Khảo sát sinh trưởng khả năng cho thịt và xác định các điểm đa hình trên gen IGF 1 liên quan đến năng suất chất lượng thịt của gà hmông và gà ri

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI TRẦN THỊ KIM ANH KHẢO SÁT SINH TRƯỞNG, KHẢ NĂNG CHO THỊT VÀ XÁC ðỊNH CÁC ðIỂM ðA HÌNH TRÊN GEN IGF-1 LIÊN QUAN ðẾN NĂNG SUẤT, CHẤT LƯỢNG THỊT CỦA GÀ H’MÔNG VÀ GÀ RI LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: CHĂN NUÔI Mã số : 60.62.40 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS LÊ THỊ THÚY HÀ NỘI – 2010 LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa ñược sử dụng ñể bảo vệ học vị Tơi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn ñã ñược cảm ơn thơng tin trích dẫn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2010 Tác giả luận văn Trần Thị Kim Anh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp i LỜI CẢM ƠN Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc ñến PGS TS Lê Thị Thúy, người hướng dẫn khoa học tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn thầy Phan Xuân Hảo thầy cô môn Di truyền – Giống vật nuôi - Khoa Chăn nuôi Nuôi trồng thuỷ sản; thầy cô Viện Sau đại học - Trường ðaị học Nơng nghiệp Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành luận văn Tơi chân thành cảm ơn: Trung tâm Nghiên cứu gia cầm Vạn Phúc; Trung tâm Thực nghiệm Bảo tồn vật nuôi - Viện Chăn ni; Phịng phân tích thức ăn chăn ni – Viện Chăn ni, Phịng DNA ứng dụng – Viện Cơng nghệ Sinh học Tơi xin cảm ơn gia đình, bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ tơi hồn thành luận văn Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2010 Tác giả luận văn Trần Thị Kim Anh Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC SƠ ðỒ vii DANH MỤC HÌNH viii ðẶT VẤN ðỀ 81 1.1 Tính cấp thiết ñề tài 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Ý nghĩa ñề tài 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa học ñề tài 2.1.1 ðặc ñiểm sinh trưởng khả cho thịt gà .3 2.1.2 ðặc ñiểm phẩm chất thịt 2.1.3 ðặc tính hố học thịt gà 13 2.1.4 Khái niệm gen (IGF-1)quy ñịnh suất chất lượng thịt16 2.2 Tình hình nghiên cứu nước giới 19 2.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 19 2.2.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .24 3.1 ðối tượng – ðịa ñiểm – Thời gian nghiên cứu 24 3.2 Nội dung nghiên cứu .24 3.2.1 Khả sinh trưởng gà Ri gà H’Mông 24 3.2.2 Sức sản xuất thịt gà H’Mông gà Ri 24 3.2.3 Chất lượng thịt gà H’Mông gà Ri 24 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iii 3.2.4 Gen IGF-1 quy định tính trạng chất lượng thịt 24 3.3 Phương pháp nghiên cứu 25 3.3.1 Sơ ñồ bố trí thí nghiệm 25 3.3.2 Các tiêu phương pháp xác ñịnh 25 3.4 Phương pháp xử lý số liệu .36 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Khả sinh trưởng gà H’Mông gà Ri .37 4.1.1 Sinh trưởng tích lũy gà H’Mơng 37 4.1.2 Sinh trưởng tích lũy gà Ri .38 4.2 Năng suất thịt giống gà H’Mông gà Ri 40 4.2.1 Năng suất thịt gà H’Mông 41 4.2.2 Năng suất thịt gà Ri 43 4.2.3 Năng suất thịt gà H’Mông gà Ri .44 4.3 Phẩm chất thịt gà H’Mông gà Ri 47 4.3.1 Chất lượng thịt gà H’Mông gà Ri 47 4.3.2 Các tiêu hố học thịt đùi 55 4.4 Gen quy ñịnh suất chất lượng thịt IGF-1 58 4.4.1 Tách chiết DNA tổng số mẫu nghiên cứu .58 4.4.2 Nhân ñoạn gen IGF1 kỹ thuật PCR 59 4.4.3 Xác định phân tích trình tự gen mã hóa IGF-1 60 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 ðề nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 