Nghiên cứu chiết tách flavonoid toàn phần từ phần trên mặt đất cây kim đơn bidens pilosa l

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  HỒ QUANG SƠN NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH FLAVONOID TOÀN PHẦN TỪ PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CÂY KIM ĐƠN (BIDENS PILOSA L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Đà Nẵng – Năm 2017 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA  NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH FLAVONOID TOÀN PHẦN TỪ PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CÂY KIM ĐƠN (BIDENS PILOSA L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực : Hồ Quang Sơn Lớp : 13CHD Người hướng dẫn khoa học: TS DS Phạm Văn Vượng Đà Nẵng – Năm 2017 MỤC LỤC MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài .1 Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu .1 4.1 Nghiên cứu lý thuyết .1 4.2 Nghiên cứu thực nghiệm .1 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 5.1 Ý nghĩa khoa học 5.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY ĐƠN KIM 1.1.1 Đặt tính sinh thái 1.1.2 Đặt điểm thực vật .3 1.1.3 Công dụng Đơn kim 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY ĐƠN KIM 1.2.1 Favonoid .5 1.2.2 Hợp chất acetylene .5 1.2.3 Nhóm terpenoid 1.2.4 Một số hợp chất khác 1.3 TỔNG QUAN VỀ FLAVONOID .6 1.3.1 Định nghĩa 1.3.2 Nguồn gốc 1.3.3 Cấu trúc 1.3.4 Phân loại .8 1.3.5 Chiết xuất flavonoid 14 1.3.6 Hoạt tính sinh học chế tác dụng thể người 14 1.3.7 Tách riêng tinh chế flavonoid 15 1.4 CÁC NGHIÊN CỨU TRONG NƯỚC VÀ TRÊN THẾ GIỚI 15 1.4.1 Nghiên cứu giới 15 1.4.2 Nghiên cứu nước 16 1.5 Tổng quan dược lý 16 1.5.1 Độc tính cấp 17 1.5.2 Tác dụng chống viêm .17 1.5.3 Tác dụng đái tháo đường 17 1.5.4 Tác dụng hạ huyết áp 17 1.5.5 Tác dụng kháng khuẩn chống sốt rét 17 1.5.6 Tác dụng chống ung thư 18 1.5.7 Tác dụng chống oxy hóa 18 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Hóa chất 18 2.1.3 Thiết bị .19 2.2 Phương pháp nghiên cứu 19 2.2.1 Sơ đồ nghiên cứu 19 2.2.2 Quy trình thực 19 2.3 Phương pháp xác định số tiêu hóa lí 20 2.3.1 Xác định độ ẩm .20 2.3.2 Xác định hàm lượng tro 21 2.4 Phương pháp định tính flavonoid 22 2.4.1 Định tính phản ứng đặc trưng 22 2.4.2 Định tính phương pháp sắc ký lớp mỏng 22 2.4.3 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .24 2.5 Định lượng flavonoid 26 2.5.1 Định lượng flavonoid phương pháp ngâm chiết 26 2.5.2 Định lượng phương pháp chiết soxhlet 26 2.6 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết flavonoid từ đơn kim .26 2.6.1 Khảo sát thời gian chiết 27 2.6.2 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng .27 2.6.3 Khảo sát số lần chiết 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 27 3.1 Xác định số tiêu vật lý .27 3.1.1 Xác định độ ẩm .27 3.1.2 Xác định hàm lượng tro 28 3.2 Định tính flavonoid 28 3.2.1 Định tính flavonoid phản ứng đặc trưng 28 3.2.2 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lớp mỏng 29 3.2.3 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) .30 3.3 Định lượng flavonoid .32 3.3.1 Định lượng phương pháp ngâm chiết 32 3.3.2 Định lượng phương pháp chiết soxhlet 32 3.