Nghiên cứu thành phần hóa học và thăm dò hoạt tính ức chế α glucosidase lá chân chim không cuống quả họ nhân sâm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ -GLUCOSIDASE LÁ CHÂN CHIM KHÔNG CUỐNG QUẢ HỌ NHÂN SÂM Mã số: CS 2015.19.19 Cơ quan chủ trì: Chủ nhiệm đề tài: Lê Thị Việt Hoa TP Hồ Chí Minh, tháng 10 năm 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP TRƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ THĂM DỊ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ -GLUCOSIDASE LÁ CHÂN CHIM KHÔNG CUỐNG QUẢ HỌ NHÂN SÂM Mã số: CS 2015.19.19 Xác nhận quan chủ trì đề tài Chủ nhiệm đề tài Lê Thị Việt Hoa TP Hồ Chí Minh, tháng 10 năm 2016 DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA THỰC HIỆN ĐỀ TÀI VÀ CÁC ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH  Các thành viên tham gia thực đề tài: Lê Thị Việt Hoa_Chủ nhiệm đề tài Nguyễn Tấn Phát_Viện Cơng nghệ Hóa học  Các đơn vị phối hợp chính: Khoa Hóa học, Trường ĐHSP Tp HCM; Viện Cơng nghệ Hóa học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐH SƢ PHẠM TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 09 năm 2016 THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thơng tin chung: * Tên đề tài: “Nghi n cứu th nh hần hóa học v th h ạt tính ức chế -glucosidase Chân chim không cuống họ Nhân sâm” * Mã số đề tài: CS.2015.19.19 * Chủ nhiệm đề tài: Lê Thị Việt Hoa * Cơ quan chủ trì: Khoa H trƣờng Đại học Sƣ hạm Tp Hồ Chí Minh * Thời gian thực hiện: 09/2015 đến 09/2016 Mục tiêu củ đề tài: “Tách chiết, phân lập, xác định cấu trúc, thử hoạt tính ức chế -glucosidase cao chất có cao methanol Chân chim không cuống họ Nhân sâm” Tính sáng tạo: Đã phân lập chất có chân chim khơng cuống quả, xác định cấu trúc thử hoạt tính ức chế -glucosidase cao chất phân lập Kết nghiên cứu: - Biện luận cấu trúc hợp chất cô lập từ cao methanol Chân chim không cuống - Kết thử hoạt tính ức chế enzyme -glucosidase cho cao ethanol, nhexane, ethyl acetate, methanol, hợp chất phân lập Sản phẩm: – báo khoa học; Hiệu hƣơng thức chuyển giao kết qủa nghiên cứu khả n ng ụng: Kết báo khoa học sử dụng cho cơng trình nghiên cứu khoa học khoa Hóa Cơ qu n chủ trì (Kí tên) Chủ nhiệ đề tài Lê Thị Việt Hoa THE INFORMATION OF RESEARCH RESULTS General information: * Project title: “Stu y f structure c nents and prove the -glucosidase inhibitor activities from the leaves of Schefflera sessiliflora De P V” * Code number: CS.2015.19.19 * Coordinator: Le Thi Viet Hoa * Implementing institution: Ho Chi Minh City Pedagogical University, Chemical faculty * Duration: From September 2015 to September 2016 Objective: “Isolation, structure elucidation of new components from the methanol extraction, and prove the -glucosidase inhibitor activities from the leaves of Schefflera sessiliflora De P V” Creativeness and innovativeness: - Isolated components from the methanol extraction - Test the -glucosidase inhibitor activities on extractions and components Research results: - Report structure elucidation of five new compounds - Result of the -glucosidase inhibitor activities on ethanol, n-hexane, ethyl acetate, methanol extractions and some new components Products: - Scientific papers: Efficient, method of transferring research results and the ability to apply Research results will be used for the next research of Chemistry faculty Implementing institution Coordinator Le Thi Viet Hoa MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC CÁC BẢNG iii DANH MỤC SƠ ĐỒ iii LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Phân loại khoa học 1.2 Mô tả thực vật 1.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học 1.4 Các nghiên cứu tác dụng dược lý CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Hóa chất, dụng cụ thiết bị 2.1.1 Hóa chất 2.1.2 Dụng cụ thiết bị 2.2 Nguyên liệu 2.3 Chiết tách phân lập 2.3.1 Quá trình trích ly cao chiết 2.3.2 Quá trình sắc ký phân lập hợp chất 2.4 Th dị hoạt tính ức chế -glucosidase 13 2.4.1 Phương pháp thử hoạt tính ức chế -glucosidase 13 2.4.2 Q trình thử hoạt tính ức chế -glucosidase 13 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 Nhận danh cấu trúc chất phân lập 14 3.2 Kết khảo sát hoạt tính ức chế enzyme -glucosidase 14 KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC BÀI BÁO Trang ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT H-NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance 13 C-NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance brs : broad (NMR) CC : Column chromatography CHCl3 : Chloroform C-M : Chloroform-Methanol COSY : Correlation SpectroscopY d : doublet dd : doublet of doublet DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer E-M : Ethyl acetate – Methanol EtOH : Ethanol EtOAc : Ethyl acetate HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Coherence HR-ESI-MS : High Resolution Electrospray Ionisation Mass Spectrometry HSQC : Heteronuclear Single Quantum Correlation H2SO4 : Acid sulfuric IR : Infrared IC50 : Inhibitory Concentration 50% J L LD50 m MeOH mp ppm q Rf s t TLC UV  L m : Coupling constant (hằng số ghép spin) : lít : Lethal Dose 50% : multiplet (NMR) : Methanol : melting point : par per million : quartet : Retention factor : singlet (NMR) : triplet (NMR) : Thin Layer Chromatography : Ultraviolet : chemical shift : microliter : micrometer Trang iii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Kết cột thường phân đoạn V Bảng 2.2: Kết cột thường phân đoạn V.2 Bảng 2.3: Kết cột thường phân đoạn IV Bảng 2.4: Kết cột thường phân đoạn IV.1 Bảng 2.5: Kết cột thường phân đoạn IV.2 Bảng 3.1: Dữ liệu phổ 13C, 1H–NMR, HMBC SSL01 so sánh với tài liệu Bảng 3.2: Dữ liệu phổ 13C, 1H–NMR, HMBC SSL02 so sánh với tài liệu Bảng 3.3: Dữ liệu phổ 13C–NMR, HMBC SSL03 so sánh với tài liệu Bảng 3.4: Dữ liệu phổ 13C, 