Nghiên cứu thành phần hóa học cây ruột gà có khớp borreria articularis họ cà phê rubiacea

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ C P TRƯỜNG ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY RUỘT GÀ CÓ KHỚP – BORRERIA ARTICULARIS, HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEA) MÃ SỐ: CS.2015.19.26 Cơ quan chủ trì: Chủ nhiệm đề tài: Khoa Hoá học, Trường Đại học Sư Phạm TP.HCM TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 10/2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ C P TRƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY RUỘT GÀ CÓ KHỚP – BORRERIA ARTICULARIS, HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEA) MÃ SỐ: CS.2015.19.26 Xác nhận quan chủ trì (ký, họ tên) Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – 10/2016 DANH SÁCH CÁC THÀNH VIÊN THAM GIA THỰC HIỆN ĐỀ TÀI VÀ CÁC ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH  Các thành viên tham gia thực đề tài: TS Nguyễn Thị Ánh Tuyết - Chủ nhiệm đề tài; Đặng Công Khánh, học viên cao học GS.TS Nguyễn Kim Phi Phụng (tư vấn khoa học)  Các đơn vị phối hợp chính: Trường ĐHKHTN Tp HCM; Viện Cơng nghệ hóa học Việt Nam MỤC LỤC Trang Danh mục chữ viết tắt…………………………………………………… i Danh mục sơ đồ……………………………………………………………… i Danh mục hình ảnh…………………………………………………………… i Danh mục bảng biểu…………………………………………………………… ii Mở đầu………………………………………………………………………… Chương TỔNG QUAN 1.1.Đặc điểm thực vật ………………………………………………… 1.2 Các nghiên cứu dược tính……………………………………… 1.3 Các nghiên cứu thành phần hoá học…………………………… Chương THỰC NGHIỆM 2.1 Hoá chất, thiết bị, phương pháp…………………………… ……… 2.2 Nguyên liệu……………………………………………… ……… 2.3 Điều chế loại cao…………………………………… ………… 2.4 Cô lập hợp chất hữu cao ethyl acetate ……… …… 2.5 Cô lập hợp chất hữu cao ethanol lại ……… 3.1 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-EA1……………………… 3.2 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-EA2 ……………………… 10 3.3 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-MeH1…………………… 12 3.4 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-MeH2…………………… 15 3.5 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-MeH3…………………… 17 3.6 Khảo sát cấu trúc hợp chất BOR-MeH4……………………… 19 3.7 Số liệu NMR iridoid cô lập………………………… 21 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT LUẬN…………………………………………………………… 24 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………… 26 PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT B Borreria br broad, rộng COSY COrrelation SpectroscopY CTPT Công Thức Phân Tử d doublet, mũi đôi dd Doublet of doublet ddd Doublet of doublet of doublet DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO DiMethyl SulfOxide HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation HR–ESI–MS High Resolution ElectroSpray Ionization Mass Spectroscopy HSQC Heteronuclear Singlet Quantum Correlation J Hằng số ghép cặp m multiplet, mũi đa M Khối lượng phân tử NOESY Nuclear Overhauser effect spectroscopy NMR Nuclear Magnetic Resonance s singlet, mũi đơn SKC Sắc Ký Cột SKLM Sắc Ký Lớp Mỏng t triplet, mũi ba UV Ultra Violet, tử ngoại ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ i DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế loại cao ………………………… Sơ đồ 2.2 Quy trình lập hợp chất từ cao etyl acetat cao ethanol lại………………………… .………………………… .…………… DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Ruột gà có khớp Borreria articularis ……………………………… Hình 3.1 Một số tương quan HMBC hợp chất BOR-EA1………………… Hình 3.2 Một số tương quan COSY, HMBC NOESY BOR-MeH2… Hình 3.3 Một số tương quan COSY HMBC BOR-MeH2 …………… Hình 3.4 Một số tương quan HMBC BOR-MeH3………………………… Hình 3.5 Một số tương quan HMBC BOR-MeH4………………………… Trang 14 16 18 20 DANH MỤC BẢNG BIỂU Trang Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR BOR-EA1 ……………………… Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR BOR-EA2 ………………………………… 11 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR BOR-MeH1 ………………………………… 14 Bảng 3.4 Dữ liệu phổ NMR BOR-MeH2 ………………………………… 17 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR BOR-MeH3 ………………………………… 19 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR BOR-MeH4 ………………………………… 21 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ 1H NMR hợp chất BOR-MeH1÷BOR-MeH4 (D2O) 22 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ 13C NMR hợp chất BOR-MeH1÷BOR-MeH4 (D2O) 23 Mẫu 1.11 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐH SƯ PHẠM TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Tp.HCM, ngày tháng năm 201 THƠNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thơng tin chung:  Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học Ruột gà có khớp, Borreria articularis, họ Cà phê (Rubiaceae)  Chủ nhiệm: Nguyễn Thị Ánh Tuyết  Cơ quan chủ trì: Khoa Hóa, Đại học Sư Phạm TP.HCM  Thời gian thực hiện: tháng 9-2015 đến tháng 9-2016 Mục tiêu: Khảo sát thành phần hóa học Ruột gà có khớp Borreria articularis, họ Cà phê (Rubiacea), thu hái Phan Thiết Tính sáng tạo: Trong số hợp chất cô lập năm hợp chất 2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone, asperulosidic acid, scandoside methyl ester, 6-O-methylscandoside methyl ester 6-Omethylasperulosidic acid methyl ester lần biết đến có Ruột gà có khớp Borreria articularis Bên cạnh hai hợp chất 6-O-methylscandoside methyl ester 6-Omethylasperulosidic acid methyl ester lần cô lập chi Borreria Kết nghiên cứu: Bằng phương pháp chiết xuất cô lập chất hữu cơ, từ cao ethanol thô cô lập sáu hợp chất, bao gồm hợp chất antraquinone, hợp chất triterpenoid bốn hợp chất iridoid Bằng phương pháp phổ nghiệm (HR–ESI–MS, 1D 2D–NMR) so sánh với tài liệu tham khảo, sáu hợp chất nhận danh là: 2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone, acid ursolic, asperulosidic acid, scandoside methyl ester, 6-O-methylscandoside methyl ester 6-Omethyldeacetylasperulosidic acid methyl ester Sản phẩm: Một phần kết nghiên cứu cơng bố Tạp chí Khoa học Công nghệ (Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam) Nguyen Thi Anh Tuyet, Dang Cong Khanh, Nguyen Kim Phi Phung (2014), Chemical constituents of Borreria articularis, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ , 52(5B), 454-459 Hiệu quả, phương thức chuyển giao kết nghiên cứu khả áp dụng: Kết nghiên cứu cơng bố Tạp chí Khoa học cơng nghệ tạp chí chun ngành có uy tín, nhằm cung cấp thơng tin thành phần hóa học Ruột gà có khớp nói riêng chi Borreria nói chung, giúp nhà nghiên cứu lĩnh vực có định hướng việc nghiên cứu hóa học chi Ngày tháng năm Xác nhận quan chủ trì (ký, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) Mẫu 1.12 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐH SƯ PHẠM TP.HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Tp.HCM, ngày tháng năm 2016 INFORMATION ON RESEARCH RESULTS General information:  Project title: Study on chemical constituents of Borreria articularis, family Rubiaceae  Code number: CS.2015.19.50  Coordinator: Nguyen Thi Anh Tuyet  Implementing institution: chemistry department, University of Pedagogy of HCM City  Duration: From September 2015 to September 2016 Objective(s): Study on chemical constituents of Borreria articularis collected in Phan Thiet provine Creativeness and innovativeness: Among isolated compounds, five compounds, 2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone, asperulosidic acid, scandoside methyl ester, 6-O-methylscandoside methyl ester and 6-Omethyldeacetylasperulosidic acid methyl ester were already present in other Borreria species but this was the first time they were found in B articularis Two compounds 6-O-methylscandoside methyl ester and 6-O-methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester were known for the first time in the genus Borreria Research results: From the crude ethanol extracts of Borreria articularis by using method of extraction in the isolation of organic compounds, we isolated six compounds including one antraquinone, one triterpenoid and four iridoids By using modern spectroscopic methods of analysis of organic compounds (HR-ESI-MS, 1D and 2D NMR) and comparison with those reported in the literature, the chemical structures of six compounds were eclucidated as 2-hydroxy-1-methoxyanthraquinone, ursolic acid, asperulosidic acid, scandoside methyl ester, 6-O-methylscandoside methyl ester and 6-Omethyldeacetylasperulosidic acid methyl ester Products: The research result was published on Journal of Science and Technology (Vietnam academy of Science and Technology): Nguyen Thi Anh Tuyet, Dang Cong Khanh, Nguyen Kim Phi Phung (2014), “Chemical constituents of Borreria articularis.”, Journal of Science and Technology , 52(5B), 454-459 Effects, transfer alternatives of reserach results and applicability: The result of this research was published on Journal of Science and Technology (Vietnam academy of Science and Technology) to share knowledge of Borreria genus for the researchers, who are studying on the same field Xác nhận quan chủ trì (ký, đóng dấu) Ngày tháng năm Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) MỞ ĐẦU Nghiên cứu hợp chất thiên nhiên đóng góp thành tựu quý báu cho ngành hoá học ngành sinh học y dược học Sự kết hợp chứng khoa học từ lĩnh vực nghiên cứu hóa học hợp chất thiên nhiên hoạt tính sinh học góp phần củng cố phát triển thuốc y học cổ truyền cách thuyết phục Việt Nam có vị trí địa lý thuộc vùng nhiệt đới nóng ẩm, điều kiện để phát triển hệ thực vật phong phú đa dạng Đây lý y học cổ truyền nước ta phát triển mạnh Chi Borreria thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) có khoảng 150 loài phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt Châu Mỹ, Châu Phi, Châu Âu Châu Á Các nghiên cứu trước cho thấy chiết xuất từ lồi thuộc chi Borreria có hoạt tính sinh học đa dạng kháng viêm, kháng khuẩn, chất chống oxy hóa chống loét, tiêu hóa [5] Cây Ruột gà có khớp (Borreria articularis) thuộc chi Borreria, họ Rubiaceae Trong dân gian, Ruột gà có khớp dung để trị sốt, đau mắt…và đặc biệt trị bệnh rọm Tuy nhiên nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học lồi nước giới cịn nên chúng tơi chọn Ruột gà có khớp (Borreria articularis) để khảo sát thành phần hóa học, qua góp phần giải thích làm sáng tỏ chế trị bệnh thuốc cổ truyền CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT Ruột gà có khớp, thuộc họ Cà phê (Rubiaceae) có tên khoa học Borreria articularis Ngồi ra, Ruột gà có khớp cịn có tên đồng nghĩa khác Spermacoce articularis [1] Hình 1.1 Ruột gà có khớp Borreria articularis Ruột gà có khớp cỏ nằm, dài 20-30 cm, thân vng, cạnh nhám Hoa có màu tím nhạt Cụm hoa xim có 2-6 hoa Lá dài 1-3 cm, cứng, nhám mặt bên, gân bên đôi, kèm có tơ nhọn Quả nang, cao 4-5mm, có lơng, chứa hạt đen Cây hoa hàng năm Cây ruột gà có khớp tìm thấy nhiều Ấn Độ, Sri Lanka, Đông Nam Á Trung Quốc Thường mọc ven lộ, đất đỏ, nơi nhiều cát, sỏi [1, 17] Ở nước ta, ruột gà có khớp mọc thành bụi tự nhiên, tìm thấy vùng nhiều cát, gần biển [1, 17] 1.2 C C NGHI N C U VỀ Ƣ C T NH  Dược tính theo y học cổ truyền Ở Việt Nam: cành ruột gà có khớp dùng để trị đau mắt, rễ dùng để giải khát, trị sốt [1] Ở Ấn Độ: dịch chiết sử dụng để điều trị bệnh trĩ sỏi mật Hạt dùng để trị tiêu chảy, kiết lỵ Ngoài ra, dùng để chữa số bệnh như: sốt rét, tiêu chảy số bệnh đường ruột, bệnh da, xuất huyết, sốt, sốt rét, nhiễm trùng bàng quang hô hấp, nhức đầu, viêm mắt bệnh nướu [5]  Một số nghiên cứu dược tính Năm 2004, Saha K cộng [9] cơng bố kết nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa ức chế tạo thành nitric oxide (NO) Kết cho thấy dịch Hợp chất cô lập từ loài B verticillata [5, 14], B laevis [6, 5] B latifolia [2, 5] 3.4 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA H P CHẤT BOR-MeH2 Hợp chất BOR-MeH2 (5.5 mg) thu từ phân đoạn Et72 cao Et có đặc điểm sau: - Hợp chất dạng gum màu vàng nhạt - Kết sắc ký với hệ dung môi giải ly ethyl acetate:methanol:nước 8:2:0.4, hình thuốc thử H2SO4 20%, nung nóng thu vết tròn màu xanh dương, Rf=0.4 - Phổ HR-ESI-MS (phụ lục 4a) cho mũi ion phân tử giả m/z =405.1396 [M+H]+ ứng với công thức C17H24O11 ([M+H]=405.1397) - Phổ 1H-NMR (D2O, phụ lục 4b), δH ppm 7.46 (1H,s, H-3), 5.80 (1H, s, H-7), 5.35 (1H, d, J=5.0, H-1), 4.55 (dd, J =1.5/1.5, H-6), 4.29 (d, J=15.5, H-10),4.21 (d, J=15.5, H-10), 3.17 (dd, J = 7.5/5.5, H-9), 3.04 (dd, J = 7.5/3.0, H-5) - Phổ 13C DEPT NMR (D2O, phụ lục 4c, 4d), δC ppm: 171.3 (C-11), 154.2 (=CH-, C3), 147.4 (=CC=, C-4), 97.7 (C-1); 81.6 (C-6); 60.7 (C-10); 47.0 (C-9); 43.7 (C-5) - Phổ COSY, HSQC, HM C (phụ lục 4e, 4f 4g)  iện luận cấu trúc Phổ NMR hợp chất OR-MeH2 thể tín hiệu tương tự phổ NMR chất OR-MeH1, chứng tỏ hợp chất OR-MeH2 iridoid, có điểm khác biệt nhóm -OCH3 cấu hình C-6 Phổ 1H NMR xuất tín hiệu đặc trưng khung iridoid với hai proton olefin 7.46 (s, H-3), 5.80 (s, H-7), proton nhóm methine δH 5.35 (d, J= 5.0, H1), 4.55 (d, J =1.5/1.5, H-6), 3.17 (dd, J = 7.0/5.5, H-9), 3.04 (dd, J = 7.5/3.0, H-5) Hai proton nhóm –O-CH2- vị trí C-10 cộng hưởng 4.29 4.21 dạng mũi đôi với số ghép J = 15.5 Hz Các proton >CH-O- phân tử đường cộng hưởng vùng δH 4.74-3.27, proton nhóm –OCH3 cộng hưởng δH 3.71 Phổ 13C kết hợp với DEPT NMR xuất tín hiệu cộng hưởng carbon olefin δC 154.2 (=CH-, C-3), 147.4 (=CC=, C-4), carbon >C=O δC 171.3 (C-11) carbon methine khung iridoid (97.7, C-1; 81.6, C-6; 15 60.7, C-10; 47.0, C-9; 43.7, C-5), carbon anomer carbon mang oxygen phân tử đường cộng hưởng vùng δC 100.0-62.0 Các tương quan COSY, HSQC, HM C hợp chất OR-MeH2 có nhiều điểm tương đồng với hợp chất OR-MeH1 Theo đó, phân tử đường gắn vào iridoid qua C-1 cấu trúc phân tử đường xác định β-D-glucopyranose Ngoại trừ, phổ HM C, proton nhóm –OCH3 cho tương quan với >C=O (C11) nên C-11 bị methyl hóa Trong tự nhiên, hợp chất iridoid chủ yếu tồn dạng cấu hình hướng α H-1 β H-9 Theo Soren Damtoft cộng [13], nhóm –OR nằm vị trí C-6 định hướng α số ghép J1,9 > 8.0Hz δC-1 > 99 ppm, nhóm –OR nằm vị trí C-6 định hướng β số ghép J1,9< 8.0Hz δC-1< 99 ppm Proton H-1 có J = 5.0 Hz (CH-O- phân tử đường cộng hưởng vùng δH 3.97-3.30, proton hai nhóm –OCH3 cộng hưởng δH 3.82 3.48 Phổ 13C kết hợp với DEPT NMR xuất tín hiệu cộng hưởng carbon olefin δC 152.7 (=CH-, C-3), 148.0 (=CC=, C-4), carbon >C=O δC 169.5 (C-11) carbon methine khung iridoid [94.4 (C-1), 88.5 (C6); 58.9 (C-10), 46.2 (C-9), 37.2 (C-5)], carbon anomer cộng hưởng δC 98.0 carbon mang oxygen phân tử đường cộng hưởng vùng δC 60.7-76.3 Các tương quan HSQC, HM C hợp chất OR-MeH3 có nhiều điểm tương đồng với hợp chất OR-MeH1 BOR-MeH2 Theo đó, phân tử đường gắn vào iridoid qua C1 cấu trúc phân tử đường xác định β-D-glucopyranose Tại vị trí C-6 C-11 methyl hóa Tương tự hợp chất OR-MeH2, phổ 1H NMR 13C NMR hợp chất BOR-MeH3 cho thấy giá trị số ghép J1,9 = 3.0 Hz < 8.0Hz δC-1 94.4 < 99 cho phép dự đốn nhóm –OCH3 vị trí C-6 định hướng β [10] Từ tất liệu NMR trên, kết hợp so sánh với số liệu phổ NMR hợp chất 6-O-methylscandoside methyl ester [3] cho thấy tương đồng, nên cấu trúc hợp chất OR-MeH3 đề nghị 6-O-methylscandoside methyl ester Hình 3.4 Một số tương quan HM C BOR-MeH3 6-O-methylscandoside methyl ester (BOR-MeH3) 18 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR BOR-MeH3 Vị trí carbon Hợp chất BOR-MeH3 (D2O) δH ppm (J, Hz) δC ppm 6-O-methylscandoside methyl ester (CD3OD) [3] δC ppm 5.70, d (3.0) 94.4 95.2 7.51, s 152.7 153.6 109.2 110.5 3.31, m 37.2 39.2 4.35, m 88.5 90.1 5.95, s 126.3 127.4 148.0 149.7 3.43, m 46.2 47.6 10 4.35, m 58.9 60.5 169.5 169.1 11 6-OCH3 3.48, s 55.9 57.1 11-OCH3 3.82, s 51.9 51.7 1 4.80 (*) 98.0 100.0 2 3.31, m 72.6 74.7 3 3.53, m 75.6 78.0 4 3.43, m 69.5 71.6 5 3.53, m 76.3 78.5 6 3.97, dd (12.0/2.0) 3.77, dd (12.5/6.0) (*) : tín hiệu bị che khuất 60.7 62.8 Cho đến nay, hợp chất 6-O-methylscandoside methyl ester diện số loài thực vật khác [3, 13] lần hợp chất cô lập từ chi Borreria 3.6 KHẢO S T CẤU TRÚC HÓA HỌC CỦA H P CHẤT OR-MeH4 Hợp chất BOR-MeH4 (5.6 mg) thu từ phân đoạn Et73 cao Et có đặc điểm sau: - Hợp chất dạng gum màu vàng nhạt - Kết sắc ký với hệ dung mơi giải ly chloroform:methanol 9:1, hình thuốc thử H2SO4 20%, nung nóng thu vết tròn màu xanh dương, Rf=0.4 - Phổ 1H NMR (D2O, phụ lục 6a), δH ppm 7.73 (1H, d, J=1.0 Hz, H-3), 6.26 (1H, s, H-7), 4.97 (1H, d, J=9.0, H-1), 4.88 (1H, d, J =8.0 Hz, H-1'), 3.82 (3H, s, 11-OCH3), 3.29 (3H, s, 6-O-CH3), 3.26 (1H, ddd, J=6.8/6.8/1.5 Hz, H-5), 2.70 (1H, dd, J=8.0/8.0 Hz, H-9), 19 - Phổ 13C NMR (D2O, phụ lục 6b), δC ppm 169.9 (C-11), 154.9 (=CH-, C-3), 150.4 (=CC=, C-4), 100.8 (C-1); 83.9 (C-6); 60.2 (C-10); 44.4 (C-9); 39.8 (C-5) - Phổ HSQC HMBC (phụ lục 6c 6d) Biện luận cấu trúc Phổ NMR hợp chất OR-MeH4 thể tín hiệu tương tự phổ NMR chất OR-MeH3 nên BOR-MeH4 iridoid, có điểm khác biệt cấu hình C-6 Phổ 1H NMR xuất tín hiệu đặc trưng khung iridoid với hai proton olefin δ H 7.73 (1H, d, J = 1.0 Hz, H-3) 6.26 (1H, s, H-7), proton nhóm –O-CH-O- δH 4.97 (1H, d, J = 9.0 Hz) 4.88 (1H, d, J = 8.0 Hz), proton nhóm methine δH 3.26 (ddd, J = 6.8/6.8/1.5 Hz) 2.70 (dd, J =8.0/8.0 Hz), hai proton nhóm –O-CH2- vị trí C-10 cộng hưởng 4.50 (d, J =16.0 Hz 4.33 (d, J =15.5 Hz) Các proton >CH-Ocủa phân tử đường cộng hưởng vùng δH 3.90-3.30, hai nhóm –OCH3 cộng hưởng δH 3.82 (3H, s) 3.29 (3H, s) Phổ 13C kết hợp với DEPT NMR xuất tín hiệu cộng hưởng carbon >C=O δC 169.9 (C-11), carbon olefin δC 154.9 (=CH-); 150.4 (=CH 99 ppm nên nhóm –OCH3 vị trí C-6 định hướng α [13] Kết hợp so sánh với liệu phổ 6-O-methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester [3] cho thấy có tương đồng nên đề nghị cấu trúc hợp chất BORMeH4 6-O-methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester Hình 3.5 Một số tương quan HM C BOR-MeH4 6-O-Methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester (BOR-MeH4) 20 Đây lần hợp chất cô lập từ chi Borreria Bảng 3.6 Dữ liệu phổ hợp chất BOR-MeH4 Vị trí carbon Hợp chất BOR-MeH4 (D2O) δH ppm (J, Hz) δC ppm 6-O-Methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester (CD3OD) [3] δC ppm 4.97, d (9.0) 100.8 101.8 7.73, d (1.0) 154.9 155.1 - 106.7 108.2 3.26, ddd (6.8/6.8/1.5) 39.8 42.1 4.54, dd (6.5/1.5) 83.9 85.0 6.26, s 127.0 127.6 - 150.4 152.9 2.70, dd (8.0/8.0) 44.4 46.0 10 4.50, d (16.0) 4.33, d (15.5) 60.2 61.8 11 - 169.9 169.5 6-OCH3 3.29, s 56.5 57.4 11-OCH3 3.82, s 52.0 51.8 1 4.88, d (8.0) 99.2 100.8 2 3.42, dd (8.0/9.5) 72.8 75.0 3 3.47, m 76.0 77.9 4 3.45, dd (8.0/9.0) 69.5 71.4 5 3.56, m 75.0 78.3 6 3.74, m 3.91, m 60.6 62.6 3.7 Số liệu NMR iridoid cô lập Qua phân giải cấu trúc iridoid cô lập, số liệu NMR chất trình bày chung bảng 3.7 3.8 21 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ 1H NMR hợp chất BOR-MeH1÷BOR-MeH4 (D2O) Vị trí BOR-MeH1 4.95, d, 7.5 BOR-MeH2 5.35, d, 5.0 BOR-MeH3 5.70, d, 3.0 BOR-MeH4 4.97, d, 9.0 7.52, d,1.0 7.46, s 7.51, s 3.08, dd, 6.5/6.5 3.04, dd, 3.0/7.5 3.31, m 7.73, d, 1.0 3.26, ddd, 6.8/6.8/1.5 4.84, dd, 6.5/2.5 4.55, d, 1.5/1.5 4.35 4.54, dd, 6.5/1.5 6.06, d, 1.0 5.95, s 6.26, s 2.70, dd, 7.5/7.5 3.17, dd, 5.5/7.5 3.43, m 2.70, dd, 8.0/8.0 10 4.90, d, 14.5 4.84, d, 13.5 4.50, d, 16.0 4.33, d, 15.5 5.80, br s 4.29, d, 15.5 4.21, d, 15.5 4.35, m 10-OAc 2.1 (s) 3.48, s 3.29, s 3.71, s 3.82, s 3.82, s 4.74, d, 8.5 4.80 (*) 4.88, d, 8.0 6-OCH3 11OCH3 1 4.81, d, 8.0 2 3.32, dd, 8.0/9.5 3.27, dd, 8.0/ 8.5 3.31, m 3.48, dd, 9.0/9.0 3.45, dd, 9.0/ 9.5 3.53, m 3 3.37, dd, 9.0/8.5 3.36, dd, 9.0/ 9.5 3.43, m 3.53, m 3.39, ddd, 3.39, ddd, 5 8.5/6.0/2.0 2.0/5.8/8.0 3.85, dd, 2.0/12 3.85, dd, 2.0/12.5 3.97, 6 dd,12.0/2.0 3.65, dd, 5.5/12 3.67, dd , 3.77, 6.0/12.5 dd,12.5/6.0 (*): Tín hiệu bị che khuất 4 3.42, dd, 8.0/9.5 3.47, m 3.45, dd, 8.0/9.0 3.56, m 3.74, m 3.91, m 22 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ 13C NMR hợp chất BOR-MeH1÷BOR-MeH4 (D2O) Vị trí BORMeH1 BORMeH2 BOR-MeH3 BORMeH4 101.6 97.7 94.4 100.8 154.5 154.2 152.7 154.9 110.0 110.8 109.2 106.7 42.2 43.7 37.2 39.8 75.7 81.6 88.5 83.9 132.5 130.2 126.3 127.0 145.5 147.4 148.0 150.4 46.1 47.0 46.2 44.4 10 64.5 60.7 58.9 60.2 11 174.0 171.3 169.5 169.9 55.9 56.5 6-OCH3 10-OAc 175.5 21.7 11OCH3 53.4 51.9 52.0 1 100.3 100.0 98.0 99.2 2 74.3 74.0 72.6 72.8 3 77.1 77.0 75.6 76.0 4 71.0 70.9 69.5 69.5 5 77.6 77.6 76.3 75.0 6 62.2 62.0 60.7 60.6 23 KẾT LUẬN Từ Ruột gà có khớp Borreria articularis thu hái tỉnh Phan Thiết, sử dụng phương pháp trích ly ngâm dầm nhiệt độ phịng, phương pháp sắc ký, cô lập hợp chất tinh khiết Sử dụng phương pháp hóa lý đại HR–ESI–MS, 1D 2D–NMR so sánh với tài liệu tham khảo, chúng tơi xác định cấu trúc hóa học hợp chất bao gồm: - 2-Hydroxy-1-methoxyanthraquinone (BOR-EA1) - Ursolic acid (BOR-EA2) - Asperulosidic acid (BOR-MeH1) - Scandoside methyl ester (BOR-MeH2) - 6-O-Methylscandoside methyl ester (BOR-MeH3) - 6-O-Methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester (BOR-MeH4) Trong số hợp chất lập hợp chất 2-hydroxy-1methoxyanthraquinone, asperulosidic acid, scandoside methyl ester, 6-O- methylscandoside methyl ester 6-O-methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester lần biết đến có Ruột gà có khớp Borreria articularis riêng hai hợp chất 6-O-methylscandoside methyl ester 6-O- methyldeacetylasperulosidic acid methyl ester lần có diện chi Borreria Kết nghiên cứu góp phần bổ sung thêm kiến thức hóa - thực vật chi Borreria (BOR-EA1) (BOR-EA2) (BOR-MeH1) 24 (BOR-MeH2) (BOR-MeH3) (BOR-MeH4)  Đề xuất hướng nghiên cứu tiếp theo: Trong trình khảo sát thành phần hóa học cao ethyl acetate cao ethanol, chúng tơi nhận thấy cịn có diện hợp chất triterpenoid iridoid khác Mong tìm nguồn kinh phí để tiếp tục khảo sát Một phần kết nghiên cứu đăng Tạp chí Khoa học Cơng nghệ (Viện Hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam) (Nguyen Thi Anh Tuyet, Dang Cong Khanh, Nguyen Kim Phi Phung (2014), Chemical constituents of Borreria articularis, Tạp chí Khoa học Công nghệ , 52(5B), 454-459) 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Võ Văn Chi (2012), ―Từ điển thuốc Việt Nam‖, NXB Y Học, Hà Nội, tập 2, 626 TÀI LIỆU TIẾNG ANH [2] Kamiya Kohei, Fujita Yasuhiro, Saiki Yasuhisa, Hanani Endang, Mansur Umar, Satake Toshiko (2002), Studies on the constituents of Indonesian Borreria latifolia, Heterocycles, 56, 537–544 [3] Koichi Machida, Emiko Takehara, Hiroko Kobayashi, Masao Kikuchi (2003), Studies on the Constituents of Gardenia Species III New Iridoid Glycosides from the leaves of Gardenia jasminoides cv.fortuneana Hara, Chem Pharm Bull, 51(12) 1417—1419 [4] K S Mukherjee, B Mukhopadhyay, S Mondal, D Gorai and G Brahmachari (2004), Triterpenoid constituents of Borreria articularis, Journal of the Chinese Chemical Society, 51, 229-231 [5] Lucia Maria Conserva, Jesu Costa Ferreira,Júnior (2012), Borreria and Spermacoce species (Rubiaceae): A review of their ethnomedicinal properties, chemical constituents, and biological activities, Pharmacognosy Reviews, (11), 46-55 [6] Noiarsa P, Yu Q, Matsunami K, Otsuka H, Ruchirawat S, Kanchanapoom T (2007), (Z)-3-hexenyl diglycosides from Spermacoce laevis Roxb J Nat Med., 61, 406–409 [7] Olga Tzakou, Philippos Mylonas, Constantinos Vagias, Panos V Petrakis (2007), Iridoid Glucosides with Insecticidal Activity from Galium melanantherum‖, Z Naturforsch, 62c, 597-602 [8] Razia Sultana, M Shafiqur Rahman, M Nazrul Islam Bhuiyan, Jaripa Begum, M Nural Anwa (2008), In vitro Antibacterial and Antifungal Activity of Borreria articularis, Bangladesh J Microbiol, 25, 95-98 [9] Saha K, Lajis NH, Israf DA, Hamzah AS, Khozirah S, Khamis S (2004), Evaluation of antioxidant and nitric oxide inhibitory activities of selected Malaysian medicinal plants, Journal of Ethnopharmacol, 92, 263–267 [10] Soren Damtoft, Soren Rosendal Jensen, Bent Juhl Nielsen (1981), 13 C and H NMR spectroscopy as a tool in the configurational analysis of iridoid glucosides, Phytochemistry, 20 (12), 2717-2732 [11] Tuyen Pham Nguyen Kim, Nga Vo Thi, Phuong Tran Van, Phuong Quach Ngo Diem, Duong Ngo Thi Thuy, Quang Ton That, Phung Nguyen Kim Phi (2013), Phytochemical Constituents and Determination of Resveratrol from the Roots of Arachis hypogea L, American Journal of Plant Sciences, 4, 2351-2358 [12] Vadivelan S, Sinha BN, Kalyan S Betanabhatla, Christina AJM, Rakesh N Pillai (2007), Anti-inflammatory activity of Spermacoce articularis Linn on carrageenan induced paw Edema in wistar male rats, Pharmacologyonline, 3, 478-484 [13] Van Long LH, Nga VT, Dam NP, Hung MA, Dung TD, Quang TT, Phung NKP (2013) , Three new iridoid glucoside salts from Hedyotis tenelliflora Growing in Vietnam, Nat Prod Commun., (11), 1507-1508 [14] Vinicius F Moreira, Rodrigo R Oliveira, Leda Mathias, Raimundo Braz-Filho, Ivo J Curcino Vieira (2010), New Chemical Constituents from Borreria verticillata (Rubiaceae), Helvetica Chimica Acta, 93, 1751-1757 [15] Yan-Bin Wu, Cheng-Jian Zheng, Lu-Ping Qin , Lian-Na Sun, Ting Han, Lei Jiao, Qiao-Yan Zhang, Jin-Zhong Wu (2009), Antiosteoporotic activity of Anthraquinones from Morinda officinalis on Osteoblasts and Osteoclasts, Molecules, 14, 573-583 [16] Y Narsimha Reddy, H.Parameshwar, G Krishna Mohan, B.Ravi Kumar (2010), Hepatoprotective effect of the methanolic extract of whole plant of Borreria articularis on carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in albino rats, Journal of Pharmaceutical Research & Health Care, (4), 285-292 TÀI LIỆU TRÊN TRANG WEB [17] http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/175 (truy cập ngày 15/9/2016) [7] [8] [4] K S Mukherjee, B Mukhopadhyay, S Mondal, D Gorai and G Brahmachari (2004), ―Triterpenoid Constituents of Borreria articularis‖, Journal of the Chinese Chemical Society, 51, 229-231 [6] [8] Razia Sultana, M Shafiqur Rahman, M Nazrul Islam Bhuiyan, Jaripa Begum, M Nural Anwa (2008), ―In vitro Antibacterial and Antifungal Activity of Borreria articularis‖, Bangladesh J Microbiol, Vol 25, 95-98 [9] [7] Neoh Bee Keat, Rahayu Utami Umar, Nordin Haji Lajis, Tai Yuen Chen, Tu Yen Li, Mawardi Rahmani, Mohd Aspollah Sukari (2010), ―Chemical constituents from two weed species of Spermacoce (Rubiaceae)‖, The Malaysian Journal of Analytical Sciences, Vol 14 No , 6-11 [10] [11] [5] Olga Tzakou, Philippos Mylonas, Constantinos Vagias, Panos V Petrakis (2007), ―Iridoid Glucosides with Insecticidal Activity from Galium melanantherum‖, Z Naturforsch, 597-602 [12] [10] Vinicius F Moreira, Rodrigo R Oliveira, Leda Mathias, Raimundo Braz-Filho Ivo J Curcino Vieira (2010), ―New Chemical Constituents from Borreria verticillata(Rubiaceae)‖, Helvetica Chimica Acta, Vol 93, 1751-1757 [13] [10] [14] [5] Koichi Machida, Emiko Takehara, Hiroko Kobayashi, and Masao Kikuchi (2003), ‖ Studies on the Constituents of Gardenia Species III New Iridoid Glycosides from the leaves of Gardenia jasminoides cv.fortuneana Hara‖, Pharmaceutical Society of Japan, 51(12), 1417-1419 [=] Lucia Maria Conserva, Jesu Costa Ferreira,Júnior (2012), ―Borreria and Spermacoce species (Rubiaceae): A review of their ethnomedicinal properties, chemical constituents, and biological activities‖, Pharmacognosy Reviews, 46-55 ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ C P TRƯỜNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY RUỘT GÀ CÓ KHỚP – BORRERIA ARTICULARIS, HỌ CÀ PHÊ (RUBIACEA) ... chun ngành có uy tín, nhằm cung cấp thơng tin thành phần hóa học Ruột gà có khớp nói riêng chi Borreria nói chung, giúp nhà nghiên cứu lĩnh vực có định hướng việc nghiên cứu hóa học chi Ngày tháng... Hạnh phúc Tp.HCM, ngày tháng năm 201 THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thông tin chung:  Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học Ruột gà có khớp, Borreria articularis, họ Cà phê (Rubiaceae)  Chủ