1. Trang chủ
  2. » Luận Văn - Báo Cáo

Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao

74 6 0

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

THÔNG TIN TÀI LIỆU

Thông tin cơ bản

Định dạng
Số trang 74
Dung lượng 4,12 MB

Nội dung

Ngày đăng: 05/07/2021, 09:05

HÌNH ẢNH LIÊN QUAN

BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
BẢNG KÝ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT (Trang 6)
Hình 1.2. Cấu trúc protein của 4 nhóm enzyme phytase: β-Propellar Phytase (BPPhy), Protein tyrosine phytase (PTPhy), Purple Phosphatase Acid (PAPhy) và Histidine Acid Phosphatase (HAPhy) [67]. - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 1.2. Cấu trúc protein của 4 nhóm enzyme phytase: β-Propellar Phytase (BPPhy), Protein tyrosine phytase (PTPhy), Purple Phosphatase Acid (PAPhy) và Histidine Acid Phosphatase (HAPhy) [67] (Trang 14)
Hình 1.3. Cấu trúc tinh thể của enzyme phytase từ Aspergillus fumigatus [67]. A : Mô hình ba chiều của phytase A - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 1.3. Cấu trúc tinh thể của enzyme phytase từ Aspergillus fumigatus [67]. A : Mô hình ba chiều của phytase A (Trang 23)
Hình 1.4. Các cấu trúc đóng vai trò trong khả năng hồi tính của phytase A. fumigatus [67].A - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 1.4. Các cấu trúc đóng vai trò trong khả năng hồi tính của phytase A. fumigatus [67].A (Trang 25)
Hình 2.1. Sơ đồ cấu trúc của vector pPICZαA, B, C (www.invitrogen.com). - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 2.1. Sơ đồ cấu trúc của vector pPICZαA, B, C (www.invitrogen.com) (Trang 27)
Các cặp mồi chính sử dụng cho PCR đƣợc trình bày qua bảng 2.1. - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
c cặp mồi chính sử dụng cho PCR đƣợc trình bày qua bảng 2.1 (Trang 28)
Bảng 2.2. Danh sách các chủng phục vụ trong nghiên cứu tách dòng gen mã hóa phyA. - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Bảng 2.2. Danh sách các chủng phục vụ trong nghiên cứu tách dòng gen mã hóa phyA (Trang 29)
Hình 2.2. Phƣơng pháp Mega-PCR cơ bản. - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 2.2. Phƣơng pháp Mega-PCR cơ bản (Trang 31)
Bảng 2.3. Thành phần gel chạy điện di protein - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Bảng 2.3. Thành phần gel chạy điện di protein (Trang 36)
Bảng 2.4. Tƣơng quan giữa hàm lƣợng phospho vô cơ và OD700nm - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Bảng 2.4. Tƣơng quan giữa hàm lƣợng phospho vô cơ và OD700nm (Trang 37)
Hình 3.1. Mô tả thí nghiệm tạo đột biến điểm thay thế 4 axit amin trên gen phyA. Để thực hiện thí nghiệm này, chúng tôi sử dụng vector pPICZαA/phyA/P12 mang gen mã hóa phytase tƣơng đối bền nhiệt của A - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.1. Mô tả thí nghiệm tạo đột biến điểm thay thế 4 axit amin trên gen phyA. Để thực hiện thí nghiệm này, chúng tôi sử dụng vector pPICZαA/phyA/P12 mang gen mã hóa phytase tƣơng đối bền nhiệt của A (Trang 40)
Hình 3.2. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR, Mega – PC R1 trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5×; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1-A: sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi: phyA-EcoRI-F, A58E5-R; 2-A: Sản phẩm PCR sử dụng cặp m - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.2. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR, Mega – PC R1 trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5×; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1-A: sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi: phyA-EcoRI-F, A58E5-R; 2-A: Sản phẩm PCR sử dụng cặp m (Trang 41)
