Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học cao chiết diclomethane của lá cây tầm gửi trên cây khế chua

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC  +  VÕ SONG HẠNH NGUYÊN NGHIÊN CHIẾT CỨU TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH HÓA PHẦN HỌC CAO CHIẾT DICLOMETANE CỦA LÁ CÂY TẦM TRÊNGỬI CÂY KHẾ CHUA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC CHUYÊN NGÀNH SƯ PHẠM HÓA Đà Nẵng - 2018 ĐẠI HỌC ĐÀ TRƯỜNG NẴNG ĐHSP CỘNG HÒA XÃ HỘI Độc lập – Tự – Hạnh phúc KHOA HÓA NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tênVõ sinh Song viên: Hạnh ên Nguy Lớp : 14SHH Tên đề tài: Nghiên “ chiết cứu diclomethane tách thành xác phần cao định hóa chiế họ ” Tầm gửi kh Nguyên liệu, dụng cụ thiết bị - Nguyên Láliệu: tầm gửi uận hái Liên phơi Chiểu khô - Dụng sắc cụ, ký, thiết đèn UV, bị: chiết chưng n cân phân tích, bếp cách Nội dung nghiên cứu - Chiết mẫu phương với phápdung -hexane chưng môi ni diclometan - Phân ký cột - Xác lập sắc định cao số hợp tổng chất diclometan phương ký thành ph mỏng phần hóa học – c MS Giáo viên hướng dẫn: Ngày giao đề tài: 01/08/2017 Ngày hoàn thành: 15/03/2018 Chủ nhiệm khoa PGS.TS Lê Tự Hải Giáo GS.TS viên hướng Đào Hùng C Sinh Kết viên nộp hoànbáo thành cáo tháng cho Khoa 2018 04 năm ngày điểm đánh giá:…… Đà Nẵng, ngày CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG …8 tháng LỜI CẢM ƠN Để hồn GS.TS Đàóng H thành Cường tận trình thực Em xin thí nghiệm thầy em hồn tốt khoa Trần thành tình đề gửi đề lời luận dẫn, hồn cảm đại Lục khóa hướng tài Hóa, Mạnh tài ơn học hỗ thành đến t t bá t Sư Kiều phạm Oanh Đ hỗ trợ kiến th tốt khóa luận tốt nghiệp Ĉj1̽QJQJj\ WKiQJQăP Sinh viên thực Võ Song Hạnh Nguyên MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ HỌ TẦM GỬI 1.2.1 Tên gọi [8] 1.2.2 Mô tả thực vật [3] 1.2.3 Phân bố cách trồng [4] 1.3 GIÁ TRỊ SỬ DỤNG CỦA CÂY TẦM GỬI: .7 1.3.1 Dùng 1.3.2 Tác dụng dược lý 1.4 NGHIÊN làm thuốc chữa bệnh [13] CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HỌ TẦM GỬI: 1.4.1 Các cơng trình giới nghiên cứu 1.4.2 Các cơng trình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG 10 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 NGUYÊN LIỆU, DỤNG CỤ, HÓA CHẤT VÀ SƠ ĐỒ NGHIÊN 10 CỨU 2.1.1 Thu mẫu xử mẫu lýnguyên liệu 10 2.1.2 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 10 2.1.3 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .13 2.2.1 Phương pháp 2.2.2 Phương pháp -lỏng chiết tạo tổng phân cao bố lỏng ethanol 2.2.3 Phương -MS pháp GC 15 2.2.4 Phương pháp 2.2.5 Phân lập chiết định phân ngâm dầm tạo tổng 13 cao eth từ 14 bột l tính thành phần nhóm 18 chức đoạn : sắc ký cột 22 sắc k CHƯƠNG 29 