Đánh giá khả năng chịu lạnh của các giống lúa xuân châu hương, Q5, C27, khang dân, U17 và nhị ưu 63 bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

Trong bài báo này, chúng tôi trình bày kết quả đánh giá khả năng chịu lạnh ở mức độ mô sẹo của 6 giống lúa: Xuân châu hương, Q5, C27, Khang dân, U17 và Nhị ưu 63 bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro nhằm chọn tạo vật liệu khởi đầu phục vụ chọn dòng chịu lạnh của lúa. Kết quả cho thấy, xử lý mô sẹo ở nhiệt độ 50C ± 0,50C với các ngưỡng thời gian (1, 5, 9, 11, 13 và 15 ngày), mô sẹo các giống nghiên cứu có tỷ lệ sống sót, tốc độ sinh trưởng và khả năng tái sinh chồi khác nhau, giống Xuân châu hương có tỷ lệ sống sót, tốc độ sinh trưởng và khả năng tái sinh chồi là cao nhất.

Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ 82(06): 103 - 108 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG CHỊU LẠNH CỦA CÁC GIỐNG LÚA XUÂN CHÂU HƯƠNG, Q5, C27, KHANG DÂN, U17 VÀ NHỊ ƯU 63 BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY IN VITRO Nguyễn Thị Tâm, Tăng Thị Ngọc Mai, Chu Hoàng Mậu* Trường Đại học Sư phạm – ĐH Thái Nguyên TÓM TẮT Trong năm gần đây, khí hậu giới nói chung Việt Nam nói riêng có biến đổi bất thường Vùng miền núi phía Bắc, đồng sơng Hồng Bắc Trung Bộ khu vực thường xuyên chịu ảnh hưởng lạnh Những năm gần nhiệt độ xuống thấp thời gian kéo dài hơn, nguyên nhân làm giảm suất sản lượng lúa gạo vùng Lúa vụ đông xuân chịu tác động mạnh nhiệt độ thấp, đặc biệt giai đoạn mạ, vậy, nghiên cứu khả chịu lạnh tăng cường khả chống chịu với nhiệt độ thấp nhằm nâng cao suất ổn định sản lượng giống lúa yêu cầu cấp thiết tỉnh miền núi phía Bắc khu vục Bắc Trung Bộ Trong báo này, chúng tơi trình bày kết đánh giá khả chịu lạnh mức độ mô sẹo giống lúa: Xuân châu hương, Q5, C27, Khang dân, U17 Nhị ưu 63 kỹ thuật nuôi cấy in vitro nhằm chọn tạo vật liệu khởi đầu phục vụ chọn dòng chịu lạnh lúa Kết cho thấy, xử lý mô sẹo nhiệt độ 50C ± 0,50C với ngưỡng thời gian (1, 5, 9, 11, 13 15 ngày), mơ sẹo giống nghiên cứu có tỷ lệ sống sót, tốc độ sinh trưởng khả tái sinh chồi khác nhau, giống Xuân châu hương có tỷ lệ sống sót, tốc độ sinh trưởng khả tái sinh chồi cao Kết tạo 86 dịng mơ 210 dịng xanh trồng đồng ruộng phục vụ cho nghiên cứu Từ khố: In vitro, mơ sẹo, Oryza sativa, tái sinh cây, chịu lạnh ∗ MỞ ĐẦU Ở Việt Nam, lúa (Oryza sativa L.) nông nghiệp có vị trí quan trọng kinh tế quốc dân Vùng miền núi phía Bắc, đồng sơng Hồng Bắc Trung Bộ khu vực sản xuất lúa quan trọng lại thường xuyên chịu ảnh hưởng điều kiện lạnh Trong năm gần đây, vào mùa đông, nhiệt độ khu vực thường hạ xuống thấp (dưới 10oC) kéo dài làm ảnh hưởng lớn đến suất chất lượng lúa lúa vụ đơng xn Vì vậy, nghiên cứu khả chịu lạnh tăng cường khả chịu lạnh giống lúa nhằm nâng cao ổn định sản lượng lúa điều kiện nhiệt độ thấp địi hỏi thực tiễn sản suất nơng nghiệp nhiều tác giả quan tâm nghiên cứu [1], [2], [3], [5] Để góp phần nhà chọn giống