Nghiên cứu thu cao chiết methanol, định danh thành phần hóa học dịch chiết hexane và phân lập chất tinh khiết của cây giảo cổ lam ở núi ngọc linh, tỉnh quảng nam

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM NGUYỄN NHƯ QUỲNH NGHIÊN CỨU THU CAO CHIẾT METHANOL, ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT HEXANE VÀ PHÂN LẬP CHẤT TINH KHIẾT CỦA CÂY GIẢO CỔ LAM Ở NÚI NGỌC LINH, TỈNH QUẢNG NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA HỌC ĐÀ NẴNG, NĂM 2020 TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU CAO CHIẾT METHANOL, ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT HEXANE VÀ PHÂN LẬP CHẤT TINH KHIẾT CỦA CÂY GIẢO CỔ LAM Ở NÚI NGỌC LINH, TỈNH QUẢNG NAM Sinh viên thực : Nguyễn Như Quỳnh Chuyên ngành : Hóa học MSSV : 314054161144 Lớp : 16CHDE Người hướng dẫn : GS.TS Đào Hùng Cường ĐÀ NẴNG, NĂM 2020 LỜI CAM ĐOAN Em xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng em Các số liệu kết nêu luận văn trung thực Tác giả luận văn NGUYỄN NHƯ QUỲNH LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, rèn luyện bắt đầu thực khóa luận tốt nghiệp Trường Đại học Sư phạm – Đại học Đà Nẵng nay, em nhận nhiều giảng dạy, bảo giúp đỡ tận tình q thầy cơ, gia đình bạn bè Do đó, em xin phép bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc Lời đầu tiên, em xin chân thành cảm ơn GS.TS Đào Hùng Cường nhiệt tình hướng dẫn, giúp đỡ, cung cấp kiến thức động viên em suốt thời gian nghiên cứu thực đề tài khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn đến q Thầy Cơ Khoa Hóa học với tri thức tâm huyết để truyền đạt vốn kiến thức quý báu cho em suốt thời gian năm học tập trường thầy cơng tác phịng thí nghiệm khoa Hóa nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em thời gian nghiên cứu thực khóa luận vừa qua Em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ln bên cạnh giúp đỡ, động viên sống học tập Bước đầu làm quen với nghiên cứu khoa học, kiến thức kinh nghiệm nhiều hạn chế nên luận văn khơng tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp, bổ sung thầy cô, anh chị bạn để em thu nhận thêm nhiều kiến thức kinh nghiệm cho thân sau Cuối cùng, em xin chúc quý thầy cô sức khỏe, hạnh phúc thành công sống nghiệp giảng dạy Em xin chân thành cảm ơn! Đà Nẵng, ngày tháng năm 2020 Sinh viên Nguyễn Như Quỳnh MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục tiêu nghiên cứu Đối tượng phạm vi nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Bố cục luận văn CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu Giảo cổ lam 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Phân loại thực vật 1.1.3 Phân bố địa lý 1.1.4 Đặc điểm hình thái 1.1.5 Vi phẫu 1.1.6 Công dụng Giảo cổ lam 1.1.7 Liều lượng cách dùng 1.1.8 Một số chế phẩm từ giảo cổ lam thị trường 1.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam giới Giảo cổ lam Gynostemma pentaphyllum 10 1.2.1 Tình hình nghiên cứu Việt Nam 10 1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 12 1.3 Thành phần hóa học Giảo cổ lam 13 1.3.1 Saponin 13 1.3.2 Flavonoid 16 1.3.3 Các nhóm chất khác Giảo cổ lam 18 1.4 Nghiên cứu lý thuyết thực nghiệm 18 1.4.1 Chiết hồi lưu 18 1.4.2 Phương pháp phổ hồng ngoại IR 19 1.4.3 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ 19 CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị nghiên cứu 22 2.1.1 Nguyên liệu 22 2.1.