng ch-a tìm đ-ợc giải pháp khắc phục hiệu bệnh thối nõn dứa Hơn công trình nghiên cứu theo h-ớng điều tra tình hình gây bệnh thối nõn dứa Với lý trên, chọn đề tài: Nghiên cứu nấm mốc gây bệnh thối nõn dứa số địa ph-ơng thuộc xà Quỳnh Thắng Qnh T©n - hun Qnh L-u - tØnh NghƯ An” Mục đích nghiên cứu: Nhằm tìm hiểu thực trạng bệnh thối nõn dứa dứa, đồng thời nghiên cứu xác định tác nhân gây bệnh thối nõn dứa số địa ph-ơng xà Quỳnh Thắng x· Qnh T©n - hun Qnh L-u – tØnh NghƯ An Nhiệm vụ nghiên cứu: Điều tra thực trạng bệnh thối nõn dứa số địa ph-ơng thuộc xà Quỳnh Thắng xà Quỳnh Tân (Quỳnh L-u, Nghệ An) Điều tra thành phần loài nấm mốc gặp dứa Xác định chủng nấm mốc tác nhân gây bệnh thối nõn dứa Nghiªn cøu sù sinh tr-ëng cđa mét sè chđng nấm mốc điều kiện pH môi tr-ờng nuôi cấy khác Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Ch-ơng I Tổng quan tài liệu I Đặc điểm chung dứa Cây dứa ăn nhiệt đới n-ớc ta nay, dứa ba loại ăn hàng đầu: Chuối, dứa cam quýt Dứa đ-ợc trồng nhiều nơi toàn quốc Quả dứa dùng để ăn t-ơi chế biến thành sản phẩm xuất Dứa thích hợp với điều kiện nhiệt độ độ ẩm cao, sợ rét s-ơng muối Trong điều kiện thích hợp dứa sinh tr-ởng quanh năm Dứa loại ăn không kén ®Êt Vïng gß ®åi, ®Êt dèc 20 trë xuèng, loại đất nghèo dinh d-ỡng trồng đ-ợc dứa đồng sông Cửu long, đất phèn, dứa tiên phong mở đ-ờng cho loại hoa màu loại khác nh- mÝa, chuèi, cam Trång døa nhanh cho thu hoạch Sau năm đạt suất 10 - 20 tấn/ha Đ-ợc thâm canh tốt, đạt 30 35 Quả dứa đ-ợc xem Hoàng Hậu loài h-ơng vị thơm ngon giàu chất dinh d-ìng Trong qu¶ døa Cayen cã tõ 11 – 15% đ-ờng, (trong saccaroza chiếm 1/3 lại glucoza), 0,6% axit (trong axit xitric chiếm 87% lại axit malic số axit khác) Quả dứa chứa nhiều loại vitamin, vitamin A có 130 đơn vị quốc tế, B 0,08mg; B2 0,02mg; C 4,2mg/100g C¸c chÊt kho¸ng cã: Canxi: 16mg; P : 11mg; Fe 0,3mg; Cu 0,07mg.Thành phần cấu tạo hữu chủ yếu dứa là: Prôtêin: 0,4g; Lipit: 0,2g; Gluxit: 13,7g; Xenluloza: 0,4g; n-ớc: 83,5g Ngoài dứa có enzim Bromelin, loại enzim giúp tiêu hoá tốt Ng-ời ta đà chiết xuất sản xuất chÕ phÈm Bromelin dïng c«ng nghiƯp thùc phÈm, thuộc da, vật liệu làm phim Sản phẩm phụ công nghiệp chế biến dứa đ-ợc dùng làm nguyên liệu để lên men chế biến thành thức ăn gia súc Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Sau thu hoạch quả, dứa dùng để lấy sợi Trong có 3% xenlulo Sản phẩm dệt từ sợi dứa bền đẹp, chất l-ợng tốt sợi đay Thân dứa chứa 12,5% tinh bột, nguyên liệu để lên men chuyển hoá thành môi tr-ờng nuôi cấy nấm vi khuẩn Dứa đ-ợc trồng n-ớc ta từ lâu Khắp từ Bắc đến Nam, tỉnh có dứa Dứa trồng v-ờn, phân tán d-ới tán trồng v-ờn đồi, tập trung hàng trăm nông tr-ờng quốc doanh, trang trại Dứa đ-ợc trồng nhiều tỉnh phía Nam, chiếm 75,43% tổng diện tích n-ớc Trong đó, đồng sông Cửu Long chiếm 69,36% diện tích n-ớc Những tỉnh có diện tích trồng dứa lớn nh-: Kiên Giang ( Rạch Giá, Hà Tiên), Cà Mau, Bạc Liêu, Cần Thơ, Sóc Trăng, Mỹ Tho, Vĩnh Long, Thanh Hoá, Bắc Giang, Phú Thọ Năng suất bình quân đạt 13,7 tấn/ha Trong suất bình quân giới 60 70 tấn/ha Trong năm gần đây, nhà n-ớc đà ý đến việc đầu t- xây dựng