Nghiên cứu đặc tính sinh học của canine parvovirus phân lập được ở phía bắc việt nam luận văn thạc sĩ nông nghiệp

HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHAM NING BUN PHA XAY NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CANINE PARVOVIRUS PHÂN LẬP ĐƯỢC Ở PHÍA BẮC VIỆT NAM Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Nguyễn Thị Lan NHÀ XUẤT BẢN HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan.Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng .năm 2019 Tác giả luận văn Kham Ning Bun Pha Xay i LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn, tơi nhận hướng dẫn, giúp đỡ, bảo tận tình thầy giáo Học viện Nông Nghiệp Việt Nam, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hồn thành luận văn, cho phép tơi đươc bày tỏ lịng kính trọng biết ơn sâu sắc GS.TS Nguyễn Thị Lan tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho tơi suốt trình học tập thực đề tài Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành tới thầy cô giáo Khoa Thú Y, Bộ môn Bệnh lý thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ tơi q trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn tập thể lãnh đạo, cán viên chức Phịng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ sinh học Thú y giúp đỡ tạo điều kiện cho tơi q trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích tơi hồn thành luận văn./ Hà Nội, ngày tháng .năm 2019 Tác giả luận văn Kham Ning Bun Pha Xay ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục chữ viết tắt vi Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục biểu đồ ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xii Phần Mở Ðầu 1.1 Tính cấp thiết Ðề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Ðề tài 1.2.1 Mục tiêu chung 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn Ðề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh parvovirus gây giới Việt Nam 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Parvovirus gây giới 2.1.2 Tình hình dịch bệnh Parvovirus gây Việt Nam 2.2 Ðặc điểm sinh học parvovirus 2.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc hệ gen Parvovirus 2.2.2 Phân loại phân bố type Parvovirus 2.2.3 Sức đề kháng Parvovirus 2.2.4 Đặc tính ni cấy 2.2.5 Đặc tính kháng nguyên 2.2.6 Khả miễn dịch 2.2.7 Đường xâm nhập cách truyền bệnh 10 2.2.8 Triệu chứng 11 iii 2.2.9 Các phương pháp chẩn đoán 14 2.3 Tổng quan nuôi cấy tế bào 18 2.3.1 Một số đặc điểm tế bào động vật 18 2.3.2 Thành phần dinh dưỡng môi trường nuôi cấy tế bào 19 2.3.3 Điều kiện nuôi cấy 20 2.3.4 Sự tạp nhiễm cách hạn chế 21 2.4 Phân lập virus 21 2.4.1 Khái quát phân lập virus 21 2.4.2 Phân lập Parvovirus phục vụ nghiên cứu sản xuất vacxin vô hoạt 22 Phần Nội dung phương pháp nghiên cứu 23 3.1 Ðịa Ðiểm nghiên cứu 23 3.2 Thời gian nghiên cứu 23 3.3 Ðối tượng/vật liệu nghiên cứu 23 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 23 3.3.2 Vật liệu nghiên cứu 23 3.4 Nội dung nghiên cứu 24 3.4.1 Thu thập mẫu chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy Parvovirus 24 3.4.2 Nghiên cứu phân lập Parvovirus môi trường tế bào CRFK 24 3.4.