Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hoàng đằng ở xã sa bình, huyện sa thầy, tỉnh kon tum

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌ VÀ TÊN: HỒ TRƯƠNG QUỲNH CHÂU TÊN ĐỀ TÀI: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU HOÀNG ĐẰNG Ở XÃ SA BÌNH, HUYỆN SA THẦY, TỈNH KON TUM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC ĐÀ NẴNG - 2013 ********** *************** ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA TÊN ĐỀ TÀI: XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN CHO DƯỢC LIỆU HOÀNG ĐẰNG Ở XÃ SA BÌNH, HUYỆN SA THẦY, TỈNH KON TUM KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC SINH VIÊN THỰC HIỆN : HỒ TRƯƠNG QUỲNH CHÂU LỚP : 09CHD GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN : TH.S ĐỖ THỊ THÚY VÂN ĐÀ NẴNG - 2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA HÓA Độc lập - Tự - Hạnh phúc ********** ******************* NHIỆM VỤ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: HỒ TRƯƠNG QUỲNH CHÂU Lớp: 09CHD Tên đề tài: “Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hồng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum” Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị chính: - Nguyên liệu: Thân hồng đằng thu hái từ xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum vào tháng 11 năm 2012 - Hóa chất: Các dung mơi hữu cơ: etanol 960, đietyl ete Hố chất vơ cơ: KOH 10%, Mg/HCl đặc, dung dịch HCl, Na2CO3, dung dịch FeCl3, nước cất… - Dụng cụ thiết bị chính: Bộ chiết soxhlet, máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS, máy đo sắc kí khí kết hợp với khối phổ GC-MS, kính hiển vi Olympus CX21, tủ sấy, lị nung, cân phân tích, cốc thuỷ tinh, bình tam giác, ống nghiệm, bếp điện, bếp cách thuỷ, cốc sứ, loại pipet, bình định mức, bình hút ẩm, giấy lọc… Nội dung nghiên cứu: - Giải phẫu thân hoàng đằng - Xác định số tiêu hóa lý độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại dược liệu hồng đằng - Định tính, định lượng ankaloit dược liệu hoàng đằng - Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu với dung môi khác phản ứng với thuốc thử - Xác định thành phần hóa học dịch chiết hồng đằng GC-MS - Thử hoạt tính sinh học cắn chiết dược liệu hoàng đằng Giáo viên hướng dẫn: ThS Đỗ Thị Thúy Vân Ngày giao đề tài: 1/10/2012 Ngày hoàn thành: 30/4/2013 Giáo viên hướng dẫn (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày 22 tháng năm 2013 LỜI CẢM ƠN Đề tài “Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hoàng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum” thực từ tháng 11 năm 2012 đến tháng năm 2013 Trong suốt trình thực đề tài nhận nhiều giúp đỡ thầy cô giáo, bạn bè nhân dân địa phương nơi thu hái mẫu Lời đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến thạc sĩ Đỗ Thị Thúy Vân, người ln tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn thầy Nguyễn Văn Din thầy quản lí phịng thí nghiệm Hóa dược - Hóa hữu - Hóa phân tích - Hóa lí đại học Sư Phạm giúp đỡ tơi hồn thành đề tài Xin chân thành cảm ơn giúp đỡ nhiệt tình người bạn nhân dân địa phương xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum Một lần xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Hồ Trương Quỳnh Châu MỤC LỤC MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đối