Hình 3.3. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR, Mega – PC R2 trên gel agarose 1% trong đệm TAE ×0.5; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1-A: P65S Mega-primer sau tinh chế; 2-A: Q195R Mega-primer sau tinh chế; 1-B: Sản phẩm Mega-PCR lần 2 - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.3. Điện di kiểm tra sản phẩm PCR, Mega – PC R2 trên gel agarose 1% trong đệm TAE ×0.5; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1-A: P65S Mega-primer sau tinh chế; 2-A: Q195R Mega-primer sau tinh chế; 1-B: Sản phẩm Mega-PCR lần 2 (Trang 42)
Hình 3.4. Kết quả biến nạp sản phẩm ghép nối gen phyA mang 4 đột biến điểm vào vector pPICZαA; A: Thể biến nạp trên đĩa môi trƣờng LB low salt - zeocin 25 μg ml-1; B: M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1: sản phẩm PCR gen phyA - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.4. Kết quả biến nạp sản phẩm ghép nối gen phyA mang 4 đột biến điểm vào vector pPICZαA; A: Thể biến nạp trên đĩa môi trƣờng LB low salt - zeocin 25 μg ml-1; B: M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo scientific); 1: sản phẩm PCR gen phyA (Trang 43)
Hình 3.5. Điện di kiểm tra sản phẩm cắt giới hạn trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5×; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo Scientific); 3, 6, 9, 12, 15: plasmid pPICZαA/phyA/AAS1, 2, 3, 4, 5 ; 1, 4, 7, 10, 13: plasmid pPICZαA/phyA/AAS1, 2, 3, 4, 5 cắt bởi - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.5. Điện di kiểm tra sản phẩm cắt giới hạn trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5×; M-Thang chuẩn DNA 1 kb (Thermo Scientific); 3, 6, 9, 12, 15: plasmid pPICZαA/phyA/AAS1, 2, 3, 4, 5 ; 1, 4, 7, 10, 13: plasmid pPICZαA/phyA/AAS1, 2, 3, 4, 5 cắt bởi (Trang 44)
Hình 3.6. Kết quả phân tích trình tự 5 plasmid pPICZαA/phyA/AAS1 -5 sau khi tạo đột biến điểm bằng phần mềm Bioedit 7.2.5 - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.6. Kết quả phân tích trình tự 5 plasmid pPICZαA/phyA/AAS1 -5 sau khi tạo đột biến điểm bằng phần mềm Bioedit 7.2.5 (Trang 45)
Kết quả điện di Hình 3.8 cho thấy, vector pPICZαA/phyA/P12 và pPICZαA/phyA/AAS5 đã đƣợc mở vòng hoàn toàn tạo dạng mạch thẳng có kích thƣớc khoảng 5 kb tƣơng ứng với độ dài 3.6 kb của vector pPICZαA và độ dài đoạn gen phyA khoảng 1,3 kb - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
t quả điện di Hình 3.8 cho thấy, vector pPICZαA/phyA/P12 và pPICZαA/phyA/AAS5 đã đƣợc mở vòng hoàn toàn tạo dạng mạch thẳng có kích thƣớc khoảng 5 kb tƣơng ứng với độ dài 3.6 kb của vector pPICZαA và độ dài đoạn gen phyA khoảng 1,3 kb (Trang 48)
Hình 3.8. Kết quả điện di sản phẩm cắt giới hạn bằng MssI trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5× - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.8. Kết quả điện di sản phẩm cắt giới hạn bằng MssI trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5× (Trang 48)
Hình 3.10. Kết quả điện di sản phẩm PCR bằng cặp mồi T-phyA-EcoRI-F/ phyA- phyA-Stop-XbaI-R2 trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5× - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.10. Kết quả điện di sản phẩm PCR bằng cặp mồi T-phyA-EcoRI-F/ phyA- phyA-Stop-XbaI-R2 trên gel agarose 1% trong đệm TAE 0,5× (Trang 49)
Bảng 3.1. Hoạt tính phytase tái tổ hợp của các thể biến nạp biểu hiện trên vi đĩa 24 giếng - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Bảng 3.1. Hoạt tính phytase tái tổ hợp của các thể biến nạp biểu hiện trên vi đĩa 24 giếng (Trang 50)
Bảng 3.2. Hiệu suất thu hồi enzyme phytase tái tổ hợp bằng phƣơng pháp lọc luân hồi Viva Flow 200 với kích thƣớc màng 5 kDa - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Bảng 3.2. Hiệu suất thu hồi enzyme phytase tái tổ hợp bằng phƣơng pháp lọc luân hồi Viva Flow 200 với kích thƣớc màng 5 kDa (Trang 51)