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 32 3.4.1 Khảo sát thời gian chiết 32 3.4.2 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng .34 3.4.3 Khảo sát số lần chiết 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 Đại học Đà Nẵng Trường Đại học Sư Phạm Cộng hòa xã hội chủ nghĩa Việt Nam Độc lập- Tự do-Hạnh phúc Khoa Hóa NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên: HỒ QUANG SƠN Lớp : 13CHD Tên đề tài Nghiên cứu chiết tách flavonoid toàn phần từ phần mặt đất Đơn kim (Bidens Pilosa L.) Nguyên liệu, dụng cụ, thiết bị - Nguyên liệu: Cây Đơn kim thu hái xã Ba, huyện Đông Giang, tỉnh Quảng Nam - Dụng cụ: Bình định mức, bình tam giác, ống đong, cốc, pipet… - Thiết bị: Bếp cách thủy, lò nung, tủ sấy, máy UV-VIS, cân phân tích, máy HPLC Nội dung nghiên cứu - Xác định thông số vật lí: Độ ẩm, hàm lượng tro - Khảo sát yếu tố: Thời gian chiết, tỷ lệ rắn lỏng, số lần chiết - Đinh tính, định lượng flavonoid Giáo viên hướng dẫn: TS.DS Phạm Văn Vượng Ngày giao đề tài: 10/08/2016 Ngày hoàn thành: 18/04/2107 Chủ nhiệm khoa Giáo viên hướng dẫn PGS.TS Lê Tự Hải TS.DS Phạm Văn Vượng Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho khoa ngày….tháng…năm… Kết điểm đánh giá………… Đà Nẵng, ngày….tháng….năm… CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM ƠN Trong thời gian học trường Đai học Sư Phạm – Đại học Đà nẵng, xin cảm ơn giúp đỡ cán giảng viên khoa Hóa hết lịng giảng dạy truyền đạt cho tơi kiến thức bản, tản vững chắc, động viên giúp đỡ tơi q trình làm khóa luận Tôi xin cảm ơn TS.DS Phạm Văn Vượng hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình thực đề tài Xin cảm ơn gia đình bạn bè tơi ln động viên giúp đỡ đóng góp ý kiến quý báu để tơi hồn thành luận văn Lần làm quen với cơng việc nghiên cứu, cịn nhiều điều thiếu sót, mong nhận đóng góp, ý kiến thầy để khóa luận hồn chỉnh cố kinh nghiệm, kiến thức Tôi xin chân thành cảm ơn Đà Nẵng, ngày 20 tháng năm 2017 Sinh viên Hồ Quang Sơn DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên bảng bảng Trang 1.1 Cây đơn kim 1.2 Quả đơn kim 1.3 Cấu trúc hepta-1,3,5 tryin-1-ylbenzene 1.4 Albert Szen-gyorgy (1893-1986) 1.5 Bộ khung Flavonoid 1.6 Bộ khung Flavon 1.7 Cấu trúc Luteolin 1.8 Cấu trúc Apigenin 1.9 Bộ khung Flavanon 1.10 Cấu trúc Naringin 1.11 Bộ khung Flavonol 1.12 Cấu trúc Keamferol 10 1.13 Cấu trúc Quercetin 10 1.14 Cấu trúc Flavonovol 10 1.15 Bộ khung Chalcon 10 1.16 Cấu trúc Butein 11 1.17 Cấu trúc Morachalcon 11 1.18 Cấu trúc Agoletin 11 1.19 Bộ khung auron 11 1.20 Cấu trúc Aureusidin 12 1.21 Cấu trúc Anthocyanin 12 1.22 Cấu trúc Rotenon 13 2.1 Sơ đồ chiết Flavonoid 20 2.2 Chiết ethyl acetate 21 2.3 Loại tạp n-hexane 21 2.4 Các phận máy HPLC 25 3.1 Kết định tính sắc ký lớp mỏng 31 3.2 Kết thời gian lưu