Xác định hàm lượng vitamin d2 và khoáng chất (ca, mg) trong một số nấm lớn ở bắc trung bộ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HÓA HỌC ===  === N TT NGHIP Đề tài: XC NH HM LNG VITAMIN D2 VÀ KHOÁNG CHẤT (Ca, Mg) TRONG MỘT SỐ NẤM LỚN Ở BẮC TRUNG BỘ GV hướng dẫn: SV thực hiện: Lớp: ThS Hoàng Văn Trung Đậu Thị Son - 1152040548 Nguyễn Thị Thanh - 1152043838 52K - CNTP Nghệ An - 5/2016 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Đậu Thị Son - 1152040548 Nguyễn Thị Thanh - 1152043838 Khóa : 52K - CNTP Ngành : Công nghệ thực phẩm Tên đề tài: Xác định hàm lƣợng vitamin D2 khoáng chất (Ca, Mg) số nấm lớn Bắc Trung Bộ Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: Cán hướng dẫn : ThS Hoàng Văn Trung Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 201 Ngày hoàn thành đồ án Ngày tháng năm 201 : Ngày tháng năm 201 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) Chủ nhiệm môn (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án vào ngày ii tháng năm 201 Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XẾT TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Đậu Thị Son - 1152040548 Nguyễn Thị Thanh - 1152043838 Khóa : 52K - CNTP Ngành : Cơng nghệ thực phẩm Cán hướng dẫn : ThS Hoàng Văn Trung Cán duyệt : Nội dung nghiên cứu, thiết kế Nhận xét cán hƣớng dẫn Ngày tháng năm 201 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc BẢN NHẬN XẾT TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Đậu Thị Son - 1152040548 Nguyễn Thị Thanh - 1152043838 Khóa : 52K - CNTP Ngành : Cơng nghệ thực phẩm Cán hướng dẫn : ThS Hoàng Văn Trung Cán duyệt : Nội dung nghiên cứu, thiết kế Nhận xét cán hƣớng dẫn Ngày tháng năm 201 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) iv LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phịng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An tồn Thực phẩm Mơi trường - Trường Đại học Vinh Ch ng xin chân thành cảm n Ban giám hiệu Trường Đại học Vinh, môn Công Nghệ Thực Phẩm, qu thầy cô truy n đạt ki n th c cho ch ng thời gian học tập trường Với lịng kính trọng bi t n sâu sắc, ch ng xin chân thành g i lời cảm n đ n thầy giáo Th.S Hồng Văn Trung - Khoa Hóa học - Trường Đại học Vinh giao đ tài, tận tình hướng dẫn, tạo u kiện thuận lợi suốt q trình nghiên c u hồn thành đ tài Ch ng xin g i lời cảm n đ n thầy cô, cán Trung tâm Thí nghiệm gi p đ ch ng tơi q trình thực đ tài Và lịng bi t n sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên, gi p đ ch ng tơi hồn thành đ tài Vinh, tháng 05 năm 2016 Sinh viên thực Đậu Thị Son - Nguyễn Thị Thanh i MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii BẢNG KÝ HIỆU CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC CÁC BANG v MỞ ĐẦU 1 L chọn đ tài Ý nghĩa khoa học nghĩa thực tiễn đ tài Đối tượng phạm vi nghiên c u PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan v nấm 1.1.1 Giới thiệu v giới nấm 1.1.2 Phân loại nấm 1.1.3 Nấm ăn 1.1.4 Nấm dược liệu 1.1.5 Tầm quan trọng nấm 1.2 Tổng quan v vitamin D 1.2.1 Giới thiệu, cấu tạo, phân loại tên gọi 1.2.2 Vai trò vitamin D c thể 1.2.3 Nguồn cung cấp vitamin D cho c thể 1.2.4 Tình hình nghiên c u ngồi nước 10 1.2.5 Các phư ng pháp xác định vitamin D 11 1.2.6 Đánh giá, lựa chọn phư ng pháp 13 1.3 Tổng quan v nguyên tố canxi, magie 14 1.3.1 Tổng quan v nguyên tố canxi 14 1.3.2 Tổng quan v nguyên tố magiê 15 1.3.3 Các phư ng pháp phân tích canxi magie 15 1.4 Phư ng pháp sắc k lỏng hiệu cao (HPLC) 16 1.4.1 Nguyên lý 16 1.4.2 Hệ thống HPLC 16 1.4.3 C ch trình tách HPLC 19 1.5 Phư ng pháp quang phổ hấp thụ nguyên t 19 1.5.1 Sự xuất phổ hấp thụ nguyên t 19 1.5.2 Q trình ngun t hóa mẫu 20 1.5.3 Các y u tố ảnh hưởng phư ng pháp loại trừ phép đo AAS 20 PHẦN PHƯƠNG PHÁP THỰC NGHIỆM 24 2.1 Thi t bị, dụng cụ, hóa chất 24 2.1.1 Thi t bị 24 2.1.2 Dụng cụ 24 ii 2.1.3 Hóa chất 25 2.2 Pha dung dịch chuẩn 26 2.2.1 Pha dung dịch chuẩn vitamin D2 26 2.2.2 Pha dung dịch chuẩn Ca, Mg 26 2.3 Thu thập bảo quản mẫu 26 2.4 X l mẫu 26 2.4.1 Mẫu phân tích vitamin D2 26 2.4.2 Mẫu phân tích Ca, Mg 28 PHẦN KẾT QUẢ, THẢO LUẬN 30 3.1 K t xác định vitamin D2 30 3.1.1 Khảo sát phổ hấp thụ tia UV vitamin D2 dung dịch 30 3.1.2 Xác định khoảng n tính đường chuẩn vitamin D2 30 3.1.3 Khảo sát độ lặp lại máy 34 3.1.4 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phư ng pháp 36 3.1.5 Xác định độ lệch chuẩn (SD) độ lệch chuẩn tư ng đối RSD( ) phép phân tích vitamin D2 mẫu nấm 36 3.1.6 Thời gian chi u xạ 37 3.1.7 Xác định hiệu xuất thu hồi 42 3.1.8 K t phân tích số mẫu nấm 43 3.2 K t xác định Ca Mg 47 3.2.1 Xây dựng đường chuẩn, xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) kim loại canxi 47 3.2.2 Xây dựng đường chuẩn, xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) kim loại magiê 48 3.2.3 Đánh giá độ lặp lại, độ thu hồi phư ng pháp 49 3.2.4 Ti n hành phân tích mẫu nấm 52 KẾT LUẬN 54 Đã khảo sát u kiện tối ưu xác định Vitamin D2 54 Xây dựng phư ng trình đường chuẩn vitamin D2, Ca, Mg 54 K t phân tích 54 Xác định giới hạn định lượng (LOQ) giới hạn phát (LOD), độ thu hồi phư ng pháp 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 iii BẢNG KÝ HIỆU CÁC TỪ VIẾT TẮT AOAC : Hiệp hội nhà hố học phân tích thống HPLC : Sắc k lỏng hiệu cao MeOH : Metanol AAS : Quang phổ hấp