Hình 3.11. Kết quả điện di phytase tái tổ hợp trên gel SDS – PAGE 12%. M: Unstained protein molecular weight marker (Thermo scientific); A: Dịch enzyme từ chủng mang gen phyA cải biến X33.AAS5.2 sau khi cô Cross Flow; A15, 24: phân đoạn 15, 24 của - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.11. Kết quả điện di phytase tái tổ hợp trên gel SDS – PAGE 12%. M: Unstained protein molecular weight marker (Thermo scientific); A: Dịch enzyme từ chủng mang gen phyA cải biến X33.AAS5.2 sau khi cô Cross Flow; A15, 24: phân đoạn 15, 24 của (Trang 52)
Hình 3.12. Xác định pH tối ƣu của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. X33.P12.7: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen gốc, X33.AAS5.2: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen đã cải biến - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.12. Xác định pH tối ƣu của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. X33.P12.7: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen gốc, X33.AAS5.2: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen đã cải biến (Trang 54)
Hình 3.13. Đánh giá độ bền pH của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. Độ bền pH đƣợc thể hiện bằng hoạt tính còn lại khi xử lý ở các pH khác nhau trong 30 phút - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.13. Đánh giá độ bền pH của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. Độ bền pH đƣợc thể hiện bằng hoạt tính còn lại khi xử lý ở các pH khác nhau trong 30 phút (Trang 55)
Hình 3.14. Xác định nhiệt độ tối ƣu của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin.X33.P12.7: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen gốc, X33.AAS5.2: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen đã cải biến - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.14. Xác định nhiệt độ tối ƣu của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin.X33.P12.7: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen gốc, X33.AAS5.2: Chủng nấm men Pichia pastoris mang gen đã cải biến (Trang 56)
Hình 3.15. Đánh giá độ bền nhiệt của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. Độ bền nhiệt đƣợc thể hiện bằng hoạt tính còn lại khi xử lý nhiệt ở các nhiệt độ khác nhau trong 20 phút - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.15. Đánh giá độ bền nhiệt của phytase tái tổ hợp sau khi thay thế 4 axit amin. Độ bền nhiệt đƣợc thể hiện bằng hoạt tính còn lại khi xử lý nhiệt ở các nhiệt độ khác nhau trong 20 phút (Trang 57)
Hình 3.1. So sánh trình tự axit amin liên quan đến khả năng bền nhiệt của gen phyA - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
Hình 3.1. So sánh trình tự axit amin liên quan đến khả năng bền nhiệt của gen phyA (Trang 69)
Hình P1. Kết quả sắc ký tƣơng tác kỵ nƣớc trên cột Butyl Sephrose HP, 10ml enzyme phytase tái tổ hợp của chủng X33.AAS5.2 với nồng độ muối (NH 4)2SO4 2 M trong đệm Na-actate 20 mM pH5.0 - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
nh P1. Kết quả sắc ký tƣơng tác kỵ nƣớc trên cột Butyl Sephrose HP, 10ml enzyme phytase tái tổ hợp của chủng X33.AAS5.2 với nồng độ muối (NH 4)2SO4 2 M trong đệm Na-actate 20 mM pH5.0 (Trang 70)
Hình P2. Kết quả sắc ký tƣơng tác kỵ nƣớc trên cột Butyl Sephrose HP, 10ml enzyme phytase tái tổ hợp của chủng X33.P12.7 với nồng độ muối (NH 4)2SO4 2.5 M trong đệm Na-actate 20 mM pH5.0 - Cải biến gen mã hóa enzyme phytase từ nấm mốc aspergillus niger nhằm tăng khả năng hồi tính của phytase sau khi bị biến tính ở nhiệt độ cao
nh P2. Kết quả sắc ký tƣơng tác kỵ nƣớc trên cột Butyl Sephrose HP, 10ml enzyme phytase tái tổ hợp của chủng X33.P12.7 với nồng độ muối (NH 4)2SO4 2.5 M trong đệm Na-actate 20 mM pH5.0 (Trang 70)

TỪ KHÓA LIÊN QUAN

TÀI LIỆU CÙNG NGƯỜI DÙNG

TÀI LIỆU LIÊN QUAN

w