PHỤ LỤC 78 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chữ ñầy ñủ CS Cộng Cv Hệ số biến thiên DNA Acid deoxyribonucleic EDTA Etilendiamin tetraaxetic axit Hm Gà H’mông N Nitơ P Xác suất Ri Gà Ri SE Sai số chuẩn TTTA Tiêu tốn thức ăn X Trung bình Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp v DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 2.1 Một số tiêu ñánh giá sức sản xuất thịt gia cầm .5 Bảng 2.2 Thành phần hóa học thịt gia cầm 13 Bảng 3.1 Bảng tiêu chuẩn phần ăn đàn thí nghiệm 25 Bảng 3.2 Dung lượng mẫu tiêu theo dõi 25 Bảng 3.3 Thành phần phản ứng khuếch ñại DNA 32 Bảng 3.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR 34 Bảng 3.5 Chu trình nhiệt chạy giải trình tự 36 Bảng 4.1 Sinh trưởng tích lũy gà H’Mông (g) .37 Bảng 4.2 Sinh trưởng tích lũy gà Ri (g) 39 Bảng 4.3 Năng suất thịt gà H’Mông 42 Bảng 4.4 Năng suất thịt gà Ri 43 Bảng 4.5 Năng suất thịt gà H’Mông gà Ri 45 Bảng 4.6 Chất lượng thịt gà H’Mông 48 Bảng 4.7 Chất lượng thịt gà Ri .50 Bảng 4.8 Chất lượng thịt gà H’Mông gà Ri 52 Bảng 4.9 Một số tiêu hóa học chất lượng thịt gà H’Mông 55 Bảng 4.10 Một số tiêu hóa học chất lượng thịt gà Ri 56 Bảng 4.11 Một số tiêu hoá học chất lượng thịt ñùi 56 Bảng 4.12 Vị trí ñiểm ña hình nucleotide gen IGF-1 mẫu nghiên cứu61 Bảng 4.13 Tỷ lệ ñột biến ñiểm 62 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp vi DANH MỤC SƠ ðỒ STT Tên biểu ñồ Trang ðồ thị 4.1 ðồ thị sinh trưởng tích lũy gà H’Mơng 38 ðồ thị 4.2 ðồ thị sinh trưởng tích lũy gà Ri 40 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 2.1 Cấu tạo Myoglobin 10 Hình 2.2 Sự biến ñổi màu sắc thịt 11 Hình 2.3 Ảnh 3D gen IGF-1 17 Hình 2.4 ðoạn gen IGF-1 động vật gặm nhấm 17 Hình 2.5 Vị trí gen IGF-1 gà NST số 18 Hình 4.1 ðiện di DNA tổng số gel agarose 0.8% gà H’Mông 58 Hình 4.2 ðiện di DNA tổng số gel agarose 0.8% gà Ri 59 Hình 4.3 ðiện di sản phẩm PCR gà Ri gà H’Mông 60 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp viii ðẶT VẤN ðỀ 1.1 Tính cấp thiết đề tài Việt Nam nằm khu vực nhiệt đới gió mùa ñược ñánh giá khu vực địa lý có đa dạng sinh học cao với bề dày lịch sử hàng ngàn năm Các giống ñộng thực vật nói chung giống gia súc, gia cầm nói riêng Việt Nam phong phú Chỉ tính riêng gà có khoảng 15 giống (Báo cáo nguồn tài nguyên di truyền vật nuôi Việt NamFAO 2004) [56], phải kể đến giống gà quan trọng gà Ác, gà Chọi, gà ðông Tảo, gà H’mơng, gà Hồ, gà Mía, gà Ri… Chăn ni giống gà nội dần trọng gần ñây thị hiếu ẩm thực người Việt Nam thích ăn thịt trứng gà nội so với giống nhập nội thịt giống gà nội thơm ngon, khối lượng thể vừa phải, thích hợp cho tiêu dùng giêt mổ hộ gia đình Từ trước đến nay, người dân thường chăn ni theo hướng đáp ứng nhu cầu người tiêu dùng, người tiêu dùng sử dụng sản phẩm chăn nuôi chủ yếu dựa vào cảm quan, thị hiếu, chưa có nhiều minh chứng mang tính khoa học hàm lượng chất dinh dưỡng loại thịt gà Việc tiến hành phân tích đánh giá hàm lượng chất dinh dưỡng thịt gà, so sánh chất lượng thịt giống gà, giúp người tiêu dùng trở thành “những người tiêu dùng thông minh” vào người chăn ni đáp ứng nhu cầu thị hiếu người tiêu dùng thông minh việc làm cần thiết Các giống gà nội ñều có phẩm chất thịt ñậm ñà thơm ngon Ngồi yếu tố ngoại cảnh thức ăn, ni dưỡng yếu tố di truyền- Gen điều khiển tính trạng chất lượng thịt đóng vai trị quan trọng ñối với chất lượng thịt gà Việc chọn lọc dựa vào giá trị kiểu hình, tính trạng sản xuất cần nhiều thời