tìm giống có khả chịu lạnh tốt, tiến hành ∗ Tel: 0913 383 289; Email: mauchdhtn@gmail.com đánh giá khả chịu lạnh mức độ mô sẹo giống lúa: Xuân châu hương, Q5, C27, Khang dân, U17 Nhị ưu 63, kỹ thuật nuôi cấy in vitro VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vật liệu Vật liệu nghiên cứu hạt giống lúa: Khang Dân (KD), U17 sở Nông nghiệp Phát triển nông thôn tỉnh Thái Nguyên cung cấp, Xuân Châu Hương (XCH), Nhị Ưu 63 (NƯ63), C27 sở Nông nghiệp Phát triển nông thôn tỉnh Bắc Kạn cung cấp, Q5 sở Nông nghiệp Phát triển nông thôn tỉnh Bắc Giang cung cấp Phương pháp nuôi cấy in vitro - Khử trùng hạt: hạt lúa chín bóc bỏ vỏ trấu khử trùng cồn 70% phút, lắc nhẹ nước javen 60% 20 - 25 phút Sau tráng nước cất - lần - Tạo mô sẹo: hạt sau khử trùng nuôi cấy môi trường MS 103 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ (Murashige Skoog, 1962), bổ sung sucrose 3%, aga 0,8%, 2,4D 2mg/l, pH = 5,8 Mỗi bình cấy 10 - 15 hạt Ni tuần tối, tuần ánh sáng đèn phịng ni cấy với cường độ 2000 lux Sau tuần tiến hành đánh giá khả tạo mô sẹo - Xử lý mô sẹo : Mô sẹo tạo thành chia nhỏ với kích thước 3mm chuyển sang mơi trường trì mơ sẹo gồm: MS, sucrose 3%, aga 0,8%, 2,4D 1mg/l, pH = 5,8 đặt tủ lạnh có nhiệt độ 50C ± 0,50C xử lý theo ngưỡng thời gian khác (1, 5, 9, 11, 13, 15 ngày - Tái sinh cây: Mô sẹo sau xử lý lạnh chuyển lên môi trường tái sinh (MS, BAP 2mg/l, sucrose 3%, aga 0,8%, pH = 5,8) Sau tuần đánh giá tỷ lệ sống sót tốc độ sinh trưởng mô sẹo Sau tuần đánh giá khả tái sinh - Tạo hoàn chỉnh: Các chồi lúa tái sinh tách thành dịng cấy chuyển lên mơi trường tạo hoàn chỉnh (MS, sucrose 3%, aga 0,8%, NAA 0,2 mg/l, pH = 5,8) Mật độ cấy 10 chồi/bình Ni ánh sáng đèn neon phịng ni cấy với cường độ 2000 lux KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Thăm dị khả tạo mơ sẹo tốc độ sinh trưởng mô sẹo lúa Để đánh giá khả thích ứng giống hệ thống nuôi cấy mô nhằm sử dụng chúng việc đánh giá khả chịu lạnh với mục đích chọn dòng tế bào sau 82(06): 103 - 108 này, chúng tơi tiến hành thí nghiệm khảo sát khả tạo mô sẹo, tốc độ sinh trưởng khả tái sinh giống nghiên cứu Khả tạo mô sẹo đánh giá sau tuần nuôi cấy Sau tuần nuôi cấy mô sẹo cắt nhỏ với kích thước 3mm2, sau cấy môi trường tái sinh Tốc độ sinh trưởng tương đối mơ sẹo tính số đơn vị mơ sẹo (ĐVMS), 1ĐVMS = khối mơ sẹo kích thước 3mm2 Khả tái sinh đánh giá sau tuần nuôi cấy Kết nghiên cứu thể bảng Kết nhận bảng cho thấy, tất giống thí nghiệm có khả tạo mô sẹo khả tái sinh Tuy nhiên, tỷ lệ tạo mô sẹo, tốc độ sinh trưởng giống lúa khác Khả tạo mô sẹo tốc độ sinh trưởng mô sẹo giống C27 cao (98,59%), thấp giống Nhị ưu 63 (82,29%) Song khả tái sinh cây giống Xuân Châu Hương cao (15,39%), thấp giống C27 (8,54%) Nhiều nghiên cứu rằng, khả tái sinh nuôi cấy mô sẹo phụ thuộc vào kiểu gen giống [4], [6], [7], [8] Qua thực nghiệm, chúng tơi thấy mơ có màu vàng trắng, mơ sẹo cứng khơ có khả tái sinh cao so với mơ có màu nâu đen, mơ sẹo mọng nước Như vậy, tất giống nghiên cứu có khả tạo mơ sẹo tái sinh đáp ứng cho nghiên cứu liên quan đến nuôi cấy in vitro Bảng Thăm dị khả tạo mơ sẹo, tốc độ sinh trưởng khả tái sinh giống lúa Giống Tỷ lệ tạo mô sẹo (%) sau tuần Tốc độ sinh trưởng (đvms/hạt/3tuần) Tỷ lệ tái sinh cây(%) sau tuần U17 96,96 ± 0,39 2,72 ± 0,17 15,13 ± 0,12 NƯ63 82,29 ± 0,33 1,45 ± 0,16 9,17 ± 0,02 KD 93,41 ± 0,45 1,82 ± 0,16 13,24 ± 0,03 Q5 93,56 ± 0,34 2,33 ± 0,11 9,46 ± 0,03 XCH 86,96 ± 0,27 2,31 ± 0,09 15,39 ± 0,21 C27 98,59 ± 0,53 2,82 ± 0,10 8,54 ± 0,27 104 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ 82(06): 103 - 108 Bảng Tỷ lệ mô sẹo sống sót sau tuần ni phục hồi Tỷ lệ sống sót (%) Giống ngày 11 ngày 13 ngày 15 ngày U17 94,96 ± 0,06 43,35 ± 0,3 22,57 ± 0,4 12,35 ± 0,45 8,27 ± 0,23 8,13 ± 0,17 NƯ63 86,14 ± 0,25 34,17 ± 0,15 20,03 ± 0,13 10,27 ± 0,19 7,15 ± 0,09 6,93 ± 0,12 KD 92,81 ± 0,14 39,73 ± 0,21 15,72 ± 0,22 9,37 ± 0,08 6,42 ± 0,23 4,86 ± 0,15 Q5 83,08 ± 0,17 26,93 ± 0,07 10,24 ± 0,21 6,43 ± 0,15 2,01 ± 0,09 XCH 95,13 ± 0,12 45,35 ± 0,34 21,11 ± 0,14 12,34 ± 0,11 8,14 ± 0,12 ,36 ± 0,35 C27 79,67 ± 0,18 24,84 ± 0,19 10,26 ± 0,15 5,11 ± 0,08 0 Ảnh hưởng lạnh đến tỷ lệ sống sót mơ sẹo Để xây dựng quy trình chọn dịng chịu lạnh, cần xác định ngưỡng chịu lạnh mô sẹo Chúng tiến hành xác định khả chịu lạnh giống mức độ mô sẹo thông qua tiêu khả chịu lạnh tái sinh mô sẹo sau xử lý nhiệt độ 50C ± 0,50C với ngưỡng thời gian khác (1, 5, 9, 11, 13 15 ngày) Khả chịu lạnh mô sẹo đánh giá thơng qua tỷ lệ sống sót mô sẹo sau nuôi phục hồi tuần Kết thu cho thấy, mơ sống sót có màu trắng ngà, sau tuần kích thước mơ sẹo lớn khối mô trước xử lý Những mơ bị chết có màu đen, màu vàng trắng, kích thước khơng thay đổi Tỷ lệ sống sót mô sẹo sau xử lý nhiệt độ thấp tiêu để đánh giá khả chịu lạnh giống lúa Tỷ lệ sống sót mô sẹo giống sau xử lý nhiệt độ thấp thể bảng Kết bảng cho thấy, số ngày xử lý lạnh tăng tỷ lệ sống sót mô sẹo giảm Khả chịu lạnh giống mức độ mô sẹo khác Tỷ lệ mơ sẹo sống sót U17 cao hầu hết ngưỡng xử lý (94,96%, 43,35%, 22,57%, 12,35%, 8,27% 8,13% tương ứng với thời gian xử lí 1, 5, 9, 11, 13, 15 ngày) Tỷ lệ mơ sẹo sống sót C27 thấp hầu hết ngưỡng xử lý (79,67%, 24,84%, 10,26%, 5,11% tương ứng với ngưỡng thời gian 1, 5, 9, 11 ngày) Sau 10 ngày, tỷ lệ sống sót mô sẹo giảm nhanh giống nghiên cứu Giống C27 xử lý lạnh ngưỡng 13, 15 ngày mơ sẹo chết hồn tồn Mơ sẹo giống Q5 chết hoàn toàn xử lý lạnh ngưỡng 15 ngày Kết nghiên cứu phù hợp với nghiên cứu trước Các nghiên cứu rằng, ngưỡng xử lý, thời gian xử lý tăng tỷ lệ sống sót mơ sẹo giảm [4], [8] Ảnh hưởng lạnh đến tốc độ sinh trưởng mô sẹo Đồng thời với đánh giá khả sống sót mơ sẹo, chúng tơi cịn theo dõi khả sinh trưởng mô sẹo sau xử lý lạnh ngưỡng khác nuôi phục hồi tuần Kết trình bày bảng Kết bảng cho thấy, tốc độ sinh trưởng tương đối mơ sẹo giống khơng Trong đó, xử lý lạnh, giống Xuân châu hương có tốc độ sinh trưởng