Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy in vitro cây kim tiền thảo desmodium styracifolium osb merr

LỜI CẢM ƠN Để thực đề tài: Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy in vitro Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.) Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp cho phép tạo điều kiện cho em làm đề tài nghiên cứu phịng thí nghiệm Viện.Trong trình thực đề tài này, em nhận đƣợc nhiều động viên, khích lệ với hƣớng dẫn nhiệt tình chu đáo thầy, giáo Tơi xin đƣợc bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Văn Việt, Chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ tế bào thực vật – Viện Cơng nghệ sinh học Lâm nghiệp, Ths Đồn Thị Thu Hƣơng nhiệt tình hƣớng dẫn truyền đạt kiến thức quý báu cho suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến Ban lãnh đạo toàn thể cán làm việc, nghiên cứu Bộ môn công nghệ tế bào thực vật – Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp – Trƣờng Đại học Lâm nghiệp Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ tơi tận tình suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà nội, ngày tháng năm 2019 Sinh viên Nguyễn Thị Huệ i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v DANH BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT vi MỞ ĐẦU PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung Kim tiền thảo 1.1.1 Nguồn gốc hệ thống phân loại 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Đặc điểm sinh thái phân bố 1.1.4 Giá trị dƣợc liệu 1.1.5 Các nghiên cứu hóa sinh học, dƣợc học Kim tiền thảo 1.2 Tình hình nghiên cứu số lồi thuộc chi Desmodium PHẦN MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 10 2.2 Nội dung nghiên cứu 10 2.3 Đối tƣợng nghiên cứu 10 2.4 Địa điểm điều kiện bố trí thí nghiệm 10 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu 11 2.5.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian khử trùng Javen 8% đến khả tạo mẫu Kim tiền thảo 11 2.5.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 12 2.5.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng hàm lƣợng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi 12 2.5.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ Kim tiền thảo 13 ii 2.5.5 Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trƣởng Kim tiền thảo vƣờn ƣơm 13 2.6 Phƣơng pháp thu thập xử lí số liệu 14 2.6.1 Phƣơng pháp thu thập số liệu 14 2.6.2 Phƣơng pháp xử lý số liệu: 15 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16 3.1 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu Kim tiền thảo 16 3.2 Ảnh hƣởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 17 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi 20 3.5 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ 21 3.6 Ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trƣởng Kim tiền thảo vƣờn ƣơm 24 PHẦN KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 26 4.1 Kết luận 26 4.2 Kiến nghị 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO 27 PHỤ BIỂU 29 iii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm khử trùng vật liệu hạt Kim tiền thảo 11 