Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa ly lilium longiflorum

LỜI CẢM ƠN Để hồn thành chƣơng trình đào tạo bậc đại học trƣờng Đại học Lâm nghiệp, đƣợc đồng ý ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp - Trƣờng đại học Lâm nghiệp Việt Nam, thực đề tài tốt nghiệp: “Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa ly (Lilium longiflorum)” Sau thời gian thực nghiệm nghiên cứu, để đạt đƣợc kết nghiên cứu tốt cố gắng học tập thân, nghiêm túc tích cực dƣới bảo tận tình ThS Nguyễn Thị Thơ giúp đỡ anh chị, bạn bè Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp - Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam Tơi xin đƣợc bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới ThS Nguyễn Thị Thơ, tận tình hƣớng dẫn truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt q trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo tồn thể cán - viên chức Viện Cơng nghệ sinh học Lâm nghiệp - Trƣờng Đại học Lâm nghiệp Việt Nam tạo điều kiện thuận lợi để thực đề tài Đề tài nghiên cứu khoa học đƣợc hồn thành khơng thể qn kể đến ủng hộ tinh thần ngƣời thân bạn bè, ngƣời sát cánh động viên giúp tơi hồn thành đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Đàm Huy Hoàng i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC BIỂU ĐỒ vi DANH MỤC HÌNH vii ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu hoa Ly (Lilium longiflorum) 1.1.1 Nguồn gốc, vị trí, phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Điều kiện sinh thái 1.2 Tình hình sản xuất hoa Ly giới Việt Nam 1.2.1 Trên giới 1.2.2 Ở Việt Nam 1.3 Nuôi cấy in vitro hoa Ly giới Việt Nam 11 1.3.1 Trên giới 11 1.3.2 Ở Việt Nam 14 PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 19 2.2 Nội dung nghiên cứu 19 2.3 Đối tƣợng, vật liệu, thời gian địa điểm nghiên cứu 19 - Các vật liệu nuôi cấy đƣợc lấy từ Ly Hồng (Ly Tiber) 19 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.4.1 Phƣơng pháp luận 19 2.4.2 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm thu thập số liệu 20 Đất sinh hóa 23 2.4.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 24 ii PHẦN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Ảnh hƣởng thời khử trùng đến khả tạo mẫu in vitro 25 3.2 Ảnh hƣởng vật liệu nuôi cấy đến khả tái sinh chồi 26 3.3.Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 28 3.4.Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ chồi in vitro 31 3.5.Ảnh hƣởng loại giá thể đến sinh trƣởng mô giai đoạn vƣờn ƣơm 34 PHẦN 4.KẾT LUẬN.TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 38 4.1 Kết luận 38 4.2 Tồn 38 4.3 Kiến nghị 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Chữ đầy đủ BAP Benzyl amino prin IAA Indole acetic acid IBA Indole butyric acid MS Murashige & Skoog NAA Naphthalene acetic acid TDZ Thidiazuron 2,4D 2,4 Dichlorophenoxyacetic acid TB Trung bình CTTN Cơng thức thí nghiệm ĐHST Điều hòa sinh trƣởng iv DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng thời gian 21 khử trùng mẫu HgCl2 0,1% đến hiệu tạo mẫu 21 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng 21 kỹ thuật nuôi cấy đến khả tái sinh chồi 21 Bảng 2.3 Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến khả nhân nhanh chồi hoa Ly 22 Bảng 2.4 Bố trí thí nghiệm thu thập số liệu ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng đến khả rễ chồi in vitro 23 Bảng 2.5 Ảnh hƣởng loại giá thể đến khả sống in vitro 23 giai đoạn vƣờn ƣơm 23 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng mẫu HgCl2 0,1 % 25 đến khả tạo mẫu in vitro 25 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng của vật liệu nuôi cấy đến khả tạo mô sẹo tái sinh chồi từ mô sẹo 27 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng 29 đến khả nhân nhanh chồi hoa Ly 29 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng 32 đến khả rễ chồi in vitro 32 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng giá thể đến sinh trƣờng phát triển mô giai đoạn vƣờn ƣơm sau tuần trồng 35 v DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Tỉ lệ mẫu từ nhuỵ hoa, đế hoa vảy củ khử trùng HgCl2 0,1 % với thời gian khác 26 Biểu đồ 3.2 Tỉ lệ mẫu tạo tái sinh chồi từ mô sẹo 27 vật liệu nuôi cấy khác 27 Biểu đồ 3.3 Hệ số nhân chồi mơi trƣờng có bổ sung chất điều hồ sinh trƣởng khác 29 Biểu đồ 3.4 Chiều cao chồi mơi trƣờng có bổ sung chất điều hoà sinh trƣởng khác 30 Biểu đồ 3.5 Tỉ lệ chồi rễ mơi trƣờng MS có bổ sung NAA 32 nồng độ khác 32 Biểu đồ 3.6 Số rễ/chồi mơi trƣờng MS có bổ sung NAA 33 nồng độ khác 33 Biểu đồ 3.7 Chiều dài rễ mơi trƣờng MS có bổ sung NAA 33 nồng độ khác 33 Biểu đồ 3.8 Tỉ lệ sống loại giá thể khác 35 vi DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Chồi tái sinh từ mơ sẹo từ lát cắt mỏng nhụy hoa (hình a), đế hoa (hình b) vảy củ (hình c) 28 Hình 3.2.Cụm chồi hoa Ly mơi trƣờng MS+0,05 TDZ (Hình a) MS+ 0,04 TDZ (Hình b) sau tuần nuôi cấy 31 Hình 3.3 Rễ Ly mơi trƣờng MS+ 0,3 NAA (Hình a) MS+0,05 NAA (Hình b) sau tuần ni cấy 34 Hình 3.4 Cây Ly sinh trƣởng giá thể GT3 (Hình a) giá thể GT2 (Hình b) giá thể GT1 (hình c) 37 vii ĐẶT VẤN ĐỀ Trồng hoa kinh doanh hoa ngành đem lại lợi nhuận kinh tế cao Từ lâu ngƣời gắn bó, gần gũi với thiên nhiên Thiên nhiên nơi mang đến cho ngƣời nhiều quà tặng vô giá, q vơ giá hoa Hoa làm cho sống ngƣời thêm phần thi vị ý nghĩa Khi đời sống ngày đƣợc nâng cao, ngƣời hƣớng tới hƣởng thụ, thƣởng thức đẹp nhu cầu hoa lại khơng thể thiếu Từ mà nghề đƣợc đời đem lại lợi nhuận lớn nghề trồng kinh doanh hoa Cùng với phát triển không ngừng xã hội, nhu cầu hoa ngày lớn đòi hỏi nghề trồng hoa phải có giống hoa lạ, hấp dẫn để đáp ứng thị hiếu thị trƣờng Hoa Ly (Lilium longiflorum) lồi hoa cao cấp quyến rũ, màu sắc phong phú, hƣơng thơm độ bền hoa cắt cành cao (10-15 ngày), dễ thu hoạch bảo quản chiếm lĩnh thị trƣờng hoa tƣơi giới Việt Nam Hoa Ly không để trang trí mà cịn sử dụng để điều chế nƣớc hoa, mỹ phẩm, kem lão hóa… Do hoa Ly loại hoa mang lại lợi nhuận to lớn Hiện nay, nƣớc ta giá trung bình thị trƣờng cành hoa Ly từ 15.000 đến 30.000 VNĐ/cành, chí 60.000 VNĐ/cành vào dịp lễ tết Ở Việt Nam hoa Ly trồng thành công nhiều tỉnh nhƣ Lâm Đồng, Lào Cai, Hà Nội…Tuy nhiên, phải