Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của các giống nấm Sò Vua và nấm Vân chi để xác định được chủng nấm sinh trưởng phát triển tốt nhất trong điều kiện khí hậu Việt nam, đồng thời xây dựng công nghệ nhân giống các chủng nấm trên ở dạng dịch thể nhằm nâng cao hiệu quả trong sản xuất nấm ăn và nấm dược liệu.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ BÍCH THÙY NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ CƠNG NGHỆ NHÂN GIỐNG, NI TRỒNG NẤM SỊ VUA (PLEUROTUS ERYNGII) VÀ NẤM VÂN CHI (TRAMETES VERSICOLOR) Ở VIỆT NAM Chuyên ngành : Khoa học trồng Mã số : 62.62.01.10 TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ NƠNG NGHIỆP Hà Nội - 2014 Cơng trình hồn thành tại: VIỆN KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM Người hướng dẫn khoa học: GS.TSKH Trịnh Tam Kiệt PGS.TS Nguyễn Trung Thành Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam/ Viện (ghi rõ nơi bảo vệ luận án cấp Viện) Vào hồi phút, ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án thư Viện: Thư Viện Quốc gia Thư Viện Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Thư Viện (ghi tên thư Viện nộp luận án) MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Nấm Sò vua (Pleurotus eryngii (DC.) Quél) loại nấm ăn ngon, giá trị dinh dưỡng dược học cao Quả thể nấm Sị vua có kích thước lớn, hình dạng đẹp, ưu điểm mà nấm gọi “King Oyster mushroom” Nấm Vân chi (Trametes versicolor (L.) Pilat) loại nấm dược liệu có giá trị dược liệu cao, người tiêu dùng nước Trung quốc, Nhật bản, nước Châu Âu, châu Mỹ… ưa chuộng Trong nấm Vân chi có chứa hợp chất polysaccharid liên kết với protein, gồm hai loại chính: PSP (polysaccharide peptide) PSK (polysaccharide krestin) PSP PSK có tác dụng ức chế nhiều loại tế bào ung thư tế bào ung thư biểu mô (carcinoma), tế bào ung thư máu (leukemia), ung thư dày, ung thư đại tràng, ung thư vòm họng, ung thư phổi ung thư vú (P.M.Kidd, 2000) Cùng với phát triển xã hội, nhu cầu thực phẩm người dân ngon mà phải giàu dinh dưỡng, an tồn có giá trị tăng cường sức khỏe Hiện thị trường có nhiều loại nấm ăn nấm dược liệu nhập từ Trung Quốc vào Việt Nam với số lượng hàng trăm tấn/năm, theo nhiều đường khác nhau, nấm khơng có nguồn gốc xuất xứ, thời gian vận chuyển lâu, sử dụng chất bảo quản, gây tâm lý không tốt cho người tiêu dùng Hiện nay, loại nấm ăn - nấm dược liệu nuôi trồng Việt Nam, đ c biệt nấm Sò vua nấm Vân chi nhiều người tiêu dùng quan tâm Sản xuất nấm ăn - nấm dược liệu ngày phát triển mạnh, sở nhân giống nuôi trồng nấm nước ta áp dụng cơng nghệ nhân giống truyền thống (thể rắn), nên cịn tồn số nhược điểm như: tỷ lệ giống nhiễm bệnh cao, thời gian nuôi cấy cấp giống kéo dài trung bình từ 10 - 25 ngày, thời gian từ cấy giống vào nguyên liệu nuôi trồng đến thu hái nấm thương phẩm dài vòng tháng, dẫn đến giá thành giống nấm nấm thương phẩm cao Trong việc nghiên cứu sản xuất giống dịch thể giới đạt số thành tựu đáng kể Việc ứng dụng sản xuất giống dịch thể có hiệu rõ rệt so với giống thể rắn rút ngắn thời gian sinh trưởng - ngày cấp giống, độ cao, chất lượng tốt, tỷ lệ nhiễm giảm, thích hợp cho sản xuất giống nấm nuôi trồng nấm theo qui mô công nghiệp Nhằm góp phần khắc phục hạn chế trên, tạo điều kiện cho nấm ăn - nấm dược liệu nói chung nấm Sị vua - nấm Vân chi nói riêng phát triển có hiệu quả, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm sinh học công nghệ nhân giống, ni trồng nấm Sị vua (Pleurotus eryngii) nấm Vân chi (Trametes versicolor) Việt Nam” Mục tiêu đề tài Nghiên cứu số đ c điểm sinh học giống nấm Sò Vua nấm Vân chi để xác định chủng nấm sinh trưởng phát triển tốt điều kiện khí hậu Việt nam, đồng thời xây dựng công nghệ nhân giống chủng nấm dạng dịch thể nhằm nâng cao hiệu sản xuất nấm ăn nấm dược liệu Ý nghĩa khoa học thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đề tài cung cấp dẫn liệu khoa học tiêu sinh trưởng giống nấm Sò vua (P eryngii) giống nấm Vân chi (T versicolor), nhu cầu dinh dưỡng điều kiện ngoại cảnh tối ưu cho sinh trưởng, phát triển hai giống nấm nuôi cấy dịch thể Chỉ khác biệt di truyền chủng nấm lưu giữ mối tương quan với đ c điểm sinh học nuôi cấy, đồng thời cung cấp dẫn liệu quan sát kính hiển vi điện tử 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết nghiên cứu đề tài giới thiệu cho sản xuất giống nấm Sò vua (P eryngii) giống nấm Vân chi (T.versicolor) thích hợp với điều kiện nuôi trồng Việt Nam; đồng thời xây dựng công nghệ nhân giống dạng dịch thể hai chủng nấm trên, cải