Nghiên cứu sản xuất cây giống hà thủ ô đỏ polygonum multiflorium từ cây nuôi cấy mô ở giai đoạn vườn ươm tại huyện kon plông tỉnh kom tum

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA SINH – MÔI TRƯỜNG ĐẶNG THỊ TƯỜNG VI NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT CÂY GIỐNG HÀ THỦ Ô ĐỎ (POLYGONUM MULTIFLORUM) TỪ CÂY NUÔI CẤY MÔ Ở GIAI ĐOẠN VƯỜN ƯƠM TẠI HUYỆN KON PLƠNG, TỈNH KOM TUM Ngành: Cơng nghệ Sinh học Người hướng dẫn: TS Võ Châu Tuấn Đà Nẵng, tháng - 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả Đặng Thị Tường Vi LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực khóa luận tốt nghiệp Khoa Sinh – Mơi trường, trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng, học hỏi nhiều kiến thức lý thuyết thực hành thí nghiệm ni cấy mô tế bào thực vật Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Châu Tuấn, người thầy tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tơi xin gửi lời cảm ơn đến anh chị làm việc Công ty TNHH Nông nghiệp Dược liệu Đức Long – nơi thực đề tài nhóm nghiên cứu giúp đỡ, chia sẻ kinh nghiệm, động viên tơi suốt q trình làm khóa luận Cuối tơi gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình, bạn bè giúp đỡ, ln động viên khích lệ tơi để tơi đạt kết tốt Tôi xin chân thành cảm ơn ! Đà Nẵng, tháng năm 2017 Sinh viên Đặng Thị Tường Vi MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài .2 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nhân giống in vitro thực vật 1.1.1 Vai trò nhân giống in vitro thực vật .3 1.1.2 Các giai đoạn nhân giống in vitro thực vật 1.1.3 Một số nghiên cứu nhân giống in vitro dược liệu 1.2 Một số nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng sau in vitro vườn ươm 1.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ .7 1.2.2 Nghiên cứu ảnh hưởng ánh sáng .7 1.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng dinh dưỡng 1.3 Giới thiệu hà thủ ô đỏ 1.3.1 Phân loại 1.3.2 Nguồn gốc, phân bố 1.3.3 Đặc điểm thực vật học 10 1.1.4 Thành phần hóa học hà thủ đỏ 10 1.3.5 Giá trị dược liệu hà thủ ô đỏ 11 1.3.6 Một số nghiên cứu hà thủ ô đỏ 11 1.4 Giới thiệu điều kiện khí hậu, đất đai Măng Đen, Kon Plông, tỉnh Kom Tum 13 CHƯƠNG 14 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1 Đối tượng nghiên cứu 14 2.3 Phương pháp nghiên cứu 14 2.3.1 Phương pháp tạo rễ in vitro hà thủ ô đỏ in vitro 14 2.3.2 Phương pháp ươm trồng hà thủ đỏ in vitro ngồi vườn ươm 15 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 16 CHƯƠNG 17 KẾT QUÁ VÀ BIỆN LUẬN 17 3.1 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ hà thủ ô đỏ 17 3.2 Ảnh hưởng giá thể đến khả sống sót sinh trưởng hà thủ ô đỏ 19 3.3 Ảnh hưởng chất dinh dưỡng đến sinh trưởng hà thủ ô đỏ 21 3.4 Ảnh hưởng ánh sáng lên sinh tưởng 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 26 Kết luận 26 Kiến nghị 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 PHỤ LỤC 30 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT 2,4-D : Diclorophenoxyacetic acid AC : Active carbon (than hoạt tính) BA : 6-benzyl adenine cs : Cộng IBA : Indole 3-butyric acid KC : Knudson C (1965) KIN : Kinetin ĐHST : Điều hòa sinh trưởng MS : Murashige Skoog (1962) NAA : α-naphthalen acetic acid ĐC : Đối chứng DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả hình 3.1 thành rễ in vitro hà thủ ô đỏ nuôi cấy 17 môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/L NAA Ảnh hưởng loại giá thể ươm trồng đến khả sống 3.2 sót