sở chế biến dứa Hiện n-ớc có 12 nhà máy chế biến dứa hộp, nhà máy dứa đông lạnh [8] Dứa đ-ợc nhân giống chồi (nhân giống vô tính) phần lớn mọc từ thân Rễ dứa nhỏ phân nhánh nhiều loại đất có tầng mặt đất dày, rễ dứa ăn sâu 0,9m Tuy nhiên hệ thống rễ dứa tập trung tầng đất mặt 10 26cm lan rộng chung quanh đến 1m Đất trồng dứa tốt đất đồi Ferarit đỏ vàng Trên đất cát, đất nhiều sét, đất nặng, rễ phát triển Hàm l-ợng n-ớc đất từ 10 20% thích hợp cho phát triển rễ dứa Đất bÃo hoà n-ớc làm cho rễ dứa phát triển chậm Rễ dứa bị chết ngâm n-ớc 24 Độ pH thích hợp cho dứa phát triển 4,0 4,5 Giới hạn chịu đựng rễ dứa 3,5 6,0 Để cho dứa phát triển bình th-ờng phải có nguyên tố vi l-ợng N, P, K, Ca, Mg, S quan träng nhÊt lµ N, P ThiÕu N, P, rƠ sÏ phát triển, không hoa đ-ợc Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Nhiệt độ ảnh h-ởng mạnh đến sinh tr-ởng phát triển rễ dứa Trong phạm vi từ 12 300C Nhiệt độ tăng rễ phát triển mạnh, nhiệt độ rễ phát triển Hàng năm tháng 3, nhiệt độ ấm lên n-ớc đất đầy đủ, rễ dứa bắt đầu phát triển Sau tháng 4, tháng nhiệt độ tăng dần lên rễ hoạt động mạnh dần lên Vào tháng rễ dứa hoạt động đỉnh cao Sau vào mùa m-a, độ ẩm hàm l-ợng n-ớc cao, rễ hoạt động kém, lúc phát triển mạnh Thời gian rễ hoạt động mạnh phát triển [4] II Sơ l-ợc nấm đất gây hại trồng Nấm có nhiều chức khác mà đến ch-a biết hết chức chúng Có khoảng 100 nghìn loài nấm đà đ-ợc miêu tả nh-ng nhiều loài ch-a đ-ợc quan tâm nghiên cứu Chúng sinh sống tồn tàn d- trồng ruộng đất nguồn dinh d-ỡng chúng chất hữu phân giải Có khoảng 8000 loài nấm đ-ợc biết có khả gây bệnh cho trồng có vài loài nấm gây hại nhiều loại trồng Những nấm gây bệnh cho trồng mà có khả tồn lâu dài đất tàn d- trồng đ-ợc gọi nấm có nguồn gốc đất gây hại trồng Chúng dễ dàng lan truyền qua đất qua trồng từ vùng qua vùng khác Tuy nhiên có vài loại nấm đất bó hẹp vùng địa lý định Chúng gây bệnh cho rễ phần trồng tiếp xúc với đất Vì mà chúng đ-ợc phát thấy phận mặt đất có biểu nh- héo, vàng, đổ rạp, thối gốc phần thân, lá, củ, bị thối Bệnh nấm đất gây khó phòng trừ nấm bệnh có khả tồn đất lâu đồng ruộng mặt chủ Thêm chúng có phổ ký chủ rộng; bao gồm loại cỏ Các biện pháp phòng trừ thuốc hoá học th-ờng không hiệu biện Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng pháp dùng chống bệnh khó khăn tốn Bệnh nấm đất khó phân lập nhanh chóng để xác định bệnh có số nấm khả nuôi cấy môi tr-ờng nhân tạo sử dụng môi tr-ờng nhân nuôi đắt tiền Nhiệt độ, hàm l-ợng n-ớc đất độ pH yếu tố quan trọng ảnh h-ởng tới sinh tr-ởng, phát triển bảo tồn nấm Nhiệt độ thích hợp nấm 25 280C, nhiệt ®é thÊp nhÊt lµ – 100C vµ cao nhÊt 350C Vì vậy, hầu hết loại nấm phát triển thể ng-ời Độ pH thích hợp 6,5 Điều kiện hanh khô thích hợp cho nấm bảo tồn điều kiƯn nãng Èm [4]  TriƯu chøng cđa bƯnh nÊm đất: Nấm đất xâm nhiễm gây hại trồng làm cho rễ tế bào mạch dẫn thân không khả hút n-ớc chất dinh d-ỡng từ đất Vì vậy, triệu chứng bệnh nấm đất gây th-ờng giống nhau: gây héo vàng, còi cọc chết Những triệu chứng nh- rÊt khã cã thĨ cho kÕt ln chÝnh x¸c ruộng chết nấm gây bệnh mà th-ờng phải qua trình phân lập, nuôi cấy