thiện khả sinh trưởng giống, rút ngắn thời gian nuôi cấy, tăng suất nấm thương phẩm Cơng nghệ có tính khả thi cao, có khả ứng dụng sản xuất nấm qui mơ cơng nghiệp 3.3 Tính luận án Đã nghiên cứu đ c trưng hình thái bào tử đảm, đ c điểm sinh trưởng phát triển hệ sợi thể nấm; đồng thời đánh giá tính khác biệt di truyền chủng nấm Sò vua nấm Vân chi Trên sở tuyển chọn giống nấm ăn nấm dược liệu thích ứng với điều kiện sản xuất Việt Nam Xây dựng thành cơng quy trình nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể (từ nhân giống cấp → giống trung gian → giống thương phẩm sử dụng để nuôi trồng); thay cho công nghệ truyền thống, rút ngắn thời gian nuôi cấy, tăng suất nấm, nâng cao hiệu kinh tế Bố cục luận án Nội dung luận án thể 134 trang (không kể tài liệu tham khảo phụ lục) Mở đầu: trang; Chương 1: Tổng quan tài liệu: 36 trang; Chương 2: Vật liệu, nội dung phương pháp nghiên cứu: 17 trang; Chương 3: Kết nghiên cứu thảo luận: 75 trang; Kết luận đề nghị: trang Luận án gồm có 26 bảng số liệu, 65 hình, 18 tài liệu tiếng Việt, 78 tài liệu tiếng Anh Phần phụ lục gồm có: Sơ đồ qui trình; Bảng tính tốn hiệu kinh tế công nghệ nhân giống nấm dạng dịch thể so với cơng nghệ truyền thống; hình ảnh giống nấm thể nấm số thí nghiệm; kết phân tích thống kê xử lý số liệu thí nghiệm nội dung có liên quan đến luận án CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm giới Việt Nam 1.1.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm giới 1.1.1.1 Tình hình nghiên cứu nhân giống nấm dịch thể ni trồng nấm Sị vua nấm Vân chi Nấm Sò vua nấm Vân chi loại nấm có giá trị dược học cao nên nhiều nước quan tâm nghiên cứu Các nhà khoa học giới sâu nghiên cứu khả sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi từ ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng bổ sung nguồn cacbon, nguồn đạm, nguồn muối khoáng hàm lượng bổ sung tối ưu chúng Các tác giả nghiên cứu ảnh hưởng pH, nhiệt độ, dinh dưỡng đến sinh trưởng hệ sợi nấm Sò vua nấm Vân chi Nguyên liệu nuôi trồng thành phần dinh dưỡng bổ sung, hàm lượng dinh dưỡng đề cập đến Phương pháp lên men nuôi dưỡng tầng sâu (nhân giống dạng dịch thể) ứng dụng để sản xuất nhiều loại giống nấm ăn nấm dược liệu (Liu, 2010; Diamantopoulou P, 2012; Jonathan, 2009) Hiện công nghệ nhân giống nấm dịch thể phát triển nhiều nước giới, có nhiều cơng trình nghiên cứu đưa thành phần dinh dưỡng bổ sung tối ưu, tốc độ sục khí, ảnh hưởng pH môi trường đến sinh trưởng hệ sợi, thuận lợi khó khăn việc nhân giống nấm dịch thể 1.1.1.2 Nghiên cứu đa dạng di truyền số chủng nấm 1.1.1.3 Tình hình sản xuất nấm giới 1.1.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm nước 1.1.2.1 Nghiên cứu đa dạng di truyền số chủng nấm Ở Việt Nam, kỹ thuật RAPD áp dụng nhiều phân tích di truyền thực vật Một số tác giả sử dụng kỹ thuật RAPD để phân tích đa dạng di truyền đối tượng khác nghiên cứu đa dạng di truyền đối tượng nấm ăn nấm dược liệu chưa nhiều 1.1.2.2 Tình hình nghiên cứu sản xuất nấm Việt Nam Trong năm gần có nhiều cơng trình nghiên cứu tác Trịnh Tam Kiệt, Nguyễn Thị Chính, Phan Huy Dục, Lê Xuân Thám, Lê Thị Hoàng Yến … tác giả tập chung vào nghiên cứu lĩnh vực khác nhiều đối tượng khác Có số cơng trình nghiên cứu giống nấm dịch thể chủ yếu phịng thí nghiệm với mục đích tách chiết sinh khối, chưa có cơng trình ứng dụng lĩnh vực nuôi trồng Trung tâm nghiên cứu phát triển Nấm sản phẩm sinh học - Công ty TNHH Nấm linh chi sản xuất thành cơng nhiều sản phẩm có tác dụng phòng chữa bệnh, tập chung sâu vào cơng trình nghiên cứu khoa học để tạo sản phẩm chức Cùng với việc nghiên cứu tác dụng nấm Vân chi, công ty nghiên cứu qui trình sản xuất sản phẩm từ nấm Vân chi, có dạng sản phẩm từ nấm Vân chi bột sinh khối sợi thể nấm Vân chi Hiện tại, hàng năm công ty cung cấp cho thị trường khoảng 10 sinh khối/năm 2-3 thể/năm Việc nuôi trồng nấm Vân chi chuyển giao cho nhiều sở sản xuất, nguyên liệu sử dụng nuôi trồng mùn cưa có bổ sung dinh dưỡng, nhiệt độ thích hợp để thể nấm sinh trưởng phát triển tử 20 - 250C, thể sinh trưởng thích hợp vào tháng đến tháng dương lịch (Nguyễn Thị Chính, 2011) Một số lồi nấm ăn du nhập vào Việt Nam, có nấm Sị vua, sản phẩm nấm tươi thị trường chủ yếu nhập từ Trung Quốc Nấm Sò vua gọi nấm Đùi gà, Trung tâm Công nghệ Sinh học Thực vật nghiên cứu nuôi trồng theo phương pháp truyền thống, với công thức phối trộn nguyên liệu nuôi trồng bao gồm: 43% phế loại + 43% mùn cưa + 6% bột ngô + % cám gạo + 1% CaCO3 Các công đoạn ni trồng nấm