thụ nguyên t AbS : Độ hấp thụ quang AES : Phổ phát xạ nguyên t F-AAS : Quang phổ hấp thụ nguyên t kỹ thuật l a FES : Quang k l a FIA : Kỹ thuật b m mẫu dòng chảy GF-AAS : Quang phổ hấp thụ nguyên t kỹ thuật graphit GPX : Enzim glutathione peroxidase HCL : Đèn catot rỗng HG-AAS : Quang phổ hấp thụ nguyên t kỹ thuật hidrua hóa HMDE : Điện cực giọt treo thủy ngân KK : Khơng khí TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam iv DANH MỤC BẢNG Trang Bảng Bảng 1.1 Thành phần nguyên tố vi lượng có Nấm ăn Bảng 1.2 Nhu cầu vitamin D ngày l a tuổi 10 Bảng 1.3: Tính chất vật lí canxi 14 Bảng 2.1: Chư ng trình vơ c hóa mẫu lị vi sóng 28 Bảng 2.2: Lượng cân mẫu nấm 29 Bảng 3.1: Diện tích peak dãy dung dịch chuẩn 31 Bảng 3.2 Độ lặp lại máy HPLC 35 Bảng 3.3: Hàm lượng vitamin D2 mẫu nấm PL2 khảo sát 36 Bảng 3.4: K t khảo sát thời gian chi u xạ 37 Bảng 3.5 K t xác định hiệu xuất thu hồi 43 Bảng 3.6: K t phân tích số mẫu nấm 43 Bảng 3.7: K t xây dựng đường chuẩn canxi b ng phư ng pháp F-AAS 47 Bảng 3.8: K t xây dựng đường chuẩn magie b ng phư ng pháp F-AAS 48 Bảng 3.9: K t phân tích tính tốn độ lặp lại phân tích canxi b ng phư ng pháp F-AAS 50 Bảng 3.10: K t phân tích tính tốn độ lặp lại phân tích magie b ng phư ng pháp F-AAS 51 Bảng 3.11: K t tính toán hiệu suất thu hồi phư ng pháp xác định Ca, Mg 52 Bảng 3.12: K t đo F-AAS tính tốn hàm lượng Ca có mẫu nấm 53 Bảng 3.13: K t đo F-AAS tính tốn hàm lượng Mg có mẫu nấm 53 v Hình Hình 1.1: Cơng th c hóa học, cấu tạo vitamin D2 D3 Hình 1.2: Quy trình chuyển hóa vitamin D c thể người Hình 1.3: S đồ mô tả hệ thống HPLC 16 Hình 3.1: Phổ hấp thụ UV-VIS vitamin D2 30 Hình 3.2: Đường biểu diễn phụ thuộc nồng độ vitamin D2 với diện tích peak D2 31 Hình 3.3: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 0,25 ppm 32 Hình 3.4: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 0,5 ppm 32 Hình 3.5: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 ppm 33 Hình 3.6: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 10 ppm 33 Hình 3.7: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 20 ppm 34 Hình 3.8: Sắc k đồ chuẩn vitamin D2 100 ppm 34 Hình 3.9 Sắc k đồ mẫu nấm pl2 37 Hình 3.10: Sắc k đồ mẫu nấm Pl1chi u xạ 3h 38 Hình 3.11: Sắc k đồ mẫu nấm Pl1 chi u xạ 6h 38 Hình 3.12: Sắc k đồ mẫu nấm Pl2 chi u xạ 3h 39 Hình 3.13: Sắc k đồ mẫu nấm Pl2 chi u xạ 6h 39 Hình 3.14: Sắc k đồ mẫu nấm Pl3 chi u xạ 3h 40 Hình 3.15: Sắc k đồ mẫu nấm Pl3 chi u xạ 6h 40 Hình 3.16: Sắc k đồ mẫu nấm Pl3 chi u xạ 12h 41 Hình 3.17: Sắc k đồ mẫu nấm PL4 không chi u xạ 41 Hình 3.18: Sắc k đồ mẫu nấm PL4 chi u xạ 3h 42 Hình 3.19: Sắc k đồ mẫu nấm PL4 