tương đối cao (2,94 đvms/mô, 3,12 đvms/mô, 3,21 đvms/mô, 2,20 đvms/mô, 2,08 đvms/mô, 1,88 đvms/mô 1,52 đvms/mô), tiếp đến giống U17 giống C27 thấp Tỷ lệ mơ sẹo sống sót cao tốc độ sinh trưởng mơ cao ngược lại Kết bảng cho thấy, ngưỡng xử lý ngày không làm ảnh hưởng tới sinh trưởng mô sẹo, ngược lại cịn kích thích sinh trưởng mơ sẹo so với đối chứng, tăng cao giống U17 (3,27 đvms/mô ngưỡng ngày) Khi tăng thời gian xử lý tốc độ sinh trưởng mơ sẹo giảm dần dẫn tới ngừng sinh trưởng chết hồn tồn [8] 105 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ 82(06): 103 - 108 Bảng Tốc độ sinh trưởng tương đối mô sẹo sau xử lý lạnh nuôi phục hồi tuần Tốc độ sinh trưởng tương đối (đvms/mô/3tuần) Giống ĐC ngày 11 ngày 13 ngày 15 ngày U17 2,66 ± 0,02 3,15 ± 0,04 3,27 ± 0,03 2,12 ± 0,04 2,03 ± 0,04 1,70 ± 0,01 1,42 ± 0,02 NƯ63 2,08 ± 0,02 3,08 ± 0,11 3,20 ± 0,04 1,71 ± 0,08 1,56 ± 0,05 1,27 ± 0,02 1,02 ± 0,03 KD 2,48 ± 0,02 2,80 ± 0,16 3,18 ± 0,05 2,01 ± 0,02 1,81 ± 0,04 1,61 ± 0,01 1,32 ± 0,02 Q5 2,46 ± 0,02 2,94 ± 1,14 3,18 ± 0,07 1,54 ± 0,06 1,47 ± 0,03 1,09 ± 0,03 _ XCH 2,94 ± 0,04 3,12 ± 0,08 3,21 ± 0,04 2,20 ± 0,05 2,08 ± 0,03 1,88 ± 0,03 1,52 ± 0,02 C27 2,88 ± 0,11 2,17 ± 0,10 2,46 ± 0,02 1,36 ± 0,03 1,22 ± 0,02 _ _ Bảng Khả tái sinh chồi mô sẹo sau xử lý lạnh Khả tái sinh chồi sau tuần nuôi cấy (%) Giống ngày 11 ngày 13 ngày 15 ngày U17 18,15 ± 0,22 14,54 ± 0,13 18,15 ± 0,22 16,46 ± 0,29 13,86 ± 0,09 15,21 ± 0,14 NƯ63 11,28 ± 0,10 9,57 ± 0,23 11,28 ± 0,10 9,34 ± 0,19 9,29 ± 0,03 10,01 ± 0,12 KD 17,93 ± 0,14 14,18 ± 0,10 17,93 ± 0,14 16,32 ± 0,17 10,96 ± 0,08 12,74 ± 0,15 Q5 8,81 ± 0,04 12,35 ± 0,14 8,81 ± 0,04 6,24 ± 0,14 6,56 ± 0,26 XCH 23,24 ± 0,06 14,39 ± 0,14 23,24 ± 0,06 17,12 ± 0,07 14,32 ± 0,14 16,00 ± 0,12 C27 8,32 ± 0,10 6,42 ± 0,14 8,32 ± 0,10 1,35 ± 0,07 0 Khả tái sinh chồi từ mô sẹo sau xử lý lạnh Khả tái sinh chồi sau tuần ni cấy mơ sẹo sống sót sau xử lý lạnh trình bày bảng Kết cho thấy mô sẹo hầu hết giống sau xử lý lạnh ngưỡng thời gian khác cịn giữ khả tái sinh chồi Mơ sẹo bị xử lý ngưỡng 1, 5, ngày có khả tái sinh cao so với đối chứng tất giống Kết bảng cho thấy, giống XCH có tỷ lệ tái sinh chồi cao tất ngưỡng xử lý (23,24%, 14,39%, 23,24%, 17,12%, 14,32%, 16,00% tương ứng với ngưỡng thời gian 1, 5, 9, 11, 13, 15) Giống có tỷ lệ tái sinh chồi thấp giống C27 (8,32%, 6,42%, 8,32%, 1,35% tương ứng với ngưỡng thời gian 1, 5, 9, 11 ngày) Ở ngưỡng 13, 15 ngày mơ sẹo giống C27 bị chết hồn tồn Mơ sẹo giống Q5 bị chết hoàn toàn ngưỡng 15 ngày Như vậy, thời gian xử lý tăng tỷ lệ tái sinh chồi giảm Kết cho thấy, hầu hết mô giống sau xử lý lạnh sống sót thường có khả tái sinh cao so với đối chứng Theo Lê Trần Bình cs (1998), xử lý cực đoan tế bào mẫn cảm bị giết chết, chọn tế bào có sức sống khả tái sinh cao [5] Như vậy, khả tái sinh khơng phụ thuộc vào kiểu gen mà cịn phụ thuộc vào thời gian xử lý lạnh mô sẹo Qua thực nghiệm chúng tơi thu 86 dịng mơ có khả chịu lạnh 