1H–NMR, HMBC SSL04 so sánh với tài liệu Bảng 3.5: Dữ liệu phổ 13C, 1H–NMR, COSY, HMBC SSL05 so sánh với tài liệu Bảng 3.6: Kết phần trăm ức chế IC50 cao so với acarbose Bảng 3.7: Kết phần trăm ức chế IC50 chất so với acarbose DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Sơ đồ 2.1: Sơ đồ trích ly loại cao chiết Sơ đồ 2.2: Sơ đồ rửa giải cao Methanol Sơ đồ 2.3: Quy trình phân lập chất từ phân đoạn V Sơ đồ 2.4: Quy trình phân lập chất từ phân đoạn IV Trang iv LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI Việt Nam nước nhiệt đới gió mùa nên có nguồn thực vật vô đa dạng phong phú Từ xa xưa, ông cha ta biết sử dụng nhiều cỏ phận để chữa bệnh cách hiệu quả, việc sử dụng dựa vào kinh nghiệm dân gian Ngày với phát triển khoa học-kỹ thuật nói chung ngành HóaThực vật nói riêng địi hỏi khơng sử dụng hiệu mà cịn phải tìm hiểu thành phần hóa học thuốc để tìm hợp chất có hoạt tính sinh học cao tìm hoạt tính giúp nâng cao giá trị thuốc Việt Nam Xu hướng nhà khoa học không quan tâm tới thuốc khả chữa bệnh mà cịn có khả bồi bổ thể, tăng lực, ngăn lão hóa tế bào, phịng chống ung thư họ Nhân sâm (Araliaceae) tiêu biểu sâm Triều Tiên (Panax ginseng C.A Mey.), sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis Ha et Grushv.), sâm nam (Schefflera octophylla (Lour.) Harms)… Năm 2004, nhóm tác giả Trần Cơng Luận phát loài thuộc họ Nhân sâm chân chim không cuống đặt tên Schefflera sessiliflora De P V Với mong muốn tìm kiếm hoạt chất quý hoạt chất có hoạt tính sinh học cao làm sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu phát chất có hoạt tính, chúng tơi tiến hành “Nghiên cứu thành phần hóa học thăm dị hoạt tính ức chế -glucosidase cao methanol chân chim không cuống thuộc họ Nhân sâm” Qua đó, đưa khuyến cáo chung sử dụng loại dược liệu liều lượng dùng, cách dùng… góp phần nâng cao giá trị loại dược liệu Việt Nam Trang PHỤ LỤC 1: PHỔ CỦA SSL01 Phụ lục 1.1: Phổ HR-ESI-MS SSL01 Phụ lục 1.2: Phổ 13C-NMR SSL01 29 30 19 12 25 16 10 15 27 HO 24 12 28 O 14 13 21 22 17 26 28 18 13 11 20 23 OH Phụ lục 1.3: Phổ DEPT90 DEPT135 SSL01 Phụ lục 1.4: Phổ 1H-NMR giãn rộng SSL01 29 30 19 12 25 21 22 28 O 17 26 14 16 12 18 13 11 20 10 15 OH 27 HO 24 23 18 Phụ lục 1.5: Phổ HSQC SSL01 18 12 29 30 19 12 21 18 22 13 11 25 20 28 O 17 26 14 16 10 15 OH 27 HO 24 12 23 18 Phụ lục 1.6: Phổ HMBC SSL01 28 13 12 12 18 PHỤ LỤC 2: PHỔ CỦA SSL02 Phụ lục 2.1: Phổ HR-ESI-MS SSL02 Phụ lục 2.2: Phổ 13C-NMR SSL02 30 19 6' 4' 16 28 13 12 2' OH 1' 24 1’ 15 27 O 3' 10 O 5' HO HO GlcA 14 HOOC 28 O 17 26 21 22 13 11 25 20 18 12 29 23 OH Phụ lục 2.3: Phổ DEPT SSL02 Phụ lục 2.4: Phổ 1H-NMR giãn rộng SSL02 30 19 HOOC 4' 12 HO 16 2' OH 1' OH 15 27 O 3' 28 O 17 14 10 O 5' HO 1’ GlcA 21 22 13 26 6' 20 18 12 11 25 29 24 23 18 Phụ lục 2.5: Phổ HSQC SSL02 12 1’ 18 30 19 6' 4' 16 2' OH 1' 15 OH 27 O 3' 14 10 O 5' HO HO GlcA 28 O 17 26 21 22 13 HOOC 20 18 12 11 25 29 24 12 23 