chi u xạ 6h 42 Hình 3.20: Sắc k đồ mẫu nấm 01 không chi u xạ 44 Hình 3.21: Sắc k đồ mẫu nấm 01 chi u xạ 3h 44 Hình 3.22: Sắc k đồ mẫu nấm 05 không chi u xạ 45 Hình 3.23: Sắc k đồ mẫu nấm 10 không chi u xạ 45 Hình 3.24: Sắc k đồ mẫu nấm 12 không chi u xạ 46 Hình 3.25: Sắc k đồ mẫu nấm 12 chi u xạ 3h 46 Hình 3.26: Đồ thị đường chuẩn canxi 47 Hình 3.27: Đồ thị đường chuẩn magiê 49 vi Hình 3.18: Sắc ký đồ mẫu nấm PL4 chiếu 3h Hình 3.19: Sắc ký đồ mẫu nấm PL4 chiếu 6h 3.1.7 Xác định hiệu xuất thu hồi Hiệu suất thu hồi quy trình phân tích biểu diễn sai lệch giá trị tìm thấy với giá trị thực giá trị đối chi u chấp nhận Dựa vào hàm lượng 42 vitamin D2 cho vào cịn lại sau q trình phân tích ta xác định k t sau: Bảng 3.5 Kết xác định hiệu xuất thu hồi Khối CSO 10ppm Cmẫu Cs+mẫu Hiệu suất lƣợng mẫu (ml) (g/g) (g/g) thu hồi (%) Pl1 10 6,385 8,163 88,9 Pl2 10 4,548 6,366 90,9 Tên mẫu Trung bình 89,9 Hiệu suất thu hồi xác định b ng cách ti n hành phân tích mẫu thực mẫu nạp thêm chuẩn thực đồng thời, u kiện tối ưu K t thu hai mẫu nấm pl1 pl2 sau chi u xạ, có độ thu hồi từ 88,9%-90,9% 3.1.8 Kết phân tích số mẫu nấm Ti n hành phân tích số mẫu nấm u kiện tối ưu khảo sát lựa chọn ta xác định hàm lượng vitamin D2 sau: Bảng 3.6: Kết phân tích số mẫu nấm Stt Mẫu nấm Kết phân tích (μg/g) Nấm 01 chi u xạ 10,885 Nấm 05 chi u xạ 6,221 Nấm 10 chi u xạ 17,755 Nấm 12 chi u xạ 10,385 43 Hình 3.20: Sắc ký đồ mẫu nấm 01 khơng chiếu Hình 3.21: Sắc ký đồ mẫu nấm 01 chiếu 3h 44 Hình 3.22: Sắc ký đồ mẫu nấm 05 khơng chiếu Hình 3.23: Sắc ký đồ mẫu nấm 10 khơng chiếu 45 Hình 3.24: Sắc ký đồ mẫu nấm 12 không chiếu Hình 3.25: Sắc ký đồ mẫu nấm 12 chiếu 3h 46 3.2 Kết xác định Ca Mg 3.2.1 Xây dựng đường chuẩn xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) c a kim loại canxi 3.2.1.1 Xây dựng đường chuẩn canxi Chúng ti n hành pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ xác định 0,25; 0,5; g/ml dung dịch dung dịch HNO3 , ti n hành đo phổ hấp thụ nguyên t kim loại Ca dung dịch u kiện tối ưu theo chư ng trình chuẩn hệ thống máy K t trình bày bảng 3.7 hình 3.26 Bảng 3.7: Kết xây dựng đƣờng chuẩn canxi phƣơng pháp F-AAS TT Nồng độ dung dịch chuẩn Số liệu thống kê Abs -Ca (µg/ml) 0,25 0,0030 0,5 0,0083 0,0181 y = 0,0201x - 0,0019 r = 0,9996 Đồ thị đƣờng chuẩn Ca 0.02 y = 0.0201x - 0.0019 Abs 0.015 R2 = 0.9996 0.01 0.005 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.2 Nồng độ dung dịch chuẩn Ca Hình 26: Đồ thị đường chuẩn canxi 3.2 Giới hạn phát (LOD) canxi LOD xem nồng độ chất phân tích mà hệ thống phân tích cịn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu n n Giới hạn phát Na b