Nghiên cứu thu nhận enzym amylase của một số chủng nấm sợi phân lập tại rừng ngập mặn cần giờ

THƯ VIỆN BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Nguyễn Thị Thanh Bình NGHIÊN CỨU THU NHẬN ENZYM AMYLASE CỦA MỘT SỐ CHỦNG NẤM SI PHÂN LẬP TỪ RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THANH THỦY Thành phố Hồ Chí Minh, Tháng - 2010 LỜI CẢM ƠN Tơi xin gởi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến TS Trần Thanh Thủy dìu dắt giúp đỡ tơi suốt q trình học tập tận tình hướng dẫn suốt q trình nghiên cứu, hồn thành luận văn Tôi xin ghi nhớ công ơn tất Q Thầy Cơ Khoa Sinh, phịng thí nghiệm Vi sinh – Sinh hóa, Trường Đại học Sư phạm Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành cơng việc nghiên cứu thực luận văn Xin chân thành cảm ơn bạn học viên Cao học khóa 17 18 ngành Vi sinh vật học, Trường Đại học Sư phạm Tp Hồ Chí Minh nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt q trình tiến hành thực nghiệm Cuối tơi xin gởi lời biết ơn đến Ba Má, hai em bạn bè yêu thương ủng hộ tơi vượt qua khó khăn q trình học tập thực luận văn Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2010 NGUYỄN THỊ THANH BÌNH LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Những số liệu, kết luận văn hoàn toàn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận văn Nguyễn Thị Thanh Bình DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CMC Carboxymethy cellulose dd Dung dịch DNS 3, – dinitrosalicylic acid Hđamylase Hoạt độ amylase HST Hệ sinh thái KL Khuẩn lạc KS Kháng sinh MT Môi trường NS Nấm sợi NXB Nhà xuất OD Optical density (mật độ quang) PTN Phòng thí nghiệm RNM Rừng ngập mặn SV Sinh vật VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật MỞ ĐẦU Amylase loại enzym thủy phân tinh bột quan trọng cơng nghệ sinh học Nó có khả phân cắt liên kết α-1,4 glucoside, α-1,6 glucoside amylose amilopectin, làm tăng tốc độ đường hóa tinh bột nguyên liệu giúp phản ứng xảy nhanh chóng, rút ngắn thời gian hình thành sản phẩm Amylase thu nhận từ VSV nói chung, từ NS nói riêng có nhiều ưu điểm bật loại amylase từ thực vật động vật như: hoạt tính enzym cao hơn, khả chịu nhiệt cao, thời gian thu enzym nhanh, giá thành rẻ, sản xuất quy mô công nghiệp với nguồn nguyên liệu đơn giản rẻ tiền Với ưu trội, NS trở thành nguồn nguyên liệu dồi dào, đầy hứa hẹn cho ngành cơng nghiệp sản xuất enzym Do đó, vòng 50 năm trở lại đây, chế phẩm enzym từ NS dần thay enzym từ động vật Các chủng NS sinh amylase cao như: Aspergillus oryzae, Aspergillus niger, Rhizopus, Với phạm vi ứng dụng nhiều lĩnh vực khác như: công nghệ thực phẩm, dược phẩm, công nghệ lên men, công nghiệp dệt nên khối lượng chế phẩm amylase sản xuất hàng năm giới lên tới hàng chục vạn ngày gia tăng Chính vậy, việc tìm kiếm chủng NS sinh amylase cao thu hút quan tâm nhiều nhà khoa học nước Trong q trình tìm kiếm ấy, người ln quan tâm đến NS sống hệ sinh thái đặc biệt Nằm đất liền biển cả, RNM Cần Giờ có mơi trường sống vốn khắc nghiệt, mang tính cạnh tranh cao, làm tăng khả sinh chất có hoạt tính sinh học giúp SV thích nghi tốt với điều kiện sống Nơi lưu trữ, bảo tồn nguồn tài nguyên thiên nhiên vô quý giá vùng ven biển nhiệt đới từ thực vật, động vật VSV Hơn nữa, Việt Nam nước có nguồn tinh bột phụ phẩm nông nghiệp dồi điều kiện thuận lợi để ứng dụng amylase thu nhiều sản phẩm Có thể nói nay, hiểu biết khu hệ NS RNM vai trò chúng hệ sinh thái chưa đầy đủ Trước thực tế này, nhằm đa dạng hóa nguồn enzym từ NS, mong muốn thu nhận chủng NS mang đặc tính q, chúng tơi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu thu nhận enzym amylase số chủng NS phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ”  Mục tiêu đề tài Tuyển chọn khảo sát số chủng NS sinh α-amylase glucoamylase cao từ RNM Cần Giờ Tp Hồ Chí Minh  Nhiệm vụ đề tài - Phân lập chủng NS thu nhận từ RNM Cần Giờ - Khảo sát khả sinh tổng hợp amylase chủng NS phân lập - Tuyển chọn chủng sinh amylase cao tiếp tục khảo sát - Phân loại đến chi chủng NS tuyển chọn - Khảo sát điều kiện sinh trưởng chủng NS tuyển chọn - Khảo sát điều kiện ảnh hưởng đến trình thu nhận amylase - Thu nhận chế phẩm amylase thô so sánh với enzym thương mại thị trường - Khảo sát đặc tính sinh học khác  Đối tượng phạm vi nghiên cứu - Đối tượng chủng NS phân lập từ mẫu đất, thân, cây, …ở RNM Cần Giờ - Phạm vi nghiên cứu gồm xã: Bình Khánh, Tam Thơn Hiệp, An Thới Đơng, Long Hịa, Lý Nhơn thuộc RNM huyện Cần Giờ  Thời gian địa điểm nghiên cứu đề tài - Thời gian: Từ tháng 8/2009 – 7/ 2010 - Địa điểm: Đề tài thực PTN Vi sinh - Sinh hóa, Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư Phạm Tp Hồ Chí Minh Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 KHÁI QUÁT VỀ RNM CẦN GIỜ TP HỒ CHÍ MINH 1.1.1 Đặc điểm nhân tố sinh thái RNM Cần Giờ hệ sinh thái ngập mặn có vai trị vị trí đặc biệt quan trọng MT cộng đồng dân cư địa phương vùng Là rừng tái sinh RNM Cần Giờ Khu Dự trữ Sinh Việt Nam với hệ thực vật động vật phong phú mang tính đa dạng sinh học cao [34], [39] Hình 1.1 Rừng ngập mặn Cần Giờ Về vị trí địa lý khu dự trữ sinh RNM Cần Giờ hình thành hạ lưu hệ thống sơng Đồng Nai – Sài Gịn nằm cửa ngõ Đơng Nam Tp Hồ Chí Minh Tọa độ: 10°22’ – 10°40’ độ vĩ Bắc 106°46’ – 107°01’ kinh độ Đơng Cách trung tâm Tp Hồ Chí Minh khoảng 70km, phía Bắc Cần Giờ giáp tỉnh Đồng Nai, phía Nam giáp biển Đơng, phía Tây giáp tỉnh Tiền Giang Long An, phía Đơng giáp tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu Chiều dài khu vực từ Bắc xuống Nam 35 km, từ Đông sang Tây 30 km [39] Ở RNM Cần Giờ, nhiệt độ trung bình 25,80C, biên độ dao động nhiệt ngày từ – 70C Khí hậu nóng ẩm chịu chi phối quy luật gió mùa xích đạo Nhiệt độ khơng khí có ảnh hưởng lớn đến sinh trưởng, phát triển sinh vật RNM Chapman (1977) cho RNM phát triển biên độ nhiệt tháng lạnh cao 200C, biên độ dao động theo mùa không 