mẫu chuẩn Luteolin 32 3.3 Kết thời gian lưu chất chuẩn flavonoid 32 3.4 Sắc ký đồ mẫu flavonoid phương pháp HPLC 32 3.5 Khảo sát thời gian chiết 35 3.6 Phổ UV-VIS khảo sát thời gian chiết Flavonoid 35 3.7 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng pha loãng 250 lần 36 3.8 Phổ UV-VIS khảo xác tỉ lệ rắn lỏng theo mật độ quang 36 3.9 Dịch chiết số lần chiết theo mật độ quang 37 3.10 Phổ UV-VIS khảo xác số lần chiết 38 DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu Tên bảng bảng Trang 3.1 Kết xác định độ ẩm bột đơn kim 29 3.2 Kết xác định hàm lượng tro bột đơn kim 29 3.3 Kết định tính flavonoid phản ứng đặc trưng 30 3.4 Kết chiết flavonoid phương pháp ngâm chiết 33 3.5 Kết chiết flavonoid phương pháp chiết soxhlet 34 3.6 3.7 3.8 Kết khảo sát thời gian chết phương pháp đo mật độ quang Kết khảo sát tỉ lệ rắn lỏng phương pháp đo mật độ quang Kết khảo sát số lần chiết theo mật độ quang 34 37 38 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Hình 2.4 Các phận máy HPLC b Nguyên tắc hoạt động - Hệ thống dung mơi (1) đóng vai trị pha động trộn với theo tỉ lê thích hợp (điều khiển máy tính) thay đổi thành phần hệ thống Gradient (2) - Pha động bơm liên tục qua cột hệ thống bơm cao áp (3) - Mẫu phân tích đưa vào cột tách phận tiêm mẫu (4), sau pha động đẩy vào cột tách (5), trình tách xảy - Các chất sau khỏi cột tách thời điểm khác lượt vào detector (6) thích hợp chuyển thành hiệu điện khuếch đại chuyển đại phận tự ghi xử lý kết c Chuẩn bị tiến hành sắc ký * Chuẩn bị máy móc Máy HPLC điểm chứng theo định kỳ để bảo đảm máy hoạt động tốt cho kết phân tích có độ xác cao * Chuẩn bị chất cần đo - Dung môi pha động: Đệm phosphate/H2O: Methanol (40:60) - Chất chuẩn: Luteolin - Mẫu: cao chiết flavonoid SVTH: Hồ Quang Sơn 25 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 2.5 Định lượng flavonoid 2.5.1 Định lượng flavonoid phương pháp ngâm chiết * Tiến hành Cân xác 100g dược liệu Đơn kim bỏ cốc ngâm ethanol 80º, 48 tiếng, sau lấy dịch chiết ngâm tiếp ethanol 80º 24 tiếng, gộp dịch chiết lại đem cạn dung mơi thu cao chiết Hịa tan cao chiết nước cất, sau hịa tan tiếp vào n- hexane để loại tạp, tiếp tục thêm dung môi ethyl acetate vào, thu dịch chiết ethyl acetate, đem cô cạn, thu flavonoid cần chiết Lấy cao đem cân biết khối lượng xác 2.5.2 Định lượng phương pháp chiết soxhlet *Tiến hành Cân 50g bột Đơn kim với 250ml ethanol 80º ( trước tiến hành chiết, làm ẩm 50ml dung môi ủ 30 phút chiết) thu hồi dung mơi, sau hịa tan vào 50ml nước nóng thu hỗn dịch Lắc hỗn dịch với nhexane ( lần, lần 40ml) để loại tạp Sau cho vào ethyl acetate ( lần, lần 40ml) Thu dịch chiết ethyl acetate, đem cạn ta thu cao cần chiết Tính hàm lượng flavonoid tồn phần theo cơng thức X(%) = 𝑚 𝑀 x 100 Trong đó: m: Khối lượng cắn thu M: Khối lượng dược liệu 2.6 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết flavonoid từ đơn kim - Flavonoid hợp chất có bước sóng nằm vùng UV khoảng 240– 400nm, dựa vào định luật Lambert- Beer: Hàm lượng chất tiết tỷ lệ với mật độ quang A bước sóng có cường độ hấp thụ lớn ứng với mẫu có hàm lượng chất lớn SVTH: Hồ Quang Sơn 26 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 2.6.1 Khảo sát thời gian chiết - Thời gian ảnh hưởng đến trình chiết tách flavonoid, thời điểm định, lượng flavonoid chiết nhiều - Cân khối lượng xác bột Đơn kim ngâm ethanol 80º 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ, sau lấy dịch chiết đem cạn thu cắn, hịa tan cắn nước, sau loại tạp n-hexane, ethyl acetate, cô cạn dịch chiết ethyl acetate thu cao chiết, đem cao chiết đo UV-VIS lấy kết tối ưu 2.6.2 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng Ảnh hưởng tỉ lệ nguyên liệu rắn dung môi làm ảnh hưởng đến hiệu suất chiết flavonoid Cách tiến hành tương tự cách làm khảo sát thời gian chiết, lấy tỉ lệ 1:3, 1:5, 1:7, 1:9, sau lấy dịch chiết đem đo UV-VIS lấy kết tối ưu 2.6.3 Khảo sát số lần chiết - Tùy cây, dược liệu khác mà ta thu dịch chiết khác nhau, có ngâm trong lần hết dịch chiết, có dược liệu ngâm nhiều lần thu dịch chiết tối ưu - Chiết flavonoid theo số lần ngâm chiết: lần , lần, lần, lần, sau gộp số lần chiết lại đem đo UV- VIS, lấy kết tối ưu CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Xác định số tiêu vật lý 3.1.1 Xác định độ ẩm Bột Đơn kim tiến hành xác định độ ẩm, số lượng mẫu xác định độ ẩm mẫu Kết khảo sát độ ẩm trung bình Đơn kim trình bày qua Bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết xác định độ ẩm bột đơn kim STT m1 m2 m3 Ω (%) 48,407 5,002 53,070 6,77 74,216 5,003 78,875 6,87 57,066 5,005 61,729 6,88 SVTH: Hồ Quang Sơn ωtb (%) 6.83 27 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 62,439 5,010 67,105 6,86 82,027 5,007 86,698 6,79 Nhận xét Từ Bảng 3.1 độ ẩm trung bình bột Đơn kim tương đối thấp 6,83% Bột Đơn kim bảo quản điều kiện thường, nơi thoáng mát, để lâu thời gian dài 3.1.2 Xác định hàm lượng tro Hàm lượng tro trung bình lấy trung bình từ mẫu Kết khảo xác hàm lượng tro bột Đơn kim trình bày Bảng Bảng 3.2 Kết xác định hàm lượng tro củ bột đơn kim STT m1 m2 H (%) 5,004 0,469 9,37 5,015 0,468 9,32 5,010 0, 469 9,38 5,002 0,472 9,33 5,003 0,468 9,35 Htb 9,35 Nhận xét Từ bảng 3.2 cho thấy hàm lượng tro trung bình bột Đơn kim 9,35% 3.2 Định tính flavonoid 3.2.1 Định tính flavonoid phản ứng đặc trưng Bảng 3.3 Kết định tính flavonoid phản ứng đặc trưng Nhóm chất Thuốc thử đặc hiệu Phản ứng Cyanidin Flavonoid FeCl3 5% Phản ứng với NH3 SVTH: Hồ Quang Sơn Hiện tượng dung dịch chuyển sang màu đỏ cam Dung dịch có màu xanh thẫm Có vệt màu vàng xuấ Kết + ++ ++ 28 Khóa luận tốt nghiệp Phản ứng với NaOH 10% GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Xuất kết tủa vàng ++ Ghi (+): Phản ứng dương tính (++): Phản ứng dương tính rõ Nhận xét Từ tượng phản ứng đặc trưng số nhóm chất flavonoid có bột đơn kim 3.2.2 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lớp mỏng Ngoài cách nhận biết flavonoid phản ứng đặc trưng phương pháp sắc ký lớp mỏng hiệu qủa việc tìm kiếm chất flavonoid có dược liệu bột đơn kim hay khơng Kết định tính flavonoid từ đơn kim phương pháp sắc ký lớp mỏng thể Hình 3.1 Hình 3.1 Kết định tính sắc ký lớp mỏng Nhận xét SVTH: Hồ Quang Sơn 29 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Sau dùng máy sắc ký để định tính flavonoid cao chiết từ Đơn kim, kết nhận thấy vệt tối che huỳnh quang chứng tỏ có flavonoid cao chiết 3.2.3 Định tính flavonoid phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) - Chất chuẩn: Luteolin - Pha động: methanol : đệm phosphate/H2O (60:40) - Mẫu: cao flavonoid - Tốc độ dòng 0,8- ml/phút Kết định tính flavonoid phương pháp HPLC thể Hình 3.2, 3.3, 3.4 Hình 3.2 Kết thời gian lưu chất chuẩn Luteotin - Thời gian lưu chất chuẩn nằm phút 4,504 chiếm 77,306% SVTH: Hồ Quang Sơn 30 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Hình 3.3 Kết thời gian lưu mẫu flavomoid - Thời gian lưu mẫu flavonoid nằm phút thứ 4,543 chiếm 0,444% Hình 3.4 Sắc ký đồ mẫu flavonoid Đơn kim phương pháp HPLC Nhận xét Từ kết sắc ký đồ mẫu flavonoid, cho ta thấy chất Luteolin chất chuẩn mẫu có thời gian lưu trùng khớp, chứng tỏ hợp chất flavonoid chiết từ Đơn kim có chất Luteolin SVTH: Hồ Quang Sơn 31 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 3.3 Định lượng flavonoid 3.3.1 Định lượng phương pháp ngâm chiết Kết định lượng flavonoid trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết chiết flavonoid phương pháp ngâm chiết Mẫu m(g) bột dược liệu m(g) flavonoid H(%) Lần 100,10 0,401 0,401 Lần 100,03 0,414 0,414 Lần 100,01 0,420 0,420 Lần 100,00 0,451 0,451 Lần 100,03 0,446 0,446 Htb (%) 0,426 Nhận xét Qua lần chiết tách, kết cho thấy hàm lượng flavonoid trung bình 0,426% 3.3.2 Định lượng phương pháp chiết soxhlet Kết định lượng flavonoid phương pháp soxhlet trình bày Bảng 3.5 Bảng 3.5 Kết chiết flavonoid phương pháp chiết soxhlet Mẫu m (g) bột dược liệu m (g) flavonoid H (%) Lần 50,00 0,196 0,392 Lần 50,02 0,204 0,407 Lần 50,01 0,219 0,437 Lần 50,00 0,210 0,420 Lần 50,05 0,203 0,405 Htb (%) 0,412 Nhận xét Qua lần chiết, hàm lượng flavonoid trung bình 0,412% 3.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 3.4.1 Khảo sát thời gian chiết * Cách tiến hành SVTH: Hồ Quang Sơn 32 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng - Cân xác 10g bột Đơn kim cho vào bình, ngâm với dung môi ethanol vào ngày, ngày, ngày, ngày (Hình 3.5) Sau đó, lấy dịch chiết đem cạn thu cắn, hịa tan cắn nước, sau loại tạp n-hexane, ethyl acetate, cô cạn dịch chiết ethyl acetate thu cao chiết, đem cao chiết đo UV-VIS bước sóng 313 nm, chọn lấy mẫu có số ngày chiết flavonoid nhiều - Kết khảo sát thời gian chiết trình bày Bảng 3.6 Hình 3.6 Bảng 3.6 Kết khảo sát thời gian chiết Mật độ quang A flavonoid λmax (nm) Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu (1ngày) (2 ngày) (3 ngày) (4 ngày) 0,412 0,6082 0,6935 0,5021 313 Hình 3.5 Khảo sát thời gian chiết SVTH: Hồ Quang Sơn 33 