Bảng 2.2 Bố trí thí nghiệm nhân nhanh chồi Kim tiền thảo 12 Bảng 2.3: Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất hữu đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo 12 Bảng 2.4 Thiết kế thí nghiệm rễ Kim tiền thảo 13 Bảng 2.5 Ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trƣởng 14 Bảng 3.1 Ảnh hƣởng thời gian khử trùng đến khả tạo mẫu 16 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi 18 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng chất hữu đến khả 20 nhân nhanh chồi 20 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ 22 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống 24 iv DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Cây Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.)[14] Hình 1.2 Hình thái Kim tiền thảo[15] Hình 3.1 Tỉ lệ mẫu nảy mầm cơng thức khử trùng 16 Hình 3.2 Hạt Kim tiền thảo đƣợc khử trùng công thức CT2 17 Hình 3.3 Hệ số nhân chồi tỉ lệ chồi hữu hiệu môi trƣờng 18 Hình 3.4 Hình ảnh chồi Kim tiền thảo môi trƣờng 19 sau tuần nuôi cấy 19 Hình 3.5 Hệ số nhân chồi tỉ lệ chồi hữu hiệu công thức môi trƣờng bổ sung hàm lƣợng chất hữu khác 20 Hình 3.6 Cụm chồi Kim tiền thảo mơi trƣờng NC1 sau tuần ni cấy 21 Hình 3.7 Chiều dài rễ trung bình số rễ trung bình/chồi Kim tiền thảo cơng thức thí nghiệm 22 Hình 3.8 Chồi Kim tiền thảo rễ sau tuần nuôi cấy công thức môi trƣờng R1, R2, R3, R6 23 Hình 3.9 Chồi Kim tiền thảo rễ tốt công thức môi trƣờng R5 24 Hình 3.10 Tỉ lệ sống chiều cao trung bình Kim tiền thảo cơng thức thí nghiệm 25 Hình 3.11 Cây Kim tiền thảo đƣợc trồng công thức RB3 trƣớc sau tuần trồng 25 v DANH BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT TT Viết đầy đủ Từ viết tắt BAP Benzylamino purine-6 CTTN Công thức thí nghiệm Cs Cộng ĐHST Điều hịa sinh trƣởng GSH-Px Glutathione peroxidase HPLC High-performance liquid chromatography (sắc kí lỏng hiệu cao) HPLC – PAD Sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò Amperometric xung HLP Hydroxy-L-proline Ki Fufuryamino purine-6 10 MS Murashige & Skoog, 1962 11 MDA Malondialdehyde 12 MCP-1 Monocyte Chemoattractant protein-1 13 NAA Naphthylacetic acid 14 OPN Recombinant human osteopontin protein(protein tái tổ hợp ngƣời) 15 P38 – MAPK P38 MAP Kinase (con đƣờng báo hiệu p38 MAPK) 16 TB Trung bình 17 TFDS Flavonoid Desmodium styracifolium 18 TGF-β Protein TGF-beta tái tổ hợp ngƣời 19 WST -1 Proliferation reagent WST-1 (thuốc thử tăng sinh tế bào WST-1) 20 FITC Flourescein isothiocyanate (huỳnh quang isothiocyanate) vi MỞ ĐẦU Hiện hợp chất tự nhiên đƣợc phân lập từ dƣợc liệu đƣợc sử dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp, chúng đƣợc dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm Trong vơ số lồi thực vật Việt Nam, có nhiều lồi thuộc họ Đậu (Fabaceae) có giá trị sử dụng cao, đƣợc dùng để bào chế thuốc chữa nhiều bệnh nhƣ Kim tiền thảo, đƣợc biết đến nhƣ loại thảo dƣợc quý tốt cho sức khỏe Chúng có nhiều tác dụng nhƣ tăng tiết mật, giảm đau ống mật, lợi mật, tăng lƣu lƣợng máu thận, tăng tuần hoàn não động mạnh đùi… Kim tiền thảo loại thuốc nam cần thiết cho ngƣời bệnh