210 dịng xanh giống lúa, trồng đồng ruộng để phục vụ cho nghiên cứu Từ khảo sát khả chịu lạnh tái sinh giống, xác định ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống U17, Nhị ưu 63, Khang dân, Xuân châu hương 15 ngày, ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống C27 11 ngày ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống Q5 13 ngày Tuy nhiên, để khẳng định chắn 106 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ ngưỡng xử lý có hiệu giống cần phải tiếp tục theo dõi đồng ruộng, phân tích di truyền, hố sinh kiểm tra khả chống chịu lạnh hệ tái sinh từ dịng mơ chịu lạnh thu KẾT LUẬN - Cả giống lúa có khả tạo mô sẹo khả tái sinh từ mô sẹo Khả tạo mô sẹo giống C27 cao nhất, thấp giống Nhị ưu 63 Song khả tái sinh giống Xuân châu hương cao nhất, thấp giống C27 - Xử lý mô sẹo 50C ± 0,50C với thời gian ngày không làm ảnh hưởng tới sinh trưởng mơ sẹo, ngược lại cịn kích thích sinh trưởng mơ sẹo Tăng thời gian xử lý lạnh lên 9, 11, 13 15 ngày làm ức chế sinh trưởng mô sẹo so với đối chứng - Khả tái sinh từ mơ sẹo sống sót sau xử lý lạnh ngưỡng thời gian ngày cao hẳn so với đối chứng - Ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống U17, Nhị ưu 63, Khang dân, Xuân châu hương 15 ngày, ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống Q5 13 ngày ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống C27 11 ngày 50C ± 0,50C - Khả chịu lạnh giống lúa mức độ mơ sẹo có khác Khả chịu lạnh mức độ mô sẹo giống xếp thep thứ tự từ cao đến thấp sau: XCH > U17 > KD > NƯ > Q5 > C27 82(06): 103 - 108 - Đã tạo 86 dịng mơ 210 dịng xanh phục vụ cho nghiên cứu chọn dòng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bertin P., Bouharmont J., Kinet J M (1997), “Somaclonal variation and improvement of chilling tolerance in rice: Chance in chilling-induce chlorophyll fluorescence”, Crop Sci, 37, pp 1727-1735 [2] Bertin P., Kinet J M., Bouharmont J (1995), “Heritable chilling tolerance improvement in rice through somaclonal variation and cell line selection”, Aust J Bot, 44, pp 91-105 [3] Bouharmont J., Dekeyser A (1989), “In vitro selection for cold and salt tolerance in rice”, Review of Advance in Plant Biotechnology, 1985 – 88 IMWIC & IRRI, pp 308 – 313 [4] Lê Trần Bình, Võ Thị Ngọc Điệp, Lê Thị Muội (1995), "Nghiên cứu khả chịu lạnh chịu khô mức độ mơ sẹo lúa giống có nguồn gốc sinh thái khác nhau", Tạp chí Sinh học, 17 (1), tr25 – 29 [5] Lê Trần Bình, Lê Thị Muội (1998), Phân lập gen chọn dòng chống chịu ngoại cảnh bất lợi lúa, Nxb Đại học quốc gia, Hà Nội [6] Gamborg O L., Phillip G C (1995), Basal media for plant cell and tissue culture in: Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Fundamental methods, Springer Heidelberg, pp 301-306 [7] M Al – Forkan, M A Rahim, T Chowdhury, P Akter and L Khaleda (2005), “Deverlopment of highly in vitro callogeenesis and regeneration system for some salt tolerance rice cultivars of