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng parvovirus phân lập 24 3.5 Phương pháp nghiên cứu 24 3.5.1 Phương pháp mổ khám 24 3.5.2 Phương pháp tách chiết DNA 25 3.5.3 Phương pháp PCR 26 3.5.4 Phương pháp phân lập Parvovirus 26 3.5.5 Phương pháp xác định hiệu giá virus 27 3.5.6 Xử lý số liệu 28 3.5.7 Phương pháp test kit xét nghiệm nhanh bệnh parvovirus chó 28 Phần Kết thảo luận 31 4.1 Kết thu thập mẫu chó mắc parvovirus 31 4.2 Kết phân lập virus môi trường tế bào CRFK 35 4.2.1 Kết phân lập Parvovirus 35 iv 4.2.2 Kết kiểm tra có mặt virus mẫu phân lập phương pháp PCR 37 4.3 Xác định số đặc tính sinh học vủa parvovirus 38 4.3.1 Kết nghiên cứu khả gây bệnh tích tế bào Parvovirus 38 4.3.2 Kết xác định hiệu giá chủng Parvovirus nghiên cứu 40 4.3.3 Xác định quy luật nhân lên virus Parvo môi trường tế bào CRFK 40 Phần Kết luận kiến nghị 45 5.1 Kết luận 45 5.2 Kiến nghị 45 Tài liệu tham khảo 46 Phụ lục 49 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nghĩa tiếng Việt µl Microlit CPE Cyto Pathogenic Effect DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium DNA Deoxyribonucleic acid ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay FAO Food and Agriculture Organization FBS Fetal Bovine Serum MOI Multiplicity of Infection PBS Phosphate buffered saline RNA Ribonucleoic acid RT-PCR Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction TCID50 50% Tissue Culture Infective Dose PCR Polymerase chain reaction MDCK Madin Darby Canine kidney CRFK Crandell Rees Feline Kidney HI Haemagglutination Inhibition CPV2 Canine Parvovirus type HA Haemagglutination Cs Cộng PCR Polymerase Chain Reaction TBE Tris/Borate/EDTA MOI Multiplicity of infection PFU Plaque forming unit vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Thông tin mẫu thu thập chó mắc Parvovirus thời gian nghiên cứu 31 Bảng 4.2 Kết phản ứng PCR chẩn đốn chó mắc Parvovirus 32 Bảng 4.3 Các triệu chứng điển hình chó mắc bệnh virus Parvo (n = 40 con) 33 Bảng 4.4 Các tổn thương đại thể chó mắc bệnh Parvovirus 34 Bảng 4.5 Kết phân lập Parvovirus môi trường CRFK 36 Bảng 4.6 Thông tin chủng Parvovirus gây bệnh tích tế bào mơi trường CRFK 37 Bảng 4.7 Kết xác định khả gây bệnh tích tế bào chủng Parvovirus phân lập 39 Bảng 4.8 Hiệu giá chủng Parvovirus phân lập 40 Bảng 4.9 Hiệu giá virus chủng VNUA-C17 tế bào theo thời gian 40 Bảng 4.10 Hiệu giá virus chủng VNUA-C31 tế bào theo thời gian 41 Bảng 4.11 Hiệu giá virus chủng VNUA-C32 tế bào theo thời gian 42 Bảng 4.12 Hiệu giá virus chủng VNUA-C35 tế bào theo thời gian 42 vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu tạo Parvovirus Hình 2.2 Sự phân bố CPV-2a\2b\2c giới Hình 2.3 Tỷ lệ phần trăm xuất chủng CPV-2/CPV-2-like, CPV2a, CPV-2b, CPV-2c Hình 2.4 Cơ chế sinh bệnh Parvovirus chó 11 Hình 2.5 Triệu chứng lâm sàng chó bị Parvovirus 12 Hình 2.6 Chó bị tiêu chảy cấp, nơn mửa Parvovirus 13 Hình 2.7 Kit thử nhanh Canine Parvovirus (CPV) Ag 17 Hình 4.1 Kết điện di sản phẩm PCR phát Parvovirus 32 Hình 4.2 Tế bào CRFK gây nhiễm sau 24h, 48h, 72h, 96h 36 Hình 4.3 Tế bào CRFK bình thường 37 Hình 4.4 Bệnh tích tế bào Parvovirus gây 37 Hình 4.5 Hình ảnh bệnh tích tế bào Parvovirus gây tế bào CRFK thời điểm khác 39 viii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 4.1 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C17 41 Biểu đồ 4.2 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C31 41 Biểu đồ 4.3 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C32 42 Biểu đồ 4.4 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C35 43 ix Bảng 4.6 Thơng tin chủng Parvovirus gây bệnh tích