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 KẾT QUẢ THU NHẬN ANOL TỔNG BẰNG CAO PHƯƠNG ETH PHÁP NGÂM CHIẾT 29 3.2 KẾT QUẢ – CHIẾT LỎNG VỚI LỎNG CÁC DUNG MÔI TỪ TỔNG CAO ETHANOL 31 3.2.1 Dung môi n-hexane 31 3.2.2 Dung môi diclometane 32 3.2.3 Định tính định danh thành diclometane phần hóatách học từ ethanol 32 3.3 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN GCAO CAODICLOMETANE ETHANOL CỦATỪ LÁTỔN CÂY TẦ 42 3.3.1 3.3.2 Kết chạy Kết giải ly sắc ký cao cột cao diclometane 42 diclomethane hệ dung 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 MỤC LỤC 61 (12 môi e DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT B : Benzen C : Chloroform D : Diclometane E : Etylacetate GC : Gas Chromatography MS : Mass Spectrometry TCVN : Tiêu TED : Tầm gửi/Ethanol/Diclometane TD : Tầm gửi/Diclome tane chuẩn Việt Nam DANH MỤC CÁC BẢNG Số Tên bảng hiệu Trang 2.1 Tên hóa chất 3.1 Thể tích dịch 3.2 Cao thu 3.3 Thành phần nhóm phân chức đoạn cao diclometh 32-36 Thành phần hóa dịch 37 3.4 3.5 3.6 sử chiết ethanol 29 sau sau cô học hợp cao kết quay30 chân mơi diclomethane Tổng dụng 10-11 định tính thành 40-42 chiết diclomethane Thành óa phần học h phân đoạndịch TDII.2 chiết 55-57 Tầm gửi dung môi diclometane k p DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình Trang hình 1.1 Tiêu 1.2 Lá 1.3 Cấu Tầm gửi trúc hợp Tầm gửi H20O11) 21chất querceti quercitrin8 (C (C15H10O7) trúc β-sitosterol hợp chất β-sitosteryl arachidate 1.4 Cấu 2.1 Lá 2.2 Thiếtký bịkhí sắcghép -MS khối 2.3 Tủ tươi, sấy khô sau khivà thu háibột (tháng 5/2016) xay 10 mịn phổ GC 11 11 2.4 Kỹ thuậ t chiết ngâm dầm (Maceration) 13 2.5 Kỹ thuật-lỏng chiết lỏng 14 2.6 Chương 3.1 Mẫu 3.2 Cao ethanol 3.3 Khối trình dịch nhiệt độ lò cột 17 chiết ml) ethanol sau (lần thay 29 dung 30 lượng cao thu hiếtđược sau từ khicác cô31dịch quay c ch không 3.4 Mẫu dịch -hexane chiết (5 ml)n sau 3.5 Mẫu dịch 3.6 Sắc ký lần thay 31 dung chiết ml) diclmethane sau lần ( đồ thay 32 dun GC loromethane phân đoạn cao từ 40 tổng dich cao ethanol 3.7 Thử dung môi đơn ứ tự -hexan, ( cao cao cao ntheo43th diclometan, cao 3.8 Cao TED thử cetat:diclometan hệ dung môi 44 etyla theo 3.9 Cột sắc ký (d = nước 3.5 ) cm, h = c 5045cm) 3.10 Các bìnhg hứng dịch dun giải ly 3.11 Các 3.12 Các vết chất mỏng lọ 3.13 Các vết chất 3.14 Các vết ên chất tr 3.15 Thử dung 3.16 Hệ dung môi ometan benzen:dicl với tỉ 3.17 Hệ dung môi benzen:diclometan:etyl e với tỉ 50 lệ khác ace 3.18 Hệ dung môi benzen:diclometan:cl oroform cácvới tỉ lệ khác 51 3.19 Cột sắc 3.20 So sánh 3.21 Phân TDI.2 đoạn 52 3.22 Phân TDI.3 đoạn 52 3.23 Phân đoạn TDI.4 53 3.24 Phân đoạn DI.5 T 53 3.25 Phân đoạn DI.6 T 53 vết chất c bảntrên mỏngcá (15 C lọ L1 L83 45 ml) đến 46 đến 47 lọ L8 lọ mỏng48của (d=1.5 phân I.1 lọ mỏng I, TDII, TDIIIphân 48đoạn môi cực đơn giảm với độ dần phân từ trái 49 ký L2 đoạn cm, TD h=70 sang lệ50 khác cm)51 52 TD nh 3.26 So sánh phân đoạn 55 tế bào thể hố , thc nhóm flavon,  tổn có thương Glycosid: Theo tim Ở liều ngăn ngừa xạ, nguy thoái c hoá flavanon, thôngflavonol tiểu ] rõ th rệ số điều nghiên trị cứu, glycosi có nhịp tác tim dụng vàcường điề tim[17] Nhận xét chung Từ Bả ng 3.3 cho có số thấy bằng– MS phương định pháp 10 cấu danh GCtử đư diclomethane dịch chiết từ cấu tử Tầm Trong gửi đó, tr chiếm thành phần lớn thuộ gồm 4-(2-hydroxyethyl )phenol(C8H10O2), (E)-4-(3-hydroxyprop-1- Nhóm phenol: en-1-yl)-2-methoxyphenol, 3-(2-amino-1-hydroxyethyl) phenol Nhóm acid béo: 4,5,7-trihydroxyoct-2-enoic acid (C8H14O5), 2-hydroxypropanoic acid (C3H6O3), n-hexadecanoic acid (C16H32O2), 9-octadecenoic acid (Z) (oleic acid) Trong  dù axit từ axit liệu 3] mỹ lợi hạ phẩm cho sử béo có định mục chđích axit béo khẳng cho béo tế su ngược bào não Axit Oleicgọi dụng công nhiều nghiệp nh c đặc biệt y h sứctác khỏe chống dụng axit tăng người, độ nước có tiểu cholesterol việc làm chậm palmitic Sodium palmitate hữu 15] [ xấu (LDL) phát [14] triển  n-Hexadecanoic acid thường Axit axit cho có cis-9-Hexadecanoic acid thường oleic cứu, béo lâu nguồn nhiên phẩm, làm Mặc Axit có nghiên chuyển hóa, glucose số Axit Palmitic gọi được 39 sử sử dụng tron máu bệnh ti dụng để sản x dụngácnhư sảnmột phẩ 3.2.3.3 Định danh chất phân đoạn cao diclometane phương pháp GC/MS Sắc ký đồ GC diclometane phân từđoạn tổngcao cao eth Hình 3.6 Hình 3.6 Sắc ký đồn GC đoạn diclometane cao phâ từ Kết định thành danh mơi diclometane tổng phần hóa học thể cao e dịch Bảng Bảng 3.5 Thành óa phần họch Tầm củagửi dịch chiết du diclometane S T T Thời Diện tích gian lưu peak(%) Cơng thức Tên gọi 1,2,3,41 4,45 3,80 tetramethylcyclo butane (C8H16) 4,98 62,2 butan-1-ol (C4H10O) 40 (4S,5R,7R,E)4,5,73 5,20 4,71 trihydroxyoct-2enoic acid (C8H14O5) 24 6,22 2,18 hydroxypropanoi c acid (C3H6O3) 4-(25 8,28 3,23 hydroxyethyl)phe nol (C8H10O2) 4-(26 9,64 1,17 hydroxyethyl) morpholin-3-one (E)-4-(3- 12,17 6,18 hydroxyprop-1en-1-yl)-2methoxyphenol 41 3-(2-amino-18 12,99 7,24 hydroxyethyl) phenol 16,08 11,8 n-hexadecanoic acid (C16H32O2) 9-octadecenoic 19,43 3,66 acid (Z) (oleic acid) Nhận xét: Từ kết cho : bảng thấy  Phươngp phá GC -MS diclometane từ  Trong Tầmcây gửi định danh cấu tử 10 d khế chua cấu butan-1-ol tử có này, hàmcấu lượng tử cao nhấ 3.3 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO DICLOMETANE TỪ TỔNG CAO ETHANOL CỦA LÁ CÂY TẦM GỬI Dùng 175 g cao ethanol tầ m gửi đem ế t chi lỏng –lỏ ng