phòng thí nghiệm để xác định nguyên nhân gây bệnh Sự bảo tồn nấm: Nấm gây bệnh tồn đất thời gian dài kể điều kiện ký chủ Chúng bảo tồn sợi nấm, hạch nấm, hậu bào tử, bào tử trứng bào tử có vách dày đất tàn d- trồng III Những bệnh th-ờng gặp dứa Một số nghiên cứu n-ớc đà cho thấy bệnh hại dứa không nhiều số l-ợng, nh-ng có loại bệnh có ảnh h-ởng lớn đến suất dứa đặc biƯt lµ bƯnh thèi nân døa [9, 12] 4.1 BƯnh thèi nân døa  TriƯu chøng: C©y døa cã thĨ nhiễm bệnh từ trồng đến thu hoạch Bộ phận bị bệnh bao gốm rễ, thân, quả, lánh-ng triƯu chøng phỉ biÕn nhÊt lµ thèi nân døa Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Rễ bị bệnh ban đầu th-ờng có mầu thấm n-ớc, sau chuyển thành màu đen, phát triển chậm ( nhiỊu ng-êi ta nhÇm t-ëng rƠ bi rệp sáp tuyến trùng ) Lá chuyễn màu vàng nhạt Bệnh phát triển vào thân, gây thối thân thối nõn, chuyển màu vàng nhạt, th-ờng thối gốc lá, dễ rút dứa khỏi thân bị bệnh Gốc bị thối có màu thấm n-ớc, sau thối đen Ranh giới phần bệnh phần khoẻ th-ờng có màu nâu thẩm Các dứa đà tr-ởng thành bị bệnh thối th-ờng đổ ngà ruộng Nấm gây bệnh phát triển cuống quả, cuống bị bệnh gặp trời nắng khô dần, gặp trời m-a thối bị gảy Quả bị thối nấm vi sinh vật hoại sinh khác Tác nhân g©y bƯnh: BƯnh thèi nân døa nÊm phytophthora g©y tuỳ theo điều kiện khí hậu thời tiết vùng địa lí khác mà có loại nấm khác gây hại Trên giới thông th-ờng có ba loại Phytophthora gây hại P cinamomi, P nicotinanae P palmivora Việt Nam, theo kết nghiên cứu b-ớc đầu cho thấy có hai loại nấm P cinamomi P nicotinanae gây hại mẫu bệnh thu nhập tỉnh miền Trung tỉnh phía Bắc Điều kiện phát sinh gây hại: Nấm bệnh phát sinh nhiệt độ 190C 360C, ẩm độ đất không khí cao tạo điều kiện cho bệnh phát triển N-ớc tự đất giúp cho bệnh lây lan thuận lợi Độ pH đất cao gây bệnh hại nặng so với đất có pH thấp (đất vùng Đồng giao Ninh Bình dứa bị bệnh nặng so với ®Êt chua phÌn ë ®ång b»ng s«ng Cưu Long ) 4.2 Một số bệnh hại dứa khác Ngoài bệnh thối nõn dứa nấm Phytophthora, số nghiên cứu khác ghi nhận hiển diện phá hoại nấm Sclerotium rolfsii nh-ng tỷ lệ thấp Nấm gây hại cổ thân dứa sát mặt đất Triệu Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng chứng bệnh sau dứa bị héo vàng, phần bị bệnh bị thối có nhiều hạch nấm Nhìn chung thiệt hại bệnh không đáng kể số vùng nh- Thừa Thiên Huế Ninh Bình, mùa m-a, ghi nhận sù hiĨn diƯn cđa nÊm Phythium sp NÊm g©y bƯnh thối rễ, bị bệnh có rễ phát triển rễ bị bệnh thối đen khô lại âm độ đất thấp bị bệnh phát triển chậm Bệnh phổ biến Thừa Thiên Huế Những nghiên cứu bệnh ch-a đ-ợc tiến hành nhiều n-ớc ta [4] IV Đặc điểm phân loại nấm mốc Phytophthora Loại nấm đ-ợc Anton DeBari mô tả vào năm 1876 với loài nấm Phytophthora anfestans Sợi nấm dày thô nấm Phythium cành bào tử nang phát triển có giới hạn, bào tử nang sinh du động bào tử mà thục bào tử nang tr-ớc đ-ợc giải phóng chúng nảy mầm bào tử nang tr-ớc giải phóng, bào tử nang trực tiếp sinh sợi nấm Có thể có gai nhọn bề mặt đặc biệt loài sống môi tr-ờng biển Những loài đồng tản (bào tử trứng sinh có gặp dòng t-ơng hợp) Tuy nhiên, số dòng khác tản trở thành dòng đồng tản sau vài lần