tế bào môi trường CRFK STT Tên mẫu Giống Tháng Tính Địa điểm lấy Tên chủng tuổi biệt mẫu virus C17 Becgie Bỉ Cái Hà Nội VNUA-C17 C31 Bắc Kinh Lai Nhật Đực Hải Dương VNUA-C31 C32 Chó Ta Đực Hải Dương VNUA-C32 C35 Poodle Đực Bắc Ninh VNUA-C35 Hình 4.3 Tế bào CRFK bình thường Hình 4.4 Bệnh tích tế bào Parvovirus gây 4.2.2 Kết kiểm tra có mặt virus mẫu phân lập phương pháp PCR Sau thu chủng Parvovirus gây bệnh tích tế bào đặc trưng mơi trường tế bào CRFK sau dịch virus đời thứ lựa chọn để kiểm tra có mặt Parvovirus Dịch virus thu lại kiểm tra phương pháp PCR lần để giám định lại phát triển nhân lên virus khẳng định biến đổi tế bào CRFK quan sát Parvovirus gây nên, 37 mà nguyên nhân khác sai sót khâu chuẩn bị, bệnh tích gây virus khác Dịch virus thu sau phân lập tế bào CRFK lấy để tiến hành tách chiết DNA theo hướng dẫn kit hãng Qiagen Phản ứng PCR thực (theo bước trình bày phần 3.4.3) với cặp mồi đặc hiệu Sản phẩm phản ứng PCR điện di kiểm tra Kết cho thấy mẫu đối chứng âm (N) âm tính, giếng đối chứng dương (P) giếng biểu thị kết mẫu Xuất băng sáng nét, kích thước 550bp theo thiết kế Như khẳng định bệnh tích tế bào virus phân lập Parvovirus Trên giới, nghiên cứu phân lập Parvovirus dòng tế bào CRFK (Crandell Feline Kidney) sử dụng nhiều quốc gia (Mochizuki M et al 1996; Parthiban S et al., 2011) Cho đến thời điểm tại, kết nghiên cứu thực phân lập thành công Parvovirus dòng tế bào lớp CRFK Việt Nam Từ đó, chúng tơi tiếp tục nghiên cứu đặc tính sinh học Parvovirus mơi trường tế bào CRFK 4.3 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC VỦA PARVOVIRUS 4.3.1 Kết nghiên cứu khả gây bệnh tích tế bào Parvovirus Để xác định khả gây bệnh tích tế bào Parvovirus, nghiên cứu tiến hành cấy truyền đời chủng virus đến đời P#5 Thời điểm thu virus bệnh tích tế bào đạt 80-90% Tại đời P#5, nghiên cứu xác định khả gây bệnh tích tế bào chủng Parvovirus phân lập Việc xác định khả gây bệnh tích tế bào tiến hành môi trường tế bào CRFK với nồng độ MOI = 0,1 Sau gây nhiễm cố định thời gian theo dõi xuất bệnh tích tế bào Thơng thường sau gây nhiễm định kỳ 12 quan sát hình thái tế bào để phát bệnh tích theo dõi bệnh tích tế bào phát triển 100% Trong nghiên cứu thời gian theo dõi tính từ gây nhiễm đến có bệnh tích tế bào hồn tồn ngày Kết theo dõi khả gây bệnh tích tế bào chủng Parvovirus trình bày bảng 4.7 38 Bảng 4.7 Kết xác định khả gây bệnh tích tế bào chủng Parvovirus phân lập (tính theo % diện tích tế bào bị phá hủy so với tổng số diện tích đáy bình ni cấy) STT Chủng virus CPE theo thời gian sau gây nhiễm virus 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi VNUA-C17 - * 20 50 80 100 B VNUA-C31 - 10 50 70 90 B VNUA-C32 - * 30 50 80 100 VNUA-C35 - 10 40 65 85 B B *: CPE 5% 10%: số % tế bào bị phá hủy so với tổng diện tích bề mặt ni cấy B: Tế bào bong tróc hồn tồn khỏi bề mặt ni cấy hpi: hour post inoculation (giờ sau gây nhiễm virus) a) CPE 24h b) CPE 48h c) CPE 72h d) CPE 96h Hình 4.5 Hình ảnh bệnh tích tế bào Parvovirus gây tế bào CRFK thời điểm khác Qua bảng 4.7, nghiên cứu Parvovirus bắt đầu gây bệnh tích tế bào từ 36 đến 48 sau gây nhiễm phá hủy hoàn toàn tế bào sau 72 đến 84 Tuy nhiên thời gian phá hủy tế bào sớm hay muộn tùy thuộc vào chủng virus, điều phụ thuộc vào khả gây bệnh tích chủng virus khác Bên cạnh cơng tác lấy mẫu chuẩn bị tiến hành tốt có ý nghĩa quan trọng