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 0.700 0.65 Mật độ quang A 0.60 0.55 0.50 0.45 A 0.40 0.35 0.30 0.25 0.200 290.0 300 310 320 330 340 350 360.0 nm Bước sóng (nm) Xanh lá: ngày Hồng: ngày Đỏ: ngày Xanh dương: ngày Hình 3.6 Phổ UV-VIS khảo sát thời gian chiết flavonoid Nhận xét Qua kết Bảng 3.6 ta thấy thời gian chiết flavonoid từ bột đơn kim tối ưu ngày 3.4.2 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng a Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng * Cách tiến hành - Lấy mẫu bột Đơn kim với mẫu 10g, cho vào cốc ngâm cồn 80o theo tỉ lệ bột đơn kim: ethanol 80 1:3, 1:5, 1:7, 1:9, sau thời gian chiết lấy dịch chiết đem cạn thu cắn, hịa tan cắn nước, sau loại tạp n-hexane, ethyl acetate, cô cạn dịch chiết ethyl acetate thu cao chiết, đem cao chiết pha loãng 250 lần đo UV-VIS, chọn tỉ lệ tối ưu Hình ảnh dịch chiết pha lỗng Hình 3.7 SVTH: Hồ Quang Sơn 34 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Hình 3.7 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng pha loãng 250 lần Kết khảo sát tỉ lệ rắn lỏng trình bày Bảng 3.7 Hình 3.8 0.800 0.75 Mật độ quang A 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 A 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.200 290.0 300 310 320 330 340 350 360.0 nm Bước sóng (nm) Đỏ: 1/5 Hồng: 1/3 Xanh lá: 1/7 Xanh dương: 1/9 Hình 3.8 Phổ UV-Vis khảo sát tỉ lệ rắn lỏng theo mật độ quang Bảng 3.7 Kết khảo sát tỉ lệ rắn lỏng Mật độ quang A λmax (nm) Mẫu 1(1:3) Mẫu 2(1:5) Mẫu 3(1:7) Mẫu 4(1:9) 313 0,6013 0,6974 0,4658 0,3335 SVTH: Hồ Quang Sơn 35 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng Nhận xét Kết Bảng 3.7 ta thấy mật độ quang lớn tỉ lệ 1: chiết tỉ lệ 1:5 tối ưu 3.4.3 Khảo sát số lần chiết * Cách tiến hành - Lấy mẫu, mẫu 10g bột Đơn kim đem ngâm với ethanol 80o Sau lấy dịch chiết theo số lần: lần, lần, lần, lần ngày Sau gộp tổng số lần chiết lại, lấy dịch chiết đem cạn thu cắn, hịa tan cắn nước, sau loại tạp n-hexane, ethyl acetate, cô cạn dịch chiết ethyl acetate thu cao chiết, đem pha loãng 250 lần đo UV-VIS, chọn số lần chiết tối ưu (Hình 3.9) Hình 3.9 Dịch chiết sau pha lỗng 250 lần - Kết khảo sát số lần chiết từ dịch chiết Đơn kim trình bày Bảng 3.8 Hình 3.10 Bảng 3.10 Kết khảo sát số lần chiết theo mật độ quang Mật độ quang A λmax (nm) Mẫu (1 lần) Mẫu 2(2 lần) Mẫu 3(3 lần) Mẫu (4 Lần) 313nm 0,6854 0,7874 0,5801 0,4640 SVTH: Hồ Quang Sơn 36 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng 0.850 0.80 Mật độ quang A 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 A 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.200 290.0 300 310 320 330 340 350 360.0 nm Xanh dương: lần Hồng: lần Xanh lá: lần Bước sóng (nm) Đỏ: lần Hình 3.10 Phổ UV-VIS khảo sát số lần chiết Nhận xét Qua Bảng 3.8 ta thấy, mật độ quang cao lần chiết Nếu lấy lần chiết, flavonoid dược liệu chưa hết, lấy lần lần chiết, thời gian này, số chất khác dược liệu chiết ra, khối lượng để tính flavonoid khơng xác Như lần chiết vừa