tượng phạm vi nghiên cứu Các phương pháp nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu lý thuyết 3.2 Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 10 Bố cục đề tài 10 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 11 1.1 Giới thiệu hoàng đằng 11 1.2 Một số nghiên cứu thành phần hoá học hoàng đằng 12 1.2.1 Thành phần hóa học 12 1.2.2 Một số nghiên cứu chung ankaloit 13 1.2.3 Các ankaloit có hồng đằng tìm thấy 14 1.3 Giá trị sử dụng hoàng đằng 14 1.3.1 Y dược dân gian 14 1.3.2 Các nghiên cứu dược học hoàng đằng 15 1.3.3 Các sản phẩm thuốc từ hoàng đằng có mặt thị trường 15 1.4 Sự nhầm lẫn hoàng đằng với số khác 16 CHƯƠNG 2: NHỮNG NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 17 2.1 Nguyên liệu, dụng cụ, hoá chất 17 2.1.1 Thu gom nguyên liệu 17 2.1.2 Xử lí nguyên liệu 17 2.1.3 Thiết bị - dụng cụ hóa chất 18 2.2 Giải phẫu thực vật 18 2.3 Các phương pháp xác định tiêu hóa lí 19 2.3.1 Xác định độ ẩm 19 2.3.2 Xác định hàm lượng tro phương pháp tro hóa mẫu 19 2.3.3 Xác định hàm lượng số kim loại hoàng đằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 20 2.4 Định tính, định lượng ankaloit 21 2.4.1 Định tính ankaloit 21 2.4.2 Định lượng ankaloit 21 2.5 Phân tích sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hồng đằng với dung môi khác phản ứng với thuốc thử 22 2.6 Phương pháp chiết Soxhlet xác định thành phần hợp chất dịch chiết hoàng đằng phương pháp GC-MS 22 2.6.1 Phương pháp chiết Soxhlet 22 2.6.2 Xác định thành phần hợp chất dịch chiết hoàng đằng phương pháp GC-MS 23 2.7 Thử hoạt tính sinh học 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 23 3.1 Kết giải phẫu thân hoàng đằng 23 3.2 Kết xác định số tiêu hóa lí hoàng đằng 24 3.2.1 Độ ẩm 24 3.2.2 Hàm lượng tro 25 3.2.3 Hàm lượng số kim loại 26 3.3 Kết định tính, định lượng ankaloit dược liệu hồng đằng 26 3.3.1 Kết định tính 27 3.3.2 Kết định lượng 27 3.4 Kết khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hoàng đằng với dung môi khác phản ứng với thuốc thử 28 3.5 Kết xác định thành phần hóa học hợp chất dịch chiết hoàng đằng GC-MS 30 3.6 Thử hoạt tính kháng sinh cắn chiết thu từ hoàng đằng 31 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 32 Kết luận 32 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 DANH MỤC CÁC BẢNG Tên bảng Trang Bảng 1.1 Phân biệt hoàng đằng vàng đắng Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm 18 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro 18 Bảng 3.3 Bảng hàm lượng số kim loại hoàng đằng 19 Bảng 3.4 Kết định lượng ankaloit 21 Bảng 3.5 Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết hồng đằng với dung mơi khác 22 Bảng 3.6 Thành phần hóa học cắn chiết hoàng đằng 24 Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính kháng sinh 25 DANH MỤC CÁC HÌNH Tên hình Trang Hình 1.1 Cây hồng đằng Hình 1.2 Lá hồng đằng Hình 1.3 Hoa hồng đằng Hình 1.4 Quả hoàng đằng Hình 1.5 Đại Tràng Hồn Hình 1.6 Minh Nhãn Khang Hình 2.1 Một số hình ảnh hồng đằng 10 Hình 2.2 Thân hồng đằng phơi khơ 11 Hình 2.3 Bột hồng đằng 11 Hình 2.4 Bộ chiết Soxhlet 16 Hình 3.1 Giải phẫu thân hồng đằng 17 Hình 3.2 Dược liệu hồng đằng ánh sáng tử ngoại 20 Hình 3.3 Dịch chiết hồng đằng kính hiển vi 20 Hình 3.4 Kính hiển vi OLYMPUS CX21 