nuôi cấy nhân tạo Thể đực luôn tế bào, nh-ng cã thĨ cã tÕ bµo vµ sù kÕt dÝnh chúng noÃn đính bên hay thể noÃn mọc xuyên qua thể đực Một số đặc điểm phân biệt loài chi Phytophthora: Sợi dạng san hô Sợi nấm có u b-ớu nhỏ giống nh- san hô đặc điểm nấm P cinnamomi Đầu cuối sợi nấm cuộn lại thấy nấm P porri Những u phình góc cạnh thành chuỗi sợi nấm thấy loài P.cryptogae, P erythroseptica P richardiae Các u phình sợi nấm có dạng hình cầu, to tụ tập với đặc điểm P cinnamomi 10 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng So sánh tình trạng bệnh thèi nân døa (BiĨu ®å 2) víi diƠn biÕn cđa nhiệt độ (Biểu đồ 3) l-ợng m-a (Biểu đồ 4) năm (mặc dù số liệu năm 2006 nh-ng xem điều kiện thời tiết lặp lại năm 2005) đ-a nhận xét rằng: Sự phát triển bệnh dứa vào tháng (Đợt 1) chịu tác động nhiệt độ cao l-ợng m-a cao từ tháng tr-ớc (tháng đến tháng 9) Còn phát triển bệnh dứa vào tháng (Đợt 2) chịu tác động nhiệt độ thấp l-ợng m-a từ tháng tr-ớc (tháng 12 năm tr-ớc đến tháng năm sau) Từ sở ®ã cho thÊy: + BƯnh thèi nân døa ph¸t triĨn mạnh điều kiện nhiệt độ tăng cao (26,40C đến 29,10C) l-ợng m-a nhiều (131 đến 409mm) (Đợt tháng 9/2005) Còn nhiệt độ giảm xuống (17,20C đến 21,20C) l-ợng m-a giảm xuống (27,5 đến 82,6mm) tỷ lệ bị thối nõn đ-ợc giảm xng Trong thùc tÕ, qua ®iỊu tra mét sè cã kinh nghiƯm trång døa, bƯnh thèi nân døa ph¸t triển mạnh vào tháng tháng hàng năm 3-4 tháng tuổi + Bên cạnh ảnh h-ởng điều kiện thời tiết bệnh thối nõn dứa cho thấy có liên quan đến đặc điểm sinh lý dứa Vào thời điểm tháng 9/2005 giai đoạn dứa sinh tr-ởng mạnh nên góp phần tạo điều kiện cho bệnh thối nõn phát triển Còn vào thời điểm tháng 4/2006 3- tháng tuổi đà trở thành năm tuổi, tức đà tr-ởng thành, chuẩn bị hoa tạo nên đà hạn chế đ-ợc bệnh thối nõn Điều có nghĩa bệnh thối nõn dứa xảy non lẫn tr-ởng thành, bệnh 3-4 tháng tuổi chiếm tỷ lệ cao so với năm tuổi III Kết điều tra thành phần nấm mốc dứa 3.1 Thành phần chủng nấm mốc đ-ợc phát dứa Từ mẫu nõn, thân bị bệnh thối nõn đà phục hồi (đà bị bệnh thối nõn vào mùa tr-ớc), đà tiến hành phân 20 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng lập phát đ-ợc 11 chủng nấm mốc là: NN1, NN2, NN3, NN4, NN5, NN6, NN7, NN8, NN9, NN10 vµ NN11 Các chủng đà đ-ợc làm bảo quản Phòng thí nghiệm Vi sinh, khoa Sinh học, tr-ờng Đại học Vinh Đặc điểm mô tả khuẩn lạc 11 chủng đ-ợc trình bày Bảng Bảng Đặc điểm mô tả chủng nấm mốc đ-ợc phát dứa TT Ký hiệu chủng NN1 NN2 NN3 NN4 NN5 NN6 NN7 NN8 NN9 10 NN10 11 NN11 Đặc điểm mô tả sau ngày nuôi cấy Khuẩn lạc ban đầu màu trắng, xốp, sau chuyển sang màu hồng tím Đ-ờng kính khuẩn lạc: 3-4 cm Bào tử lớn, hình l-ỡi liềm, có 3-5 vách ngăn, chất tiết màu đỏ môi tr-ờng thạch Khuẩn lạc có màu xanh lam, đ-ờng kính: 2-3 cm Bào tử tròn, màu xanh, tập trung đỉnh sợi nÊm, sau ngµy khèi bµo tư chun sang mµu đen Khuẩn lạc màu xanh lục, sau chuyển sang màu nâu đen, đ-ờng kính: 1,5 2cm Bào tử hình cầu phân bố thành lớp màu đen bề mặt khuẩn lạc Khuẩn lạc màu trắng, sau chuyển sang màu vàng nhạt, đ-ờng kính 2cm Bào tử hình tròn, màu vàng nhạt Chất tiết giọt n-ớc bề mặt khuẩn lạc Khuẩn lạc màu lục chàm, đ-ờng