Sị vua đựoc mơ tả chi tiết: sử dụng bao bì túi nilon kích thước 19 x 33cm, trọng lượng bịch nguyên liệu 0,8 kg/bịch Các tác giả xác định điều kiện ngoại cảnh thích hợp để ni trồng nấm Sị vua: nhiệt độ từ 12 -150C; cường độ chiếu sáng từ 800 - 1200 lux; độ ẩm khơng khí 85 - 95%; điều kiện thơng thống tốt Kết nghiên cứu ghi nhận, với điều kiện nuôi trồng suất thực thu nấm Sò vua đạt 35-40% (Đinh Xuân Linh Cộng sự, 2012) Nói chung, số nhà khoa học nước ta tập trung nghiên cứu sâu nấm ăn, đ c biệt nấm dược liệu (nấm Linh chi, Vân chi, Nhộng trùng thảo…), hướng nghiên cứu thực ni cấy mơi trường dịch thể chuyên sâu công nghệ tách chiết sinh khối sợi để tạo sản phẩm chức năng; việc nuôi trồng nấm để thu thể chủ yếu sử dụng nguồn giống thể rắn (giống hạt) thời gian nuôi trồng thường kéo dài 1.2 Giới thiệu chung nấm Sò vua nấm Vân chi Nấm Sò vua (tên tiếng anh King oyster mushroom) có tên khoa học Pleurotus eryngii (DC Fr.) Đây lồi nấm ăn có giá trị dinh dưỡng dược học cao Nấm Vân chi có tên khoa học Trametes versicolor (L.Fr.) Pilat, tên tiếng Anh Yunzhi ho c Turkey tails Trước cịn có tên khoa học khác Coriolus versicolor, Polyporus versicolor Nấm Vân chi loại nấm dược liệu sử dụng nhiều nước châu Á Trong trình sinh trưởng, phát triển, nấm sò Vua nấm Vân chi chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố Các tác nhân ảnh hưởng đến hình thành thể nấm chia làm loại là: Các yếu tố ngoại cảnh nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, độ pH, nồng độ CO2 tốc độ gió vai trò vi sinh vật khác chung sống hệ sinh thái; chất dinh dưỡng cần thiết 1.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi Trong trình sinh trưởng, phát triển, nấm Sị vua nấm Vân chi chịu ảnh hưởng nhiều yếu tố Các tác nhân ảnh hưởng đến hình thành thể nấm chia làm loại: Các yếu tố ngoại cảnh nhiệt độ, độ ẩm, ánh sáng, độ pH, nồng độ CO2 tốc độ gió vai trò vi sinh vật khác chung sống hệ sinh thái; chất dinh dưỡng cần thiết 1.4 Vai trò nấm Sò vua nấm Vân chi Nấm Sò vua nấm Vân chi loại nấm có giá trị dinh dưỡng dược học cao Đ c biệt nấm Vân chi loại nấm nhiều nhà khoa học giới sâu nghiên cứu dược tính nó, có nhiều báo cơng bố tác dụng nấm Vân chi như: điều trị ung thư, tác dụng chống virus HIV, tác dụng tăng cường miễn dịch… Ngồi ra, việc trồng nấm Sị vua nấm Vân chi góp phần vào việc tận thu phụ phẩm từ nơng nghiệp, góp phần bảo vệ mơi trường CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu 2.1.1 Giống nấm: Gồm giống nấm Sị vua giống nấm Vân chi có xuất xứ khác nhau, lưu giữ Trung tâm Công nghệ Sinh học Thực vật - Viện Di truyền Nơng nghiệp 2.1.2 Vật tư hóa chất * Vật tư sử dụng tách chiết ADN - 23 mồi RAPD sử dụng nghiên cứu đa dạng sinh học nấm Sò vua, 10 mồi RAPD sử dụng cho nấm Vân chi * Các hóa chất sử dụng thí nghiệm nhân giống cấp giống cấp trung gian + Glucose, CNM, pepton, MgSO4.7H2O, KH2PO4, vitamin B1,… xuất xứ từ công ty Merck * Nguyên liệu sử dụng thí nghiệm nhân giống thương phẩm nuôi trồng + Glucose, CNM, pepton, MgSO4.7H2O, KH2PO4, vitamin B1,… xuất xứ từ Trung Quốc + Một số nguyên liệu thóc tẻ, cám gạo, rơm rạ, mùn cưa 2.1.3 Các điều kiện, trang thiết bị sử dụng thí nghiệm 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Một số đặc tính sinh học nấm Sị vua nấm Vân chi 2.2.2 Đánh giá khác biệt di truyền nấm Sò vua nấm Vân chi 2.2.3 Nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể 2.2.4 Sử dụng giống dịch thể để nuôi trồng nấm Sò vua, nấm Vân chi 2.3 Phư ng pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm Sị vua nấm Vân chi Thí nghiệm 1: Sinh trưởng phát triển nấm Sò vua nấm Vân chi ni cấy khiết Thí nghiệm 2: Đánh giá sinh trưởng phát triển nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng 2.3.2 Đánh giá khác biệt di truyền nấm Sò vua nấm Vân chi 2.3.2.1 Phương pháp tách chiết ADN 2.3.2.2 Phương pháp PCR 2.3.2.3 Phương pháp phân tích số liệu 2.3.3 Các thí nghiệm nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể 2.3.3.1 nghiên cứu nhân giống cấp nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi mơi trường dịch thể Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi mơi trường dịch thể Thí nghiệm 5: Ảnh hưởng thành phần môi trường dịch thể tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp Thí nghiệm 6: Ảnh hưởng chế độ lắc đến sinh trưởng giống nấm Sị vua nấm Vân chi mơi trường dịch thể Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng tỷ lệ giống gốc đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trường