việc giữ cho virus sống sót bảo toàn độc lực, 39 ngược lại thu thập bảo quản mẫu khơng quy trình làm virus giảm độc lực chết điều ảnh hưởng trực tiếp tới việc phân lập giữ giống virus 4.3.2 Kết xác định hiệu giá chủng Parvovirus nghiên cứu Kết xác định hiệu giá TCID50 virus tính theo cơng thức Reed Muench trình bày bảng 4.8 Bảng 4.8 Hiệu giá chủng Parvovirus phân lập STT Chủng virus Hiệu giá virus TCID50/25µl VNUA-C17 4,83x106 VNUA-C31 3,16x105 VNUA-C32 6,67x105 VNUA-C35 3,16x106 Qua bảng 4.8 thấy, hiệu giá virus thấp xác định chủng virus VNUA-C31 với giá trị 3,16x105 TCID50/25µl, hiệu giá virus cao xác định chủng VNUA-C17 với giá trị 4,83x106 TCID50/25µl Hai chủng VNUA-C32 VNUA-C35 có giá trị 6,67x105 TCID50/25µl 3,83x105 TCID50/25µl Như vậy, chủng Parvovirus có hiệu giá tương đối cao, có khả phát triển nhân lên tốt môi trường tế bào CRFK 4.3.3 Xác định quy luật nhân lên virus Parvo môi trường tế bào CRFK Sau xác định hiệu giá chủng Parvovirus môi trường tế bào CRFK, xác định quy luật nhân lên virus Parvo môi trường tế bào CRFK Kết trình bày bảng 4.9, 4.10, 4.11, 4.12 biểu đồ 4.1, 4.2, 4.3, 4.4 Bảng 4.9 Hiệu giá virus chủng VNUA-C17 tế bào theo thời gian Thời gian Virus Ngoài tế bào VNUAC17 Trong tế bào VNUAC17 12hpi 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi 0,50 0,83 2,16 3,83 4,16 5,83 5,50 2,83 0,83 1,16 1,50 3,50 3,16 3,83 3,16 2,83 40 Biểu đồ 4.1 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C17 Bảng 4.10 Hiệu giá virus chủng VNUA-C31 tế bào theo thời gian Thời gian Virus 12hpi 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi Ngoài tế bào VNUA-C31 0,50 1,16 2,83 3,83 4,50 5,16 3,83 2,83 Trong tế bào VNUA-C31 0,83 1,50 2,50 3,50 3,50 2,50 2,16 2,50 Biểu đồ 4.2 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C31 41 Bảng 4.11 Hiệu giá virus chủng VNUA-C32 tế bào theo thời gian Thời gian 12hpi 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi Virus Ngoài tế bào VNUA-C32 0,50 1,50 2,83 3,50 4,50 5,83 5,16 2,83 Trong tế bào VNUA-C32 0,83 1,83 2,50 3,16 3,83 4,16 3,16 2,83 Biểu đồ 4.3 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C32 Bảng 4.12 Hiệu giá virus chủng VNUA-C35 tế bào theo thời gian Thời gian Virus 12hpi 24hpi 36hpi 48hpi 60hpi 72hpi 84hpi 96hpi Ngoài tế bào VNUA-C35 0,50 1,16 2,50 3,83 4,50 5,50 4,50 2,83 Trong tế bào VNUA-C35 0,83 1,83 2,50 3,50 3,83 3,83 3,16 2,50 42 Biểu đồ 4.4 Đường biểu diễn nhân lên virus VNUA-C35 Phân tích đường biểu diễn nhân lên phát triển chủng virus nghiên cứu VNUA - C17, VNUA - C31, VNUA – C32 VNUA – C35 thể qua biểu đồ cho thấy, chủng virus nghiên cứu xâm nhập nhân lên nhanh tế bào, đạt mức cao thời điểm 60-72 sau gây nhiễm Tại thời điểm này, thu virus tế bào chủng virus nghiên cứu đem xác định hiệu giá thấy giá trị log TCID50 chủng VNUA – C32 đạt tới 4,16; chủng VNUA - C17 VNUA – C35 đạt 3,83; chủng VNUA - C31 đạt 3,5 Sau hàm lượng virus tế bào giảm dần Đến thời điểm 96 sau gây nhiễm giá trị log TCID50 đạt mức 2,5 3,83 Qua biểu đồ, nhận thấy chủng virus VNUA - C17, VNUA C31, VNUA – C32 VNUA – C35 có quy luật nhân lên virus tương đối giống hàm lượng virus giải phóng tự ngồi tế bào nhiều hàm lượng virus tế bào Tại thời điểm 72h sau gây nhiễm hàm lượng virus đạt giá trị cao Cụ thể: chủng VNUA - C17 giá trị log TCID50 đạt 5,83; chủng VNUA-C31 đạt 5,16; chủng VNUA - C32 đạt 5,83; chủng