20 Hình 3.5 Phổ đồ GC – MS thành phần hóa học hợp chất dịch chiết hồng đằng 23 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ thời xa xưa, trình đấu tranh với thiên nhiên, bệnh tật, để bảo vệ sống, người biết sử dụng nguồn thảo dược làm thuốc chữa bệnh vô giá trị Ngày nay, xu hướng sử dụng sản phẩm thuốc có nguồn gốc từ thiên nhiên để phịng trị bệnh ngày trở nên phổ biến Dược điển nước khu vực châu Á Việt Nam, Hàn Quốc, Trung Quốc… có chuyên luận dược liệu, số chuyên luận dược liệu đưa vào Dược điển Mỹ, châu Âu Vì vậy, tổ chức Y tế giới nhấn mạnh việc đảm bảo chất lượng nguồn dược liệu làm thuốc vơ quan trọng Cây hồng đằng nguồn nguyên liệu phong phú, dễ kiếm, mọc hoang dại nhiều vùng núi Việt Nam [3], [9] Các ankaloit tách chiết từ hồng đằng có hoạt tính sinh học cao Từ lâu chất dùng y học dân gian để chữa bệnh đường tiêu hóa, bệnh truyền nhiễm chúng thành phần thuốc an thần, thuốc cai nghiện [10] Trên giới việc nghiên cứu hoàng đằng trọng, tính đến có hàng trăm cơng trình nghiên cứu hoàng đằng bao gồm lĩnh vực chiết tách, xác định thành phần hoá học hợp chất hữu cơ, ứng dụng công nghệ thực phẩm, công nghệ dược phẩm Người Việt Nam dùng bột hoàng đằng để chữa trị số bệnh đau mắt, lỵ, bệnh gan, chữa viêm ruột, tiêu chảy [1], [3], [5] Cho đến nước ta chưa có nhiều nghiên cứu mang tính thành phần, tính chất, khả ứng dụng, cơng nghệ khai thác hợp chất hố học có hồng đằng Và đặc biệt nghiên cứu xây dựng tiêu chuẩn chất lượng, đồng thời xây dựng phương pháp thử để đánh giá tiêu chuẩn cịn hạn hẹp Đây vấn đề đáng quan tâm nghiên cứu nhằm góp phần quy hoạch, khai thác, chế biến ứng dụng sản phẩm hồng đằng cách có hiệu quả, khoa học Xuất phát từ thực tế này, đề tài “Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hồng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum” thực với mục tiêu sau: Giải phẫu thân hoàng đằng Xác định số tiêu hóa lý độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại dược liệu hoàng đằng Định tính, định lượng ankaloit dược liệu hồng đằng Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu với dung môi khác phản ứng với thuốc thử Xác định thành phần hóa học dịch chiết hồng đằng GC-MS Thử hoạt tính sinh học cắn chiết dược liệu hoàng đằng Đối tượng phạm vi nghiên cứu Thân Hoàng Đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum dịch chiết từ thân hồng đằng dung mơi khác Các phương pháp nghiên cứu 3.1 Nghiên cứu lý thuyết Phương pháp nghiên cứu hợp chất tự nhiên, tổng quan tài liệu đặc điểm vi phẫu, hình thái thực vật, thành phần hố học, ứng dụng hoàng đằng 3.2 Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm  Phương pháp lấy mẫu: Mẫu thu hoàng đằng mọc hoang dại xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum Thu lấy riêng rẽ phận khác cây: lá, thân Tùy theo mục đích nghiên cứu mà mẫu xử lý theo cách khác nhau: - Đối với mẫu nghiên cứu giải phẫu cắt lấy phần thân có kích thước phù hợp đem ngâm vào dung môi cồn 900 - Đối với nguyên liệu dùng để nghiên cứu hoạt chất, thu lấy phận cần thiết, rửa sạch, cắt nhỏ, phơi khô nghiền thành bột mịn Đem bột dược liệu bảo quản túi polietylen  Phương pháp giải phẫu thực vật: Giải phẫu hình thái thực vật theo phương pháp Trần Công Khánh [6], [7]  Phương pháp trọng lượng: xác định độ ẩm, hàm lượng tro thân hoàng đằng  Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS: xác định hàm lượng kim loại thân hoàng đằng  Phương pháp định tính, định lượng ankaloit theo Dược điển Việt Nam IV [2] Hình 3.1 Giải phẫu thân hoàng đằng Ngoài thân lớp bần (phần hình 3.1) với nhiều lớp tế bào xếp đặn, màng dày tạo thành vòng đồng tâm, bắt màu xanh với thuốc nhuộm xanh metylen Tiếp theo lớp tế bào mô mềm vỏ (phần hình 3.1) gồm tế bào màng mỏng có hình gần trịn, hình trứng hay hình chữ nhật, bắt màu đỏ với cacmin Phía tế bào mơ cứng tập trung tạo thành vịng mơ cứng (phần hình 3.1), liên tục uốn lượn theo bó libe, gỗ Phần gồm tế bào thành dày, khoang rộng Tiếp đến bó libe cấp (phần hình 3.1) , thường bị khơ lại khoang trống Tương ứng với bó libe cấp bó gỗ cấp (phần hình 3.1) Bó gỗ gồm nhiều mạch gỗ to, nhuộm màu xanh Rải rác có tế bào mơ cứng (phần hình 3.1) Giữa bó libe gỗ có tia ruột xếp đặn thành hình nan quạt (phần hình 3.1) Mơ mềm ruột (phần hình 3.1) gồm tế bào tròn hay nhiều cạnh bắt màu đỏ 3.2 Kết xác định số tiêu hóa lí hoàng đằng 3.2.1 Độ ẩm Thân hoàng đằng khô tiến hành xác định độ ẩm Số lượng mẫu lấy để xác định độ ẩm mẫu Độ ẩm chung độ ẩm trung bình mẫu Kết xác định độ ẩm trung bình mẫu trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm STT m1(g) m2(g) m3(g) W(%) 44,896 2,008 46,774 6,481 34,181 2,035 36,084 6,493 30,046 2,067 32,339 6,472 43,055 2,024 44,948 6,483 45,483 2,011 47,364 6,456 Wtb (%) 6,480 Từ bảng 3.1 cho thấy độ ẩm trung bình thân hồng đằng khơ 6,480% Kết hồn toàn phù hợp theo chuyên luận dược liệu hoàng đằng Dược điển Việt Nam IV 14% [2] 3.2.2 Hàm lượng tro Lấy mẫu hoàng đằng xác định độ ẩm trên, nung lò nung nhiệt độ 400-4500C để xác định hàm lượng tro Hàm lượng tro lấy trung bình từ mẫu Kết xác định hàm lượng tro trung bình trình bày bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro STT m1 (g) m2 (g) m4 (g) % tro (%) 44,896 2,008 44,957 3,038 Hàm lượng 34,181 2,035 34,249 3,342 tro trung 30,046 2,067 30,479 3,532 bình: 43,055 2,024 43,129 3,656 3,449% 45,483 2,011 45,557 3,680 Vậy hàm lượng tro trung bình là: 3,449% Căn theo chuyên luận dược liệu hoàng đằng Dược điển Việt Nam IV hàm lượng tro khơng q 5% hàm lượng tro hồng đằng thu hoạch xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum hoàn toàn phù hợp Trong thành phần tro vơ có mặt muối số kim loại K, Na, Ca, Fe, Cu, Pb, Zn… Sự có mặt kim loại ảnh hưởng đến tính chất dịch chiết từ thân hồng đằng với phương pháp chiết khác 3.2.3 Hàm lượng số kim loại Tro thu sau nung mẫu mang hòa tan dung dịch axit HCl:HNO3 (1:3) lỗng định mức nước cất bình định mức 50ml, sau xác định hàm lượng kim loại máy quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS trung tâm khí tượng thủy văn quốc gia đài khí tượng thủy văn khu vực Trung Trung bộ, số 660, Trưng Nữ Vương, Đà Nẵng Kết phân tích trình bày bảng 3.3 Bảng 3.3 Bảng hàm lượng số kim loại hoàng đằng Kim loại Hàm lượng kim loại (mg/kg) TCVN 3572 - 81 theo định Quyết định số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y tế ngày 4/4/1998 (mg/kg) Fe 3,125 5,0 Hg 0,025 0,4 Pb 0,055 Căn vào định số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y tế ngày 4/4/1998 (mg/kg) số tiêu chuẩn vệ sinh thực phẩm cho hàm lượng kim loại