thƣờng xuyên nhập giống từ nƣớc ngồi với chi phí cao từ 10.000 - 15.000 VNĐ/củ giống không chủ động nguồn giống Kỹ thuật nhân giống in vitro với ƣu điểm sinh trƣởng phát triển cách đồng cho hệ số nhân giống cao Chỉ cần lƣợng nhỏ nguyên liệu ban đầu, nuôi cấy môi trƣờng dinh dƣỡng với điều kiện thích hợp thu đƣợc lƣợng lớn giống ngắn nhiều so với phƣơng pháp truyền thống khác Xuất phát từ thực tế tiếp tục thực đề tài “Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa ly (Lilium longiflorum)” PHẦN TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu hoa Ly (Lilium longiflorum) 1.1.1 Nguồn gốc, vị trí, phân loại 1.1.1.1 Nguồn gốc phân bố Cây hoa Ly có tên khoa học Lilium longiflorum, họ liliaceas, thuộc nhóm mầm (Monocotylendones) Cây hoa Ly có ngi gốc từ Nhật Bản nƣớc châu Âu Hoa Ly đƣợc trồng Đà Lạt từ năm 1945 Hà Nội năm 1970 Đà Lạt nhập giống Ly từ Hàn Quốc, Nhật Bản Hiện nay, hoa Ly đƣợc trồng phổ biến nhiều nơi nhƣ Hà Nội, Đà Lạt… 1.1.1.2 Phân loại hoa Ly Bộ : Liliales Họ : Liliaceae Chi : Lilium Loài : L longiflorum Theo hệ thống phận loại Takhtajan Ly thuộc ngành hạt k n Angiospermae lớp mầm Monocotyledoneae hay lớp loa kèn Liliopsida, phân lớp loa kèn Liliae, loa kèn Liliales, họ loa k n Liliaceae (Võ Văn Chi, Vƣơng Đức Tiến, 1978) [3] Họ Liliaceae họ lớn với 200 chi 3000 loài Chi Lilium gồm khoảng 220 lồi, có số lồi đƣợc trồng cách 3000 năm Sau năm 1950, khoảng 100 giống Ly đƣợc lai tạo đăng ký tên giới với nhiều giống lai có nguồn gốc từ hai loài Nhật Bản L auratum L speciosum (Pelkonen, 2005) [31] Trung Quốc nƣớc có nhiều chủng loại Ly trung tâm, nguồn gốc Ly giới Theo kết điều tra, Trung Quốc có khoảng 460 giống, 280 biến chủng (chiếm 1/2 tổng giống hoa Ly giới), có 136 giống, 52 biến chủng Trung Quốc tạo Nhật, Hàn Quốc có 110 giống có 30 giống mang đặc trƣng nƣớc Hà Lan có khoảng 320 giống, 805 giống ch nh Hà Lan tạo ra…Cuối kỷ XVI, nhà thực vật học ngƣời Anh phát đặt tên cho giống Ly Đầu kỷ XVII Ly đƣợc di thực từ Châu Âu đến Châu Mỹ Sang kỉ XVIII giống Ly Trung Quốc đƣợc di thực sang Châu Âu vẻ đẹp mùi thơm hấp dẫn nên Ly nhanh chóng phát triển đƣợc coi hoa quan trọng Châu Âu, Châu Mỹ.Vào cuối thể kỷ thứ XIX bệnh virut Ly lây lan mạnh, tƣởng chừng Ly bị hủy diệt Đến đầu kỷ XX ngƣời ta phát giống Ly thơm Trung Quốc (L regane) có khả chống chịu tốt với bệnh virut, giống đƣợc nhập vào Châu Âu chúng đƣợc dùng vào việc lai tạo giống để tạo nhiều giống có tính thích ứng rộng, khả chống chịu sâu bệnh tốt, Ly lại đƣợc phát triển mạnh mẽ Do việc mua bán hoa Ly giới phát triển, nên công tác lai tạo giống đƣợc ý mở rộng, giống ngày nhiều Để tiện cho việc mua bán hiệp hội làm vƣờn Hoàng Gia Anh năm 1963 đƣa hệ thống phân loại Ly Hệ thống chủ yếu vào nguồn gốc bố mẹ lai, tạo giống từ ngƣời ta chia giống Ly trồng trọt làm bốn nhóm: Nhóm 1: Nhóm Ly phƣơng Đơng: gồm chủng: L auratum, L spucicsum, L faponicum, L rubellum…chủ yếu giống lai có ngồn gốc khác Nhóm 2: Nhóm Ly Á châu: gồm L lancipollium, L lenhttini var maximwicgii, L caculamabel, L pumilum , L dacidu, L wiblanotiac chủ yếu nhóm Carotuoid