dịch thể Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng thời gian ni cấy đến sinh trưởng giống nấm Sò vua Vân chi dạng dịch thể 2.3.3.2 Nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua giống nấm Vân chi dạng dịch thể cấp trung gian Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng chế độ sục khí tới sinh trưởng giống nấm Sị vua nấm Vân chi cấp trung gian Thí nghiệm 10: Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian 2.3.3.3 Nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua giống nấm Vân chi thương phẩm dạng dịch thể Thí nghiệm 11: Ảnh hưởng thành phần môi trường dịch thể tới sinh trưởng hệ sợi nấm Sò vua nấm Vân chi thương phẩm 2.3.4 Các thí nghiệm sử dụng giống nấm dịch thể để ni trồng nấm Sị vua, nấm Vân chi Thí nghiệm 12: Đánh giá ảnh hưởng nguồn giống nguyên liệu nuôi trồng đến sinh trưởng nấm Sị vua nấm Vân chi Thí nghiệm 13: Ảnh hưởng tuổi giống dịch thể đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu ni trồng Thí nghiệm 14 : Ảnh hưởng lượng giống thương phẩm đến sinh trưởng phát triển nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng 2.4 Phư ng pháp chuẩn bị môi trường 2.5 Phư ng pháp bố trí thí nghiệm - Các thí nghiệm bố trí lần nhắc lại tiến hành sau: + Đối với giống cấp1: bình tam giác 500ml/ cơng thức, bình tam giác chứa 200ml mơi trường Tổng cộng 15 bình tam giác/1 cơng thức thí nghiệm + Đối với giống cấp trung gian: bình duran 5000ml/cơng thức, bình duran chứa 3000 ml mơi trường Tổng cộng 15 bình duran /1 cơng thức thí nghiệm + Đối với giống nấm thương phẩm: 30 lít mơi trường/1 bioreator/ cơng thức + Trong giai đoạn ni trồng: cơng thức thí nghiệm bố trí 100 bịch Tổng số 300 bịch ngun liệu/cơng thức thí nghiệm; theo dõi tiêu sinh trưởng 50 bịch/cơng thức thí nghiệm, lấy mẫu theo điểm đường chéo, điểm 10 bịch * Các tiêu theo dõi - Theo dõi đ c điểm sinh trưởng nuôi cấy khiết - Theo dõi đ c điểm sinh trưởng giai đoạn giống dịch thể + Kích thước KLC( khuẩn lạc cầu)(mm) + Sinh khối sợi (g/1000ml) + Mật độ KLC *Nấm Sò vua (1) số lượng KLC từ 10-40 KLC/1ml (2) số lượng KLC từ 41-80 KLC/1ml (3) số lượng KLC từ 81-120 KLC/1ml (4) số lượng KLC từ 121-150 KLC/1ml (5) số lượng KLC 150 KLC/1ml *Nấm Vân chi (1) số lượng KLC từ 10-30 KLC/1ml (2) số lượng KLC từ 31-60 KLC/1ml (3) số lượng KLC từ 61-90 KLC/1ml (4) số lượng KLC từ 91-120 KLC/1ml (5) số lượng 120 KLC/1ml - Theo dõi đ c điểm sinh trưởng giai đoạn nuôi trồng 2.6 Phư ng pháp xử lý số liệu Kết nghiên cứu xử lý theo phương pháp thống kê sinh học phần Excel phần mềm IRRISTAT 4.0 giai đoạn mọc giai đoạn sau sợi phủ kín bề m t môi trường, dù để điều kiện nhiệt độ, điều kiện ánh sáng không thấy hình thành mầm mống thể ni cấy khiết chủng nấm Vân chi 3.1.5 Nghiên cứu sinh trưởng hình thành thể nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng Kết cho thấy: thời điểm tháng - tháng 4: Giai đoạn hệ sợi thể chủng nấm Vân chi sinh trưởng tốt, sâu bệnh Hai chủng nấm Vân chi Tra-1 Tra-2 có nhiều đ c điểm giống nhau: thời gian mọc sợi, thời gian hình thành thể, kích thước, màu sắc, suất thể tươi chủng nấm Vân chi nghiên cứu thời điểm năm Bảng 3.6: Ảnh hưởng thời điểm nuôi trồng đến kích thước thể suất nấm Vân chi Giống Thời gian Chỉ tiêu KT dọc mũ nấm (mm) Tra-1 Tháng 11 - tháng Tháng - tháng Tháng - tháng Tháng - tháng 10 CV% LSD0,05 Tra-2 Tháng 11 - tháng Tháng - tháng Tháng -tháng Tháng - tháng 10 CV% LSD0,05 KT ngang Số lớp mũ Trọng lượng mũ nấm nấm cụm nấm tư i bịch (mm) (gam) 54,2 16,2 42,8 6,3 4,78 78,4 18,3 56,7 5,7 5,86 6,8 2,6 5,4 7,6 0,75 81,8 42,6 65,4 4,5 5,72 54,6 15,8 42,1 6,7 5,05 77,9 18,0 55,8 4,2 4,25 6,6 2,5 5,5 4,6 0,45 80,9 42,4 65,2 6,3 7,92 3.1.6 Đặc điểm hiển vi bào tử nấm Vân chi Trên kính hiển vi điện tử qt có độ phóng đại 2.000 lần, bào tử nấm Vân chi thưa Ở độ phóng đại 15.000 lần chủng Tra-1 Tra-2 có đảm hình thành tiểu bính có đính đảm bào tử điển hình 3.2 Đánh giá khác biệt di truyền chủng nấm Sò vua nấm Vân chi 3.2.1 Sự khác biệt di truyền chủng nấm Sị vua Phân tích đa dạng di truyền 11 Bảng 3.8 Hệ số tư ng đồng di truyền mẫu nấm nghiên cứu Mẫu 1.00 0.80 0.70 0.71 0.67 0.64 1.00 0.79 0.79 0.70 0.67 1.00 0.85 0.68 0.66 1.00 0.75 0.66 1.00 0.68 1.00 Qua kết phân tích mối quan hệ di truyền, thiết lập sơ đồ mối quan hệ di truyền mẫu nấm nghiên cứu Hệ số tương đồng di truyền có giá trị thấp 0,64 hai mẫu số số Hệ số tương đồng cao hai mẫu số số với giá trị 0,85 C p mẫu số số có hệ số tương đồng di truyền cao 0,80 3.2.2 Sự khác biệt di truyền