nặng tối đa cho phép rau khô Fe: 5mg/kg, Hg: 0,4 mg/kg, Pb: 2mg/kg hàm lượng kim loại thân hồng đằng khơng ảnh hưởng đến sức khoẻ người hàm lượng kim loại nặng thân hoàng đằng Fe: 3,125mg/kg, Hg: 0,025mg/kg, Pb: 0,055mg/kg 3.3 Kết định tính, định lượng ankaloit dược liệu hồng đằng 3.3.1 Kết định tính - Kết quan sát lát cắt dược liệu ánh sáng tử ngoại bước sóng 365nm thể hình 3.2 Hình 3.2 Dược liệu hoàng đằng ánh sáng tử ngoại quan sát Dưới ánh sáng tử ngoại, lát cắt dược liệu hoàng đằng phát quang màu vàng tươi - Kết quan sát dịch chiết hoàng đằng với dung mơi etanol 90% kính hiển vi thể hình 3.3 Hình 3.3 Dịch chiết hồng đằng Hình 3.4 Kính hiển vi OLYMPUS CX21 kính hiển vi Khi quan sát dịch chiết hồng đằng với dung mơi etanol 90%, kính hiển vi thấy xuất tinh thể có hình dạng hình 3.3 Kết thu từ thí nghiệm định tính theo chuyên luận dược liệu hoàng đằng Dược điển Việt Nam IV 3.3.2 Kết định lượng Kết định lượng ankaloit dịch chiết dược liệu hoàng đằng với dung môi etanol 96% thể bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết định lượng ankaloit Khối lượng bột hoàng Độ ẩm (%) Khối lượng Khối lượng Hàm lượng bột hoàng cắn thu ankaloit (%) 0,255 2,720 đằng ban đầu đằng trừ (g) độ ẩm (g) 10,023 6,480 9,374 Hàm lượng ankaloit dược liệu hoàng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum 2,720% Kết phù hợp với hàm lượng ankaloit dược liệu hoàng đằng chuyên luận dược liệu Dược điển Việt Nam IV lớn 1% 3.4 Kết khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hồng đằng với dung môi khác phản ứng với thuốc thử Kết khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hồng đằng với dung môi khác phản ứng với thuốc thử thể bảng 3.5 Bảng 3.5 Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết hồng đằng với dung mơi khác Kết Kết định tính dịch chiết định tính chung Nhóm hợp chất Thuốc thử Cách thực Phản ứng dương tính Dịch Dịch chiết cồn Dịch chiết nước chiết Không Thủy Không Thủy ete thủy phân phân thủy phân phân Chất béo Nhỏ dd lên giấy Vết mờ H2SO4 đđ Xanh dương Carotenoid hay xanh lục (+) Có Khơng (-) có ngã sang xanh dương Tinh dầu Bốc tới cắn Có mùi thơm Khơng (-) Ankaloit Thuốc thử có Kết tủa chung (-) (+) (+) Có ankaloit Coumarin Phát quang Phát quang kiềm mạnh KOH 10% Dung dịch Anthranoid kiềm có màu Khơng (-) (-) (+) (+) (-) có Có hồng tới đỏ Flavonoid Mg/HCl đđ Dung dịch có màu hồng tới Có (-) (+) đỏ Tanin FeCl3 Xanh rêu hay (-) (-) (-) (-) Khơng (-) (+) Có xanh đen Saponin Lắc mạnh Tạo bọt bền (-) Axit hữu Na2CO3 Sủi bọt (+) (+) Có Chất khử Thuốc thử Tủa đỏ gạch (+) (+) Có Fehling Đánh giá theo mức sau: (-) Khơng có Ghi chú: () Nghi ngờ Có thể có phản ứng khơng thực (+) Có Khơng có mặt nhóm hợp chất dịch chiết Qua khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết hồng đằng phản ứng hóa học nhận thấy dược liệu hồng đằng có chất béo, ankaloit, anthranoid, flavonoid, saponin, axit hữu cơ, chất khử 3.5 Kết xác định thành phần hóa học hợp chất dịch chiết hoàng đằng GC-MS Kết định danh cấu tử có cắn chiết dược liệu hoàng đằng GC-MS thể phổ đồ hình 3.5: Hình 3.5 Phổ đồ GC-MS thành phần hóa học hợp chất dịch chiết hồng đằng Qua phân tích phổ đồ GC-MS đối chiếu thư viện phổ chuẩn, bước đầu thống kê số cấu tử với hàm lượng đáng kể với thời gian lưu hàm