phận từ rễ, thân, sử dụng đƣợc Vì có giá trị thƣơng mại cao Tuy nhiên, hầu hết nguồn dƣợc liệu nƣớc ta đƣợc nhập từ Trung Quốc chƣa có nghiên cứu đầy đủ nhƣ quy trình khép kín từ gieo trồng đến thu hoạch, chế biến sử dụng Kim tiền thảo để có suất hiệu cao Hơn nữa, Việt Nam nhƣ giới chƣa có cơng bố nghiên cứu nhân giống Kim tiền thảo kỹ thuật ni cấy in vitro Do đó, việc tiến hành nghiên cứu nuôi cấy in vitro kim tiền thảo hƣớng nghiên cứu đầy triển vọng nhằm tái sinh, bảo tồn phát triển nguồn dƣợc liệu Việt Nam Dựa vào lí đó, tơi lựa chọn thực đề tài: Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy in vitro Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.) PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung Kim tiền thảo 1.1.1 Nguồn gốc hệ thống phân loại Tên khoa học: Desmodium styracifolium (Osb.) Merr Tên khác: Đồng tiền lông, Mắt trâu, Vảy rồng, Dây sâm lông, Bƣơm bƣớm, Cỏ Đồng tiền vàng (Gold Money Herb), Cat’s foot, maiden-hair, ground ivy (Anh); Herbe de St-Jean, couronne de terre, lierre terrestre, rondette (Pháp) Chi: Thóc lép (Desmodium) Họ: Đậu (Fabaceae) Bộ : Đậu (Fabales) Lớp: Ngọc lan (Magnoliopsida) Ngành: Ngọc lan (Magnoliophyta) Hình 1.1 Cây Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb.) Merr.)[14] 1.1.2 Đặc điểm hình thái Thân cỏ, mọc bị Thân hình trụ, màu xanh vàng, phủ đầy lơng mịn màu vàng hoe Lá mọc so le, đơn hay kép lông chim lẻ gồm 1-3 chét, chét to bên Cuống dài 2-4 cm, hình trụ phù đáy, phủ đầy lơng trắng Hai kèm hình mũi mác, dài 6-9 mm, ngang 2-3 mm, nhiều gân dọc, đầy lông trắng mịn Lá kèm nhỏ, hình tam giác Lá chét có phiến trịn xoăn, đƣờng kính - cm, đến cm, mép ngun, đỉnh trịn hay tù chia thùy cạn, đáy hình tim; mặt nhẵn, màu vàng lục xám, mặt dƣới mốc phủ đầy lông mịn màu trắng, gân kiểu lông chim rõ mặt dƣới, gân phụ - 10 đôi, cuống dài - mm, phủ đầy lông trắng mịn Hai chét bên có phần phiến hai bên gân khơng gốc, bên to, bên nhỏ Cụm hoa: chùm dài đến cm, thƣờng cành nách phía ngọn, mấu chùm xim co gồm hoa có chung bắc, gốc cuống hoa có u lồi nhỏ Cụm hoa phủ đầy lơng trắng mịn Hoa nhỏ, khơng đều, lƣỡng tính, mẫu Hai cuống hoa xim hƣớng hai bên sau xụ xuống Quả loại đậu xụ xuống, mang đài tồn gốc, dẹp, dài 1,5 - cm, ngang - mm, nhiều lông trắng mịn, chia thành - đốt Cây thƣờng đƣợc thu hái vào mùa hè thu, dùng tƣơi hay phơi khơ [1, 3] Hình 1.2 Hình thái Kim tiền thảo[15] 1.1.3 Đặc điểm sinh thái phân bố Thích hợp điều kiện nhiệt độ nóng ẩm ẩm mát, đất chua, có thành phần giới trung bình, ẩm nƣớc nhƣng chịu đƣợc đất chua, nghèo xấu khô hạn Ƣa sáng nhƣng chịu đƣợc bóng râm, sống lƣu niên, tái sinh hạt, chồi gốc, chồi thân, chồi cành khoẻ [1, 3] Phân bố địa lý: Cây Kim tiền thảo loại dƣợc liệu mọc nhiều Đông Nam Ấn Độ, Trung Quốc, Thái Lan, Malaysia, Indonesia, Việt Nam Nhật Bản…Ở Việt Nam, phân bố rộng rãi vùng đồi núi Thƣờng gặp chỗ sáng, đất cát pha, vùng trung du Hà Tây, Lạng Sơn, Ninh Bình, Hải Phịng [1, 3] 1.1.4 Giá trị dược liệu Theo Đông y loại có vị ngọt, tính hàn Trong dân gian Kim tiền thảo đƣợc dùng nhiệt, lợi thủy, tiêu sạn, giải độc, tiêu viêm Các nghiên cứu dƣợc lý đại cho thấy Kim tiền thảo có tác dụng lợi tiểu, lợi mật, kháng sinh, kháng viêm, dãn mạch, hạ huyết áp Nhƣng công dụng chủ yếu lợi mật, thông tiểu tiện, thƣờng dùng chữa sỏi thận, sỏi mật, sỏi bàng quang, sỏi đƣờng tiết niệu, viêm gan vàng da, viêm thận phù thũng … Đối với hệ tim mạch, Kim tiền thảo làm tăng lƣu lƣợng mạch vành, hạ huyết áp, làm tim đập chậm, đồng thời làm giảm mức tiêu thụ oxy tim Tác dụng hạ huyết áp kích thích thụ thể cholinergic phóng bế thụ thể adrenergic Các nhà khoa học nghiên cứu chứng minh đƣợc thành phần flavonoid Kim tiền thảo có tác dụng tốt việc làm hạ huyết áp ngƣời huyết áp cao Bên cạnh đó, Kim tiền thảo có tác dụng đối kháng với triệu chứng pituitrin gây giảm lƣu lƣợng mạch vành, đồng thời làm giảm mức tiêu thụ oxy tim [4] Đặc biệt hoạt chất soyasaponin I chứa Kim tiền thảo đƣợc chứng minh có tác dụng ức chế hình thành sỏi calci axalat thận Cao Kim tiền thảo thí nghiệm động vật có tác dụng ức chế hình thành sỏi calci axalat thận thành phần polysacchorid chứa cao có tác dụng đồng thời làm tăng lƣợng tiết nƣớc tiểu, ngồi cịn có tác dụng tăng cƣờng tiết mật [4] 1.1.5 Các nghiên cứu hóa sinh học, dược học Kim tiền thảo Zhou C et al (2012) tiến hành nghiên cứu phƣơng pháp đánh giá chất lƣợng Desmodium styracifolium phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao với phát mảng photodiode phƣơng pháp quang phổ khối ion hóa song song Desmodium styracifolium, với C-flavone glycosides hợp chất hiệu dƣợc lý chính, loại thảo dƣợc phổ biến Trung Quốc đƣợc sử dụng để điều trị rối loạn tiểu tiện, sỏi tiết niệu, phù vàng da Để phát triển phƣơng pháp kiểm soát chất lƣợng D styracifolium cách kết hợp dấu vân tay sắc ký định lƣợng thành phần Việc phân tách đƣợc thực cột Ultimate XB-C-18 cách rửa giải gradient acetonitril axit formic 0,1% Các phân tích đƣợc xác định Tiến hành theo dõi rễ chồi Kim tiền thảo sau tuần, thu đƣợc kết nhƣ bảng 3.5 dƣới đây: Bảng 3.5 Ảnh hƣởng chất ĐHST đến khả rễ CT TN NAA (mg/l) Than hoạt tính (g/l) Tỉ lệ chồi rễ (%) Chiều dài rễ trung bình (cm) Số rễ trung bình/ chồi (rễ) R1 R2 R3 R4 R5 R6 0,1 0,3 0,5 0,1 0,3 0,5 0 0,1 0,1 0,1 39,53 50,57 53,87 61,11 95,66 69,94 0,0001 0,55 1,08 1,02 2,60 3,41 3,22 0,0001 1,33 5,33 3,67 5,67 8,33 6,67 0,0001 Sig 8.33 6.67 5.67 5.33 3.67 3.41 3.22 2.6 1.33 1.08 0.55 1.02 chiều dài rễ số rễ/chồi Hình 3.7 Chiều dài rễ trung bình số rễ trung bình/chồi Kim tiền thảo cơng thức thí nghiệm Từ bảng 3.5 ta thấy, cơng thức R1 có bổ sung 0,1 mg/l NAA số rễ hầu nhƣ khơng rễ, trung bình 1,33 rễ/ chồi Công thức R2 với 0,3 mg/l NAA cho khả rễ tốt, chiều dài rễ trung bình 1,08 cm số rễ trung bình/chồi 5,33 rễ/chồi Nhận thấy rễ công thức R3, cho tăng hàm lƣợng NAA lên 0,5 mg/l rễ lại ngắn so với cơng thức R2 (chiều dài rễ TB/chồi 1,02 cm số rễ/chồi 3,67) Từ cho thấy khơng phải bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng với hàm lƣợng cao rễ nhiều hay chiều dài rễ tăng, cần điều chỉnh chất điều hòa sinh trƣởng với hàm lƣợng thích hợp kích thích chồi rễ q trình rễ khơng bị ức chế 22 Ở công thức R4, R5 R6 bổ sung thêm than hoạt tính với hàm