sinh trưởng hà thủ ô đỏ in vitro sau 30 ngày 19 trồng vườn ươm 3.3 3.4 Ảnh hưởng dinh dưỡng N:P:K (1:1:1) đến khả sinh trưởng hà thủ ô đỏ Ảnh hưởng độ che ánh sáng đến khả sinh trưởng hà thủ ô đỏ 21 24 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 3.1 3.2 3.3 3.4 Tên hình Cây hà thủ đỏ in vitro 20 ngày tuổi ni cấy mơi trường có 0,5 mg/L NAA Cây hà thủ ô đỏ in vitro trồng loại giá thể khác sau 45 ngày trồng vườn ươm Cây hà thủ ô đỏ in vitro khảo sát nồng độ phân N:P:K (1:1:1) sau tháng vườn ươm Sinh trưởng hà thủ ô đỏ trồng điều kiện chiếu sáng tự nhiên Trang 18 20 23 25 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Cây hà thủ đỏ dược liệu có giá trị kinh tế cao, phân bố chủ yếu nước thuộc Châu Á Trung Quốc, Nhật Bản, Việt Nam Ở nước ta, hà thủ ô mọc hoang dại miền núi từ Nghệ An trở có nhiều Sơn La, Lai Châu, Lào Cai, Hà Giang Tây Nguyên [3] Bộ phận dùng chủ yếu hà thủ ô củ, củ hà thủ ô đỏ vị thuốc dùng y học chữa chứng bệnh thiếu máu, liên quan đến rối loạn thần kinh đường tiêu hóa, ngồi trị mẩn ngứa, sốt rét, sử dụng thuốc sắc hà thủ ô đỏ giúp gân cốt khỏe mạnh, làm đen râu tóc, sống lâu [3] Theo hai nhà nghiên cứu người Nhật Bản nghiên cứu từ năm 1923, hà thủ đỏ có chất sau: emodin, physcion, rhein, lecithin, catechin, hợp chất hữu cơ, tinh bột, chất tan nước, lecitin, rhaponticin, anthraquinon, tanin, [3] Các hợp chất thành phần dùng để làm thuốc chữa bệnh cho người Hiện nay, nạn phá rừng khai thác mức nên hà thủ ô đỏ tự nhiên giảm đáng kể có nguy bị tuyệt chủng nên loài đưa vào Sách đỏ Việt Nam (Phần II Thực vật, 2007), nghị định 32/2006/NĐ-CP Vì vậy, giống hà thủ đỏ người trồng cách giâm cành hạt để cung cấp nguồn dược liệu cho việc chữa bệnh, sản xuất thuốc uống hay thực phẩm chức phương pháp đem lại hiệu chưa cao Việc nghiên cứu tìm điều kiện thích hợp ươm trồng sản xuất giống hà thủ ô đỏ từ nguồn mẫu nuôi cấy in vitro để đáp ứng nhu cầu ngày tăng người nguồn dược liệu nước ta việc làm thực tiễn cấp thiết Xuất phát từ sở trên, tiến hành nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu sản xuất giống hà thủ ô đỏ (Polygonum Multiflorium) từ nuôi cấy mô giai đoạn vườn ươm huyện Kon Plông, tỉnh Kom Tum” Mục tiêu đề tài Xác định điều kiện ươm trồng phù hợp để sản xuất giống hà thủ ô đỏ từ nuôi cấy mô huyện Kon Plông, tỉnh Kom Tum Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học Cung cấp dẫn liệu khoa học điều kiện ươm trồng thích hợp để sản xuất giống hà thủ ô đỏ từ nguồn mẫu nuôi cấy in vitro huyện Kon Plông, tỉnh Kom Tum 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu sở để sản xuất nhanh giống hà thủ ô đỏ từ nguồn mẫu nuôi cấy in vitro Đồng thời cho giống bệnh, chất lượng tốt đưa vào sản xuất thực tiễn góp phần phát triển nguồn giống để phục vụ sản xuất nguyên liệu dược liệu quy mô lớn nước ta 17 CHƯƠNG KẾT QUÁ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả hình thành rễ in vitro hà thủ ô đỏ nuôi cấy môi trường có 0,5 mg/L NAA Chồi hà thủ đỏ in vitro ni cấy mơi trường MS có bổ sung mg/L BAP (2 tháng tuổi) nuôi cấy mơi trường tạo rễ có chứa 0,5 mg/L NAA Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ hà thủ đỏ trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến khả hình thành rễ in vitro hà thủ ô đỏ Thời gian tạo rễ Tỷ lệ chồi tạo rễ (ngày) (%) 15 73,3 3,2 a 0,96 a 20 100 6,42 b 3,3 b 25 100 7,1 cb 4,9 cb Số rễ /chồi Chiều dài rễ (cm) Chú thích: Các chữ khác cột sai khác có ý nghĩa thống kê trung bình mẫu với p