kính: 1,5-2 cm Bào tử hình tròn, nhỏ, màu vàng lục Không thấy chất tiết Khuẩn lạc có màu nâu đen, đ-ờng kính: 0,8-1,0 cm Bào tử trần, hình cầu có gai, màu lục xanh Chất tiết có màu trắng đục xuất bề mặt khuẩn lạc Khuẩn lạc màu lục xanh, đ-ờng kính: 0,7-1,2 cm Bào tử hình cầu, nhỏ, màu vàng Chất tiết môi tr-ờng thạch màu đen Khuẩn lạc màu trắng ngà, xốp, đ-ờng kính: 4-5 cm Bào tử hình l-ỡi liềm, có 3-7 vách ngăn Chất tiết giọt màu vàng đậm bề mặt khuản lạc Khuẩn lạc màu xanh lục, sau chuyển sang màu đen tím, kích th-ớc: 0,7-1,0 cm Bào tử hình cầu Chất tiết màu đen vào môi tr-ờng thạch Khuẩn lạc màu tím than, đ-ờng kính 2,5-3 cm Bào tử hình cầu, màu đen Chất tiết giọt n-ớc không màu bề mặt khuẩn lạc Khuẩn lạc có màu trắng, xốp, gồm sợi th-a giống nh- cành san hô, ®-êng kÝnh: -4 cm Kh«ng thÊy cã chÊt tiÕt Sự phát chủng từ mẫu phân tích khác đ-ợc trình bày Bảng 6: - Tổng số chủng nấm mốc gặp mẫu bị thối nõn 10 chủng mẫu đà phục hồi chủng Điều đáng ý số chủng 21 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng mẫu đà phục hồi có chủng gặp mẫu bị thối nõn Do đó, kết không đủ sở để khẳng định chủng nấm mốc tác nhân gây nên bệnh thối nõn dứa Có thể, hầu hết chủng đ-ợc phát sống bì sinh dứa - Những chủng có tần số gặp nhiều hầu hết loại mẫu phân tích là: NN1 (6/6 loại mẫu), NN2 (4/6), NN4 (5/6), NN6 (4/6) NN11 (5/6) - Đối với bị thối nõn số l-ợng chủng gặp chủ yếu nõn (đang bị thối) (8 chủng) (7 chủng) Còn đà phục hồi số l-ợng chủng nấm mốc phát nõn (6 chủng), thân (5 chủng) (6 chủng) t-ơng đ-ơng Bảng Sự phát chủng nấm mẫu phân tích TT Ký hiệu Cây bị thối nõn Cây đà phục hồi chủng Nõn Thân Lá Nõn Thân Lá NN1 + + + + + + NN2 + ++ + + NN3 + ++ NN4 + + + ++ ++ NN5 NN6 NN7 NN8 NN9 + 10 NN10 + 11 NN11 + + + + + + + + ++ + + ++ + + + + Tæng Ghi chó: +: gỈp Ýt, ++: gỈp nhiỊu 22 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng 3.2 Những chủng nấm tác nhân gây bệnh thối nõn dứa Chúng đà tiến hành phân tích 15 mẫu 15 gốc phần thối nõn 15 dứa bị thối nõn khác (thu từ xà Quỳnh Thắng Quỳnh Tân) Các mẫu đ-ợc lấy cách gốc từ 0,5- 1cm đà đ-ợc rửa cồn 700 Sau đó, dùng dao vô trùng cắt tách loại bỏ lớp tế bào biểu bì xung quanh Đặc điểm phần gốc bị thối đà chuyển sang màu sẫm bắt đầu có dấu hiệu nhũn Bảng Những chủng nấm mốc phát đ-ợc gốc bị bƯnh thèi nân Sè mÉu ph©n TT Ký hiƯu chđng Sè mÉu gỈp NN6 15 6.6% NN8 15 6.6% NN11 15 15 100% tÝch Tû lệ Kết phân tích (Bảng 7) cho thấy: + Trong mô gốc bị thối có mặt chủng nấm mốc là: NN 6, NN8 NN11 Trong đó, chủng NN6 NN8 xuất với tần số thấp (1/15 mẫu phân tích) Chủng NN11 đà xuất 100% mẫu (15/15 mẫu phân tích), có 13 mẫu phân tích gặp chủng NN11 mà Kết phân tích cho phép khẳng định chủng NN11 tác nhân gây nên bƯnh thèi nân døa + Chđng NN6 xt hiƯn ë phần nõn bị thối nõn, bị thối nõn đà phục hồi + Chủng NN8 xuất phần thân, bị thối nõn thối nõn đà phục hồi + Chủng NN11 xuất tất phần bị thối nõn, phần nõn thân bị thối nõn đà phục hồi Trong bị thối nõn xuất nhiều + Những chủng khác (NN1, NN2, NN3, NN4, NN5, NN7, NN9, NN10) không xuất phần mô gốc bị thối nõn, chứng tỏ: chủng 23 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng sống bì sinh bên dứa không ảnh h-ởng nhiều đến dứa chúng phân bố phổ biến nhiều phần dứa + Từ kết nghiên cứu cho thấy đà đ-ợc phục hồi mầm bệnh tồn phát triển trở lại điều kiện thuận lợi Vì nhân giống cần ý đến mầm chồi nhân giống 3.3 Kết định loại chủng NN6 , NN8 , NN11 Để tìm hiểu rõ chủng nấm mốc đ-ợc phát phần mô gốc bị thối nõn, đà tiến hành định loại chủng đó: 3.3.1 Chủng NN6 - Khuẩn lạc có màu lục sẫm, đ-ờng kính sau ngày: 0,8-1,0 cm Chất tiết có màu trắng đục xuất bề mặt khuẩn lạc - Bọng đỉnh giá thẳng Bào tử trần hình cầu, đ-ờng kính 2.0 3.5 àm, có gai - KÕt ln: Chđng NN6 lµ Aspegillus fumigatus Fres [6] Hình Bọng cuống bào tử chủng NN6 (x 600) Hình Bào tử hình cầu có gai chđng NN6 (x 1.000) 3.3.2 Chđng NN8 - Khn l¹c màu trắng ngà, xốp, đ-ờng kính sau ngày: 4-5 cm Chất tiết giọt màu vàng đậm bề mặt khuẩn lạc - Giá bào tử trần lớn ngắn, 10 -20àm đơn có nhánh phần đỉnh Thể bình thành cụm đỉnh giá nhánh; 3.5 4.0 x 20 - 25àm Bào tử trần lớn có ngăn đỉnh dài, cong l-ỡi liềm, có vánh ngăn 24 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng - Kết luận: Chủng NN8 Fusarium moniliforme Sheldon.[6] Hình Bào tử lớn bào tử bé cña chñng NN8 (x 1.000) 3.3.3 Chñng NN11 - KhuÈn lạc có màu trắng, xốp, gồm sợi th-a giống nh- cành san hô, đ-ờng kính: -4 cm Không thấy có chất tiết - Các u phình hình cầu sợi nấm t-ơng đối lớn, có vách ngăn, màng mỏng Các bào tử th-ờng dày lên đỉnh Thể trøng dµy - KÕt ln: Chđng NN11 lµ Phytophthora sp [8 ] Hình Các u phình hình cầu chủng NN11 (x 1.000) Hình Cấu tạo thể trứng chủng NN11 (x1.000) 25 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng 3.4 Kết nghiên cứu ảnh h-ởng pH môi tr-ờng nuôi cấy nấm đến sinh tr-ởng phát triển chủng NN11 Nh- kết đà trình bày mục 3.2 3.3., chủng NN11 đ-ợc xác định tác nhân gây nên bệnh thối nõn dứa thuộc chi Phytophthora Kết nghiên cứu khả sinh tr-ởng chủng NN 11 môi tr-ờng lỏng Sacbouraud-Dextro có điều kiện pH khác đ-ợc trình bày bảng Bảng Kết theo dõi thay đổi pH môi tr-ờng tạo thành sinh khối chủng NN11 TT pH m«i tr-êng Sau Sau Sau ngày 4,3 4,5 5,0 Sinh khối t-ơi Sau 12 Ban đầu Sau 12 ngày (g) ngày (g) 5,7 1,00 5,00 Ban đầu 4,0 5,0 5,2 5,5 6,0 6,0 1,00 7,20 6,0 6,0 6,0 6,0 6,0 1,00 9,81 7,0 7,0 7,0 6,5 6,5 1,00 8,70 8,0 7,6 7,0 7,0 6,5 1,00 8,05 KÕt Bảng cho thấy: + Trong môi tr-ờng có pH ban đầu =6 giá trị pH đ-ợc ổn định suốt trình thử nghiệm, đồng thời lô thí nghiệm có giá trị pH ban đầu khác có xu h-ớng điều chỉnh pH giá trị xung quanh pH=6 Điều cho thÊy r»ng m«i tr-êng -a thÝch cđa chđng NN 11 pH=6 + Trong môi tr-ờng có tính kiềm (pH=8,0) trung tính (pH=6,0 pH=7,0) suất sinh khối chủng NN11 sau 12 ngày nuôi cao so với môi tr-ờng mang tính axit (pH=4,0 pH=5,0) Kết phù hợp với số công trình nghiên cứu tác giả khác thể bảng 26 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Bảng So sánh kết nghiên cứu pH môi tr-ờng chủng NN11 với công trình nghiên cứu tác giả khác Kết nghiên cứu pH môi tr-ờng Kết nghiên cứu Đồng Giao chủng NN11 (Ninh Bình) §ång b»ng s«ng Cưu Long [9] Trong m«i tr-êng kiỊm trung Độ pH đất cao bệnh thối tính, chủng NN11 (cho sinh