lƣợng 0,1 g/l rễ nhiều hơn, rễ trắng khỏe phát triển mạnh Điều chứng tỏ, Kim tiền thảo thích hợp với mơi trƣờng rễ có bổ sung than hoạt tính Từ đó, ta thấy mơi trƣờng thích hợp để rễ chồi Kim tiền thảo công thức R5 (MS + 0,3 mg/l NAA + 0,1 g/l than hoạt tính + 20 g/l saccharose + g/l agar) với số rễ trung bình/chồi 8,33 chiều dài rễ tb/chồi 3,41 cm Hình 3.8 Chồi Kim tiền thảo rễ sau tuần nuôi cấy công thức mơi trƣờng R1, R2, R3, R6 23 Hình 3.9 Chồi Kim tiền thảo rễ tốt công thức môi trƣờng R5 3.6 Ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trƣởng Kim tiền thảo vƣờn ƣơm Cây in vitro đƣợc nuôi cấy điều kiện môi trƣờng dinh dƣỡng đầy đủ, ánh sáng nhân tạo điều kiện vơ trùng Vì thế, in vitro hồn chỉnh, đạt tiêu chuẩn có chiều cao khoảng 3-3,5 cm đƣợc đƣa nhà lƣới để huấn luyện cho thích nghi dần với điều kiện mơi trƣờng bên ngồi Sau huấn luyện, đủ tiêu chuẩn đƣợc rửa thạch trồng vào túi bầu có thành phần ruột bầu khác Sau trồng tuần, thu đƣợc kết nhƣ bảng 3.6 dƣới đây: B n ả g Ả n h n g ủ ca th n p h n ầ u rộ tb ầ đ n ế khả n ă g ố sủ ca â yco n CT TN Thành phần giá thể ruột bầu Tỷ lệ sống (%) Chiều cao TB (cm) RB1 Đất tầng B 15,03 3,04 RB2 25% cát vàng + 75% đất 18,07 3,49 RB3 50% cát vàng + 50% đất 81,93 5,65 RB4 75% cát vàng +25% đất 52,69 4,19 RB5 100% cát vàng 16,34 3,37 Sig 0,0001 24 Chất lƣợng Cây phát triển kém, vàng Cây phát triển kém, vàng Cây phát triển khỏe mạnh, xanh tốt Cây phát triển chậm, xanh tốt Cây phát triển kém, vàng 90 81.93 80 70 60 52.69 50 40 30 20 10 18.07 15.03 3.04 16.34 5.65 3.49 4.19 3.37 Tỷ lệ sống (%) Chiều cao TB (cm) Hình 3.10 Tỉ lệ sống chiều cao trung bình Kim tiền thảo cơng thức thí nghiệm Từ bảng 3.6, ta thấy công thức RB3 với 50% cát vàng + 50% đất tầng B cho tỉ lệ sống cao đạt 81,93% Các công thức RB1, RB2, RB5 có tỷ lệ sống thấp Từ đó, thấy rằng, thay đổi tỉ lệ phối trộn thành phần ruột bầu tỷ lệ sống thay đổi Nhƣ vậy, thành phần ruột bầu thích hợp để trồng Kim tiền thảo 50% cát vàng + 50% đất tầng B cho tỷ lệ sống đạt 81,93%, với chiều cao trung bình 5,65 cm, phát triển khỏe, xanh tốt Hình 3.11 Cây Kim tiền thảo đƣợc trồng công thức RB3 trƣớc sau tuần trồng 25 PHẦN KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết thu đƣợc trình nghiên cứu, đƣa số kết luận nhƣ sau:  Đối với hạt Kim tiền thảo, sử dụng công thức khử trùng: cồn 70% phút, Javen 8% phút cho tỷ lệ mẫu 87,12% khả hạt nảy mầm cao (59,11%)  Môi trƣờng MS + mg/l BAP + 0,3 mg/l Kinetin + 0,1 mg/l NAA + 30 g/l saccharose + g/l agar có hệ số nhân chồi cao 4,37 chồi; tỉ lệ chồi hữu hiệu cao đạt 78,89%  Môi trƣờng MS + 0,3 mg/l NAA + 0,1 g/l than hoạt tính + 20 g/l saccharose + g/l agar môi trƣờng phù hợp để rễ chồi Kim tiền thảo với tỉ lệ chồi rễ 95,66%, số rễ TB/chồi 8,33 chiều dài rễ TB/chồi 3,41 cm  Thành phần ruột bầu thích hợp cho Kim tiền thảo phát triển tốt 50% cát vàng + 50% đất tầng B với tỷ lệ sống đạt 81,93%, chiều cao TB 5,65 cm, phát triển khỏe mạnh, xanh tốt 4.2 Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên chƣa thể nghiên cứu đánh giá ảnh hƣởng chế độ tƣới nƣớc, chế độ chiếu sáng chế độ bón phân