lượng trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6 Thành phần hóa học cắn chiết hoàng đằng STT tR Hàm lượng(%) Định danh KLPT (m/z) Công thức cấu tạo 12,154 2,82 Cycloheptasilox H C H3C CH3 CH3 CH3 O O O Si Si Si Si CH3 519 H3C H3C ane tetradecamethyl- O Si O Si H3C H3C H3C H3C 12,361 1,98 Phenol, 3,5-bis O O Si H3C CH3 OH 206 (1,1dimethylethyl) H3C H3C 25,601 13,53 1,2- 278 O OH CH3 CH3 CH3 CH3 O benzendicarboxy O lic acid, mono CH3 CH3 (2-ethylhexyl) este 37,757 1,49 Berberine 336 H3C H3C O O N O O 37,879 2,51 Palmatine 342 H3C H3C O O N OCH OCH Như vậy, hỗn hợp cấu tử thu từ dịch chiết hồng đằng, có hai ankaloit palmatine chiếm tỉ lệ 2,51% berberine chiếm tỉ lệ 1,49% Hai ankaloit có tác dụng chữa tiêu chảy, lỵ đặc biệt ức chế tụ cầu khuẩn liên cầu khuẩn 3.6 Thử hoạt tính kháng sinh cắn chiết thu từ hoàng đằng Bột hoàng đằng tiến hành chiết Soxhlet với dung môi etanol 960 thời gian giờ, dịch chiết thu có màu vàng đậm Cô đuổi dung môi thu cắn chiết Gửi mẫu cắn chiết tới phòng thử hoạt tính sinh học – Viện hóa học Việt Nam, 18 Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Kết thử hoạt tính kháng sinh trình bày bảng 3.7 Bảng 3.7 Kết thử hoạt tính kháng sinh Theo nghiên cứu trước hoạt chất hồng đằng có tác dụng ức chế tụ cầu khuẩn (Staphylococcus) liên cầu khuẩn (Streptococcus) Trong đề tài này, tiến hành thử thêm hoạt tính kháng sinh cắn chiết hồng đằng với vi khuẩn Gram (+) Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, vi khuẩn Gram (-) Salmonella enterica, Escherichia, Pseudomonas aeruginosa nấm Candida albican kết cắn chiết hồng đằng khơng thể hoạt tính kháng sinh với chủng vi sinh vật KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Qua trình nghiên cứu thực nghiệm, rút số kết luận xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hoàng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum sau: - Đã giải phẫu thân hoàng đằng xác định cấu trúc tế bào thân hoàng đằng - Hồng đằng khơ có: độ ẩm trung bình 6,480%; hàm lượng tro 3,449%, hàm lượng kim loại nặng (Fe: 3,125mg/kg, Hg: 0,025mg/kg, Pb: 0,055mg/kg) phù hợp với TCVN 3572 - 81 theo Quyết định số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y tế ngày 4/4/1998 - Đã tiến hành định tính, định lượng ankaloit hồng đằng với hàm lượng ankaloit 2,720% kết phù hợp với chuyên luận dược liệu hoàng đằng theo Dược điển Việt Nam IV - Khảo sát sơ thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hoàng đằng với dung môi khác phản ứng với thuốc thử: Liebermann-Burchard, thuốc thử chung ankaloit (Mayer, Dragendorff, Bouchardat), Fehling, KOH 10%, Mg/HCl đặc, dung dịch FeCl3, dung dịch HCl, Na2CO3, xác định sơ có mặt chất béo, ankaloit, anthranoid, flavonoid, saponin, acid hữu cơ, chất khử dược liệu hoàng đằng - Thành phần hóa học dịch chiết dược liệu hồng đằng với dung môi etanol 960 định danh phương pháp GC-MS, kết xác định số hợp chất Cycloheptasiloxane tetradecamethyl (2,82%); Phenol 3,5-bis (1,1- dimethylethyl) (1,98%); 1,2benzendicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) este (13,53%); Berberine (1,49%); Palmatine (2,51%) - Chúng tơi tiến hành thử hoạt tính kháng sinh cắn chiết hoàng đằng với vi khuẩn Gram (+) Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, vi khuẩn