chủng nấm Vân chi Kết điện di sản phẩm PCR mẫu nấm Vân chi với 10 mồi nghiên cứu, mồi thu số lượng băng DNA kích thước băng giống Kết phù hợp hoàn toàn với kết nghiên cứu đ c tính sinh học chủng nấm Vân chi chủng có đ c điểm sinh trưởng hệ sợi thể giống 3.3 Kết nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể Từ kết đánh giá đ c tính sinh học khác biệt m t di truyền chủng nấm nghiên cứu, đề tài tuyển chọn chủng nấm Sò vua E1 chủng nấm Vân chi Tra-1 chủng nấm có triển vọng Việt Nam Để thúc đẩy sản xuất phát triển bền vững giống nấm tuyển chọn, đề tài tiếp tục nghiên cứu công nghệ nhân giống dịch thể sử dụng nguồn giống để nuôi trồng nhằm rút ngắn thời gian sinh trưởng, tăng sinh lực giống suất nấm thương phẩm ết uả nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp dạng dịch th 3.3.1.1 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trư ng dịch thể Kết thu nghiên cứu ảnh hưởng nhiệt độ đến q trình sinh trưởng nấm Sị vua E1 nấm Vân chi tra-1 môi trường dịch thể, chúng tơi nhận thấy nấm Sị vua ni mơi trường dịch thể khoảng nhiệt độ 26 ± 1°C; nấm Vân chi nuôi khoảng nhiệt độ 30 ± 1°C thích hợp nhất, kết phù hợp với nghiên cứu sinh trưởng hệ sợi chủng nấm nuôi cấy khiết 12 Bảng 3.9 Ảnh hưởng nhiệt độ đến sinh trưởng giống nấm Sị vua giống nấm Vân chi mơi trường dịch thể Chỉ tiêu Kích thước KLC (mm) Mật độ KLC Sinh khốisợi (g/1000ml) 18 ± 1°C 0,44 9,7 22 ± 1°C 0,76 12,8 26 ± 1°C 1,28 18,6 30 ± 1°C 1,65 17,9 CV% 3,4 5,2 LSD0,05 0,67 1,43 22 ± 1°C 0,72 13,8 26 ± 1°C 0,94 17,6 30 ± 1°C 1,18 21,5 34 ± 1°C 1,26 15.6 CV% 2,7 3,8 LSD0,05 0,52 1,24 Giống Nhiệt độ Nấm Sò vua E1 Nấm Vân chi Tra-1 3.3.1.2 Ảnh hưởng pH đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trư ng dịch thể Kết cho thấy khoảng pH ban đầu từ - thấy SK sợi nấm tăng, môi trường ban đầu có giá trị pH mật độ KLC SK sợi nấm Sò vua lớn (18,6g/1000ml) Khi giá trị pH SK sợi bắt đầu có dấu hiệu giảm Tại giá trị pH 8, SK sợi giảm mạnh (14,1g/1000ml) Như chủng nấm Sò vua SK sợi lớn môi trường ban đầu có giá trị pH SK sợi nấm Vân chi đạt cao (27,6 g/1000ml dịch) nuôi cấy điều kiện pH 6, SK sợi nấm Vân chi sai khác nhiều mơi trường có giá trị pH pH Khi pH mật độ KLC SK giảm rõ rệt (17,8g/1000ml) 13 Bảng 3.10 Ảnh hưởng pH ban đầu tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi mơi trường l ng Giống Nấm Sị vua E1 Nấm Vân chi Tra-1 Giá trị pH Giá trị pH sau Giá trị pH kết th c Mật độ Sinh khối sợi ban đầu khử tr ng trình nuôi KLC (g/1000ml) 2,93 2,02 9,8 3,95 2,84 4,95 3,82 5,95 4,84 6,96 5,74 7,98 6,58 14,6 16,1 18,6 16,3 14,1 CV% 4,0 LSD0,05 1,05 2,94 1,95 3,93 2,74 4,96 3,67 5,95 4,75 6,96 5,71 7,97 6,66 1 4 10,3 14,2 17,4 27,6 26,3 17,8 CV% 4,8 LSD0,05 1,57 3.3.1.3 Ảnh hưởng thành ph n dinh dư ng đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trư ng dịch thể Số liệu bảng 3.11 cho thấy: giống nấm Sò vua sinh trưởng tốt công thức môi trường (2,5 g CNM + 2,5 g pepton + 0,5 g MgSO4.7H2O + g KH2PO4 + 100 g nấm tươi + 15 glucose); giống nấm Vân chi sinh trưởng tốt công thức môi trường (2 g CNM + g pepton + 0,2 g MgSO4.7H2O + g KH2PO4 + 15 g glucose + 1,5mg thiamin) 14 Bảng 3.11 Ảnh hưởng thành phần môi trường dịch thể đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi Giống Cơng Kích thước Mật độ SK sợi nấm thức KLC (mm) KLC (g/1000ml) CT1 1,96 18,8 CT2 0,87 CT3 0,84 CT4 1,08 Nấm Sò vua E1 Nấm 28,5 29,2 CT5 1,67 CV% 3,4 2,2 LSD0.05 0,78 0,98 CT1 1,43 CT2 1.32 CT3 1,28 CT4 1.3 CT5 1,46 CV% 4,5 4,8 LSD0.05 0,11 2,12 Vân chi Tra-1 20,4 24,8 15,4 22,8 35,2 30,1 18,4 Đặc điểm KLC Trơn bóng, phân tán lỏng Trơn bóng, dịch liên kết dạng huyền phù Trơn bóng, dịch liên kết dạng huyền phù Trơn bóng, dịch liên kết dạng huyền phù Trơn bóng, phân tán lỏng Dịch trong, KLC có tua, mật độ thưa Dịch trong, KLC có tua, mật độ trung bình Dịch trong, KLC có tua, mật độ dày đ c Dịch trong, KLC có tua, mật độ dày Dịch trong, KLC có tua, mật độ thưa 3.3.1.4 Ảnh hưởng chế độ lắc tới sinh trưởng phát triển giống nấm Sò vua nấm Vân chi Kết bảng 3.12 cho thấy giống nấm Sò vua cho SK sợi cao (26,9 gam/1000ml) chế độ lắc 160 vòng/ phút; giống nấm Vân chi cho sinh khối sợi cao nhất (36,2 gam/1000ml) chế độ lắc 140 vòng/phút 3.3.1.5 Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy tới sinh trưởng hệ sợi giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trư ng dịch thể 15 Kết cho thấy tỷ lệ giống cấy ảnh hưởng nhiều đến mật độ KLC, kích thước KLC SK sợi nấm Sò vua nấm Vân chi Khi sử dụng giống mẹ với tỷ lệ 30% ống giống gốc, thu giống nấm có mật độ KLC cao, kích thước KLC (1,23 -1,05 mm), SK sợi cao so với mức cấy giống khác (32,4 - 34,7 g/1000ml) Bảng 3.13: Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi Chỉ tiêu Tỷ lệ Giống giống (% ống gốc) 10 Nấm Sò vua E1 Nấm Vân chi Tra-1 Kích thước KLC (mm) 2,34 Mật SK sợi độ (g/1000ml) KLC 24,6 20 1,82 28,1 30 1,23 32,4 40 0,60 CV% 2,9 2,3 LSD0.05 0,82 1,24 10 1,55 20 28,4 Đặc điểm Sợi hình cầu, số trơn, số có tua gai, phân tán Sợi hình cầu, số trơn, số có tua gai, phân tán Sợi hình cầu, trơn, phân tán Sợi hình cầu nhỏ, trơn, có kết dính mạnh 22,8 KLC to, phân tán, có tua 1,37 28,6 30 1,05 34,7 40 0,63 29,2 KLC to, đều, phân tán, có tua sợi KLC trung bình, có kết dính, có tua sợi KLC nhỏ, kết dính mạnh, có tua sợi CV% 3,1 LSD0.05 0,67 3,5 1,89 3.3.1.6 Ảnh hưởng th i gian nuôi tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi môi trư ng dịch thể SK sợi có tăng trưởng rõ thời gian 48 đến 72 (Nấm Sò vua đạt từ 21,2 -28,2 gam/1000ml; nấm Vân chi đạt từ 18,4 -32,8 gam/1000ml), sang 72 SK nấm Sò vua nấm Vân chi tăng không đáng kể, SK đạt cực đại 96 (nấm Sò vua đạt 28,9 gam/1000ml; nấm Vân chi đạt 33,7 gam/ 1000ml) 16 Hình 3.59 Đường cong sinh trưởng giống nấm Sị vua E1 giống nấm Vân chi Tra-1 dạng dịch thể 3.3.2 ết nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian dạng dịch thể 3.3.2.1 Ảnh hưởng chế độ sục hí tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian Bảng 3.15 Ảnh hưởng cường độ sục khí đến sinh trưởng giống nấm Sị vua Vân chi cấp trung gian Giống Nấm Sò Vua E1 Nấm Vân chi Tra-1 Chỉ tiêu Mức độ cấp khí (V/V/M) 0,4 Kích thước KLC (mm/ KLC) 1,74 Mật độ sợi nấm SK sợi (g/1000ml) 19,6 0,5 1,58 26,2 0,6 1,30 32,1 0,7 1,06 34,8 33,6 0,8 0,57 CV% 4,3 2,0 LSD0.05 0,98 1,06 0,4 1,62 21,8 0,5 1,47 28,9 0,6 1,02 35,2 0,7 0,81 34,6 0,8 0,54 32,8 CV% LSD0.05 3,3 0,65 3,3 1,84 Đối với nấm Sò vua SK sợi đạt cao 34,8 gam/1000 ml dịch giống cấp khí mức 0,7 V/V/M Giống nấm Vân chi nuôi cấy chế độ sục khí 0,6 V/V/M, SK đạt 35,2 gam/1000 ml dịch giống 17 3.3.2.2 Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian Bảng 3.16 Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy đến sinh trưởng giống nấm Sò vua Vân chi cấp trung gian Giống Chỉ Tiêu Tỷ lệ giống (%) Nấm Sò Vua E1 10 15 CV% LSD0.05 Nấm Vân Chi Tra-1 10 15 CV% LSD0.05 Kích thước KLC (mm) Mật độ KLC SK sợi (g/1000ml) 1,72 1,54 1,28 0,88 0,55 3,3 0,72 1,58 1,41 1,08 0,86 0,52 4,7 0,93 4 19,8 28,2 33,7 32,8 30,6 3,3 1,72 20,6 26,8 32,4 35,6 32,5 2,7 1,47 Giống nấm Sò vua cấy mật độ 7% giống cho SK sợi cao (33,7 gam/1000ml), KLC đồng đều, dịch khơng bị kết vón Nấm Vân chi cấy 10% giống cho SK sợi cao (35,6 gam/100ml) 3.3.3 ết nghiên cứu nhân giống nấm thư ng ph m (nấm Sò vua, nấm Vân chi) dạng dịch thể Giống nấm Sò vua sinh trưởng tốt công thức môi trường 3: g CNM + g pepton + 0,5 g MgSO4.7H2O + g KH2PO4 + 15 glucose, sinh khối sợi đạt cao thời điểm 72 -84 (27,627,9gam/1000ml); giống nấm Vân chi sinh trưởng tốt công thức môi trường II: 1,5 g CNM + g pepton + 0,2 g MgSO4.7H2O + g KH2PO4 + 15 g glucose + 1mg thiamin, sinh khối sợi đạt cao thời điểm 72 - 84 (30,2 - 30,9 gam/1000ml) 18 Bảng 3.17: Ảnh hưởng thành phần môi trường dịch thể đến sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi thư ng phẩm Giống nấm Nấm Sị vua E1 Nấm Vân chi Tra-1 Cơng thức CV% LSD0.05 CV% LSD0.05 48 13,7 14,5 16,8 16,9 3,5 1,1 15,8 16,2 16,4 16,7 3,9 1,3 60 15,9 18,3 20,5 20,7 3,1 1,2 20,6 21,7 22,7 22,6 1,6 0,7 SK sợi (g/1000ml) 72 84 19,8 21,2 22,6 23,4 25,7 27,6 23,9 25,6 3,7 2,7 1,7 1,4 24,5 26,4 28,8 30,2 28,7 30,0 28,4 29,8 1,6 1,3 0,9 0,8 96 21,8 23,7 27,9 25,9 1,8 0,9 26,8 30,9 30,8 30,2 4,4 2,6 120 21,9 25,7 27,7 25,8 2,8 1,4 26,7 30,7 30,5 30,2 3,9 2,3 3.4 Sử dụng giống dịch thể để ni trồng nấm Sị vua nấm Vân chi 3.4.1 Ảnh hưởng nguồn giống nguyên liệu nuôi trồng đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi 3.4.2 Ảnh hưởng ngun liệu ni trồng đến hình thành phát triển thể nấm Sò vua nấm Vân chi 3.4.3 Ảnh hưởng công thức phối trộn đến ích thước thể suất nấm Sò vua, nấm Vân chi Nghiên cứu ảnh hưởng loại nguyên liệu đến khả hình thành, phát triển thể suất nấm Sò vua nấm Vân chi, kết trình bày bảng 3.22 bảng 3.23 Các kết thu trình theo dõi sinh trưởng, phát triển nấm Sị vua cơng thức ni trồng khác nhau, với nguồn giống dịch thể giống truyền thống cho thấy: Việc bổ sung dinh dưỡng trình ni trồng nấm Sị vua có ảnh hưởng rõ rệt đến sinh trưởng phát triển