đến khả sinh trƣởng phát triển ngồi vƣờm ƣơm Vì vậy, kiến nghị cần tiếp tục nghiên cứu thêm nội dung để bổ sung vào quy trình nghiên cứu 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt Võ Văn Chi (1997) Từ điển thuốc Việt Nam NXB Y học, TP.Hồ Chí Minh Nghiêm Thị Hƣơng (2009) Nghiên cứu thành phần hố học có hàn the (desmodium heterophyllum) họ cánh bướm (papilionaceac) Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng đại học Thái nguyên Đỗ Tất Lợi (1999) Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB Y học, Hà Nội Đoàn Thị Nhu (2013) Kim tiền thảo điều trị sỏi niệu, sỏi mật, viêm gan, viêm thận Báo Tiền Phong, Tp Hồ Chí Minh Nguyễn Minh Ngọc (2013), Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học mũi mác (Desmodium triquetrum, họ đậu (fabaceae) mọc hoang Bắc Kạn Luận văn thạc sĩ dƣợc học, Trƣờng đại học dƣợc Hà Nội Tài liệu tiếng anh Preeti S, Deo B, Tiwari S K (2013) High frequency in vitro multiplication of an endangered medicinal plant Desmodium gangeticum L (DC) Research journal of biotechnology, 8(5): 3-10 Sun X, Tang X, Yang Q (2018) An effective quantitative fingerprint method for evaluating the quality consistency of Desmodium styracifolium Pharmazie, 73(10): 579-584 Thandar S, Tun O M (2015) In vitro micropropagation of desmodium triquetrum DC., Myanmar medicinal plan International Journal of Technical Research and Applications e-ISSN, 2320-8163, pp 133-138 Vasantha M.M, Shivanna K, Manchanahally B (2005) Callus mediated regeneration of Desmodium oojeinense Roxb, Phytomorphology An International Journal of Plant Morphology, 55(3): 171-177 10 Xie H, Li J, Gao H (2018) Total flavone of Desmodium styracifolium relieved apoptosis and autophagy of COM-induced HK-2 cells by regulating KIM-1 via p38/MAPK pathway Mol Cell Biochem, 442(1-2):169-175 11 Zhou C, Luo J.G, Kong L.Y (2012) Quality evaluation of Desmodium styracifolium using high-performance liquid chromatography with photodiode array detection and electrospray ionisation tandem mass spectrometry Phytochem Anal, 23(3): 240-7 12 Zhou J, Jin J, Li X, Zhao Z, Zhang L, Wang Q, Li J, Zhang Q, Xiang S (2018) Total flavonoids of Desmodium styracifolium attenuates the formation of hydroxyL-proline-induced calcium oxalate urolithiasis in rats Urolithiasis, 46(3): 231-241 Tài liệu web 13 https://amp.thaythuoccuaban.com/vithuoc/Kimtienthao.htm 14 https://caythuocquythiennhien.com/kim-tien-thao 15 https://thaoduocquy.net/products/kim-tien-thao 16 http://thaoduocquyhcm.com/cay-thuoc-vn/6647-ba-che.html 17 http://thuocbac.edu.vn/tim-hieu-cong-dung-chua-benh-cua-cay-thoc-lep/ 18 https://patents.google.com/patent/CA2931528A1/en 19.http://ydvn.net/contents/view/2525.cay-han-the-desmodium heterophyllum.html 20 http://ydvn.net/contents/view/2878.cay-mui-mac-tadehagi-triquetrum.html PHỤ BIỂU Phụ biểu 1: Kết kiểm tra tỉ lệ mẫu hạt Kim tiền thảo công thức khử trùng khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOMAUSACH Missing Percent 277 N 100,0% Total Percent N 0,0% Percent 277 CT * SOMAUSACH Crosstabulation SOMAUSACH CT1 CT CT2 CT3 Total Total ,00 1,00 