Nghiên cứu nhân giống lan cattleya tú cầu đỏ cattleya laeliocattleya look ton red bằng phương pháp nuôi cấy in vitro

LỜI CẢM ƠN Để hồn thành để tài khóa luận tốt nghiệp này, em nhận hướng dẫn, bảo tận tình Q Thầy Cơ lời chia sẻ, giúp đỡ, động viên bạn ngồi đề tài khóa luận Nhân dịp này, cho phép em xin gửi lời tri ân: Trướ hết, m xin h n thành ảm n thể n ộ nghiệp, Thầy n l nh đạo Viện CNSH Lâm gi o ủ Viện ng nghệ sinh h L m nghiệp đ tạo điều kiện tốt qu tr nh thự đề tài khóa luận tốt nghiệp Tiếp th o, m xin gửi lời iết n s u s đến Tiến sĩ Nguyễn Thị Hồng Gấm, Viện Công nghệ Sinh h c, Trường Đại h c Lâm nghiệp đ tận t nh hướng ẫn m ng y ngày đầu t t y vào nghi n ứu để hồn thành tốt đề tài khóa luận Em xin gửi lời cảm n đến tập thể cán Bộ môn Công nghệ tế bào thực vật, Thầy Cơ cán phịng thí nghiệm đ tạo điều kiện thuận lợi hoàn thành tốt đề tài uối ng, m xin gửi lời ảm n tới gi đ nh, ạn người th n đ lu n lu n kh h lệ, động vi n tạo m i điều kiện thuận lợi ho húng m h tập hoàn thành kh Tuy đ nghiệm ủ luận tốt nghiệp ố g ng để hồn thiện đề tài khóa luận này, song kiến thứ , kinh ản th n m n hạn hế, v ản kh tr nh kh i s i s t, k nh mong qu Thầy ản o o ủ luận tốt nghiệp kh ng đ ng g p kiến đ nh gi , để m đượ hoàn thiện h n n 10 t n v nt n năm 2018 c ện Nguyễn Thị Huyền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .3 1.1.Tổng quan Lan Cattleya Cattleya Tú cầu đ 1.1.1 Đặc đ ểm chung Lan Cattleya 1.1.2 Giới thiệu chung lan Cattleya Tú cầu đỏ .9 Định hướng nhân giống Lan Cattleya Tú cầu đ 10 1.2.1 Nhân giống tách chiết 10 1.2.2 Nhân giống nuôi cấy mô 11 1.3.Lịch sử nghiên cứu thành tựu nghiên cứu nhân giống lan in vitro 12 1.3.1 Trên giới 12 1.3.2 Các nghiên cứu tron nước 12 PHẦN 2.MỤC TIÊU - NỘI DUNG - VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.3 Vật liệu nghiên cứu 20 Phư ng ph p nghi n ứu 21 2.4.1 P ươn p p luận 21 2.4.2 P ươn p p bố trí thí nghiệm cụ thể 21 2.4.3 P ươn p p t u t ập xử lý số liệu 25 PHẦN 3.KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Ảnh hưởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu lan Cattleya Tú cầu đ 27 3.2 Ảnh hưởng chất điều h sinh trưởng đến khả nh n nh nh thể chồi lan Cattleya Tú cầu đ 30 3.3 Ảnh hưởng chất điều h sinh trưởng đến khả nh n nh nh hồi lan Cattleya Tú cầu đ 34 3.4 Ảnh hưởng chất điều h sinh trưởng đến khả r rễ tạo hoàn chỉnh 39 PHẦN 4.KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 44 4.1 Kết luận 44 4.2 Tồn 44 4.3 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ BIỂU DANH MỤC VIẾT TẮT TT CHỮ ĐẦY ĐỦ CHỮ VIẾT TẮT BAP - Benzyl amino purine NAA Naphthyl acetic acid Kinetin - Furfuryl amino purine IBA Indole - - butyric acid ĐHST Điều h CTTN Công thức thí nghiệm Đ Đối chứng KT Khử trùng TS Tái sinh 10 NNC Nhân nhanh chồi 11 NNTC Nhân nhanh thể chổi 12 Cs Cộng 13 DAS – ELISA Double Antibody Sandwich ELISA 14 CyMV Cymbidium mosaic virus 15 ORSV Odontoglossum ringspot virus 16 RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA 17 GA3 Axit Gibberellin 18 DNA Deoxyribonucleic acid 19 HgCl2 Mercury chloride 20 ND Neodymi 21 TDZ Thidiazuron sinh trưởng DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Ảnh hưởng thời gian khử tr ng đến kết quảtạo mẫu in vitro 22 Bảng 2.2: Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nh n nh nh thể chồi lan Cattleya Tú cầu đ 23 Bảng 2.3 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nh n nh nh hồi lan Cattleya Tú cầu đ 24 Bảng 2.4 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả r rễ tạo hoàn chỉnh lan Cattleya Tú cầu đ 25 Bảng 3.1 Kết ảnh hưởng thời gian khử tr ng đến khả tạo mẫu in vitro 28 Bảng 3.2 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả nh n nh nh thể chồi lan Cattleya Tú cầu đ 31 Bảng 3.3 Kết ảnh hưởng chủa chất ĐHST đến khả nh n nh nh hồi lan Cattleya Tú cầu đ 35 Bảng 3.4 Kết ảnh hưởng chất ĐHST đến khả r rễ lan Cattleya Tú cầu đ 40 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cấu tạo hoa Cattleya Hình 1.2 Một số lồi lan Cattleya thuộc nhóm Hình 1.3 Một số lồi lan Cattleya thuộc nhóm Hình 3.1 Quả lan Cattleya Tú cầu đ trướ s u khử trùng 29 Hình 3.2 Phơi hạt nuôi cấy tr n m i trường nuôi cấy khởi đầu 29 Hình 3.3 Phơi hạt lan Cattleya Tú cầu đ t i sinh tr n m i trường nuôi cấy khởi đầu s u h n tuần nuôi cấy 30 Hình 3.4 Thể chồi lan Cattleya Tú cầu đ ni cấy sau tái sinh 31 Hình 3.5 Thể chồi lan Cattleya Tú cầu đ sau tuần nuôi cấy công thứ m i trường nhân nhanh thể chồi 33 Hình 3.6 Sự phát triển thể chồi sau tuần nuôi cấy 34 Hình 3.7 Chồi lan Cattleya Tú cầu đ sau tuần nuôi cấy công thứ m i trường nhân nhanh chồi 37 Hình 3.8 Chồi lan Cattleya Tú cầu đ lúc cấy chuyển (A) sau tuần (B) NNC5 38 Hình 3.9 Cụm chồi lan Cattleya Tú cầu đ 30 ngày (A) 45 ngày (B) m i trường NNC5 38 Hình 3.10 Cụm chồi lan Cattleya Tú cầu đ sau 45 ngày ni 38 Hình 3.11 Chồi lan Cattleya Tú cầu đ đủ tiêu chuẩn cấy vào m i trường rễ 39 Hình 3.12 Ảnh hưởng chất ĐHST đến khả r rễ lan Cattleya Tú cầu đ sau 20-25 ngày 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong loại ho trồng phổ biến nay, ho l n biết đến lồi hoa khơng vẻ đẹp, hư ng th m, màu s giá trị kinh tế đ ạng mà cịn có o Đến nay, 750 chi với 35.000 loài lan tự nhiên 75.000 giống lan kết ch n l c lai tạo đ biết đến Hiện nay, số nước phát triển Mỹ, Pháp, Hà Lan, Thái Lan, Trung Quố ,… đ đ ng ứng dụng công nghệ tiên tiến việc nghiên cứu lai tạo giống lan hư ng th m, màu s đ ạng nhằm đ p ứng nhu cầu ngày cao thị trường đ m lại nguồn lợi kinh tế cho nước ưu điểm mặt sinh trưởng, Trong giống lan nhập nội lại phát triển kh e mạnh, sản lượng - chất lượng ho o điều khiển hoa o ho người trồng kinh doanh lan vào dịp lễ Tết, nên mang lại hiệu Với điều kiện xã hội - tự nhiên thuận lợi, nhiều nguồn nguyên liệu sẵn cho l n sinh trưởng phát triển Việt Nam trở thành nước sản xuất hoa có tiếng khu vực, tập trung th o hướng nhập nội lai loài lan tập trung phát triển loài lan đị Như vậy, việc khai thác nguồn gen q có sẵn ta phải đồng thời nhập nội tuyển ch n giống lan phù hợp với nhu cầu thị hiếu Cattleya đượ mệnh ho l n đượ nh Hoàng hậu ủ loài ho lan Đ y loại huộng qu n t m n y v màu s đ ạng hư ng th m tuyệt vời Một số loại như: Cattleya Tú ầu đ , Cattleya labiata, Cattleya eldorado,… Ở nướ t với kh hậu n ng ẩm th h hợp ho loại hoa sinh sống ph t triển, nhi n thự tế sản xuất giống l n Việt N m n gặp nhiều kh khăn Vậy n n, ng l n Cattleya đượ nhập nội hủ yếu từ Th i L n nướ t sản xuất nghi n ứu ung ấp ho Hiện n y, Cattleya nhiều loài, loài tự nhi n, ph n ố hẹp, nh n giống gặp nhiều kh khăn o hạt l n nh kh ng nội nhũ ần ộng sinh ủ loại nấm đặ iệt để nảy mầm Để giải vấn đề này, người t p ụng nh n giống ằng kỹ thuật nu i in vitro tạo r hàng loạt m ng đặ t nh tốt, ổn định mặt i truyền, hệ số nh n y on o, nh n nh nh hàng loạt,… nhằm giải kh n nguồn l n giống thời gi n ng n với gi ả hợp l h nh v vậy, mà t i thự đề tài nghi n ứu l n Cattleya Tú ầu đ : “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Cattleya Tú cầu đỏ (Cattleya laeliocattleya Look Ton Red) phương pháp nuôi cấy in vitro” PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Tổng quan Lan Cattleya Cattleya Tú cầu đỏ 1.1.1 Đặc điểm chung Lan Cattleya 1.1.1.1 Nguồn gốc, phân bố Lan Cattleya g i Cát lan, tên chi John Lindley đặt năm 1824 theo tên William Cattley người đ nh n giống trồng thành công loài lan Cattleya labiata Tên viết t t chi tạp h thư ng mại C Cattleya ũng t n liên minh hoa lan gồm chi Brassavola, Cattleya, Encyclia, Guarianthe, Laelia, Myrmecophila, Sophronitis, Broughtonia Lan Cattleya giống l n đẹp h Orchidaceae nêncịn g i Hồng hậu loài lan hoa tổng hợp củ hư ng s c vẹn tồn quyến rũ Cattleyacó vẻ đẹp đài , ki u s với nhiều màu s c từ hồng, tím tr ng ho đến cam, vàng,… hoa có mùi th m ngào ngạt, quyến rũ Cattleya chi thực vật tư ng đối phong phú chủng loại, đ mặt hoa Mặc dù Ben tham Hooker chấp nhận ạng độ 20 loài, số n y đ tăng lên nhiều khoảng 65 loài nguyên thủy vơ vàn lồi đ lai tạo Lan Cattleya giống lan có nhiều lai h lan, k h thước hoa lớn với bề rộng từ 15-20cm màu s c phong phú Nhiều lồi Cattleya có nguồn gốc vùng rừng nhiệt đới Châu Mỹ, cao từ 650-1700m phân bố vùng rừng thuộ ost Ri độ đến Nam Mỹ nhiệt đới, xuất xứ từ Braxin, Columbia, Mexicô vùng nhiệt đới v ng đồi cao mát mẻ Hiện nay, Cattleya đ đ ng gây trồng kh p giới Ở Việt Nam, Cattleya ũng loài l n phổ biến, đượ người sản xuất người tiêu dùng huộng Ngồi ra, dịng Cattleya ũng đ Lan, Trung Quốc, Việt N m,… Tại Việt Nam, Cattleya đượ mặt Thái ng dùng với nghĩ kh ng hỉ bao gồm Cattleya nguyên thủy mà cịn dùng cho Cattleya lai Ví dụ: Brassolaelio - Cattleya, Laelicatteya, Sophrocattleya… 1.1.1.2 Vị trí phân loại Lan Cattleya thuộc: - Lớp: Liliopsidae - Bộ: Orchidales - H : Orchidaceae - Chi: Cattleya Hình 1.1 Cấu tạo hoa Cattleya Nguồn: sưu tầm Internet Mô tả ký hiệu hình 1.1:   c = cột  b = nụ  e = m t tăng trưởng  l = môi  lf =  ls = thống bên cánh hoa  p = cánh hoa  ps = giả hành  r = rễ  sh = v  sb = v b c b c s = lưng nh ho 1.1.1.3.Đặc đ ểm hình thái sinh học Cattleya loài đ th n, thân mang 1-2 lá/thân, mang nhiều giả hành dự trữ nhiều chất inh ưỡng nước, giả hành mập l n h n so với Dendrobium, rễ nh dài, m c từ ăn hành bám vào giá thể, phát triển theo chiều ngang Lúc cịn non có bẹ màu xanh b c lại, lúc lớn bẹ khô rụng Thường tr n đỉnh giả hành có to, có lưỡi mèo bao b c lấy ph t ho , ph t ho vượt l n xuy n qu lưỡi m o để trổ hoa Trung bình năm, lan giả hành Nếu hăm n tốt phát Ơ ĐỒ QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU TỔNG QUÁT Nhân giống lan Cattleya Tú cầu đỏ p ƣơng p áp nuô cấy in vitro Công thức khử trùng: KT3 Quả lan (1 phút cồn 70o + phút HgCl2 0,1%) Tái sinh phôi hạt Nhân nhanh thể chồi NNTC5: MS Thể chồi + 0,5mg/l BAP + 0,3mg/l NAA + 0,3mg/l Kinetin + 100g/l khoai tây + 20g/l sucrose + 4g/l agar Tái sinh chồi từ thể chồi Nhân nhanh chồi NNC5 (MS + 0,5mg/l BAP + 0,3mg/l NAA + Chồi lan 0,7mg/l Kinetin + 100g/l khoai tây + 20g/l sucrose + 4g/l agar Tạo rễ Ra rễ R3: MS + 0,3mg/l IBA + 100g/l khoai tây + 20g/l sucrose + 4g/l agar Cây lan hoàn chỉnh 43 PHẦN KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Dựa vào kết thu từ thí nghiệm q trình thực khóa luận tốt nghiệp: “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống Cattleya Tú cầu đỏ (Cattleya laeliocattleya Look Ton Red) phương pháp nuôi cấy in vitro” t i đư r kết luận s u: - Công thức khử tùng mẫu đạt tỷ lệ tái sinh cao KT3: cồn 70o phút HgCl2 0,1% phút đạt tỷ lệ mẫu 73,33% tỷ lệ mẫu tái sinh 91,16% - Công thứ m i trường thích hợp để nhân nhanh thể chồi NNTC5: MS + 0,5 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA + 0,3 mg/l Kinetin + 100 g/l khoai tây + 20 g/l sucrose + g/l agar chồi mập