Nhóm 3: Nhóm Ly thơm: gồm chủng L langflorcum, Ly Đài Loan (L porosanum), Ly trắng (L candidum), Ly vƣơng (L relaga) Nhóm 4: Nhóm Ly Tinh Diệp: gồm Ly Hán Lâm (L hansoni), Ly Tinh Diệp (L martagou) với L chalcudonnicum, Ly ốc đan…lai tạo chọn lọc Năm 1982, Hiệp hội Ly quốc tế đề hệ thống phân loại Ly sở hệ thống phân loại Anh năm 1963 Hệ thống dựa vào nơi nguyên sản bố mẹ, đặc trƣng hình thái, màu sắc hoa quy giống Ly vào nhóm: a b b c Hình 3.4 Cây Ly sinh trưởng giá thể GT3 (Hình a) giá thể GT2 (Hình b) giá thể GT1 (hình c) 37 PHẦN 4.KẾT LUẬN.TỒN TẠI VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Dựa vào kết thu đƣợc từ thí nghiệm chúng tơi đƣa kết luận sau: Nhụy hoa vật liệu thích hợp thời gian khử trùng phút HgCl2 0,1% cho tỷ lệ mẫu 83,33% Vật liệu thích hợp cho giai đoạn tái sinh chồi đế hoa, tỷ lệ tạo mô sẹo thu đƣợc 96,7% tỷ lệ tái sinh chồi từ mô sẹo đạt 74,4% Môi trƣờng MS có bổ sung: 0,04 mg/l TDZ + 0,2 mg/l 2,4D + 6g/l agar + 30g/l sucrose thích hợp cho giai đoạn nhân nhanh chồi Ly, với hệ số nhân chồi cao 6,18 chất lƣợng chồi tốt Môi trƣờng MS bổ sung 0,3mg/l NAA + 6,5g/l agar +30g/l sucrose thích hợp cho việc kích thích chồi rễ tạo in vitro hoàn chỉnh (tỷ lệ chồi rễ 98,87%, số rễ/ chồi 10,33 chiều dài rễ 1,06) Giá thể Ly nuôi cấy mô giai đoạn vƣờn ƣơm tốt đất sinh hóa cho tỷ lệ sống cao 63,33%, cứng cáp sinh trƣởng phát triển tốt 4.2 Tồn Do thời gian hạn chế nên chƣa đánh giá đƣợc giá thể để tìm đƣợc giá thể phù hợp với Ly 4.3 Kiến nghị Nghiên cứu thêm môi trƣờng nuôi cấy khác đến khả nhân nhanh tạo rễ lồi Lilium nói chung Nghiên cứu thêm giai đoạn sau nuôi cấy in vitro Tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện quy trình nhân nhanh hoa Lilium bằngphƣơng pháp nuôi cấy in vitro 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Hƣơng, Nguyễn Quang Thạch, 2005 Nghiên cứu tao củ in vitro sinh trưởng Lily trồng từ củ in vitro Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn (kỳ 1, tr 33 - 35) Vũ Lan Anh, 2006 Hoàn thiện quy trình nhân nhanh hoa Lilium Topgum phương pháp nuôi cấy lát cắt mỏng vảy củ nhân giống in vitro, Báo cáo khoá luận tốt nghiệp Chi Võ Văn Chi, Vƣơng Đức Tiến, 1978 Phân loại thực vật học, NXB Đại Học Trung học chuyên nghiệp Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc, 2004 Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao - Cây hoa Lily, NXB Lao động - xã hội Hà Nội Nguyễn Thái Hà, Dƣơng Minh Nga, Hà Thị Thuý & cs (2003) Bảo khoa học công nghệ sinh học" toàn quốc năm 2003, tƣ 875-879 Hồ Thị Mỹ Hạnh, 2007 Nghiên cứu quy trình nhân nhanh hoa Lilyum Aziatische "Birthday" phương pháp nuôi cấy in vitro phát triển cảu Lily trồng từ in vitro Báo cáo khoá luận tốt nghiệp Dƣơng Thị Thu Hƣơng, 2001 Nghiên cứu nhân nhanh giống hoa Loa Kèn chịu nhiệt Lilium formolongo phương pháp nuôi cấy in vitro Dƣơng Công Kiên, 2002, Nuôi cấy mô thực vật, NXB Đại học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Xuân Linh, 1998, Hoa kỹ thuật trồng hoa, NXB Nông nghiệp Hà Nội 10 Nguyễn Thành Long, 2014 Nhân nhanh giống hoa lily (lilium sp.) phương