Count 38 55 93 % within CT 40,9% 59,1% 100,0% Count 12 81 93 % within CT 12,9% 87,1% 100,0% Count 83 91 % within CT Count 8,8% 58 91,2% 219 100,0% 277 % within CT 20,9% 79,1% 100,0% Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases df a 34,034 32,778 28,626 Asymp Sig (2sided) 2 277 a cells (0,0%) have expected count less than The minimum expected count is 19,05 ,000 ,000 ,000 100,0% Phụ biểu 2: Kết kiểm tra tỉ lệ nảy mầm hạt Kim tiền thảo công thức khử trùng khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOHATNAYMAM Missing Percent 277 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 277 CT * SOHATNAYMAM Crosstabulation SOHATNAYMAM ,00 1,00 CT 2,00 3,00 Total Count % within CT Count % within CT Count Total 1,00 53 40 93 57,0% 43,0% 100,0% 38 55 93 40,9% 59,1% 100,0% 57 34 91 % within CT Count 62,6% 148 37,4% 129 100,0% 277 % within CT 53,4% 46,6% 100,0% 100,0% Phụ biều 3: Kết kiểm tra tỉ lệ chồi hữu hiệu Kim tiền thảo sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * CHOIHUUHIEU Missing Percent 1482 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 1482 CT * CHOIHUUHIEU Crosstabulation CHOIHUUHIEU ,00 NN1 NN2 NN3 CT NN4 NN5 NN6 ĐC Total Count % within CT 314 398 21,1% 78,9% 100,0% 104 237 341 30,5% 69,5% 100,0% 75 157 232 32,3% 67,7% 100,0% 80 102 182 44,0% 56,0% 100,0% Count % within CT Count % within CT 1,00 84 Count % within CT Total Count 86 46 132 65,2% 34,8% 100,0% 72 29 101 71,3% 28,7% 100,0% 92 96 % within CT Count 95,8% 593 4,2% 889 100,0% 1482 % within CT 40,0% 60,0% 100,0% % within CT Count % within CT Count Chi-Square Tests Value df Asymp Sig (2sided) Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases a 279,557 298,614 6 ,000 ,000 261,770 ,000 1482 a cells (0,0%) have expected count less than The minimum expected count is 38,41 100,0% Phụ biểu 4: Phân tích phƣơng sai số nhân tố ảnh hƣởng tổ hợp chất ĐHST đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo ANOVA SOCHOI TB/MAU Sum of Squares Between Groups Mean Square 29,659 4,943 ,165 14 ,012 29,823 20 Within Groups Total df F Sig 420,437 ,000 Phụ biểu 5: Kết kiểm tra tỉ lệ chồi hữu hiệu Kim tiền thảo sử dụng hàm lƣợng chất hữu bổ sung khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * CHOIHUUHIEU Missing Percent 1583 N 100,0% Total Percent N 0,0% 1583 CT * CHOIHUUHIEU Crosstabulation CHOIHUUHIEU ,00 NC1 CT NC2 NC3 Total Count % within CT 1,00 246 440 686 35,9% 64,1% 100,0% 221 341 562 39,3% 60,7% 100,0% Count % within CT Total Count 158 177 335 % within CT Count 47,2% 625 52,8% 958 100,0% 1583 % within CT 39,5% 60,5% 100,0% Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases df a 12,047 11,942 11,346 Asymp Sig (2sided) 2 1583 a cells (0,0%) have expected count less than The minimum expected count is 132,26 ,002 ,003 ,001 Percent 100,0% Phụ biểu 6: Phân tích phƣơng sai số nhân tố ảnh hƣởng hàm lƣợng chất hữu bổ sung đến khả nhân nhanh chồi Kim tiền thảo ANOVA SOCHOI TB/MAU Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 21,310 10,655 ,506 ,084 21,817 F Sig 126,245 ,000 Phụ biều 7: Kết kiểm tra tỉ lệ rễ Kim tiền