VNUA - C35 đạt 5,5 Sau thời điểm 72h hàm lượng virus giải phóng tự tế bào giảm đến thời điểm 96h hàm lượng virus ngồi tế bào gần sấp sỉ đạt giá trị logTCID50 từ 2,5 đến 2,83 43 Như nhân lên virus nuôi cấy môi trường tế bào khơng phải q trình liên tục Cả 04 chủng virus phân lập cho kết tương đối giống Sau gây nhiễm virus xâm nhập vào tế bào nhân lên tế bào đến thời điểm 24h gây nhiễm Tại thời điểm trước 24h sau gây nhiễm hàm lượng virus tế bào cao hàm lượng virus tế bào Từ thời điểm 36h sau gây nhiễm, virus phá hủy tế bào giải phóng ngồi mơi trường nên hàm lượng virus giải phóng ngồi môi trường nhiều tế bào Hàm lượng virus tế bào đạt giá trị cao thời điểm 60h tế bào đạt cao thời điểm 72h sau gây nhiễm Sau thời điểm đạt giá trị cao hàm lượng virus ngồi tế bào có xu hướng giảm dần theo thời gian Như vậy, qua kết phân tích đường cong sinh trưởng Parvovirus cho thấy thời điểm thu virus đạt hiệu giá cao thời điểm 72h sau gây nhiễm 44 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Đã xác định 40 chó mắc bệnh phương pháp PCR với triệu chứng lâm sàng điển hình như: Mệt mỏi giảm bỏ ăn, đau bụng chướng bụng, sốt cao, nôn mửa, trường hợp nặng thường bị tiêu chảy phân có máu, nơn mửa tiêu chảy Bệnh tích đại thể chủ yếu hạch màng treo xuất huyết, ruột sung huyết, xuất huyết, ruột non mỏng, niêm mạc ruột bong tróc Phân lập 40 mẫu virus Parvo dịng tế bào CRFK, kết đời thứ có 04 mẫu virus gây bệnh tích tế bào VNUA-C17, VNUA-C31, VNUA-C32, VNUA-C35 Gây nhiễm virus Parvo đời thứ 5, thấy virus gây bệnh tích tế bào từ 36 đến 48 sau gây nhiễm phá hủy hoàn toàn tế bào sau 72 đến 84 - Kết 04 chủng virus Parvo có hiệu giá cao (3,16x105 - 4,83x106 TCID50/25µl), chứng tỏ virus Parvo có khả phát triển nhân lên tốt mơi trường tế bào CRFK - Phân tích đường cong sinh trưởng virus Parvo cho thấy hàm lượng virus tế bào đạt giá trị cao thời điểm 60h-72h (hiệu giá virus logTCID50 đạt 3,50 – 4,16) tế bào đạt cao thời điểm 72h sau gây nhiễm (hiệu giá virus logTCID50 đạt 5,16 - 5,83), thời điểm thu virus đạt hiệu giá cao thời điểm 72h sau gây nhiễm 5.2 KIẾN NGHỊ 1) Tiếp tục nghiên cứu đánh giá ổn định đặc tính sinh học chủng virus Parvo phân lập môi trường nuôi cấy CRFK 2) Tiếp tục thu thập mẫu chó mắc bệnh Parvovirus giống chó khác, thời điểm khơng gian khác để phân lập nhiều mẫu Parvovirus thực địa phục vụ cho việc sàng lọc, lựa chọn chủng Parvovirus thích hợp cho việc sản xuất kháng thể đơn dòng phục vụ chẩn đoán chế tạo Kit chẩn đoán nhanh chó mắc bệnh viêm ruột tiêu chảy Parvovirus 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt: Nguyễn Ngọc Hùng (2011) Nghiên cứu số đặc điểm bệnh lý bệnh virus parvo type gây chó ứng dụng phương pháp hóa mơ miễn dịch chẩn đốn bệnh, Luận văn Thạc sĩ nông nghiệp chuyên ngành Thú y, Học viện Nông nghiệp Việt Nam Nguyễn Như Pho (2003) "Bệnh Parvovirus Care chó." NXB Nơng Nghiệp, Hà Nội Nguyễn Thị Yến Mai, Trần Ngọc Bích, Nguyễn Phúc Khánh, Keovongphet Phuthavong Trần Văn Thanh (2018) Tình hình bệnh viêm ruột parvovirus chó phịng mạch thú y tỉnh Tiền Giang, Đồng Tháp thành phố Cần Thơ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 54 (Số chuyên đề: Nông nghiệp) tr.136-142 Phạm Sỹ Lăng cs (2006) Kỹ thuật ni chó phịng bệnh cho chó NXB Lao động xã hội, Hà Nội Tô Dung Xuân Giao (2006) Kỹ thuật ni chó mèo phịng bệnh thường gặp Nhà xuất Lao động xã hội, Hà Nội