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu 23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.2.1 Các phương pháp xác định tiêu hóa lý 24 2.2.2 Phương pháp chiết mẫu thực vật 26 2.2.3 Phương pháp định danh thành phần hóa học cao chiết 27 2.3 Các sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 27 2.3.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm thu cao chiết hexane từ bột giảo cổ lam 27 2.3.2 Sơ đồ phân lập cao chiết hexane 28 2.4 Mơ tả quy trình thực nghiệm phịng thí nghiệm 33 2.4.1 Mơ tả quy trình chiết cao methanol 33 2.4.2 Mô tả quy trình chiết trích ly với n-hexan 36 2.5 Khảo sát điều kiện chiết tối ưu với dung môi methanol 37 2.5.1 Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng 38 2.5.2 Khảo sát thời gian chiết 38 CHƯƠNG : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Xác định số số vật lý 39 3.1.1 Độ ẩm 39 3.1.2 Hàm lượng tro 39 3.1.3 Hàm lượng kim loại 40 3.2 Khảo sát điều kiện chiết hồi lưu với dung môi methanol 41 3.2.1 Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng 41 3.2.2 Khảo sát thời gian chiết 41 3.3 Xác định thành phần hóa học cao chiết hexane phương pháp GC – MS 42 3.4 Xác định công thức cấu tạo hợp chất tinh khiết GP1 47 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC BẢNG Số hiệu bảng Tên bảng Trang 1.1 Ưu điểm nhược điểm phương pháp chiết hồi lưu 19 2.1 Các hóa chất sử dụng đề tài 23 3.1 Kết khảo sát độ ẩm mẫu bột nguyên liệu khô 39 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro mẫu bột thí nghiệm 3.3 Kết khảo sát hàm lượng số kim loại nặng mẫu 40 3.4 Kết khảo sát rắn – lỏng 41 3.5 Kết khảo sát thời gian chiết 42 3.6 Một số thành phần hóa học cao chiết hexane 3.7 Số liệu phổ NMR hợp chất GP1 chất tham khảo 39 – 40 44 – 46 53 DANH MỤC CÁC HÌNH Số hiệu Tên hình Trang 1.1 Cây giảo cổ lam Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino 1.2 Quả chín giảo cổ lam Gynostemma pentaphyllum 1.3 Cây giảo cổ lam (Thất diệp đảm) 1.4 Cây giảo cổ lam (Ngũ diệp sâm) 1.5 Thực phẩm bảo vệ sức khỏe Giảo cổ lam Tuệ Linh 10 1.6 Trà túi lọc Giảo cổ lam Tuệ Linh 10 1.7 Viên thìa canh Giảo cổ lam 10 1.8 Trà túi lọc Giảo cổ lam Nam Trà My 10 1.9 Cấu trúc dammarane 14 1.10 Cấu trúc khung dammaran với mạch nhánh hở 15 1.11 Cấu trúc khung dammaran với mạch nhánh vòng 15 1.12 Cấu trúc flavonoid 16 hình 1.13 Yixingensin 3,3’,5-trihydroxy-4’,7-dimethoxyflavon-3-O- β D-glucopyranosit (Ombuin 3-glucosit) 17 1.14 Vitexin 18 2.1 Cây sau phơi khô 22 2.2 Cây sau cắt 22 2.3 Cây sau nghiền thành bột 22 2.4 Sơ đồ quy trình thực nghiệm 28 2.5 Sơ đồ phân lập chất từ cao hexane 29 2.6 Cột sắc ký sau nạp 32 2.7 Sắc ký bảng mỏng GPH5 32 2.8 Cho nguyên liệu vào bình cầu 33 2.9 Lắp ống sinh hàn đun cách thủy 33 2.10 Lọc dịch chiết sau nguội 34 2.11 Cô quay chân không 34 2.12 Đun cách thủy tủ hút 35 2.13 Cao chiết 35 2.14 Hỗn hợp cao chiết MeOH, nước cất hexane 36 2.15 Sự phân lớp phễu sau lắc 36 2.16 Dịch chiết hexane dịch nước sau chiết 37 3.1 Sắc ký đồ GC – MS cao chiết hexane giảo cổ lam 43 3.2 Mẫu rắn GP1 47 3.3 Phổ UV – VIS hợp chất GP1 48 3.4 Phổ hồng ngoại (FT – IR) hợp chất GP1 49 3.5 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất GP1 40 – 50 3.6 Phổ 13C-NMR (MeOD-C13CPD) hợp chất GP1 51 – 52 3.7 Cấu trúc hóa học hợp chất GP1 53 46 18 Squalene 35.334 2.43 19 alpha.-Tocospiro B 35.481 0.50 20 gamma.-Tocopherol 36.371 0.37 21 Vitamin E 36.736 0.29 22 Stigmasterol 37.846 2.16 38.155 0.22 38.285 0.32 Stigmasta-7,25-dien23 3-ol, (3.beta.,5.alpha.)- 24 Lanosterol 47 Ghi chú: Kết (% diện tích) tỷ lệ diện tích Peak thành phần sắc ký đồ GC-MS so với tổng diện tích Peak chất có liên quan sắc ký đồ chọn Nhận xét: Từ kết Bảng 3.6 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 24 cấu tử cao chiết hexane giảo cổ lam Trong số 24 cấu tử định danh có số cấu tử có hàm lượng lớn 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (z,z,z)28.83%, n-Hexadecanoic acid 26.00%, Squalene 2.43%, Stigmasterol 2.16% Trong đó, 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (z,z,z)- ngăn ngừa rối loạn nhịp tim, giảm nguy huyết khối, n-Hexadecanoic chống viêm, Stigmasterol làm giảm cholesterol, Tocopherol có khả quét gốc tự chống oxy hóa 3.4 Xác định cơng thức cấu tạo hợp chất tinh khiết GP1 Hợp chất GP1 tách dạng dầu, màu cam, tan tốt methanol (Hình 3.2) Phổ UV-Vis (MeOH) cho đỉnh hấp phụ cực đại λmax 412, 315, 300 285 nm (Hình 3.3) Hình 3.2 Mẫu rắn GP1 48 Hình 3.3 Phổ UV – VIS hợp chất GP1 ➢ Các số liệu phổ:  Phổ FT – IR (Xem Hình 3.4) Phổ IR dải hấp thụ νmax 3443 (OH), 3013, 2963, 2930, 2855 (CH), 1708 (C=O), 1641 (CH=CH), 1460, 1283, 933 718 cm-1 49 Hình 3.4 Phổ hồng ngoại (FT – IR) hợp chất GP1  Phổ 1H-NMR (Xem Hình 3.5) 50 Hình 3.5 Phổ 1H-NMR (CDCl3, 125 MHz) hợp chất GP1 Phổ 1H-NMR hợp chất GP1 gợi ý diện liên kết đôi với proton olefin δH 5.36 Ngoài cụm tín hiệu chập vùng trường cao nhóm methylene [δH 2.83 (4H), 2.30 (2H), 2.11 (4H), 1.62 (2H), 1.36 (8H)], nhóm methyl triplet [δH1,00 (3H)] đề nghị có mặt mạch hydrocarbon khơng phân nhánh Thiếu tín hiệu H nhóm OH COOH, H nhóm có độ chuyển dịch hóa học khoảng >10ppm trao đổi proton nhanh nhóm COOH nên trường hợp khơng thu tín hiệu phổ proton Phổ 13C-NMR (Xem Hình 3.6) Trên phổ 13C-NMR có 18 tín hiệu tương ứng với 18 C Trên phổ 1H-NMR hợp 51 chất GP1 không xuất nhóm COOH phổ 13 C-NMR có xuất độ chuyển dịch hóa học 178ppm (có tín hiệu nhú lên nhỏ đo CDCl3 xuất peak proton nhóm COOH) Phổ 13C-NMR hợp chất thể tín hiệu carbon carboxyl (δC  178 ), carbon olefin (δC 132.72, 131.07, 129.21, 129.18, 128.84, 128.23), 10 carbon methylene (δC21.47–35.09) carbon methyl (δC 14.64) (Bảng 3.7) Các kiện phổ 1D-NMR gợi ý hợp chất GP1 acid béo không no, mạch không phân nhánh 52 Hình 3.6 Phổ 13C-NMR (MeOD-C13CPD) hợp chất GP1 53 Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR hợp chất GP1 chất tham khảo Vị trí C δC# δCa, b δHa, c (J, Hz) 180.43 178 – 34.13 35.09 2.30 t (7.0) 24.69 26.13 1.62 quin (7.0) 29.62, 29.21, 30.67, 30.29, 29.13, 29.09 30.23, 30.19 27.23 28.15 131.85, 130.14, 132.72, 131.07, 128.26, 128.22, 129.21, 129.18, 127.80, 127.16 128.84, 128.23 11, 