suất nấm, với mức bổ sung 20% cám gạo cho kích thước thể to nhất, suất nấm cao Sử dụng giống dịch thể rút ngắn 12 - 14 ngày nuôi trồng công thức tương ứng 19 Bảng 3.22: Ảnh hưởng công thức phối trộn đến kích thước thể suất nấm Sị vua tư i Giống Giống nấm Sò vua E1 dịch thể Giống nấm Sị vua E1 thể rắn Cơng thức CV% LSD0.05 CV% LSD0.05 ĐK mũ nấm (mm) 28,9 36,7 42,5 48,8 52,5 52,6 2,8 2,2 27,7 35,2 40,4 46,8 50,4 50,3 2,8 2,1 Công thức KT dọc mũ (mm) ĐK cuống nấm (mm) 20,7 25,6 29,8 31,6 34,8 34,5 3,2 1,7 20,1 24,3 27,9 30,4 32,6 32,5 6,1 3,1 Chiều dài cuống nấm (mm) 98,7 105,8 121,6 134,7 148,4 143,2 3,4 7,6 96,5 102,6 120,1 132,4 146,2 143,4 2,5 5,5 Hiệu sinh học (%) 36,8 48,9 52,7 58,5 67,4 67,2 2,3 2,3 33,5 41,7 46,8 51,4 59,4 59,1 2,7 2,3 Bảng 3.23 Ảnh hưởng công thức phối trộn đến kích thước thể suất nấm Vân chi tư i Giống CV% LSD0.05 Giống nấm Vân chi Tra-1 thể rắn CV% LSD0.05 Giống nấm Vân chi Tra-1 dịch thể 31,5 48,7 60,8 68,2 67,4 65,6 3,4 3,5 30,7 46,8 60,2 67,8 67,5 65,9 3,9 3,96 KT ngang mũ nấm (mm) 43,8 65,4 72,5 85,4 84,7 81,8 1,9 2,4 43,2 64,8 71,9 85,1 85,3 81,5 3,7 4,8 20 Số lớp mũ nấm cụm Hiệu sinh học (%) 3,6 5,7 6,2 7,8 7,8 7,5 5,3 0,6 3,4 5,2 5,9 7,3 7,7 7,6 4,4 0,49 5,7 12,8 19,6 24,5 24,3 24,3 4,9 1,6 5,2 12,3 18,9 24,1 24,0 23,8 3,2 1,03 Nuôi trồng nấm Vân chi công thức (65% mùn cưa, 24% phế loại, 10% cám gạo, 1% CaCO3) đạt suất cao Tùy vào điều kiện cụ thể lựa chọn nguồn giống dịch thể hay nguồn giống thể rắn, với nấm Vân chi chênh lệch hiệu sinh học sử dụng nguồn giống khơng có khác biệt nhiều, có khác biệt thời gian sinh trưởng 3.4.4 Ảnh hưởng tuổi giống dịch thể đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng Khác với nghiên cứu khác mục đích thu SK sợi, nên dừng lại việc theo dõi SK sợi Trong nghiên cứu chúng tôi, mục đích cuối thu thể nấm, SK sợi chưa hoàn toàn đánh giá giống tốt hay xấu, bước nghiên cứu dùng giống thể rắn làm đối chứng, sử dụng giống dịch thể nuôi thời gian từ 48 - 120h để nuôi trồng thử nghiệm Kết nghiên cứu cho thấy: sử dụng giống dịch thể giúp giảm bớt thời gian để sợi lan kín nguyên liệu thời gian thể sớm hơn, suất cao so với giống thể rắn Khi sử dụng nguồn giống thể để ni trồng nấm Sị vua thời gian hệ sợi sinh trưởng kín bịch nguyên liệu 35 ngày, thời gian thu thể 54 ngày, hiệu suất sinh học đạt 58,4% Trong sử dụng nguồn giống dịch thể 72 - 96h tuổi để nuôi trồng nấm Sị vua thời gian hệ sợi sinh trưởng kín bịch nguyên liệu giảm xuống 24 ngày, thời gian thu thể 38 - 39 ngày, hiệu suất sinh học đạt 65,8 - 67,3% Tương tự, sử dụng nguồn giống nấm Vân chi dịch thể 72h- 96h tuổi rút ngắn thời gian ni sợi xuống cịn 25 ngày so với thể rắn 31 ngày; sử dụng nguồn giống nấm Vân chi dịch thể 72h - 84h tuổi đạt hiệu sinh học 25,1%, sử dụng nguồn giống nấm Vân chi thể rắn hiệu sinh học đạt 24,4% 21 3.4.5 Ảnh hưởng lượng giống thư ng phẩm đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng Bảng 3.25 Ảnh hưởng lượng giống cấy đến sinh trưởng nấm Sò vua nấm Vân chi nguyên liệu nuôi trồng Lượng giống Tỷ lệ nhiễm bệnh (%) T sợi mọc kín giá thể (ngày) Txuất thể (ngày) Hiệu sinh học (%) 10 9,8 31 42 44,3 15 7,6 27 40 53,7 Giống nấm 20 5,7 23 38 66,4 25 5,7 23 38 66,5 Sò vua 30 5,8 23 38 66,4 E1 CV% 4,6 LSD0,05 1,25 Giống nấm Giống nấm Vân chi Tra-1 10 9,3 34 47 13,4 15 6,8 29 42 19,2 20 5,2 25 39 24,6 25 5,4 25 38 24,7 30 5.5 25 37 24,8 CV% 4,3 LSD0,05 1,89 Để đạt hiệu kinh tế cao chọn lượng dịch giống để cấy vào nguyên liệu nuôi trồng 20 ml dịch/bịch với giống nấm 3.4.6 Hiệu kinh tế sử dụng giống dịch thể để ni trồng nấm Sị vua nấm Vân chi Hiệu kinh tế việc sử dụng nguồn giống nấm Sò vua giống nấm Vân chi dạng dịch thể để nuôi trồng cho nguyên liệu khơ trình bày Bảng 3.26 22 Sử dụng nguồn giống dịch thể để nuôi trồng rút ngắn thời gian bắt đầu cho thu hái thể nấm Sò vua từ 58 ngày xuống 45 ngày; thời gian bắt đầu cho thu hái thể nấm Vân chi từ 56 ngày xuống 45 ngày mà cho cho lãi cao Sử dụng giống dịch thể ni trồng nấm Sị vua cho lãi (5.790 triệu đồng/tấn nguyên liệu); tỷ suất lãi so với đồng vốn đạt 0,4; lãi tăng so với đối chứng sử dụng nguồn giống thể rắn 75,99% Đối với nấm Vân chi sử dụng nguồn giống dịch thể nuôi trồng cho lãi (3,530 triệu đồng/tấn nguyên liệu); tỷ suất lãi so với đồng vốn đạt 0,32; lãi tăng so với đối chứng sử dụng nguồn giống thể rắn 41,77% Bảng 3.26 Hiệu kinh tế ni trồng nấm Sị vua nấm Vân chi nguồn giống dịch thể Đơn vị tính: 1000 đồng Nguồn giống Giống nấm Sị vua dạng dịch thể Giống nấm Sò vua