Trần Ngọc Bích, Trần Thị Thảo, Nguyễn Thị Yến Mai Nguyễn Quốc Việt, 2013 Khảo sát tỷ lệ bệnh Parvovirus chó từ đến tháng tuổi thành phố Cần Thơ Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ (28) tr.15-20 Vương Đức Chất, Lê Thị Tài (2004), Bệnh thường gặp chó mèo cách phịng trị NXB Nơng nghiệp, Hà Nội II Tài liệu tiếng Anh: Allen, R., Pereira, L., Raes, D., and Smith, M (1998) Guidelines for computing crop water requirements-FAO Irrigation and drainage paper 56, FAO-Food and Agriculture Organisation of the United Nations, Rome (http://www fao org/docrep) ARPAV (2000), La caratterizzazione climatica della Regione Veneto, Quaderni per Geophysics pp 156, 178 Amelia Goddard , Andrew L Leisewitz Canine virus parvo type Veterinary Clinics of North America 2010 46 Binn LN, Lazar EC, Eddy GA, Recover y and characterization of a minute virus of canines Infect Immun 1970.1(5).pp.503–8 Brandy Tabor Canine virus parvo type Veterinary Technician, Vetlearn.com 2011 Buonavoglia, C., Martella, V., Pratelli, A., Tempesta, M., Cavalli, A., Buonavoglia and D Carmichael, L (2001) Evidence for evolution of canine Parvovirus type in Italy Journal of general Virology 82(12) pp 3021-3025 Buonavoglia, D., Cavalli, A., Pratelli, A., Martella, V., Greco, G., Tempesta, M., and Buonavoglia, C.(2000) Antigenic analysis of canine Parvovirus strains isolated in Italy The new microbiologica 23(1) pp.93-96 Burtonboy, G., Coignoul, F., Delferriere, N., and Pastoret, P (1979) Canine hemorrhagic enteritis: detection of viral particles by electron microscopy Archives of virology 61(1-2).pp 1-11 Butler, J (2004) Undoing gender: routledge Chollom, S.C., Fyaktu, E.J., Okwori, A.E.J et al., 2013 Molecular detection of canine parvovirus in Jos, Nigeria Veterinary Medicine and Animal Health 5.pp 57-59 10 Cságola, A., Varga, S., Lőrincz, M and Tuboly, T., 2014 Analysis of the full length VP2 protein of canine parvoviruses circulating in Hungary Archives of Virology 159 (9) pp 2441-2444 11 Carmichael, L., and Binn, L (1981) New enteric viruses in the dog Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine (USA) 12 Carmichael, L., Joubert, J., and Pollock, R (1980) Hemagglutination by canine Parvovirus: serologic studies and diagnostic applications American journal of veterinary research.41(5).pp 784-791 13 Decaro, N., Desario, C., Addie, D D., Martella, V., Vieira, M J., Elia, G., Thiry, E (2007) Molecular epidemiology of canine Parvovirus, Europe Emerging infectious diseases 13 (8) pp.1222 14 Decaro, N., Elia, G., Martella, V., Campolo, M., Desario, C., Camero, M., Narcisi, D (2006) Characterisation of the canine Parvovirus type variants using minor groove binder probe technology Journal of virological methods 133(1).pp 92-99 15 Hedger, R (1968) The isolation and characterization of foot-and-mouth disease virus from clinically normal herds of cattle in Botswana Journal of Hygiene 66 (01).pp 27-36 47 16 Johnson, R., and Spradbrow, P (1979) Isolation from dogs with severe enteritis of a Parvovirus related to feline panleucopaenia virus Australian Veterinary Journal 55(3).pp.151-152 17 Kelly, W (1978) An enteric disease of dogs resembling feline panleucopaenia Australian Veterinary Journal 54(12).pp 593-593 18 Kaur, G., Chandra, M., Dwivedi, P and Sharma, N., 2015 Antigenic typing of canine parvovirus