bangladesh”, Biotechnology (3), pp 230 – 234 [8] Nguyễn Thị Tâm (2004), Nghiên cứu khả chịu nóng chọn dịng chịu nóng lúa cơng nghệ tế bào thực vật, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ sinh học, Hà Nội Hình Một số hình ảnh đánh giá khả chịu lạnh lúa (A) Mô sẹo hình thành từ hạt; (B) Mơ sẹo sống sót tái sinh sau tuần nuôi phục hồi; (C) Tái sinh chồi từ mơ sẹo sống sót sau tuần 107 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nguyễn Thị Tâm đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ 82(06): 103 - 108 SUMMARY EVALUATION OF COLD TOLERANCE ABILITY OF XUAN CHAU HUONG, Q5, C27, KHANG DAN, U17, NHI UU 63 RICE CULTIVARS BY IN VITRO CULTIVATION TECHNIQUE Nguyen Thi Tam, Tang Thi Ngoc Mai, Chu Hoang Mau∗ College of Education - TNU In recent years, global climate in general and VietNam in particular have witnessed abnormal changes The Northern mountainous provice, Red River Delta and Northen central regions are often affected by cold weather, with temperature getting low and cold period prolonged in recent years This is the major cause of the decreasing rice yield in these regions, in which winter-spring rice is most seriously affected by low temperature, especially at seeding stage As such, studying on enhanced cold tolerance ability and resistance to low temperature to improve productivity and stabilize yield of rice breeds is practically required for these regions In this paper, we announce the results of evaluating cold tolerance at callus level of six rice cultivars: Khang Dan, Xuan Chau Huong, Nhi Uu 63, C27, U17 and Q5 by in vitro cultivation technique to create the initial material to serve selection of cold-tolerant rice lines Results showed that after cold treatment at different time thresholds (1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 and 15 days), callus tissue of all six rice cultivars have different rate of survival, growth rate and regeneration capacity, of which the highest are of Xuan Chau Huong Finally, 86 callus and 210 rice lines have been created and serving for further research Key words: Callus, cold tolerance, in vitro, Oryza sativa, plant regeneration ∗ Tel: 0913 383 289; Email: mauchdhtn@gmail.com 108 Số hóa Trung tâm Học liệu - Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... dòng xanh giống lúa, trồng đồng ruộng để phục vụ cho nghiên cứu Từ khảo sát khả chịu lạnh tái sinh giống, xác định ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống U17, Nhị ưu 63, Khang dân, Xuân châu hương 15... sót sau xử lý lạnh ngưỡng thời gian ngày cao hẳn so với đối chứng - Ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống U17, Nhị ưu 63, Khang dân, Xuân châu hương 15 ngày, ngưỡng chọn dòng chịu lạnh giống Q5 13 ngày... trưởng giống lúa khác Khả tạo mô sẹo tốc độ sinh trưởng mô sẹo giống C27 cao (98,59%), thấp giống Nhị ưu 63 (82,29%) Song khả tái sinh cây giống Xuân Châu Hương cao (15,39%), thấp giống C27 (8,54%)