thể rắn (ĐC) Giống nấm Vân chi dạng dịch thể Giống nấm Vân chi thể rắn (ĐC) Chi phí Chi phí tiền nguyên công liệu Tổng chi Năng suất ( g/tấn nguyên liệu) Giá bán Tổng thu Lãi Tỷ suất lãi so vốn đầu tư 6.000 8.430 14.430 404,4 50 20.220 5.790 0,40 7.000 7.530 14.530 356,4 50 17.820 3.290 0,23 5.000 6.170 11.170 36,75 400 14.700 3.530 0,32 6.000 5.970 11.970 36,15 400 14.460 2.490 0,21 Lãi tăng so với ĐC (%) 75,99 41,77 Tóm lại, sử dụng giống nấm Sò vua giống nấm Vân chi dạng dịch thể để nuôi trồng rút ngắn chu kỳ nuôi trồng so với phương pháp truyền thống từ 11-13 ngày; với chi phí đầu tư cho việc ni trồng nấm giống dịch thể thấp so với sử dụng giống thể rắn mànăng suất nấm cao phương pháp nên đầu tư áp dụng cho sản xuất quy mô công nghiệp 23 KẾT LUẬN 4.1 Kết luận Kết đánh giá tiêu sinh trưởng, phát triển giống nấm Sò vua (Pleurotus eryngii) giống nấm Vân chi giai đoạn nuôi cấy khiết giai đoạn nuôi trồng, chọn chủng nấm Sò vua E1 giống nấm Vân chi Tra1 có triển vọng, thích nghi với điều kiện sinh thái Việt Nam Điều kiện tối ưu để nhân giống nấm Sò vua E1 dịch thể giai đoạn giống cấp 1: nhiệt độ nuôi sợi 26±1ºC; mơi trường có giá trị pH 6; cơng thức mơi trường 5; chế độ lắc 160 vịng/phút; tỷ lệ giống gốc sử dụng để cấy 30% ống giống gốc/200ml môi trường; thời gian nuôi giống 96 Trong giai đoạn giống trung gian: tốc độ sục khí 0,7 lít khơng khí/lít mơi trường/phút; tỷ lệ giống cấp1 dùng để cấy giống trung gian 7% giống so với môi trường Giai đoạn giống thương phẩm: công thức mơi trường thích hợp để nhân giống nấm Sị vua E1 thương phẩm công thức Điều kiện tối ưu để nhân giống nấm Vân chi Tra-1 (Trametes versicolor) dịch thể giai đoạn giống cấp 1: nhiệt độ 30±1ºC; mơi trường có giá trị pH 6; cơng thức mơi trường 3; chế độ lắc 140 vịng/phút, tỷ lệ giống gốc dùng để cấy 30% ống giống gốc/200ml môi trường; thời gian nuôi giống 84 Giai đoạn giống trung gian: tốc độ sục khí 0,6 lít khơng khí/lít mơi trường/phút; tỷ lệ giống cấp dùng để cấy giống trung gian 10% giống so với môi trường; môi trường nhân giống nấm Vân chi Tra-1 thương phẩm công thức Nuôi trồng nấm Sò vua E đạt hiệu cao công thức 5; tuổi giống tối ưu từ 84h - 96h tuổi; lượng giống thích hợp 20ml dịch giống/bịch nguyên liệu Sử dụng giống dịch thể để nuôi trồng nấm Sị vua rút ngắn 13 ngày/chu kỳ ni trồng Nuôi trồng nấm Vân chi Tra-1 đạt hiệu cao công thức 4; tuổi giống tối ưu từ 72h - 84h tuổi; lượng giống cấy thích hợp 20ml dịch giống/bịch nguyên liệu Sử dụng giống dịch thể để nuôi trồng nấm Vân chi rút ngắn 11 ngày/chu kỳ nuôi trồng 4.2 Kiến nghị Từ kết nghiên cứu thu được, chúng tơi kính đề nghị tiếp tục nghiên cứu để hồn thiện cơng nghệ hơn; ứng dụng công nghệ nhân giống dạng dịch thể vào sản xuất để phát triển nấm Sò vua E1 nấm Vân chi Tra-1 theo qui mô công nghiệp, nhằm hướng tới sản xuất nấm đạt hiệu cao bền vững 24 CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Nguyễn Thị Bích Thùy, Trịnh Tam Kiệt (2010), Nghiên cứu số đ c điểm sinh học kỹ thuật nuôi trồng nấm Vân chi (Trametes versicolor), Di truyền học ứng dụng – Chuyên san Công nghệ sinh học, số 6: 55-58 Nguyễn Thị Bích Thùy, Cồ Thị Thùy Vân, Trịnh Tam Kiệt (2012), Nghiên cứu cơng nghệ nhân giống nấm Sị Vua (Pleurotus eryngii) dạng dịch thể Di truyền học ứng dụng – Chuyên san Công nghệ sinh học, số 8: 88-95 Nguyễn Thị Bích Thuỳ, Cồ Thị Thùy Vân, Đinh Xuân Linh, Trịnh Tam Kiệt, Nguyễn Trung Thành(2013), “Nghiên cứu nhân giống nấm Vân chi (Trametes vesicolor) dạng dịch thể”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nơng nghiệp Việt Nam, số 41: 67-73 Nguyễn Thị Bích Thùy, Khuất Hữu Trung, Ngô Xuân Nghiễn, Cồ Thùy Vân, Trịnh Tam Kiệt (2013), “Nghiên cứu đ c điểm sinh học đa dạng di truyền số chủng nấm Sị vua (Pleurotuseryngii)”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Nông nghiệp Việt Nam, số 41: 73-80 ... nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian Thí nghiệm 10: Ảnh hưởng tỷ lệ giống cấy tới sinh trưởng giống nấm Sò vua nấm Vân chi cấp trung gian 2.3.3.3 Nghiên cứu nhân giống nấm Sò vua giống nấm Vân. .. dụng giống dịch thể để ni trồng nấm Sị vua, nấm Vân chi 2.3 Phư ng pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm Sị vua nấm Vân chi Thí nghiệm 1: Sinh trưởng phát triển nấm Sò vua nấm. .. nghiệm 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Một số đặc tính sinh học nấm Sò vua nấm Vân chi 2.2.2 Đánh giá khác biệt di truyền nấm Sò vua nấm Vân chi 2.2.3 Nhân giống nấm Sò vua nấm Vân chi dạng dịch thể