đủ để chiết flavonoid KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua q trình nghiên cứu thực nghiệm, chúng tơi rút số kết thực nghiệm sau: - Bột Đơn kim có độ ẩm trung bình: 6,83%, hàm lượng tro: 9,35% SVTH: Hồ Quang Sơn 37 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng - Khảo sát điều điện tối ưu để chiết tách flavonoid + Thời gian chiết: ngày + Tỷ lệ rắn lỏng: tỷ lệ 1:5 + Số lần chiết: lần - Định tính, định lượng flavonoid * Định tính + Bằng phản ứng đặc trưng: phản ứng có dấu hiệu chứng tỏ có flavonoid mẫu + Bằng sắc ký lớp mỏng: xuất hiên vệt đen bảng mỏng chiếu bước sóng 254nm Chứng tỏ có flavonoid + Bằng sắc ký hiệu cao (HPLC): Có chất Luteolin mẫu chất chuẩn thời gian lưu * Định lượng Với phương pháp đinh lượng: phương pháp ngâm chiết chiết soxhlet, kết hàm hàm lượng chiết flavonoid phương pháp ngang nhau, chênh lệch không đáng kể (phương pháp ngâm chiết: 0,426%, phương pháp chiết soxhlet: 0,412%) Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu sâu - Nghiên cứu thêm thành phần hóa học Đơn kim - Có thể nghiên cứu mở rộng ứng dụng chất có hoạt tính sinh học vào thực tiễn, tạo sản phẩm phục vụ nhu cầu cho người - Tiếp tục nghiên cứu phương pháp chiết tách hợp chất để thu hiệu suất cao TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Đái Duy Ban, Các hợp chất thiên nhiên có họat tính sinh học phòng chống số bệnh cho người vật nuôi, NXB Khoa học tự nhiên & công nghệ Hà Nội [2] Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu [3] Phạm Văn Vượng, Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Đơn kim (Bidens pilosa L., họ asteraceae) SVTH: Hồ Quang Sơn 38 Khóa luận tốt nghiệp GVHD: TS.DS Phạm Văn Vượng [4] Phạm Văn Vượng, Phạm Thanh Kỳ, Nguyễn Thị Bích Thu, Vũ Mạnh Hùng, Nghiên cứu tác dụng chống viêm rễ Đơn kim (Bidens pilosa L.) [5] Phạm Văn Vượng, Phạm Thanh Kỳ, Hoàng Văn Lương, Phan Văn Kiệm, hợp chất flavonoid từ Đơn kim (Bidens pilosa L.) [6] Kedar Nath Modi, An update review on Bidens piosa L., institute of pharmaceutical education and Research , Modinagar, Ghaziabad, Uttar Pradesh, India, 201201 [7] KVIECINSKI Maicon Roberto, study of the antitumor potential of Bidens Pilosa L use in Brazilian folk medicine [8] http://www.derpharmachemica.com/searchresults.php?keyword=bidens+pilosa+L SVTH: Hồ Quang Sơn 39 ... tên: HỒ QUANG SƠN L? ??p : 13CHD Tên đề tài Nghiên cứu chiết tách flavonoid toàn phần từ phần mặt đất Đơn kim (Bidens Pilosa L. ) Nguyên liệu, dụng cụ, thiết bị - Nguyên liệu: Cây Đơn kim thu hái xã... tách flavonoid toàn phần từ phần mặt đất Đơn kim (Bidens Pilosa L. )” Mục tiêu nghiên cứu Tìm hiểu sâu Đơn kim, xác định vài tiêu hóa l? ?, đinh tính định l? ?ợng hợp chất flavonoid Đơn kim Khảo sát... KHOA HĨA  NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH FLAVONOID TỒN PHẦN TỪ PHẦN TRÊN MẶT ĐẤT CÂY KIM ĐƠN (BIDENS PILOSA L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN KHOA HỌC Sinh viên thực : Hồ Quang Sơn L? ??p : 13CHD Người