using differential PCR Virus disease 25(4) pp.481-487 19 Martella, V., Cavalli, A., Pratelli, A., Bozzo, G., Camero, M., Buonavoglia, D., Buonavoglia, C (2004) A canine Parvovirus mutant is spreading in Italy Journal of Clinical Microbiology 42(3).pp 1333-1336 20 Mochizuki, M., Harasawa, R., and Nakatani, H (1993) Antigenic and genomic variabilities among recently prevalent Parvoviruses of canine and feline origin in Japan Veterinary microbiology 38 (1-2).pp 1-10 21 Morailon R (1993) Maladies infectieurs Simpson J W (1996) Diffential diagnosis of faecal tenesmus in dogs, In practice 18 pp 283-287 22 Parrish, C R., Aquadro, C F., Strassheim, M., Evermann, J., Sgro, J., and Mohammed, H (1991) Rapid antigenic-type replacement and DNA sequence evolution of canine Parvovirus Journal of virology 65(12) pp 6544-6552 23 Reed, A P., Jones, E V., and Miller, T J (1988) Nucleotide sequence and genome organization of canine Parvovirus Journal of virology 62 (1).pp 266-276 24 Steinel, A., Munson, L., Van Vuuren, M., and Truyen, U (2000) Genetic characterization of feline Parvovirus sequences from various carnivores Journal of general Virology 81 (2).pp 345-350 25 Truyen, U., Steinel, A., Bruckner, L., Lutz, H., and Möstl, K (2000) Distribution of antigen types of canine Parvovirus in Switzerland, Austria and Germany Schweizer Archiv Fur Tierheilkunde.142 (3) pp 115-119 26 Zhou, P., Zeng, W., Zhang, X., and Li, S (2017) The genetic evolution of canine Parvovirus–A new perspective PloS one, 12(3) e0175035 48 PHỤ LỤC PHỤ LỤC MẪU HỒ SƠ BỆNH ÁN GIA SÚC TẠI BỆNH VIỆN THÚ Y HỌC VIỆN NƠNG NGHIỆP VIỆT NAM CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA THÚ Y - BỆNH VIỆN THÚ Y Độc lập - Tự - Hạnh phúc Hà Nôi, ngày … tháng…năm 20… HỒ SƠ BỆNH ÁN GIA SÚC SỐ B/A:… Chủ gia súc:……………………………………………………………………… Địa chỉ:………………………………………………………………………… Điện thoại: …………………………………………………………………… Loại gia súc: ….………………………………………………………………… Tên gia súc:…………………………Tính biệt : ….Đực… Cái……………… Tuổi:……………………Trọng lượng………………………………………… Giống:………………….Màu lơng:……………………………………………… Tiêm phòng vácxin: Chưa tiêm phòng;…… Đã tiêm phòng:………………… Lịch sử điều trị:……….Triệu chứng lâm sàng:……………………………… Thân nhiệt:……………………… Lông:…………………………………… Mắt: ……………………………… Niêm mạc: … ………………………… Mũi:…………………………… Phân: …………………………………… Da:……………………………… Nước tiểu: ……………………………… Các biểu khác:………… … Yêu cầu xét nghiệm: Kết chẩn đoán:…… BÁC SĨ CHẨN ĐOÁN 49 PHỤ LỤC MỘT SỐ HÌNH ẢNH VỀ BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA CHĨ MẮC BẸNH Hình 3.1 Mổ khám bệnh tích chó 50 Hình 2.1 mổ khám kiểm tra não Hình 2.2 Phổi xuất huyết Hình 2.3 Gan xuất huyết, mật sưng to, màng mật mỏng Hình 2.4 Ruột xung huyết, xuất huyết 51 ... tài: ? ?Nghiên cứu đặc tính sinh học canine parvovirus (CPV) phân lập phía bắc Việt Nam? ?? Nhằm nghiên cứu quy trình phân lập Parvovirus; làm rõ đặc tính gây bệnh tích tế bào, thời gian sinh trưởng... LUẬN VĂN Tên tác giả: Kham Ning Bun Pha Xay Tên luận văn: Nghiên cứu đặc tính sinh học Canine Parvovirus phân lập Phía Bắc Việt Nam Ngành: Thú y Mã số: 8640101 Tên sở đào tạo: Học Viện Nơng nghiệp. .. nghiên cứu thực phân lập thành công Parvovirus dòng tế bào lớp CRFK Việt Nam Từ đó, chúng tơi tiếp tục nghiên cứu đặc tính sinh học Parvovirus mơi trường tế bào CRFK 4.3 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH