Mục tiêu nghiên cứu chính của luận án là: Nghiên cứu một số đặc điểm mô bệnh học ung thư biểu mô tuyến tiền liệt tại Bệnh viện Quân y 103 theo phân loại của WHO (2004). Xác định sự bộc lộ một số dấu ấn miễn dịch, tình trạng methyl hóa gen RASSF1A và đối chiếu với một số đặc điểm mô bệnh học trong ung thư biểu mô tuyến tiền liệt. Mời các bạn tham khảo!
1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUÔC PHONG ́ ̀ HOC VIÊN QUÂN Y ̣ ̣ === *** === VI THUÂT THĂNG ̣ ́ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MÔ BỆNH HỌC, HOA MÔ MIÊN ́ ̃ DICH VÀ TINH TRANG METHYL HOA GEN ̣ ̀ ̣ ́ RASSF1A TRONG UNG THƯ BIÊU MƠ TUN TIÊN LI ̉ ́ ̀ ỆT Chun ngành: Khoa học y sinh Mã số: 9720101 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hà Nội 2018 Cơng trình được hồn thành tại: Hoc viên Qn y ̣ ̣ Người hướng dẫn khoa học: 1. GS.TS. Nguyên Đinh Tao ̃ ̀ ̉ 2. TS. Nguyễn Ngoc Hung ̣ ̀ Phản biện 1: PGS. TS. Nguyễn Văn Hưng Phản biện 2: PGS.TS. Quản Hoàng Lâm Phản biện 3: PGS.TS. Trịnh Tuấn Dũng Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường Họp tại vào hồi . giờ ngày .tháng .năm 2018 Có thể tìm hiểu luận án tại các thư viện: Thư viện Quốc gia Thư viện Hoc viên Qn y ̣ ̣ CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 1. Vi Thuật Thắng, Nguyễn Đình Tảo, Võ Thị Thương Lan và cs (2014), “Nghiên cứu hiện tượng tăng methyl hóa của gen RASSF1A ung thư tuyến tiền liệt Bệnh viện 103”, Tạp chí Y dược lâm sàng 108., (9): 7781 2. Vi Thuat Thang, Nguyen Đinh Tao, Nguyen Ngoc Hung et al. (2017), “ Study on some histopathological features and expression of some immunohistochemical markers in prostatic carcinoma”, Journal of Military Pharmaco Medicine., (8): 222 227 GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Ung thư tuyến tiên liêt (UTTTL) th ̀ ̣ ường gặp ở người trên 65 tuôi, bênh diên biên thâm lăng. Phân l ̉ ̣ ̃ ́ ̀ ̣ ̀ ớn cac tr ́ ương h ̀ ợp được phat́ hiên tinh c ̣ ̀ ờ qua xet nghiêm (XN) mô bênh hoc (MBH) ́ ̣ ̣ ̣ Ở Việt Nam, tỷ lệ UTTTL được phát hiện qua xét nghiệm MBH sau phẫu thuật tăng sản tuyên tiên liêt (TTL) ́ ̀ ̣ khoang 8% ̉ , tỷ lệ mắc chuẩn theo tuổi năm 2012 là 3,4/100.000 dân va xêp hang ̀ ́ ̀ thứ 10 về ung thư (UT) ở nam giơí. UTTTL co thê đ ́ ̉ ược điêu tri hiêu qua nêu bênh ̀ ̣ ̣ ̉ ́ ̣ được phat hiên ́ ̣ ở giai đoan s ̣ ơm. Vi vây, viêc ́ ̀ ̣ ̣ tim ra ̀ phương phaṕ phat hiên ́ ̣ va chân đoan s ̀ ̉ ́ ơm, đông th ́ ̀ ời đanh gia ́ ́ đung m ́ ưc đô ́ ̣ tôn̉ thương thi viêc ap dung môt tiêu chuân va môt bang phân loai th ̀ ̣ ́ ̣ ̣ ̉ ̀ ̣ ̉ ̣ ống nhất la ̀rât cân thiêt đê ́ ̀ ́ ̉ đưa ra phương phap điêu tri thich h ́ ̀ ̣ ́ ợp va tiên ̀ lượng căn bênh ̣ naỳ Trên thê gi ́ ơi, n ́ hiêu nghiên c ̀ ưú (NC) chi ra s ̉ ự methyl hoa gen ́ Ras – association domain family 1 isoform A (RASSF1A) xay ra vao ̉ ̀ giai đoan s ̣ ơm cua qua trinh hinh thanh va tiên triên cua ́ ̉ ́ ̀ ̀ ̀ ̀ ́ ̉ ̉ UTTTL, do đo viêc ap dung dâu chuân methyl hoa gen ́ ̣ ́ ̣ ́ ̉ ́ RASSF1A trong UTTTL đang được quan tâm. Ở Viêt Nam, cac NC vê methyl hoa ADN liên ̣ ́ ̀ ́ quan đên UT m ́ ơi đ ́ ược triên khai, các NC vê MBH, hoa mơ miên ̉ ̀ ́ ̃ dich (HMMD) ch ̣ ưa nhiều và chưa có NC đầy đủ nào về đăc điêm ̣ ̉ MBH ung thư biêu mô tuyên tiên liêt (UTBM TTL) theo phân loai ̉ ́ ̀ ̣ ̣ cua Tô ch ̉ ̉ ưc Y tê Thê gi ́ ́ ́ ới (WHO) năm 2004 kết hợp với xác định sự bôc̣ môṭ số dâu ́ ân ́ miễn dich ̣ và tình trạng methyl hóa gen RASSF1A trong UTBM TTL. Trên cơ sở đó, chúng tơi thực hiện đề tài với mục tiêu: a. Nghiên cứu một số đặc điểm mơ bệnh học ung thư biểu mơ tun tiên liêt t ́ ̀ ̣ ại Bệnh viện Quân y 103 theo phân loại của WHO (2004) b. Xác định sự bộc lộ một số dấu ấn miễn dịch, tình trạng methyl hóa gen RASSF1A và đối chiếu với một số đặc điểm mơ bệnh học trong ung thư biểu mơ tun tiên liêt ́ ̀ ̣ 2. Những đóng góp mới của luận án + Nghiên cứu tình trạng methyl hóa gen RASSF1A trong một số trường hợp ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt + Đối chiếu tình trạng methyl hóa gen RASSF1A với một số đặc điểm mô bệnh học trong ung thư biểu mô tuyến tiền liệt + Áp dụng đồng thời các dấu ấn PSA, CK34beta12, p63, CK5/6, CK7 và actin để hỗ trợ chẩn đốn, xác định típ, phân độ mơ học ung thư biểu mơ tuyến tiền liệt 3. Câu truc cua ln an ́ ́ ̉ ̣ ́ Luân an dài 135 trang gôm: Đăt vân đê (2 trang) ̣ ́ ̀ ̣ ́ ̀ ; Chương 1 Tổng quan tài liệu: 40 trang; Chương 2 Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: 20 trang; Chương 3 Kết nghiên cứu: 31 trang; Chương 4 Bàn luận: 40 trang; Kết luận: 2 trang; Kiến nghị: 1 trang; Danh sach bai bao: 1 trang; ́ ̀ ́ Luân an co ̣ ́ ́27 bang ̉ sô liêu ́ ̣ ; 1 sơ đô; ̀ 13 hinh; 25 anh; 148 tai liêu tham khao (2 ̀ ̉ ̀ ̣ ̉ 5 tiêng Viêt, 12 ́ ̣ 3 tiêng Anh) ́ ; Phu luc ̣ ̣ mâu phiêu nghiên c ̃ ́ ưu va Danh sach bênh nhân ́ ̀ ́ ̣ Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Sơ lược về mô học va phân loai ung th ̀ ̣ ư tuyên tiên liêt ́ ̀ ̣ 1.1.1 Mô hoc̣ Tuyên tiên liêt ́ ̀ ̣ gôm cac nang tuy ̀ ́ ến, ống tuyên phân nhánh, ́ ống dẫn chinh va ni ́ ̀ ệu đạo TTL. Cac nang tuy ́ ến và ống tuyên đ ́ ược lot b ́ ởi môt l ̣ ớp tế bào (TB) chế tiết ở bên trong va mơt l ̀ ̣ ớp TB đáy ở bên ngoai. TTL khơng có l ̀ ớp cơ biêu mơ, ̉ cac nang/ông tuyên ́ ́ ́ được bao quanh bởi các TB cơ trơn, nguyên bào sợi và sợi collagen. Long cac ̀ ́ nang/ông tuyên ́ ́ chưa chât tiêt va các th ́ ́ ́ ̀ ể amylacea. Cać ông d ́ ẫn chinh ́ được lót biêu mơ (BM) chuy ̉ ển tiêp ́ 1.1.2. Phân loại mơ bệnh học UTBM TTL theo WHO (2004) UTBM TTL gôm ̀ tip: ́ UTBM tuyên, ́ UTBM đường niêu, ̣ UTBM tê bao vay, UTBM tê bao đay. UTBM tuyên gôm thê tuyên ́ ̀ ̉ ́ ̀ ́ ́ ̀ ̉ ́ nang va thê tuyên ông. ̀ ̉ ́ ́ 1.2. Ung thư biêu mô tuyên tiên liêt, tân san nôi biêu mô va phân ̉ ́ ̀ ̣ ̉ ̣ ̉ ̀ đô Gleason ̣ 1.2.1. Ung thư biêu mô tuyên tiên liêt ̉ ́ ̀ ̣ * Ung thư biêu mô tuyên: ̉ ́ u gơm cac nang/ơng tuy ̀ ́ ́ ến sắp xếp hỗn độn hoăc ̣ rời rạc, tuyến cấu trúc dạng mặt sàng, các tuyến hịa nhập vào nhau hoăc u gơm cac ̣ ̀ ́ đam, cac dai TB. Nhân ́ ́ ̉ TB lớn, tăng sắc, hạt nhân to, rai rac co h ̉ ́ ́ ình nhân chia, co thê thây nhân đa hinh ́ ̉ ́ ̀ thai. Bao t ́ ̀ ương TB sáng hơn TB tuyến lành tính. Long tuyên nang ̀ ́ co thê ch ́ ̉ ưa t ́ inh thể, chất tiêt ́ màu hồng hoăc/ ̣ chất dạng mucin màu xanh nhạt. Co thê thây u ́ ̉ ́ xâm lấn dây TK, u tăng sinh xơ nhày, tuyến UT giống tiểu cầu thận. * UTBM đường niệu nguyên phat́: hâu hêt ̀ ́ làUTBM đ ường niệu kém biệt hóa kêt h ́ ợp với UTBM đường niêu t ̣ ại chỗ. Trong đo,́ có một hình ảnh đăc tr ̣ ưng, đo la: TB u gi ́ ̀ ống TB Paget năm ̀ giữa lớp TB đáy và TB chế tiết. Khi TB u lan vao ̀ ống dẫn, cac ơng ́ ́ dân l ̃ ấp đầy TB u va th ̀ ường có hoại tử dạng trứng cá. Khi TB u xâm lấn vào mơ đệm, phản ứng xơ hóa của mơ đệm rất rõ. * UTBM tế bào vay: ̉ TB ung thư hình đa diện có cầu nối gian bào và chất keratin. Co thê thây câu truc u g ́ ̉ ́ ́ ́ ồm các ống tuyến, nhưng một số TB tuyến biệt hóa TB vảy (UTBM tuyếnTB vảy) * UTBM tế bào đáy: TB u có nhân hình trịn hoặc có góc, chất nhiễm sắc mịn, bào tươ ng hẹp, xếp song song theo hình cọc rào, u hay bị hoại tử. Co thê thây TB u xâm nh ́ ̉ ́ ập mô đệm va dây TK ̀ 1.2.2. Tân san nôi biêu mô tuyên tiên liêt ̉ ̣ ̉ ́ ̀ ̣ Tân san nôi biêu mô tuyên tiên liêt (prostatic intraepithelial ̉ ̣ ̉ ́ ̀ ̣ neoplasia: PIN) la ̀ tôn ̉ thương tăng sinh TB chế tiêt, ́ kem ̀ vơí nhưng thay đôi vê nhân TB nh ̃ ̉ ̀ ư: nhân lơn, chât nhiêm săc đâm va ́ ́ ̃ ́ ̣ ̀ phân bô không đêu, hat nhân l ́ ̀ ̣ ơn, mang nhân day nh ́ ̀ ̀ ưng vân con l ̃ ̀ ớp TB đay. Trong PIN đô cao, tinh chât không đêu cua nhân ro rêt h ́ ̣ ́ ́ ̀ ̉ ̃ ̣ ơn PIN đô thâp ̣ ́ 1.2.3. Phân đô Gleason ̣ UTBM tuyên đ ́ ược chia thanh 5 đô Gleason. Điêm Gleason la ̀ ̣ ̉ ̀ tông đô Gleason cua mâu chiêm diên tich nhiêu nhât (m ̉ ̣ ̉ ̃ ́ ̣ ́ ̀ ́ ẫu nguyên phát) va mâu chiêm diên tich nhiêu th ̀ ̃ ́ ̣ ́ ̀ ứ nhi (m ̀ ẫu thứ phát) 1.3. Xâm lấn và di căn Khối u vùng chuyển tiếp thường xâm lấn về vùng trước của TTL, u vùng ngoại vi thường xâm lấn ra vùng sau bên. Giai đoạn muộn, u xâm lấn vào túi tinh, cổ bàng quang. TB u xâm lấn vào mạch máu và mạch mạch huyết di căn vào hạch limphơ vùng, di căn vào xương chậu, xương cột sống và các tạng 1.4.Hố mơ miễn dịch trong ung thư biêu mơ tun tiên liêt ̉ ́ ̀ ̣ HMMD là một kỹ thuật nhuộm đặc biệt, sử dụng kháng thể (KT) đặc hiệu để xác định sự hiện diện của các kháng ngun (KN) tương ứng trên các lát cắt mơ hoặc trên các loại TB có trong mơ. Ngun tắc: cho KT đặc hiệu lên mơ, nếu trong mơ có KN sẽ có phản ứng kết hợp KN KT. Ứng dụng HMMD trong UTBM TTL nhằm mục đích trợ giup xac đinh: ngn gơc khơi u; xac đinh đăc điêm MBH; phân bi ́ ́ ̣ ̀ ́ ́ ́ ̣ ̣ ̉ ệt tổn thương lanh tinh v ̀ ́ ơi ac tinh; phân biêt UT xâm lân va di căn… ́ ́ ́ ̣ ́ ̀ Trong NC nay chung tôi nhuôm HMMD v ̀ ́ ̣ ơi cac KT khang ́ ́ ́ (PSA, CK34βE12, p63, CK5/6, CK7, actin) 1.5. Methyl hóa ADN trong ung thư tuyên tiên liêt ́ ̀ ̣ 1.5.1. Methyl hóa ADN: methyl hóa ADN là hiện tượng gắn thêm gốc methyl vào nucleotide trên phân tử ADN. Ở ngươi, methyl hóa ̀ ADN xảy ra cytosine đứng trước guanine trong phức hợp CpG tạo thành 5methylcytosine Trong UTTTL gen ưć chế khôí u RASSF1A rât hay bi methyl hoa. ́ ̣ ́ Methyl specific PCR (MSP) la môt ̀ ̣ trong nhưng ph ̃ ương phaṕ dung ̀ đê phat hiên methyl hoa. ̉ ́ ̣ ́ Trong NC