khối từ nõn nặng so với đất có pH 8,05 đến 9,81g/250ml/12ngày) phát thấp (ở vùng đất Đồng Giao - Ninh triển mạnh môi tr-ờng Bình, dứa bị bệnh thối nõn nặng axit (cho sinh khối từ 5,00 đến so với đất chua phèn Đồng 7,20g/250ml/12ngày) sông Cửu Long) 27 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Kết luận đề nghị I Kết luận Trong đợt nghiên cứu, tỷ lệ dứa bị bệnh thối nõn xà Quỳnh Thắng (Đợt 1: 1,92%, Đợt 2: 1,43%) cao so xà Quỳnh Tân (Đợt 1: 1,46%, Đợt 2:1,21%) Bệnh thối nõn dứa vào tháng 9/2005 (Đợt 1) với tỷ lệ bệnh 1,68% chiếm tỷ lệ cao so với vào tháng 4/2006 (Đợt 2) với tỷ lệ bệnh 1,32% Bệnh thối nõn dứa phát triển mạnh vào tháng 7-8 hàng năm dứa đ-ợc 3-4 tháng tuổi Bệnh thối nõn dứa xảy non lẫn tr-ởng thành, bệnh 3-4 tháng tuổi chiếm tỷ lệ cao so với năm tuổi Có 11 chñng nÊm mèc (NN1, NN2, NN3, NN4, NN5, NN6, NN7, NN8, NN9, NN10 N11) đà đ-ợc phân lập từ mẫu nõn, thân dứa bị thối nõn dứa đà bị thối nõn nh-ng đà phục hồi Các chủng đ-ợc mô tả quan sát hiển vi Có chủng nấm mốc (NN6, NN8 NN11) đ-ợc phát thấy phần mô gốc bị thối nõn Trong đó, chủng NN 11 đ-ợc khẳng định tác nhân gây nên bệnh thối nõn dứa Các chủng đà đ-ợc định loại: + Chủng NN6 aspegillus fumigatus + Chđng NN8 lµ Fusarium moniliforme Sheldon + Chủng NN11 là: Phytophthora sp Môi tr-ờng -a thích chủng NN11 pH=6 Trong môi tr-ờng kiềm trung tÝnh, chđng NN11 (cho sinh khèi tõ 8,05 ®Õn 9,81g/250ml/12ngày) phát triển mạnh môi tr-ờng axit (cho sinh khối từ 5,00 đến 7,20g/250ml/12ngày) Liên hệ với thực tÕ cho thÊy sù ph¸t triĨn cđa chđng NN11 đất có tính kiềm mạnh đất chua phèn 28 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng II Đề nghị Trong điều kiện thời gian cho phép, tiến hành điều tra phạm vi nhỏ nên ch-a đánh giá hết khả gây hại bệnh thối nõn dứa đến suất sản xuất Đề tài mang tính điều tra b-ớc cần tập trung sâu nghiên cứu đặc tính sinh học điều kiện tự nhiên chủng nấm mốc tác nhân gây bệnh thối nõn dứa để đ-a biện pháp phòng ngừa hiệu quả, đáp ứng đ-ợc yêu cầu sản xuất 29 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Tài liệu tham khảo C Booth, 1971 The genus Fusarium Common Wealth Mycologiacal Institute, England Michael J Carlile, Sarah C Watkinson, Grahan W Gooday, 1994 The Fungi Sandego Sanfancissco Newyork, Boston-LonDon-Sydney-Tokyo Nguyễn Đình Châu, 2005 Thùc tËp lín di trun – Vi sinh - Tr-ờng Đại Học Vinh Đ-ờng Hồng Dật, 2003 Cây dứa kỹ thuật trồng NXB Lao động Xà hội Nguyễn Lân Dũng cộng sự, 1978 Một sè nghiªn cøu vi sinh vËt - tËp 1, 2, – NXB Khoa häc vµ Kü tht Ngun Lân Dũng, Bùi Xuân Đồng, Lê Đình L-ơng, 1982 Vi nÊm – NXB Khoa häc vµ Kü thuËt Bïi Xuân Đồng, 2004 Nguyên lý phòng chống nấm mốc Mycotoxin – NXB Khoa häc vµ Kü thuËt, Hµ Néi Bùi Xuân Đồng, Nguyễn Văn Huy, 2000 Vi nấm dùng công nghệ sinh học NXB Khoa học Kü thuËt, Hµ Néi Lester W Burgess, TS Fiona Benyon, TS Nguyễn Kim Vân, TS Ngô Vĩnh Viễn, ThS Nguyễn Thị Ly, KS Trần Nguyên Hà, KS Đặng Lam Hồng, 2001 Bệnh nấm mốc gây hại trồng Nguyên nhân biện pháp phòng trừ Trung tâm nghiên cứu Nông nghiệp Quốc Tế Ôxtrâylia 10 Nguyễn Ngọc Tú, Nguyễn Cửu Thị H-ơng Giang, 1997 Bảo vệ c©y trång b»ng chÕ phÈm ph©n tư vi nÊm NXB Nông nghiệp TPHCM 11 Nguyễn D-ơng Tuệ, 2003 Bài giảng thực tập lớn vi sinh Đại Học Vinh 12 Ngo V Vien, F.H.L Benyon et al, 2001 Heart Rot of Pineapple in Northern Vietnam Astralasian Plant Pathology Vol 30 30 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Phần phụ lục Phụ lục Số liệu điều tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Thắng (Đợt 1- tháng 9/2005) Diện tích T.T Tên chủ hộ Địa điểm Tổng số T.số cây thối nõn 1200 3400 46 điều tra (m2) Ông Đạt Ông Thành Ông Sơn Ông Đồng Xóm Q.Tân Xóm2 Q.Tân Xóm2 Q.Tân TĐTNXP Q Thắng 980 2760 36 1170 3230 56 1008 2930 57 Ông Quang TĐTNXP Q.Thắng 1117 3120 61 Ông Thanh TĐTNXP Q.Thắng 780 2262 42 Tæng x· 6255m2 17702 298 31 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Phụ lục Hồ Đình C-ơng Số liệu điều tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Tân - Quỳnh L-u Nghệ An (Đợt Tháng 3/2006) T.T Tống.S điều Tên chủ hộ Địa điểm Ông An Ông Tiến Ông Hoà Ông Hoan Ông Mạnh Ông Hạ ¤ng Thä ¤ng B×nh ¤ng Nghinh 10 ¤ng Thìn 11 Ông Thoả 12 Ông Minh 13 Ông Tin Tỉng 13 tra (m2) Tỉng sè c©y T.sè c©y thối nõn S-ờn đồi X2- QTân Ven đồi X2- QTân Ven đồi X2- QTân Đỉnh đồi X2- QTân S-ờn đồi X2- QTân Đỉnh đồi X2- QTân Ven đồi X7- QTân Ven đồi X7- QTân 400 4480 54 1750 5425 59 2200 7040 77 1800 6120 64 2040 6934 90 1650 5610 57 1600 6400 78 2100 7350 91 S-ên ®åi X7- QT©n 900 3600 50 S-ên ®åi X7- QT©n Đỉnh đồi X7- QTân Đỉnh đồi X7-QTân S-ờn đồi X7- QT©n 1400 4760 68 1380 4830 57 1100 3520 36 1080 3670 53 20400m2 69735 844 32 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Phụ lục3: Số liệu điều tra bệnh gây hại dứa xà Quỳnh Thắng- Quỳnh L-u Nghệ An (đợt tháng 2006) T.T Tên chủ hộ Ông Nam Ông Sơn Bà Thu Ông Thích Ông Ban Bà Đoài Ông Hợp Ông Toàn Ông Đắc 10 Ông Miên 11 Ông Hội 12 Ông Dần 13 Ông Tuệ Tổng 13 hộ T.số Số thối điều tra nõn (C©y) (C©y) 2000 9000 128 1480 5920 87 1900 6200 94 1300 5200 78 1600 6400 98 1000 4300 56 1500 6300 84 1700 5800 78 1600 6400 90 1600 5600 84 1400 5400 82 1200 3600 50 1800 6300 86 20080 76420 1095 Tổng S.điều Địa điểm Ven đồi TĐ TNXP Ven đồi TĐ TNXP S-ờn đồi TĐTNXP S-ờn ®åi T§.TNXP S-ên ®åi T§.TNXP §Ønh ®åi T§.TNXP §Ønh ®åi TNXP Ven đồi X5.QThắng Ven đồi X5.QThắng S-ờn đồi X5.QThắng S-ờn đồi X5.QThắng Đỉnh đồi X5.QThắng Đỉnh đồi X5.QThắng tra (m2) 33 Luận văn tốt nghiệp Cử nhân Sinh học Hồ Đình C-ơng Phụ lục Một số hình ảnh dứa nấm mốc ảnh Cây dứa có nõn phát triển bình th-ờng ảnh Cây dứa bị thối nõn ảnh Chủng nấm mốc NN11 phân lËp ®Üa petri 34 ... trạng bệnh thối nõn dứa số địa ph-ơng thuộc xà Quỳnh Thắng xà Quỳnh Tân (Quỳnh L-u, Nghệ An) Điều tra thành phần loài nấm mốc gặp dứa Xác định chủng nấm mốc tác nhân gây bệnh thối nõn dứa Nghiªn... hình gây bệnh thối nõn dứa Với lý trên, chọn đề tài: Nghiên cứu nấm mốc gây bệnh thối nõn dứa số địa ph-ơng thuộc xà Quỳnh Thắng Quỳnh T©n - hun Qnh L-u - tØnh NghƯ An? ?? Mục đích nghiên cứu: ... pháp nghiên cứu I Đối t-ợng nghiên cứu Đối t-ợng nghiên cứu đề tài dứa loài nấm mốc dứa hai xà Quỳnh Thắng Quỳnh Tân huyện Quỳnh L-u Nghệ An II Thời gian địa điểm nghiên cứu 2.1 Thời gian nghiên