với hexane, diclometane nối tiếp lầ sau ổi dung cô môi đu ợc 12,021thu g cao chiế đư t diclometane 3.3.1 Kết chạy sắc ký cột cao diclometane (12,021 g ) tách từ tổng cao ethanol Sửdụng cột sắ c kí có ờng đư kính ngồi 3,5 cm chiề u cao làm việ c cột 50 cm,ợnglư silicagel 140,0 cho g, dung vào môi cột ổn định Trước dung môi đơn chọn có cột dung , ta mơi dùngđể phương nhồi cột pháp độ giảm phân dầnetylacetate, là: cực diclometan, chloroform, 42 s methanol, hexane Kết chạy sắc ký đưamỏng Hình 3.7 Hình 3.7.Thửdung mơi n cao theo thứtự ( cao n-hexane, cao diclometane, ớc ) c Nhậnchoxét cao TED: - Với dung môi - Với dung methanol môi cấu - Với dung chloroform môi cấu chồng lên - Với vết hexane cấu tử tử , có nhạt tách tách tượng ké tử có thể tách , nhìn thấy cấ khó phân biệt rõ dungmetane mơi diclo cấu tử rõ ràng , có tách tượ - Vớing dumơi ethyl acetate cấu tử kéo vết Trên sở acetate:diclometane ký dung trình mơi bày đơn dựa mỏng ôivới etyl acetate:diclometane hệ dung theo m 7:3, 9:1 (từ trái qua đó, tổng kết 1:9, 3:7,tỉ 5:5, h qu lệ phải) Hình 3.8 đưa 43 Hình 3.8 Cao TED thửtrong hệdung mơi etylacetat:diclometan theo tỉlệ 3.3.2 Kết giải ly cao diclomethane hệ dung mơi etylacetate:diclometane tỉ lệ 1:9 Khi kí giải ly hiệu L1 đến L229 từ etylacetate:diclometane hệ dung tỉ1:9lệ môi ta thu 229 lọ Kết thểHình 3.10 44 sắc ký mỏng du Hình 3.9 Cột (1), nạp sắc ký (d Cột = 3.5 sắccm, ký h sau = 50 kh mẫu rửa giải bắt(2), đầu Hình 3.10 Các bình 45 hứng t dung dịch giả 31 33 35 37 39 41 61 63 65 Hình 3.11 11 67 Các 13 15 17 19 21 43 45 47 69 71 73 vết 49 51 53 75 chất 46 23 77 25 27 29 55 79 57 59 82 L1 đếncác L82lọ m 83 85 111 113 87 115 89 117 119 121 91 93 123 95 125 Hình 3.12 Các vết 97 127 99 101 129 131 chất 47 103 133 105 107 109 135 137 139 L83 đến L205 lọ mỏng 221 Hình 3.13 Các vết Dựa theo hiệu TDI (gộp đến  kết lọ 225 227 229 L207 đến cácL229 lọ thu lọ cao mỏng 3từ phân sắcđoạn ký b 1), TDII đến (gộp lọlọ 82 lọ83 205 ), TDIII đến (gộp lọ ), gộp 229 thu chất 223 lọ phân nhiên 20 đoạ phân đoạn - Phân TDI đoạn (L1 –L82) : 1,303g - Phân TDII đoạn (L83 –L205) : 0,209g - Phân TDIII đoạn (L206-L229) : 0,011g Kết sắc ký mỏng dung dịch giải ly phân đoạn thể hình 3.14 Hình 3.14 Các vết chất phân đoạn TDI, phân đoạn mỏng TDI TDIII 1K̵Q[pW Chạy ý sắc k mỏng phân đoạn, nhiều vệt lẫn vào ta I (TDI thấy ) có , phân khơng III (TDIII đoạn ) phân có biệt vết nên khơng khảo I (TDII) sát có vệt Phân rõ, vệt đoạn có I màu vệt gần nên nhauta chọn ph phân 48 đoạn xanh chạy sắ  Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TDII (L83-L205) (0,209g) Trước chạy Dm n: sắc DII, kýta thử cộtvà phân chọn đoạn dung T môi Etylacetat ; Diclometan; Chloroform; Benzen ; Hình 3.15 Thử dung mơi Hexan đơn với độ phân cực Nhận: xét - Với hexan, cấu - Với benzen, phần tử cấu Với chlorofo rm cấu tử - Với diclometan, - Với Trên nhau, với tử tách nhiề đầu - phần tách sau chồng cấu tử rõ etylacetat, có vệt xanh tách bị sở trình dung bày tách sáng nhau, nh bị ch rõ, p mơitỉ đơn nhiều lệ đó,hệ tổng dung hợm dựa hệ dung đưa môi :ra 49 lên kết hình sắc HỆ 1: B:D = 9:1 8:2 Hình 3.16 Hệ Ta 7:3 dung 6:4 2:8 mơi benzen:diclometan e với tỉ lệ thấy lệ 9:1, tỉ 7:3, , 6:4 ta tách kháthêm tốt dung acetat m để clorofor vết tách B:D:E =1:3:1 3:1 1:3:4 1:5:3 Hình 3.17 Hệ 1:0:4 dung 4:0:1 4:1:1 6:2:1 6,5:2:1,5 Rf lớn 7:2:1 7,5:2:0,5 8:2:1 môi benzen:diclometan e:etyl acetate với 50 m cá B:D:C = Hình 3.18 Hệ 7,5:2:0,5 dung n:diclometane:cloroform mơi benze với 1K̵Q : [pW Như ta benzen:diclometane:etyl Vậy 7:2:1 thấy hệ dung acetate, cụ thể ta hệchọn hệ làm dung môi tỉ môi tỉ cho lệ tố giải ly  Kết chạy sắc ký cột phân đoạn TDII (0,209 g) Phân TDII đoạn (0,209 g) (khi định h = 70 cm có danh lượng lượng tương cao đối có GC/MS) hợp để d = tiếp 1.5 cm, silicagel cột cho 20.0 v g, benzen:diclometane:etyl acetate = 1:5:3 (dựa chất c tục triển vào chạy kết sắc ký bả nhưình H 3.19 Hình 3.19 Cột sắc 51 ký 70 cm)(d=1.5 cm, h Cao phân n TDII trộ đo n với 10 g silicagel nghiề n mị n, cho chạ y cột với tốc ộhứ đng 4-5 giọt/ phút, thu đư ợc 40 lọkí hiệ u từLa1 đế n La40 gộ p lạ i thành phân n TDII.1 đo ( gộ p lọ1 lọ2), TDII.2 (gộp lọ3 ế nđ lọ10), TDII.3 (gộ p lọ 11 đế n lọ15), TDII.4 (gộ p lọ16 đế n lọ19), TDII.5 (gộp lọ20 đế n lọ30), TDII.5 (gộ p lọ31 đế n lọ40) Kế t quảsắ c ký bả n mỏng dung dị ch giả i ly lọLa1 đế n La40 ợ đư c thểhiệ n Hình 3.20 Hình 3.20 Phân TDII.1 đoạn 10 Hình 3.21 Phân TDII.2 đoạn 11 12 13 14 Hình 3.22 Phân 52 15 đoạn II.3 TD 16 17 18 19 Hình 3.23 Phânạn TDII.4 đo 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Hình 3.24 Phân TDII.5 đoạn 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 Hình 3.25 Phân TDII.6 đoạn PĐ1 PĐ3PĐ2 PĐ4 Hình 3.26 So sánh 53 PĐ5 phân PĐ6 đoạn ... ? ?Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học cao chiết diclomethane Tầm gửi khế chua quận Liên Chiểu, TP Đà Nẵng”, với mục tiêu đóng góp phần tư liệu vào hệ Đối tượng mục đích nghiên cứu. .. tượng nghiên cứu Lá Tầm gửi kh? ?chua thu hái quận Liêntại Chiểu , thành phốĐà Nẵng 2.2 Mục đích nghiên cứu - Tìm kh? ?chua điều dung xác - Phân lập, kiện chiết Tầm tách gửi thích mơi phân định thành. .. khác nha phần hóa Tầmhọc gửi kh? ?chua - Đóng chua, tạo góp thêm sở thơng khoa học tin, Tầmgửi t? ?cây liệu khế ban đầu cho k Nội dung nghiên cứu 3.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết - Thu thành thập,