1’ 18 Phụ lục 2.6: Phổ HMBC SSL02 1’ 1’ 2’ PHỤ LỤC 3: PHỔ CỦA SSL03 Phụ lục 3.1: Phổ HR-ESI-MS SSL03 Phụ lục 3.2: Phổ 13C-NMR SSL03 29 20 19 12 25 4' HO 16 O 2' OH 1' O 15 27 O 3' 14 5' 22 24 23 HO 6'' 4'' 5'' HO HO 3'' O 2'' 1'' OH 28 1’ 6’ 13 12 1’’ 28 O 17 26 10 6' HO 18 HOOC 21 13 11 30 Phụ lục 3.3: Phổ DEPT SSL03 29 20 19 12 25 HOOC 4' HO 16 10 O 2' OH 1' 24 23 HO 6'' 4'' 5'' HO HO 1’’ 12 O 15 27 O 3' 14 5' 22 28 O 17 6' HO 18 26 21 13 11 Phụ lục 3.4: Phổ 1H-NMR giãn rộng SSL03 30 3'' O 2'' 1'' OH 1’ 18 Phụ lục 3.5: Phổ HSQC SSL03 1’ 18 1’’ 1’’ 1’ 18 Phụ lục 3.6: Phổ HMBC SSL03 28 6’ 29 20 19 12 16 HO O O 3' 5' HO 14 10 6' 4' 2' OH 1' 22 28 O 17 26 HOOC 21 18 13 11 25 30 24 O 27 1’’ 6'' 1’ 15 23 HO 4'' 5'' HO HO 3'' O 2'' 1'' OH PHỤ LỤC 4: PHỔ CỦA SSL04 Phụ lục 4.1: Phổ HR-ESI-MS SSL04 Phụ lục 4.2: Phổ 13C-NMR giãn rộng SSL04 29 30 20 19 12 7' 6' 4' HO 28 1’ 16 O 2' OH 1' O 15 27 O 3' 14 10 GlcA 5' HO 28 O 17 26 H3COOC 22 13 11 25 21 18 24 23 13 6’ HO 6'' 4'' 1’’ HO HO Glc 5'' 3'' O 2'' 1'' OH Phụ lục 4.3: Phổ DEPT SSL04 Phụ lục 4.4: Phổ 1H-NMR giãn rộng SSL04 1’’ 12 7’ 1’ 18 Phụ lục 4.5: Phổ HSQC SSL04 1’ 18 7’ 1’’ 29 30 20 19 12 H3COOC 6' 4' 16 3' O 2' OH 1' O 15 27 O HO 14 10 GlcA 5' HO 28 O 17 26 7' 22 13 11 25 21 18 24 1’’ 23 1’ HO 6'' 4'' HO HO Glc 5'' 3'' O 2'' 1'' OH 7’ 18 Phụ lục 4.6: Phổ HMBC SSL04 28 6’ 1’’ 1’ 7’ PHỤ LỤC 5: PHỔ CỦA SSL05 Phụ lục 5.1: Phổ HR-ESI-MS SSL05 Phụ lục 5.2: Phổ 13C-NMR SSL05 29 30 19 12 11 25 H3COOC 4' 16 HO O 5'' HO HO 3'' 2' 3' O 1' O 15 27 O 4'' 5' 22 28 O 17 14 10 6' HO 24 23 O 2'' 1'' HO OH 6''' 4''' 5''' HO HO 3''' O 2''' 1''' OH 28 6’ 21 18 13 26 7' 20 13 12 Phụ lục 5.3: Phổ DEPT SSL05 Phụ lục 5.4: Phổ 1H-NMR giãn rộng SSL05 29 30 19 12 11 25 7' 1’’ HO HO 3'' O 1' 24 23 O 2'' 1'' OH 12 O 2' 3' 5'' HO 6''' 4''' 1’ O 15 27 O HO 4'' 1’’’ 16 5' HO 22 28 O 14 10 6' 4' 21 17 26 H3COOC 20 18 13 5''' HO HO 3''' O 2''' 1''' OH Phụ lục 5.5: Phổ HSQC SSL05 1’’ 1’ 12 1’’’ 1’’’ 12 1’’ 1’ 29 30 19 12 11 25 H3COOC 16 O 4'' 5'' HO HO 3'' 2' 3' O 1' O 15 27 O 5' HO HO 22 28 O 14 10 6' 4' 21 17 26 7' 20 18 13 24 23 O 2'' 1'' OH HO 6''' 4''' 5''' HO HO 3''' O 2''' 1''' OH [34] Phụ lục 5.6: Phổ HMBC SSL05 28 6’ 1’’ 1’’’ 1’ 1’’’ 7’ 2’ ... kiếm hoạt chất q hoạt chất có hoạt tính sinh học cao làm sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu phát chất có hoạt tính, chúng tơi tiến hành ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học thăm dị hoạt tính ức chế. .. methanol Chân chim khơng cuống họ Nhân sâm? ?? Tính sáng tạo: Đã phân lập chất có chân chim không cuống quả, xác định cấu trúc thử hoạt tính ức chế  -glucosidase cao chất phân lập Kết nghiên cứu: -... 09 năm 2016 THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thông tin chung: * Tên đề tài: “Nghi n cứu th nh hần hóa học v th h ạt tính ức chế  -glucosidase Chân chim không cuống họ Nhân sâm? ?? * Mã số đề tài: CS.2015.19.19