pháp nuôi cấy mô lát mỏng Nghiên cứu khoa học ĐHQG 11 Mai Xuân Lƣơng, 1993 Ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa huệ tây, NXB Nông nghiệp 12 Lƣơng Văn Mạnh, 2002 Nghiên cứu phương pháp chuyển gen Agrobacterium tumefaciens vào Lily 13 Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Quang Thạch (1999), “Ảnh hƣởng môi trƣởng tạo củ điều kiện bảo quản củ giống in vitro đến sinh trƣởng, phát triển hoa Loa K n đồng ruộng” Tạp ch Nông Nghiệp, Công Nghiệp, Thực Phẩm số 3, tr.133-135 14 Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Quang Thạch (2001) Ứng dụng tạo củ in vitro công tác nhân giống hoa Loa k n 15 Dƣơng Tấn Nhựt, 1994 Nhân giống hoa huệ tây phương pháp nuôi cấy vảy củ, Tạp chí sinh học 16 Dƣơng Tấn Nhựt, Nguyễn Thành Hải (2007) Hệ thống nuôi cấy bioreactor cơng nghệ sinh học thực vật Tạp chí cơng nghệ sinh học tập 4, số 3, tr 265 – 283 17 Dƣơng Tấn Nhựt, Trần Ngọc Thuỷ Tiên, Mai Thị Ngọc Hƣơng, Nguyễn Thị Thanh Hiền, Phan Xuân Huyền, Bùi văn Lệ, Đỗ Năng Vịnh, Một số kết nghiên cứu hạt nhân tạo hoa Lily (Lilium spp), Tạp chí cơng nghệ sinh học 2, 3, tr 359 - 370 18 Đỗ Minh Phú, Đoàn Thị Thùy Vân cộng sự, 2009 Nghiên cứu hoàn thiện quy trình cơng nghệ ni giống hoa Ly phƣơng pháp ni cấy in vitro Tạp chí khoa học Cơng nghệ Việt Nam số 3, tháng 12/2009, tr 21 – 26 19 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, (2006) “Cảm ứng tạo callus tái sinh chồi từ callus hoa loa kèn lilium formolongo làm sở cho công tacs chọn tạo giống kỹ thuật chuyển gen”, Tạp chí cơng nghệ sinh học 4(2), tr 241-248 20 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn Nguyễn Thị Phƣơng, 1999 Nghiên cứu cứu kỹ thuật tạo củ giống Lilum ống nghiệm Tạp chí Nông nghiệp, Công nghiệp, Thực phẩm 2/1999 21 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Nhẫn, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo (1996) Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật nuôi tây công tát nhân giống hoa loa kèn Kết nghiên cứu KH nông nghiệp 1995-1996, Trƣờng ĐH Nông Nghiệp Hà Nội NXB Nơng Nghiệp 22 Lê Hồi Thanh, 2005 Nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng tới hình thành củ hoa Lily phương pháp nuôi cấy mô tế bào Báo cáo khoá luận tốt nghiệp 23 Nguyễn Thị Phƣơng Thảo (1998) Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh số giống hoa Loa Kèn nhập nội (Oriental Hybrid lily) phương pháp in vitro, Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp, Hà Nội 24 Nguyễn Văn T nh, Nguyễn Xuân Kiệt, Đăng Minh Đơng, Hồng Minh Tân Nghiên cứu sản xuất củ hoa lily phƣơng pháp tách vảy củ miền bắc Việt Nam Tạp chí Khoa học Phát triển 2013, tập 11, số 8: 1109 25 Cao Thị Huyền Trang, Đỗ Năng Vịnh, Vũ văn Vụ, 2006 Nghiên cứu tạo mơ sẹo phơi hố, phơi vơ tính từ lát cắt bầu nhuỵ vòi nhụy giống Lilium Oriental Sorbone, Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thôn (kỳ tháng 4/2006, tr 39 - 41) 26 Triệu Tƣờng Vân, Vƣơng Thu Đông & cs, 2005 Cơ sở khoa học kĩ thuât Sản xuất hoa Ly cắt cành Nhà xuất nông nghiệp Trung Quốc Bản dịch Vũ Hữu Thịnh, 2005 Tài liệu nƣớc 27 Kyowa, Hakko (1986) “A new Lilium species with a curous dispersal mechanism” The Olantsman 3/2008, pp 39-40 28 Maesato K, Sarma.K.S, Fukui H Hara T (1991), “In vitro bulblet induction from shoot apices of Lilium japonicum” Hort science v.26(2), pp 211 29 Torres.K.C (1985) “Carbohydrate effects on callus growth and plantlet regeneration” Hort science, v.20, pp 576 30 Van Aatrijk, Blom Barnhoorn (1984), “Interractions between NAA wounding temperrature and TIBA in their effects on asventitions sprout formation on lilium bulb tissue” Plant Tissue Culture, pp 131-312 31 Veli-Pekka Penlkonen (2005), “Biotechnological approaches in lily (Lilium) produc” Olulu 2005, pp18 -20 30-31 32 Zaghmont.O, Lorres.K.C (1985), “The effect of various carbohydrate sources and concentration on the growth of lilium in vitro” Hort science, v20(4), pp 660 PHỤ BIỂU Phụ biểu 01.Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu từ nhuỵ hoa xử lý HgCl2 0.1%với thời gian khác Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value df sided) 002 13.051 001 11.623 001 Pearson Chi-Square 12.381a Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 270 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 27.00 Phụ biểu 02.Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu từ đế hoa xử lý HgCl2 0.1% với thời gian khác Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value df sided) 000 21.333 000 5.189 023 Pearson Chi-Square 20.833a Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 270 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 36.00 Phụ biểu 03.Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu từ vảy củ xử lý HgCl2 0.% với thời gian khác Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value df sided) 002 12.484 002 12.238 000 Pearson Chi-Square 12.292a Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 270 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 35.67 Phụ biểu 04.Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu tạo mô sẹo xử dụng loại vật liệu khác Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square 23.215a df Asymp Sig (2sided) 000 Likelihood Ratio 23.958 000 Linear-by-Linear Association 10.298 001 N of Valid Cases 270 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 12.67 Phụ biểu 05.Kết kiểm tra tỷ lệ mẫu tái sinh chồi từ mô sẹo xử dụng loại vật liệu khác Chi-Square Tests Asymp Sig (2Value df sided) 000 26.982 000 4.374 036 Pearson Chi-Square 26.162a Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 270 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 41.00 Phụ biểu 06.Kết phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất điều hoà sinh tưởng đến hệ số nhân chôi ANOVA hesonhan Sum of Between Groups Within Groups Total Mean Squares df Square F Sig 21.287 2.365 61.218 000 773 20 039 22.060 29 Phụ biểu 07 Kết phân lớp tìm cơng thức tốt ảnh hưởng chất điều hoà sinh tưởng đến hệ số nhân chôi hesonhan Duncan Subset for alpha = 0.05 cttn N L1 3.3967 L10 3.5367 L9 L8 4.3200 L6 4.3900 L5 4.4800 L7 4.6700 L2 5.3000 L3 5.5433 L4 Sig 3.9033 6.1867 393 1.000 058 145 