Gram (-) Salmonella enterica, Escherichia, Pseudomonas aeruginosa nấm Candida albican kết cho thấy cắn chiết hồng đằng khơng thể hoạt tính kháng sinh với chủng vi sinh vật Kiến nghị Do thời gian nghiên cứu có hạn nên đề tài giới hạn việc xây dựng tiêu chuẩn hồng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum Trên địa phận lãnh thổ nước ta, cịn nhiều vùng với trữ lượng lớn hồng đằng mọc hoang, việc nghiên cứu cần mở rộng địa bàn nhằm tận dụng triệt để nguồn dược liệu dồi nước ta Tiến hành nghiên cứu, chạy sắc kí cột để phân lập cấu tử tinh khiết palmatine, berberin từ hồng đằng để tìm hiểu hoạt tính sinh học nghiên cứu phản ứng chuyển hóa chúng TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Đái Duy Ban (2008), Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học phịng chống số bệnh cho người vật ni, NXB Khoa học tự nhiên & công nghệ, Hà Nội [2] Bộ Y tế (2010), Dược điển Việt Nam IV, NXB Y học, Hà Nội [3] Bộ Y tế (2007), Dược liệu học tập II, NXB Y học, Hà Nội, tr.9-111 [4] Nguyễn Văn Đàn - Nguyễn Viết Trực (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, NXB Y học, TP Hồ Chí Minh [5] Phạm Hồng Hộ (1999), Cây Cỏ Việt Nam- Quyển I, NXB Trẻ [6] Trần Công Khánh (1980), Kỹ thuật hiển vi dùng nghiên cứu thực vật dược liệu, NXB Y học, Hà Nội [7] Trần Cơng Khánh (1981), Thực tập hình thái giải phẫu thực vật, NXB Đại học Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội [8] Lê Lim Long, Phạm Hồng Ngọc, Lâm Ngọc Thiềm, Dùng phương pháp tính lượng tử để xác định cấu trúc 7,8- Dehydro-Columbin ( Fibleucin) tách chiết từ Hoàng Đằng [9] Đỗ Tất Lợi (2003), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học [10] Phạm Hoàng Ngọc, Phạm Thị Hồng Minh, Lâm Ngọc Thiềm, Trần Văn Vinh (1997), Tuyển tập báo cáo toàn văn Hội Nghị toàn quốc đề tài nghiên cứu khoa học lĩnh vực hóa lý hóa lý thuyết, Hà Nội, tr.89 [11] Nguyễn Đình Triệu (2007), Các phương pháp phổ hóa học hữu hóa sinh, NXB Đại học quốc gia Hà Nội [12] Bùi Xuân Vững (2010), Phân tích cơng cụ hóa học, Đà Nẵng Tiếng nước [13] Irokawa cộng (1986), Phytochemistry 28, tr.905-908 [14] Young Min Kim, Yu Min Ha, Young Chu Jin, Young Chun Jin (2009), Palmatine from Coptidis rhizoma reduces ischemia-reperfusion-mediated acute myocardial injury in the rat, Food and Chemical Toxicology Internet [15] http://thuocdongduoc.vn/cay-thuoc-vi-thuoc/278-cay-thuoc-vi-thuoc/923hoang- dang.html [16] http://www.ngoquythich.com/?cat_id=6&id=9 [17] http://trungmyjsc.com.vn/san-pham/minh-nhan-khang.aspx ... dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hồng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum? ?? Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ thiết bị chính: - Ngun liệu: Thân hồng đằng thu hái từ xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh. .. phẩm hồng đằng cách có hiệu quả, khoa học Xuất phát từ thực tế này, đề tài ? ?Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hoàng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum? ?? thực với mục tiêu sau: Giải phẫu... Sinh viên hoàn thành nộp báo cáo cho Khoa ngày 22 tháng năm 2013 LỜI CẢM ƠN Đề tài ? ?Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hồng đằng xã Sa Bình, huyện Sa Thầy, tỉnh Kon Tum? ?? thực từ tháng 11 năm 2012