ng phép đo F - AAS theo đường chuẩn: LOD  10  SD A 47 Độ lệch chuẩn: n SD    xi  x  i 1 n 1 n   x i 1  x i k Trong đó: n: số lần phân tích lặp lại mẫu i k: số bậc tự (k= n-1) xi: giá trị phân tích lần th i x giá trị phân tích trung bình n lần Giới hạn phát Ca b ng phép đo F - AAS theo đường chuẩn: LOD   SD  0,01012   0,0582( g / ml) A 0,5192 3.2 Giới hạn định lượng (LOQ) canxi LOQ xem nồng độ chất phân tích mà hệ thống phân tích cịn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa định lượng với mẫu trắng hay tín hiệu n n đạt độ tin cậy ≥ 95 Giới hạn định lượng Ca b ng phép đo F - AAS theo đường chuẩn: LOQ  10  SD 10  0,01012   0,1947( g / ml) A 0.5192 3.2.2 Xây dựng đường chuẩn xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) c a kim loại magiê 3.2.2.1 Xây dựng đường chuẩn magiê Ch ng ti n hành pha dãy dung dịch chuẩn có nồng độ xác định 0,1; 0,2; 0.4 g/ml dung dịch dung dịch HNO ti n hành đo phổ hấp thụ nguyên t kim loại Mg dung dịch u kiện tối ưu theo bảng 3.1 K t trình bày bảng 3.8 hình 3.27 Bảng 3.8: Kết xây dựng đƣờng chuẩn magie phƣơng pháp F-AAS TT Nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml) Abs -Mg 0,1 0,1068 0,2 0,2152 0,4 0,4149 48 Số liệu thống kê y = 1,023x + 0,0069 r = 0,9996 Đồ thị đƣờng chuẩn Mg Abs 0.5 0.4 y = 1.0229x + 0.007 R2 = 0.9996 0.3 0.2 0.1 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 Nồng độ dung dịch chuẩn Mg Hình 27: Đồ thị đường chuẩn magiê 3.2.2.2 Giới hạn phát (LOD) magiê LOD xem nồng độ chất phân tích mà hệ thống phân tích cịn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa với tín hiệu mẫu trắng hay tín hiệu n n Giới hạn phát Mg b ng phép đo F - AAS theo đường chuẩn: LOD   SD  0,0347   0,1017g / ml  A 1,023 3.2.2.3 Giới hạn định lượng (LOQ) magiê LOQ xem nồng độ chất phân tích mà hệ thống phân tích cịn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa định lượng với mẫu trắng hay tín hiệu n n đạt độ tin cậy ≥ 95 Giới hạn định lượng Mg b ng phép đo F - AAS theo đường chuẩn: LOQ  10  SD 10  0,0347   0,339( g / ml) A 1,023 3.2.3 Đánh giá độ lặp lại độ thu hồi c a phương pháp 3.2 Xác định độ lặp lại phương pháp đo ph hấp thụ kim loại Ca, Mg Để đánh giá độ lặp phư ng pháp ch ng ti n hành chọn mẫu nấm ngẫu nhiên ti n hành chuẩn bị mẫu theo bước áp dụng cho trình phân tích mẫu Mẫu ti n hành đo lặp lại lần 49 Các k t thực nghiệm x l thống kê theo công th c sau: - Độ lệch chuẩn: n Stt    xi  x  i 1 n 1 n   x  x  i 1 i k Trong đó: n số lần phân tích lặp lại mẫu i k số bậc tự (k= n-1) xi giá trị phân tích lần th i x giá trị phân tích trung bình i lần - Độ lệch chuẩn tư ng đối: Std  Stt 100 x K t phân tích thể bảng 3.9; 3.10 Bảng : Kết phân tích tính tốn độ lặp lại phân tích canxi phƣơng pháp F-AAS Kim loại Đại lƣợng thống kê Độ hấp thụ kim loại Abs - Ca Ca(µg/ml) Mẫu phân tích 1,4897 2,8441 1,4902 2,8451 1,4909 2,8464 1,4905 2,8456 1,4893 2,8433 Giá trị nồng độ trung bình: x 2,8449 Độ lệch chuẩn: Stt 0,00122 Độ lệch chuẩn tư ng đối: Std(%) 0,043 50 Bảng 3.10: Kết phân tích tính tốn độ lặp lại phân tích magie phƣơng pháp F-AAS Kim loại Đại lƣợng thống kê Độ hấp thụ kim loại Abs - Mg Mg(µg/ml) Mẫu phân tích 0,6776 3,0701 0,6789 3,0760 0,6792 3,0774 0,6767 3,0661 0,6794 3,0783 Giá trị nồng độ trung bình: x 3,0736 Độ lệch chuẩn: Stt 0,00527 Độ lệch chuẩn tư ng đối: Std(%) 0,172 Từ k t bảng 3.9 3.10 ta thu giá trị xác định hàm lượng kim loại Ca, Mg mẫu phân tích có độ lặp tốt Std< 1% 3.2.3 Độ thu hồi phương pháp Để nghiên c u độ thu hồi phư ng pháp ch ng ti n hành nghiên c u mẫu nấm xác định hàm lượng kim loại Ca, Mg phần xác định độ lặp lại phư ng pháp Các bước ti n hành sau: Mẫu phân tích ch a thêm chuẩn Cân xác 0,4015gam bột nấm nghi n mịn cho vào bình teflon, thêm 5ml HNO3 đậm đặc, 2ml H2O2 30 , lấy xác 5ml dung dịch chuẩn gốc Ca, Mg 10 g/ml, để yên Lắp bình teflon vào lị vi sóng ti n hành vơ c hóa lị vi sóng theo chư ng trình Bảng 2.1 Khi q trình vơ c hóa mẫu k t th c, để nguội, chuyển bình phá mẫu khỏi lị vi sóng, mở nắp để khói bình bay h t Thêm ml nước cất vào bình, lắc đ u, lọc vào bình định m c dung tích 50,0ml Tráng r a bình phá mẫu, giấy lọc lần, lần 10ml nước cất, gộp dịch r a vào bình định m c thêm 5ml dung dịch n n Ba(NO3)2 2%, thêm nước cất vừa đủ đ n vạch định m c, lắc đ u Mẫu trắng: 51 Cân h t xác 0,4ml nước cất kh ion cho vào bình teflon, thêm 5ml HNO3 đậm đặc, 2ml H2O2 30 , để n Lắp bình teflon vào lị vi sóng ti n hành vơ c hóa lị vi sóng theo chư ng trình bảng 2.1 Khi q trình vơ c hóa mẫu k t th c, để nguội, chuyển bình phá mẫu khỏi lị vi sóng, mở nắp để khói bình bay h t Thêm ml nước cất vào bình, lắc đ u, lọc vào bình định m c dung tích 50,0ml Tráng r a bình phá mẫu, giấy lọc lần, lần 10ml nước cất, gộp dịch r a vào bình định m c thêm 5ml dung dịch n n Ba(NO 3)2.6H2O 2%, thêm nước cất vừa đủ đ n vạch định m c, lắc đ u Từ phư ng trình đường chuẩn ch ng xác định nồng độ kim loại cần phân tích có dung dịch phân tích Ti n hành đo tính tốn nồng độ trước sau thêm, từ áp dụng cơng th c tính hiệu suất thu hồi H %  C cm  Cm C  100% c - Cm nồng độ kim loại ban đầu xác định mẫu phân tích - Cc nồng độ chuẩn thêm vào - Cc+m nồng độ đo sau thêm chuẩn Ti n hành đo phổ hấp thụ nguyên t kim loại Ca, Mg Bảng 3.11: Kết tính toán hiệu suất thu hồi phƣơng pháp xác định Ca, Mg Kim loại Cc (µg/ml) Cc+m (µg/ml) Cm (µg/ml) H(%) Ca 1,00 3,8361 2,8449 99,12 Mg 1,00 4,0674 3,0736 99,38 * Ti n hành đo lặp lại lần thí nghiệm Nhận xét: Qua thí nghiệm k t tính tốn bảng 3.6 cho thấy hiệu suất thu hồi phép đo AAS việc xác định kim loại Ca, Mg mẫu nấm cao (trên 99 ) Phư ng pháp đủ tin cậy để ti n hành phân tích mẫu nấm 3.2.4 Tiến hành phân tích mẫu nấm Từ k t nghiên c u ch ng ti n hành áp dụng phư ng pháp phân tích 04 mẫu nấm Để xác định hàm lượng kim loại có mẫu nấm ch ng tơi áp dụng công th c sau: 52 Cm  C0  Vđm f m Trong đó: - Cm (µg/g - ppm) Hàm lượng kim loại có mẫu nấm - Co (µg/ml) Hàm lượng kim loại có dung dịch phân tích - Vđm (ml) thể tích định m c mẫu - m (g) : Lượng mẫu nấm phân tích - f: hệ số pha loãng Bảng 3.12: Kết đo F-AAS tính tốn hàm lƣợng Ca có mẫu nấm TT K hiệu mẫu Độ hấp thụ (Abs) Hàm lƣợng Ca (*) mẫu phân tích (Cddpt - µg/ml) Hàm lƣợng Ca có nấm (CNấm -µg/g) PL1 0,444 22,18 2772,5 PL2 0,356 17,81 2226,25 PL3 0,230 11,54 1442,5 PL4 0,312 15,62 1952,5 Bảng 3.13: Kết đo F-AAS tính tốn hàm lƣợng Mg có mẫu nấm TT K hiệu mẫu Độ hấp thụ (Abs) (*) Hàm lƣợng Mg mẫu phân tích Hàm lƣợng Mg có nấm (Cddpt - µg/ml) (CNấm -µg/g) PL1 0,0852 0,0765 953,865 PL2 0,2671 0,254 314,356 PL3 0.0685 0,0602 745,05 PL4 0,2942 0,2808 351 53 KẾT LUẬN Căn c vào nhiệm vụ đồ án Ch ng thu k t sau: Đã khảo sát điều kiện tối ƣu xác định Vitamin D2  Thành phần pha động:100 MeOH  Tốc độ dòng 0,5 ml/ph t  Thời gian chi u xạ Xây dựng phƣơng trình đƣờng chuẩn vitamin D2, Ca, Mg  Phư ng trình đường chuẩn vitamin D2: y = 47,41x + 27,52 R2= 0.999 Phư ng trình hồi quy:  Phư ng trình đường chuẩn Ca: y = 0,0201x - 0,0019 R2 = 0,9996 Phư ng trình hồi quy  Phư ng trình đường chuẩn Mg: y = 1,023x + 0,0069 R2 = 0,9996 Phư ng trình hồi quy Kết phân tích  Hàm lượng vitamin D2 số mẫu nấm: Mẫu nấm Stt Kết phân tích (μg/g) Nấm 01 chi u xạ 10,885 Nấm 05 chi u xạ 6,221 Nấm 10 chi u xạ 17,755 Nấm 12 chi u xạ 10,385  Hàm lượng Ca số mẫu nấm từ 1442,5 - 2772,5 (µg/g)  Hàm lượng Mg số mẫu nấm từ 314,356 - 953,865 (µg/g) Xác định đƣợc giới hạn định lƣợng (LOQ) giới hạn phát (LOD), độ thu hồi phƣơng pháp D2 Ca Mg LOD (μg/ml ) 0,003 0,0582 0,1017 LOQ (μg/ml ) 0,01 0,1941 0,339 %H 89,9 99,12 99,38 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Ban kĩ thuật tiêu chuẩn quốc gia, (2011), TCVN 8973-2011, Hà Nội: Việt Nam Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu suất cao, Đại học Quốc gia Hà Nội Luận văn (2008): Xây dựng phương pháp định lượng azithromy in huyết tương, Đại học Y dược Hà Nội Phạm Luận (1998), Giáo trình chuyên đề Quang ph hấp thụ nguyên tử, Đại học KHTN Hà Nội Nguyễn Khắc Nghĩa (1997), Áp dụng toán học thống kê để lý số liệu thực nghiệm, Đại học Vinh Hồng Nhâm (2000), Hóa học vơ tập 3, NXB Giáo dục Nguyễn Thị Thu Vân (2004), Phân tích định lượng tập 2, NXB ĐHQG TP HCM Từ Vọng Nghi, Trần Chư ng Huy n, Phạm Luận (1990), Một số phương pháp phân tích điện hóa đại, Đại học Tổng hợp Hà Nội, tr 108, 109 Trần Thị Thùy Vân (2013), Nghiên c u xác định hàm lượng selen mangan số loài nấm Linh chi lấy từ vườn Quốc gia Pù Mát - Nghệ An b ng phư ng pháp quang phổ hấp thụ nguyên t (AAS), Luận văn thạc sĩ hóa học, Đại học Vinh Tiếng nƣớc ngồi 10 AOAC 980.26, (1980), Vitamin D in multivamin Preparations - Liquid Chromatographic Method 11 AOAC 981.17 (1982), Vitamin D in Fortified Milk and Milkpowder - Liquid Chromatographic Method 12 AOAC 982.29 (1983), Vitamin D in Mixed Feeds,Premixes,and Pet Foods Liquid Chromatographic Method 13 AOAC 992.26, (1995),Vitamin D3 (cholecalciferol) in ready-to-feed milk-based infant formula Liquid chromatographic method 14 AOAC 995.05, (1995) Vitamin D in Infant Formulas and Enteral Products Liquid Chromatographic Method 55 15 AOAC 2002.05, (2002), Determination of Cholecalciferol (Vitamin D3) in Selected - Foods Liquid Chromatography 16 Alexandre de Jusus(2010), “Determination of calcium and magnesium in biodiesel by F-AAS using microemulsions saple preparation”, Energy fuels, 243, 2109- 2112 17 LigiaC C de Oliveira (2012), “ Determination of sodium, potassium, magnesium and calcium biodiesel by LS.FAAS and HR-CSFAAS”, Journal of the Brazilian chemical society, 26-11, 7041- 7044 18 Lilia Basilio de Caland, Eva Lúcia Cardoso Silveira, Matthieu Tubino (2012), “Determination of sodium, potassium, calcium and magnesium cations in biodiesel by chromatography”, University of Campinas, Institute of Chemistry Campinas, SP, Brazil, 6154, 083-970 19 Tee E Siong(1989), “Determination of calcium in food by the atomic absorption spectrophotometric and titrimetric method”, basir Upm.edu.my, 123, 303-311 56 ... t Thi u Ca gây ảnh hưởng đ n trình trao đổi chất t bào, nặng gây ch t Từ l ch ng lựa chọn đ tài: ? ?Xác định hàm lượng vitamin D2 khoáng chất (Ca, Mg) số nấm lớn Bắc Trung Bộ? ?? Ý nghĩa khoa học... thực phẩm Tên đề tài: Xác định hàm lƣợng vitamin D2 khoáng chất (Ca, Mg) số nấm lớn Bắc Trung Bộ Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: Cán hướng dẫn : ThS Hoàng Văn Trung Ngày giao nhiệm... bảo chất lượng tràn lan thị trường Vì việc phân tích hàm lượng vitamin D2 nấm cần thi t, vừa để xây dựng quy trình định lượng ch ng nấm Trong thành phần hóa học nấm ch a hàm lượng nguyên tố vi lượng