thảo sử dụng chất ĐHST nồng độ khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOCAYRARE Missing Percent 548 N 100,0% Total Percent 0,0% N Percent 548 CT * SOCAYRARE Crosstabulation SOCAYRARE ,00 R1 R2 R3 CT R4 R5 R6 Total Count % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT Count % within CT Total 1,00 55 36 91 60,4% 39,6% 100,0% 45 46 91 49,5% 50,5% 100,0% 42 49 91 46,2% 53,8% 100,0% 35 55 90 38,9% 61,1% 100,0% 88 92 4,3% 95,7% 100,0% 28 65 93 30,1% 69,9% 100,0% 209 339 548 38,1% 61,9% 100,0% 100,0% Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association df Asymp Sig (2sided) a 73,684 87,660 47,833 N of Valid Cases 5 ,000 ,000 ,000 548 a cells (0,0%) have expected count less than The minimum expected count is 34,32 Test of Homogeneity of Variances CHIEUDAIRE Levene Statistic df1 4,365 df2 Sig 12 ,017 Phụ biều 8: Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố chiều dài rễ Kim tiền thảo sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác ANOVA CHIEUDAIRE Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 23,512 4,702 ,020 12 ,002 23,533 17 F 2775,242 Sig ,000 Phụ biểu 9: Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố số rễ trung bình/ chồi Kim tiền thảo sử dụng tổ hợp chất ĐHST nồng độ khác ANOVA SORE Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 62,444 12,489 7,333 12 ,611 69,778 17 F 20,436 Sig ,000 Phụ biều 10: Kết kiểm tra tỉ lệ sống Kim tiền thảo sử dụng thành phần ruột bầu khác Case Processing Summary Cases Valid N CT * SOCAYSONG Missing Percent 466 N Total Percent 100,0% N 0,0% Percent 466 CT * SOCAYSONG Crosstabulation SOCAYSONG ,00 RB1 RB2 CT RB3 RB4 RB5 Total Count % within CT 14 93 84,9% 15,1% 100,0% 77 17 94 81,9% 18,1% 100,0% 17 77 94 18,1% 81,9% 100,0% 44 49 93 47,3% 52,7% 100,0% Count % within CT Count % within CT 1,00 79 Count % within CT Total Count 77 15 92 % within CT Count 83,7% 294 16,3% 172 100,0% 466 % within CT 63,1% 36,9% 100,0% Chi-Square Tests Value Pearson Chi-Square Likelihood Ratio Linear-by-Linear Association N of Valid Cases df a 141,861 146,695 5,698 Asymp Sig (2sided) 4 466 a cells (0,0%) have expected count less than The minimum expected count is 33,96 ,000 ,000 ,017 100,0% Phụ biểu 11: Kết phân tích phƣơng sai số nhân tố chiều dài rễ Kim tiền thảo sử thành phần ruột bầu khác ANOVA CHIEUDAIRE Sum of Squares Between Groups Within Groups Total df Mean Square 23,512 4,702 ,020 12 ,002 23,533 17 F 2775,242 Sig ,000 ... chọn thực đề tài: Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy in vitro Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium (Osb. ) Merr. ) PHẦN TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung Kim tiền thảo 1.1.1 Nguồn gốc... cứu nhân giống Kim tiền thảo kỹ thuật nuôi cấy in vitro Do đó, việc tiến hành nghiên cứu ni cấy in vitro kim tiền thảo hƣớng nghiên cứu đầy triển vọng nhằm tái sinh, bảo tồn phát triển nguồn... đến khả rễ in vitro;  Nghiên cứu ảnh hƣởng thành phần ruột bầu đến khả sống sinh trƣởng Kim tiền thảo vƣờn ƣơm 2.3 Đối tƣợng nghiên cứu  Đối tƣợng nghiên cứu: Kim tiền thảo (Desmodium styracifolium)