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed Phụ biểu 08.Kết phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất điều hoà sinh tưởng đến chiều cao chồi ANOVA chieucaochoi Sum of df Squares Between Mean Sig 151.880 000 Square 66.068 7.341 Within Groups 967 20 048 Total 67.035 29 Groups F Phụ biểu 09 Kết phân lớp tìm công thức tốt ảnh hưởng chất điều hoà sinh tưởng đến chiều cao chồi cttn L10 L9 L8 L7 L1 L6 L5 L2 L3 L4 Sig N 3 3 3 3 3 1.1333 chieucaochoi Duncan Subset for alpha = 0.05 1.6667 1.9000 2.4333 3.2333 3.5333 4.0667 4.7000 5.0667 5.8000 1.000 1.000 208 1.000 110 1.000 054 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phu biểu 10: Kết kiểm tra tỉ lệ chồi rễ môi trường MS bỏ sung NAA nồng độ khác Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square 64.601a df Asymp Sig (2sided) 000 Likelihood Ratio 80.840 000 Linear-by-Linear Association 20.559 000 N of Valid Cases 450 a cells (.0%) have expected count less than The minimum expected count is 26.40 Phụ biểu 11.Kết phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất điều hồ sinh tưởng đến số rễ trung bình chồi ANOVA sochoitrenre Sum of df Mean Squares Between Sig 23.540 000 Square 156.933 39.233 Within Groups 16.667 10 1.667 Total 173.600 14 Groups F Phụ biểu 12 Kết phân lớp tìm cơng thức tốt ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng số rễ trung bình chồi sochoitrenre Duncan cttn N Subset for alpha = 0.05 DC RN1 RN4 7.6667 RN3 9.0000 9.0000 RN2 10.3333 Sig 1.3333 4.6667 1.000 1.000 235 235 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ biểu 13.Kết phân tích phương sai nhân tố ảnh hưởng chất điều hoà sinh tưởng đến chiều dài rễ hoa Ly ANOVA Chieu dai re Sum of df Mean Squares Between Sig 5.891 011 Square 503 126 Within Groups 213 10 021 Total 716 14 Groups F Phụ biểu 14 Kết phân lớp tìm cơng thức tốt ảnh hưởng chất điều hoà sinh trưởng đến chiều dài rễ VAR00006 Duncan chieudair N e Subset for alpha = 0.05 2.00 5333 1.00 6333 6333 5.00 7333 7333 4.00 3.00 Sig .8333 8333 1.0667 140 140 079 Means for groups in homogeneous subsets are displayed a Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000 Phụ biểu 15 Kết kiểm tra tỷ lệ sống với công thức giá thể khác Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2-sided) Pearson Chi-Square 15.450a 000 Likelihood Ratio 15.637 000 5.911 015 Linear-by-Linear Association N of Valid Cases 280 a cells (0.0%) have expected count less than The minimum expected count is 42.75 ... rãi, tiếp tục thực nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu nhân giống in vitro hoa Ly (Lilium longiflorum) ” 18 PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu chung:... tƣợng, vật liệu, thời gian địa điểm nghiên cứu - Đối tƣợng nghiên cứu: hoa Ly (Lilium longiflorum) - Vật liệu nghiên cứu: Vảy củ, đế hoa nhụy hoa Ly, Cây hoa Ly nhà vƣờn Sản Hòe - Xuân Quan - Văn... kĩ thuật ni cấy củ Ly in vitro Nhóm nghiên cứu xây dựng quy trình ni cấy số dịng Ly nhập nội từ Hà Lan, nhóm nghiên cứu tiến hành nghiên cứu nội dung ảnh hƣởng Xitokinin, Auxin, đƣờng Saccarose