14 25.65, 25.56 26.52, 26.41 2.83 t (6.0) 17 20.56 21.47 2.11 m 18 14.26 14.64 1.00 t (7.5) 4–7 9, 10, 12, 13, 15, 16 1.36 m 2.11 m 5.36 m δC# α-linolenic acid đo CDCl3; a đo CD3OD, b 125 MHz, c500 MHz Tín hiệu proton δH 2.83 (4H, t, J = 6.0 Hz) cho thấy độ chuyển hóa học dịch 2.83 đặc trưng nhóm methylene vị trí bis-allylic Mặt khác, vị trí xuất tín hiệu triplet, nhóm CH2 bị kẹp hai nhóm CH nên gán cho nhóm methylene vị trí bis-allylic (xen kẽ liên kết đơi) Tín hiệu δH 2.11 (4H, m) gán cho nhóm methylene vị trí allylic (vị trí  so với liên kết đơi) Các kiện gợi ý diện cấu trúc 1,4,7 - triene mạch hydrocarbon Việc so sánh giá trị δC 28.15 carbon allylic (C-8) với giá trị tương ứng dạng cấu hình [(Z): δC 27–28; (E): δC 32–33] cho phép gán cấu hình Z cho liên kết 54 đôi [4] Kết hợp so sánh với liệu phổ chất tham khảo, hợp chất GP1 kết luận (9Z,12Z,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoic acid, gọi α-linolenic acid (Hình 3.7) Hình 3.7 Cấu trúc hóa học hợp chất GP1 Hợp chất GP1: α-linolenic acid có hoạt tính sinh học chế hoạt động sau: - Hoạt tính sinh học: Alpha Linolenic Acid (ALA) axit béo không no đa carbon (18 carbon với ba liên kết đơi) Nó gọi axit béo omega – 3, cần thiết cho tất động vật có vú Lượng axit alpha-linolenic (hoặc axit béo omega – 3) làm giảm nguy mắc bệnh tim mạch (ngăn ngừa rối loạn nhịp tim dẫn đến tử vong tim đột ngột, giảm nguy huyết khối hình thành cục máu đơng dẫn đến đau tim đột quỵ, làm giảm nồng độ triglyceride huyết thanh, làm chậm phát triển mảng xơ vữa động mạch, cải thiện chức nội mô mạch máu, giảm huyết áp nhẹ giảm viêm Sự thiếu hụt ALA dẫn đến vấn đề thị giác bệnh lý thần kinh cảm giác, viêm da xuất huyết có vảy viêm da đầu phát triển - Cơ chế hoạt động: ALA coi axit béo thiết yếu cần thiết cho sức khỏe người, người tổng hợp Nó thực axit béo có nguồn gốc từ thực vật Con người tổng hợp axit béo omega – khác từ ALA, bao gồm axit eicosapentaenoic (EPA) axit docosahexaenoic (DHA) EPA tiền thân loại tiền giả loạt 3, leukotrien loạt thromboxan loạt Những eicosanoids có đặc tính chống viêm chống xơ vữa Các chất chuyển hóa ALA ức chế sản xuất eicosanoids tiền viêm, tuyến tiền liệt E2 (PGE2) leukotriene B4 (LTB4), cytokine gây viêm, yếu tố hoại tử khối u (TNFalpha) (IL-1 beta) Các axit béo omega-3 ALA sản phẩm phụ 55 điều chỉnh biểu số gen, bao gồm gen liên quan đến chuyển hóa axit béo viêm Chúng điều chỉnh biểu gen thông qua tác động chúng hoạt động yếu tố phiên mã bao gồm NF-kappa B thành viên họ thụ thể kích hoạt peroxisome proliferator-kích hoạt (PPAR) Sự kết hợp ALA chất chuyển hóa màng tế bào ảnh hưởng đến tính lưu động màng đóng vai trò hoạt động chống viêm, ức chế kết tập tiểu cầu hoạt động chống tăng sinh ALA ALA chuyển hóa delta6 desaturease thành axit steridonic KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Trong trình triển khai nghiên cứu, đề tài đạt kết sau : ➢ Xây dựng quy trình chiết tách phương pháp chiết hồi lưu với dung môi methanol cô quay chân không nhằm thu cao Giảo cổ lam phù hợp với điều kiện - Tỉ lệ rắn – lỏng : 1/1.5 - Thời gian chiết tối ưu: ➢ Chỉ tiêu hóa lí Đã xác định thơng số hóa lý ngun liệu: độ ẩm bột nguyên liệu giảo cổ lam 9.605 %; hàm lượng tro 1.449 %, hàm lượng kim loại nặng As, Cd, Hg, Pb nằm khoảng cho phép theo quy định tiêu chuẩn hàm lượng kim loại nặng tối đa cho phép dược liệu ➢ Thành phần hóa học dịch chiết Bằng phương pháp GC-MS, định danh 31 cấu tử dịch chiết từ giảo cổ lam bao gồm ankane, cycloankane, acid hữu cơ, ether, ester, steroid, dẫn xuất phenol, triterpene, ancol, aldehyd acid, xetone vòng Trong đó, có số cấu tử có hàm lượng lớn 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (z,z,z)-28.83%, n-Hexadecanoic acid 26.00%, Squalene 2.43%, Stigmasterol 2.16% Trong đó, 9,12,15-Octadecatrienoic acid, (z,z,z) – ngăn ngừa rối loạn nhịp tim, giảm nguy huyết khối, n-Hexadecanoic chống viêm, Stigmasterol làm giảm cholesterol, Tocopherol có khả quét gốc tự chống oxy hóa Từ gam cao chiết n-hexane, phương pháp sắc ký cột silicagel lặp lại nhiều lần kết hợp với sắc ký mỏng, phân lập hợp chất GP1 tinh Việc kết hợp phương pháp phổ: phổ hồng ngoại FT- IR, phổ cộng hưởng từ hạt nhân chiều H – NMR và13C – NMR cho phép xác định cấu trúc hợp chất phân lập Hợp chất GP1 α-linolenic acid hay (9Z,12Z,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoic acid (9,12,15-Octadecatrienoic acid (z,z,z)-), hợp chất có hoạt tính sinh học tốt Đây hợp chất có thành phần định danh tất cao chiết với hàm lượng cao Kiến nghị - Tiếp tục phân lập phân đoạn lại cao chiết hexane kết hợp với phương pháp phổ để xác định thành phần hoá học - Tiếp tục nghiên cứu, đề xuất phương pháp chiết khác sử dụng dung môi khác để thu nhận cao chiết Giảo cổ lam với hàm lượng cao - Cần nghiên cứu phương pháp tinh chế loại bỏ tạp chất cao chiết để tránh ảnh hưởng đến chất lượng thành phần hóa học có - Khảo sát sâu thử nghiệm hoạt tính sinh học để ứng dụng làm hoạt chất công nghệ hóa dược, góp phần làm tăng giá trị sử dụng giá trị kinh tế Giảo cổ lam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] Phạm Tuấn Anh (2019), “Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học ba loài thuộc Gynostemma Blume Việt Nam”, Luận án Tiến sĩ Dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội [2] Nguyễn Tiến Bân (2005), “Danh lục loài thực vật Việt Nam”, NXB Nông nghiệp, Hà Nội [3] Bộ Y tế (2017), Dược Điển Việt Nam V , tập 2, NXB Y học Hà Nội [4] Võ Văn Chi (1997), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 2, Nhà xuất Y học [5] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, Nhà xuất Trẻ [6] Trần Thị Diệu My (2018), Bài giảng hợp chất thiên nhiên, Khoa Hóa, Trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng [7] Nguyễn Trần Nguyên (2018), Bài giảng phổ, Khoa Hóa, Trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng [8] Ngô Tuấn Vinh (2010), Nghiên cứu thành phần hóa học Giảo cổ lam (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) họ Cucurbitaceae Bắc Kạn, Luận văn thạc sĩ Hóa hữu cơ, Đại học Sư phạm Thái Nguyên [9] Bùi Xn Vững (2018), Giáo trình phân tích cơng cụ, Khoa Hoá, Trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng Tiếng Anh [10] Huang S.C., Hung C.F., Wu W.B., et al (2008), “Determination of chlorophylls and their derivatives in Gynostemma pentaphyllum Makino by liquid chromatography-mass spectrometry“, Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 105 – 112 [11] Ky PT, Huong PT, Anh PT, Van Kiem P, Van Minh C, Cuong NX,…& Kim YH (2010), “Dammarane-type saponins from Gynostemma pentaphyllum”, Phytochemistry, 994-1001." [12] Li X.-L., Wang Z.-H., Zhao Y.-X., et al (2012), Purification of a polysaccharide from Gynostemma pentaphyllum Makino and its therapeutic advantages for psoriasis, Carbohydrate Polymers, 1232 – 1237 [13] Lin J.M., Lin C.C., Chiu H.F., et al (1993), Evaluation of the antiinflammatory and liver-protective effects of Anoectochilus formosanus, Ganoderma lucidum and Gynostemma pentaphyllum in rats, The American journal of Chinese medicine, 59 – 69 [14] Mishra, RN., Joshi, Dharnidhar (2011), Jiao gu lan (gynostemma pentaphyllum): The chinese rasayan-current research scenario, Int J Res Pharm Biomed Sci, 1483 – 1502 [15] Nagai M., Izawa K., Nagumo S., et al (1981), Two Glycosides of a Novel Dammarane Alcohol from Gynostemma pentaphyllum, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 779 – 783 [16] Panche, AN., Diwan, AD., Chandra, SR (2016), Flavonoids: an overview, Journal of nutritional science [17] Pietta, Pier-Giorgioc (2000), Flavonoids as antioxidants, Journal of natural products [18] V Razmovski-Naumovski, T H Huang, V H Tran, G Q Li, C C Duke, B D Roufogalis (2005), “Chemistry and pharmacology of Gynostemma pentaphyllum”, Phytochem, 197 – 219 [19] Ren, Wenying, Qiao, Zhenhua., Wang, Hongwei., Zhu, Le., Zhang, Li (2003), Flavonoids: promising anticancer agents, Medicinal research reviews, Medicinal research reviews, 519 – 534 [20] Sparg, SG., Light, ME., Van Staden, J (2004), Biological activities and distribution of plant saponins, Journal of ethnopharmacology, 219 – 243 [21] Tan H., Liu Z.L., and Liu M.J (1993), "Antithrombotic effect of Gynostemma pentaphyllum", Chinese journal of integrated traditional and Western medicine, 278 –280 [22] Tong, Hoa Tieu., Vu, Phuong Thi Bach., Duong, Kien Cong., Quach, Phuong Ngo Diem (2017), Biologicalactivities of Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, Science and Technology Development Journal – Natural Sciences, 49 – 57 Trang web [23] https://vi.wikipedia.org/wiki/Gi%E1%BA%A3o_c%E1%BB%95_lam [24] http://tuelinh.vn/giao-co-lam-co-tac-dung-chua-benh-gi-7356 [25] http://namtramy.gov.vn/Default.aspx?tabid=1083 [26] http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=459 [27] https://caythuoc.vn/giao-co-lam ... cứu thu cao chiết methanol, định danh thành phần hóa học dịch chiết hexane phân lập chất tinh khiết Giảo cổ lam núi Ngọc Linh, tỉnh Quảng Nam? ?? Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu quy trình chiết. .. ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU THU CAO CHIẾT METHANOL, ĐỊNH DANH THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT HEXANE VÀ PHÂN LẬP CHẤT TINH KHIẾT CỦA CÂY GIẢO CỔ LAM Ở NÚI... nguyên liệu Giảo cổ lam thu hái núi Ngọc Linh, tỉnh Quảng Nam - Phân lập, tinh chế số hợp chất hóa học có mẫu cao chiết từ giảo cổ lam - Định danh, xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 3 Phương