naỳ , chung tôi l ́ ựa chon gen ̣ RASSF1A đê phân tich ̉ ́ dâu chuân methyl hoa trong UTBM ́ ̉ ́ tuyến của TTL 1.5.2. Phương pháp MSP phát hiện methyl hóa ADN Đặc điểm của phương pháp: ADN sau khi xử lý bisulfite có thể bao gồm ADN bị methyl hóa có CpG được giữ ngun, ADN khơng bị methyl hóa có CpG đều bị biến đổi thành thymine. Kỹ thuật MSP sử dụng các cặp mồi đặc hiệu thiết kê d ́ ựa vào vùng giàu CpG cho phép phân biệt ADN bị methyl hóa với ADN khơng bị methyl hóa. Chương 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1. Đối tượng 2.1.1. Nhóm bệnh nhân nghiên cứu đăc điêm mơ b ̣ ̉ ệnh học 84 mẫu mơ UTBM TTL (84 bênh nhân) phâu tht n ̣ ̃ ̣ ội soi qua niêu đao t ̣ ̣ ại Bệnh viện Qn y 103 (6/2008 7/2017) được chẩn đốn MBH là UTBM TTL ngun phát. Cac bênh nhân (BN) có bênh an, ́ ̣ ̣ ́ phiếu u cầu XN MBH, khối paraffin lưu giữ mẫu mơ đủ để nghiên cứu Tiêu chuẩn loại trừ: UTTTL thứ phat, UTTTL đa xa tri, dung hoa chât, BN có nhi ́ ̃ ̣ ̣ ̀ ́ ́ ều UT cùng lúc, BN khơng phải là người Việt Nam, UTTTL được phẫu thuật tồn bộ tuyến va c ̀ ác trường hợp khơng đủ các tiêu chuẩn trên 2.1.2. Nhóm bệnh nhân nghiên cứu HMMD Sau khi đã loại 51 trường hợp khơng đủ tiêu chuẩn (mẫu mơ hết dần do ưu tiên cắt nhuộm H.E…), cịn lại gồm: + 31 mâu mơ UTBM tuy ̃ ến ngun phát của TTL + 2 mâu mơ UTBM đ ̃ ường niệu ngun phát của TTL Nhuộm HMMD vơí cać KT khang ́ (PSA, CK 34βE12, p63, CK5/6, CK7, actin). 2.1.3. Nhóm bệnh nhân nghiên cứu methyl hóa gen RASSF1A 20 mâu mơ UTBM tuy ̃ ến đủ tiêu chuẩn xét nghiệm methyl hóa Do ưu tiên cắt nhuộm H.E và HMMD, mẫu UT hết dần nên không đảm bảo chất lượng ADN cho MSP, đó, loại 64 trường hợp khơng đủ tiêu chuẩn Chọn 10 mâu mơ tăng s ̃ ản TTL (10 BN) đã được chẩn đốn xác định bằng MBH để so sánh tỷ lệ methyl hóa gen RASSF1A trong tăng sản TTL với UTBM tuyến của TTL 2.2. Phương pháp nghiên cứu 17 Bảng 3.13. Phân bố tỷ lệ u chứa tinh thể/chất tiết kết đặc màu hồng va u khơng ch ̀ ưa tinh thê/chât ́ ̉ ́ tiết kết đặc màu hồng theo nhom ́ điểm Gleason Điểm Gleason Tinh thê ̉ & chât k ́ ết đặc màu hồng Gleason 24 n=14 (%) Gleason 57 Gleason 810 Tổng (%) n=58 (%) n=10 (%) 14/14 (100%) 55/58 (94,83%) 1/10 (10%) 70 (85,4%) Chứa Không chứa Tổng Spearman 0/14 (0%) 3/58 (5,17%) 14 (100%) 58 (100%) 9/10 (90%) 12 (14,6%) 10 (100%) 82 (100%) rho=0,681; p