gian phải theo dõi qua nhiều hệ Trên sở tiến kỹ thuật di truyền phân tử phát triển mạnh mẽ gần ñây ñã mở triển vọng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp PHỤ LỤC Bảng 1: Lịch dùng vacxin phòng bệnh cho gà Ngày Loại vacxin, thuốc dùng cách sử dụng Phòng bệnh tuổi Marek ( tiêm da ñầu) Bệnh marek Lasota lần1 (tuỳ theo loại vacxin) Phòng bệnh newcastle, Viêm PQTN – IB lần (Nhỏ – giọt vào mắt, mũi viêm phế quản truyền nhiễm tuỳ theo lượng nước pha) Gumboro lần1 (tuỳ theo loại vacxin) Phòng bệnh gumboro, (Nhỏ – giọt vào mắt, mũi tuỳ theo lượng nước pha) 21 28 56 ðậu gà (chủng vào màmg cánh) Phịng bệnh đậu gà Gumboro lần2 (tuỳ theo loại vacxin) Phòng bệnh Gumboro Viêm PQTN- IB lần (tuỳ theo loại vacxin) Phòng Viêm phế quản (Nhỏ mắt, mũi pha nước cho uống giờ) truyền nhiễm Lasota lần (tuỳ theo loại vacxin) Phòng bệnh newcastle (Nhỏ mắt, mũi pha nước cho uống giờ) ( Bệnh Gà rù ) Neucastle Hệ1 (Tiêm da cánh 0,2-0,5ml/con tuỳ Phòng bệnh newcastle lượng nước pha ) 120 Vacxin đậu gà lần Phịng bệnh đậu gà trước (Pha 2ml nước cất cho 100 liều chủng vào màng lên đẻ cánh) 126 Vacxin vơ hoạt nhũ dầu phòng NCS, Gumboro, Viêm Phòng bệnh newcastle, PQTN gumboro, viêm phế quản TN (tiêm da ñầu 0,2 ml/ con) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 78 Bảng : Lịch dùng thuốc phòng bệnh cho gà Ngày tuổi 1–4 Thuốc dùng cách sử dụng Octamix-AC ðường Glucoza VitaminC +Bcomplex Liều lượng Phịng bệnh 0,5g/ nước lít Phịng bệnh đường ruột, hơ hấp, tăng 5g/ lít nước sức đề kháng (Pha nước uống cho uống liên tục) 1g/ lít nước Uống Vitamin C+ Bcomplex Tăng sức ñề kháng chống stress tiêm chủng (Pha nước uống cho uống liên tục) 10- 12 Tylosin 0,5g/lít Multivitamin Bcomplex+ C nước (Pha nước uống cho uống liên tục) 1g/ lít nước Phịng bệnh CRD tăng sức đề kháng 14 VitaminC + Bcomplex 1g/ lít nước Chống stress tiêm chủng 16-20 Bổ sung men tiêu hoá vào thức ăn (Trộn vào thức ăn cho gà ăn) theo hướng Cân hệ vi dẫn nhà khuẩn ñường ruột sản xuất ESB3 30% (ngoại) 1g/ lít nước Multivitamin 1g/ lít nước 24-26 Phịng trùng bệnh cầu (Pha nước uống cho uống liên tục) 56 Multivitamin 1g/ lít nước (Pha nước uống cho uống liên tục) 60 Piperazin Amirazin (Trộn vào thức ăn cho gà ăn) 60-140 Ampicoli oxyteracilin (uống ñịnh kỳ –5 ngày/ tháng) 50 g/ thức ăn Chống Stress tiêm chủng tạ Tẩy giun sán 60-100 Phòng bạch lỵ, CRD, mg/kg thể tụ huyết trùng trọng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 79 HÌNH ẢNH CÁC QUÁ TRÌNH THỰC HIỆN THÍ NGHIỆM Gà Ri – Xác định khối lượng thân thịt Gà H’Mơng – Khối lượng móc hàm Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp 80 Vị trí ðo giá trị pH Kết đo giá trị pH Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 81 Chuẩn bị mẫu thịt gà Ri ñể ño số màu sắc thịt Các giá trị màu sắc thịt máy ño màu sắc Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nơng nghiệp 82 ðo độ dai thịt gà Ri Bể hấp – Xác ñịnh tỷ lệ nước chế biến thịt gà H’Mông Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp 83 Kết chạy giải trình tự gen IGF-1 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 10 20 30 40 50 60 70 | | | | | | | | | | | | | | CTAAGCAGGT ACATAAGATT TTGTTGGTTA AGCCCGTAAC TTTGGCTGGA CATTTTCAGA CAAAGGAAAT 80 90 100 110 120 130 140 | | | | | | | | | | | | | | GACAGTGTGT CATTTCTATA TTGCCAATTT TGCTAGTTTC TTATAGTCTC AAAATATAGA TGGATATTTG G G G G G G G C G G C G G G G C G C G C G G G G C G C G 84 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 150 | | ATGTAATTCT 160 | | GTACCAACAG 170 | | CAAACTGTTT 180 | | TCTTACTGAA GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 220 230 240 250 260 270 280 | | | | | | | | | | | | | | AAATTGGCAG TTGAAATCTG AAACTCCCAT TATTCTTATT TTGAGTCAGT ACTGAAAATC CACCTTTTCT G .G .G G G .G G 85 190 | | ACAACTACAA 200 | | TCACAGAAAA 210 | | ATTCTGGCTG GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 290 300 310 320 330 340 350 | | | | | | | | | | | | | | TTGAACCAAT TCTACCTCTT CAGTTTCCAT TATATACGTA TGCTATGTTG AAAGCAGAAT CATAATGCTC GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 360 370 380 390 400 410 420 | | | | | | | | | | | | | | TTTTAAACTA CTGCTTTGAA TTCATTTTAG ACGCATTTAA ACTATTGCAA TTTAGCTGCT GGCCACTTGA A A A A A A A 86 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 430 440 450 460 470 480 490 | | | | | | | | | | | | | | TTTCAGTGCA GCCAGTGAGA AAGCATGCGA TTCAATGACC CTGAGTTCAC TGAGATTACT GGAAAACCAA GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 500 510 520 530 540 550 560 | | | | | | | | | | | | | | AACAAGGGTT TGGAAGTCCA GTGCTTTAAC ACATAAAGAA ATACATTAAA TACTTCAAAA GATATAAAAT 87 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 570 580 590 600 610 620 630 | | | | | | | | | | | | | | TCTTAGAACT GTTGGACAGG CTTCTGTGTG AACTTTCCTG TCCAAGCAAC ATTGCTAAAT ACCGTGACTC GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 640 650 660 670 680 690 700 | | | | | | | | | | | | | | CAATCAGAAG GCTGACATCA TGTTGTTGTG TAATTCATAA CCTCATAACT CAGTGTCACT TTTTAAAATG T 88 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 710 720 730 740 750 760 770 | | | | | | | | | | | | | | CTTTATATGT GCATTCAGCA ACTTAAAATC TCAAATGTCA GATGTTAAAT AATGGACAGA TCAGGAGGTT GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 780 790 800 810 820 830 840 | | | | | | | | | | | | | | CATTTTGTAA TATGAATTCT TTATATTTTT TAGAAGAGAG AAAAAATGTA AAGGTTGTTT AGCCAATGTT T T T T T T T A T T A T T T T A T A T A T T T T A T A T 89 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 850 860 870 880 890 900 910 | | | | | | | | | | | | | | AATACTAGAA GCCTAGAGTC AAACAATAAT CAGGAATGAT CAACTGGAAG GAAGCTGATC CCAATCATTT A .C .A .C .A .C .A .C C C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C .A .C GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 920 930 940 950 960 970 980 | | | | | | | | | | | | | | TGATGGACAA GAGTAAACTT GAACTTTTAT AGTACAACTG GGACAAAGTG CACCTAAATG CACATAGTAA 90 GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 990 1000 1010 1020 1030 1040 1050 | | | | | | | | | | | | | | CAAACACCAT TGAGATCCTA GAGAGCTGAA TATATGGCAT GAGTAAACAG CCAAATTAAC ATCGTATATG C T C T C T C T.G C C C .A C T C C T C C C C C C T C C C C C GIGF 101 106 107 111 112 123 125 134 139 140 149 153 157 176 613 614 615 616 617 619 620 1060 1070 1080 1090 1100 | | | | | | | | | | TTAGGCCCAA CAACAACAAG CAATGGAGAT CAGATGCTCA GAATGTAATC 91 i ... suất thịt gà H’Mông 41 4.2.2 Năng suất thịt gà Ri 43 4.2.3 Năng suất thịt gà H’Mông gà Ri .44 4.3 Phẩm chất thịt gà H’Mông gà Ri 47 4.3 .1 Chất lượng thịt gà H’Mông gà. .. H’Mông Gà Ri Sức sản xuất thịt 10 10 Các tiêu chất lượng thịt 10 10 Các tiêu hóa học 10 10 Gen quy ñịnh chất lượng thịt 14 3.3.2 Các tiêu phương pháp xác ñịnh 3.3.2 .1 Sinh trưởng tích lũy Gà cân vào... 4 .1 Khả sinh trưởng gà H’Mông gà Ri .37 4 .1. 1 Sinh trưởng tích lũy gà H’Mơng 37 4 .1. 2 Sinh trưởng tích lũy gà Ri .38 4.2 Năng suất thịt giống gà H’Mông gà Ri 40 4.2 .1 Năng