mạp, x nh đậm, hệ số nh n đạt 4,56 lần - Công thứ m i trường thích hợp để nhân nhanh chồi NNC5: MS + 0,5 mg/l BAP + 0,3 mg/l NAA + 0,7 mg/l Kinetin + 100 g/l khoai tây + 20 g/l sucrose + g/l agar - Công thứ m i trường thích hợp để rễ tạo hoàn chỉnh R3: MS + 0,3 mg/l IBA + 100 g/l khoai tây + 20 g/l sucrose + g/l agar 4.2 Tồn Do thời gian thực khóa luận cịn hạn chế n n hư thể hồn thiện tồn quy trình nhân giống lan Cattleya Tú cầu đ , trình nghiên cứu hư điều kiện để bố trí nhiều thí nghiệm phục vụ cho nội dung: huấn luyện con, trồng giá thể 4.3 Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu hồn thiện nội dung cịn lại quy tình nhân giống in vitro lồi lan Cattleya Tú cầu đ như: Nghi n ứu thời gian huấn luyện con; Nghiên cứu kỹ thuật trồng sau ống nghiệm 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Cao Thị h m (2011), “Nghiên cứu ản ưởng m t số biện pháp kỹ thuật đến s n trưởng, phát triển giống lan Cattleya ronald”, Luận văn Thạc sĩ kho h c Nông nghiệp, ĐHNN Hoàng Xuân Lam, Nguyễn Thị Kim Lý (2012), Kết nghiên cứu tuyển chọn m t số giống phong lan Dendrobium nhập n i từ Thái Lan, Tạp chí Khoa h c công nghệ Nông nghiệp Việt Nam, số 3: 115 - 120 Hoàng Xuân Lam, Nguyễn Thị Kim Lý (2012), Nghiên cứu ản ưởng m t số p ân bón l đến s n trưởng phát triển giống hoa phong lan Cattleya “ aad a del t”, Tạp chí Khoa h c cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam, số 3: 120 - 125 Nguyễn Công Nghiệp (2000), Trồng hoa lan, Nxb Trẻ - Hà Nội, tr 16-268 Nguyễn Quang Thạch, Hoàng Thị Nga (2010), Nghiên cứu ứng dụng p ươn p p nuô cấy lát mỏng nhân nhanh giống lan Vanda, Cattleya, Phalaenopsis, Tạp chí Nơng nghiệp cơng nghiệp thực phẩm, 462 Nguyễn Thị Kim Lý (2009), Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật DAS-ELISA phát virus gây hại giống lan Cattleya tỉnh phía Bắc Việt Nam, Tạp chí Bảo vệ thực vật - Bộ Nông nghiệp & Phát triển nông thôn, (225 2009), tr 26-33 Nguyễn Thị Kim Lý, Hoàng Xuân Lam, (2010), Kết nghiên cứu tuyển chọn m t số giống hoa phong lan Cattleya nhập n i, Tạp chí Khoa h c cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam, số 6: 63 – 68 Nguyễn Thiện Tị h, Đoàn Thị Hoa, Trần Sĩ Dũng, Huỳnh Thị Ng c Nhân (1996), “Kỹ thuật nuôi trồn oa lan” Nhà xuất Nông nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Nhóm nghiên cứu ứng dụng tài nguyên thực vật Việt Nam (2009), Giới thiệu lồi lan Cattleya, BotanyVN.com 10 Nhóm tác giả (2007), “S c đỏ Việt am” Nhà xuất Khoa h c tự nhiên & Công nghệ 11 Trần Duy Quý (2005), Sổ ta n ười Hà N c lan, Nxb Nông nghiệp- Hà Nội, tr 53-70 12 Trần Mạnh (2010), Sổ tay trồn c ăm sóc C t lan – Cattleya, (tamgroup.vn/tailieunongnghiep/upload/tailieu/901326766536.pdf), tr 14-16 13 Trung tâm Công nghệ Sinh h c thành phố Hồ Chí Minh (2008-2010), “Sưu tập, nhập n i, khảo nghiệm nhân giống giống hoa l n” 14 Bùi Thị Hiền (2009), “Nghiên cứu m t số biện pháp kỹ thuật nân cao năn suất, chất lượng hoa lan Hoàng thảo la (Dendrob um br d)”, Luận văn Thạc sĩ N ng nghiệp - Trường Đại h c Nông nghiệp Hà Nội 15 Lê Thị Mận (2009), “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống in vitro lồi lan Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume)” Khóa luận tốt nghiệp - Trường Đại h c Lâm nghiệp 16 Nguyễn Thị Lo n (2010), “Nghi n ứu hoàn thiện kỹ thuật nh n giống l n Kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) qu ph i hạt ằng phư ng ph p nh n giống in vitro Tài liệu nƣớc 17 Burgeff, H (1909), Die wurzelpilze der Orchideen, ihre kultur unh ihr Leben in der Pflanze, Verlag von Gustav Fischer, Jena, p 73 18 Knudson, L (1922), Nonsymbiotic germination of orchid seeds, Botanical Gazette, 73, p 1-25 19 Schmidt-Ostrander, Ingrid “William Cattley (1788-1835)” The Canadian Orchid Congress 17 Seidel Júnior, D.; Venturieri, G A (2011), Ex vitro acclimatization of Cattleya forbesii and Laelia purpurata seedlings in a selection ò substrates, Acta Scientiarum - Agronomy, 33 (1), p 97-103 151 18 Skoog F, Miller C (1957) “Quy định hóa h c tăng trưởng hình thành qu n m thực vật nuôi cấy ống nghiệm”, Symp Soc Exp Biol 11: 118 - 131 19 Soebijanto; Widiastoety,- D; Suwanda, (1988) The effect of Atonik on orchid (Laeliocattleya sp.) plants Buletin – Penelitian – Hortikultura 20 Sunset Western Garden Book, 1995:606–607 21 Supinrach, S Supinrach, I (2011), Study of medias on growth seedling Cattleya and Phalaenopsis, Proceedings of the 49th Kasetsart University Annual Conference, Kasetsart University, 1, p 264-271 PHỤ BIỂU P ụ b ểu 01: Mô trƣờng M (MURASHIGE & SKOOG, 1962) Các t àn p ần mô trƣờng Hàm lƣợng (mg/l) KNO3 1900 NH4NO3 1650 MgSO4.7H2O 370 KH2PO4 170 CaCl2 332 H3BO5 6,2 MnSO4.H2O 22,3 ZnSO4 8,6 Na2MoO4 0,25 CuSO4 7H2O 0,025 CoCl2 0,025 FeSO4.7H2O 27,8 Na2EDTA 37,3 Glycin 2,0 Myo-Inositol 100 Thiamine HCl 0,1 Axit nicotinic 0,5 Pyridoxine HCl 0,5 Phụ biểu 02: Ản ƣởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu CTTN KT1 Số bình Tỷ lệ mẫu mẫu tái tái sinh sinh (%) 40 50 20 100 40 50 Số bình Số bình Tỷ lệ mẫu cấy mẫu mẫu ban đầu sạch (%) 2 5 Lần TN TB KT2 33,33 40 100 60 66,67 60 66,67 TB KT3 53.33 80 75 80 100 60 100 73,33 91,16 80 75 5 100 60 5 100 80 TB KT5 77,78 TB KT4 66,67 93,33 71,66 5 100 60 5 100 40 5 100 60 TB 100 53,33 Phụ biểu 03: Ản ƣởng mô trƣờng nuôi cấy đến khả n ân nhanh thể chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ CTTN ĐC Lần TN Số bình cấy mẫu Tổng số bình sau tuần Hệ số nhân thể chồi (lần) 1,33 1,67 3 1,67 TB NNTC1 1,56 2,00 2,00 3 1,67 TB NNTC2 1,89 2,33 2,00 3 2,33 TB NNTC3 2,22 2,67 10 3,33 3 3,00 TB NNTC4 3,00 11 3,67 12 4,00 3 12 4,00 TB NNTC5 3,89 14 4,67 14 4,67 3 13 4.33 TB 4,56 Chất lƣợng thể chồi Thể chồi nh , màu xanh nhạt Thể chồi nh , xanh nhạt Thể chồi nh , xanh đậm Thể chồi mập, xanh đậm, không đồng Thể chồi nh , xanh đậm, đồng Thể chồi mập, xanh đậm, đồng Bảng số liệu hệ số nhân nhanh thể chồi lan Catleya Tú cầu đỏ qua lần lặp lại thí nghiệm CTTN Lần Lần Lần ĐC 1,33 1,67 1,67 NNTC1 2,00 2,00 1,67 NNTC2 2,33 2,00 2,33 NNTC3 2,67 3,33 3,00 NNTC4 3,67 4,00 4,00 NNTC5 4,67 4,67 4,33 Phụ biểu 04: P ân tíc p ƣơng sa nhân tố ản ƣởng àm lƣợng chất ĐH T tới khả n ân n an t ể chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Đ NNTC1 NNTC2 NNTC3 NNTC4 NNTC5 3 3 3 Sum 4.67 5.67 6.66 9.00 11.67 13.67 Average Variance 1.56 1.89 2.22 3.00 3.89 4.56 0.04 0.04 0.04 0.11 0.04 0.04 ANOVA Source of Variation SS Between Groups Within Groups 21.02 0.59 12 Total 21.61 17 df MS 4.20 0.05 F 85.56 Pvalue F crit 0.00 3.11 Phụ biểu 05: Ản ƣởng mô trƣờng nuôi cấy đến khả n ân nhanh chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ CTTN ĐC NNC1 NNC2 NNC3 NNC4 NNC5 NNC6 NNC7 Lần TN TB TB TB TB TB TB TB TB Số bình cấy mẫu 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Tổng số Hệ số Chất bình sau nhân chồi lƣợng chồi tuần (lần) 1,33 Chồi nh , 1,00 màu xanh 1,33 nhạt 1.22 3,00 Chồi nh , 2,67 màu xanh 3,00 nhạt dài 2,89 2,67 2,33 Chồi nh , màu xanh 2,67 2,56 2,33 Chồi mập, 2,33 màu xanh đậm, tư ng 2,67 đồi 2,43 3,00 Chồi mập, 10 3,33 màu xanh đậm, đồng 10 3,33 3,22 12 4,00 Chồi 11 3,67 mập,màu x nh đậm, 11 3,67 đồng 3,78 2,33 3,00 Chồi nh , x nh đậm 2,67 2,67 2,67 Chồi mập, 2,67 màu xanh, không 3,00 đồng 2,78 Bảng số liệu hệ số nhân nhanh chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ qua lần lặp lại thí nghiệm CTTN Lần Lần Lần ĐC 1,33 1,00 1,33 NNC1 3,00 2,67 3,00 NNC2 2,67 2,33 2,67 NNC3 2,33 2,33 2,67 NNC4 3,00 3,33 3,33 NNC5 4,00 3,67 3,67 NNC6 2,33 3,00 2,67 NNC7 2,67 2,67 3,00 Phụ biểu 06: P ân tíc p ƣơng sa nhân tố ản ƣởng àm lƣợng chất ĐH T tới khả n ân n an c ồi lan Cattleya Tú cầu đỏ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Đ 3.66 1.22 0.04 NNC1 8.67 2.89 0.04 NNC2 7.67 2.56 0.04 NNC3 7.33 2.44 0.04 NNC4 9.66 3.22 0.04 NNC5 11.34 3.78 0.04 NNC6 NNC7 3 2.67 2.78 0.11 0.04 8.00 8.34 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups Within Groups 11.27 0.74 16 Total 12.01 23 MS 1.61 0.05 F 34.74 P-value 0.00 F crit 2.66 Phụ biểu 7: Ản ƣởng mô trƣờng nuôi cấy đến khả rễ tạo hoàn chỉnh CTTN ĐC R1 R2 R3 R4 R5 R6 Lần lặp 3 3 3 Số chồi cấy ban đầu 30 30 30 TB 30 30 30 TB 30 30 30 TB 30 30 30 TB 30 30 30 TB 30 30 30 TB 30 30 30 TB Số chồi rễ 8 26 27 26 22 21 22 30 30 30 24 24 23 20 19 19 17 18 17 Tỷ lệ chồi rễ (%) 23,33 26,67 26,67 25,56 86,67 90,00 86,67 87,78 73,33 70,00 73,33 72,22 100,00 100,00 100,00 100,00 80,00 80,00 76,67 78,89 66,67 63,33 63,33 64,44 56,67 60,00 56,67 57,78 Số rễ trung bình/cây 1,57 1,50 1,63 1,57 3,12 3,15 3,19 3,15 2,95 3,04 3,00 2,99 4,16 4,03 4,10 4,09 2,92 3,00 2,95 2,96 2,80 2,84 2,89 2,84 2,64 2,61 2,70 2,65 Đặc đ ểm rễ + +++ ++ +++ ++ ++ + Bảng số liệu tỷ lệ chồi rễ lan Cattleya Tú cầu đỏ qua lần lặp lại thí nghiệm CTTN LẦN LẦN LẦN ĐC 23,33 26,67 26,67 R1 86,67 90,00 86,67 R2 73,33 70,00 73,33 R3 100,00 100,00 100,00 R4 80,00 80,00 76,67 R5 66,67 63,33 63,33 R6 56,67 60,00 56,67 Phụ biểu 08: P ân tíc p ƣơng sa nhân tố ản ƣởng àm lƣợng chất ĐH T tới tỷ lệ rễ chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance Đ 76.67 25.56 3.72 R1 263.34 87.78 3.70 R2 216.66 72.22 3.70 R3 300.00 100.00 0.00 R4 236.67 78.89 3.70 R5 193.33 64.44 3.72 R6 173.34 57.78 3.70 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total SS 10361.76 df MS 1726.96 44.44 14 10406.20 20 3.17 F 543.99 P-value 0.00 F crit 2.85 Bảng số liệu số rễ TB/chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ qua lần lặp lại thí nghiệm CTTN LẦN LẦN LẦN ĐC 1,57 1,5 1,63 R1 3,12 3,15 3,19 R2 2,95 3,04 3,0 R3 4,16 4,03 4,1 R4 2,92 2,95 R5 2,8 2,84 2,89 R6 2,64 2,61 2,7 Phụ biểu 09: P ân tíc p ƣơng sa nhân tố ản ƣởng àm lƣợng chất ĐH T đến khả rễ chồi lan Cattleya Tú cầu đỏ Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Đ R1 R2 R3 R4 R5 R6 3 3 3 Sum 4.70 9.46 8.99 12.29 8.87 8.53 7.95 Average Variance 1.57 3.15 3.00 4.10 2.96 2.84 2.65 0.004 0.001 0.002 0.004 0.002 0.002 0.002 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups Within Groups 10.056 0.035 14 Total 10.091 20 MS F 1.676 0.0025 670.408 P-value F crit 2.847726 ... thiệu chung lan Cattleya Tú cầu đỏ Hình 1.4 Lan Cattleya Tú cầu đỏ - Tên g i: Cattleya Tú cầu đỏ - Tên khoa h c: Cattleya laeliocattleya Look Ton Red - Là giống Cattleya giống lai nhân tạo hai... ? ?Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Cattleya Tú cầu đỏ (Cattleya laeliocattleya Look Ton Red) phương pháp nuôi cấy in vitro? ?? 19 PHẦN MỤC TIÊU - NỘI DUNG - VẬT LIỆU - PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1... Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Cattleya Tú cầu đ (Cattleya laeliocattleya Look Ton Red) phư ng ph p nu i mô in vitro - Nghiên cứu công thức khử trùng tạo mẫu in vitro từ phôi hạt - Nghiên cứu