100C [36], [34], [39] Trong nhân tố khí hậu RNM lượng mưa nhân tố quan trọng Ở đây, mùa mưa từ tháng đến tháng 10, mùa khô từ tháng đến tháng Lượng mưa trung bình từ 1300 đến 1400 mm hàng năm Độ ẩm cao nơi khác khu vực Tp.Hồ Chí Minh: mùa mưa 70 – 83%, mùa khô 74 – 77%; ẩm vào tháng 9, khô vào tháng Lượng nước bốc bình quân 4mm/ ngày 1204mm/tháng [34] Ngồi ra, gió nhân tố tác động tới phân bố thực vật RNM qua ảnh hưởng tới độ thoát nước tác động tới phát tán bào tử VSV [36] Đất Cần Giờ cấu tạo q trình trầm tích sét, q trình phèn hố, q trình nhiễm mặn đồng thời phát triển đầm mặn phù sa sơng Sài Gịn sơng Đồng Nai mang đến lắng đọng tạo thành bùn ngập mặn Độ mặn nước Cần Giờ phụ thuộc nhiều yếu tố gió mùa, thuỷ triều, mưa, nước dâng đặc biệt chịu ảnh hưởng rõ rệt từ nguồn nước thượng nguồn chảy xuống (do hoạt động hồ Trị An, Dầu Tiếng…) làm thay đổi qui luật hoạt động nhiễm mặn Cần Giờ Độ mặn nơi dao động 1,8 – 3% Độ mặn nhân tố quan trọng ảnh hưởng đến sinh trưởng, tỉ lệ sống loài ngập mặn phân bố RNM Hầu hết ngập mặn sinh trưởng tốt nước có độ mặn từ 25% đến 50% độ mặn nước biển Nhiều ý kiến cho rằng, muối nhân tố quan trọng, tác động thông qua q trình chọn lọc tự nhiên thích nghi, tạo điều kiện để ngập mặn tồn tại, phát triển [36] RNM Cần Giờ chịu tác động chế độ bán nhật triều khơng biển Đơng Mỗi tháng có khoảng ngày nhật triều không xuất 2-3 ngày trước, cuối tháng âm lịch Mực nước trung bình cao thường xuất vào tháng 10, 11 thấp vào tháng 6, [39] Chế độ bán nhật triều với biên độ triều cao nhân tố thuận lợi cho RNM sinh trưởng so với vùng có nhật triều Các dịng hải lưu nhân tố giúp phát tán quả, hạt, trụ mầm SV dọc theo vùng ven biển 1.1.2 Đặc điểm khu hệ SV RNM Cần Giờ RNM Cần Giờ có hệ SV vơ đa dạng phong phú, có nhiều loài đem lại giá trị kinh tế cao Về thực vật: Khu dự trữ sinh rừng ngập mặn Cần Giờ có 150 lồi thực vật, loài chủ yếu Bần trắng, Mấm trắng, quần hợp Đước đôi - Bần trắng Xu, Ổi, Trang, Đưng… Các loại nước lợ Bần chua, quần hợp Mái dầm – ôrô, dừa lá, ráng… Thảm cỏ biển với loài ưu Halophyla sp., Halodule sp., Thalassia sp [66] Động vật: bao gồm động vật thủy sinh khơng xương sống với 700 lồi, khu hệ cá 130 loài, loài lưỡng thê, 31 lồi bị sát, lồi có vú Trong có 11 lồi bị sát có tên sách đỏ Việt Nam như: tắc kè (Gekko gekko), kỳ đà nước (Varanus salvator), trăn đất (Python molurus), trăn gấm (Python reticulatus) … Khu hệ chim có khoảng 130 lồi thuộc 47 họ, 17 [66] Thảm động thực vật nơi trở thành nguồn cung cấp thức ăn nơi trú ngụ cho nhiều loài thủy sinh, động vật có xương sống hệ VSV Vi sinh vật đa dạng gồm có: vi khuẩn, nấm, tảo  Vi khuẩn VK với nấm tạo nên thành phần quan trọng hệ sinh thái RNM Là SV phân huỷ, chúng đóng vai trị trung tâm mặt chức hệ sinh thái Số lượng VK rừng ngập mặn chiếm tỉ lệ cao, đặc biệt trầm tích quần thể VK dị dưỡng nhiều gấp 2-3 lần lớp nước mặt, quần thể bùn lớn gấp vài lần cát Nhiều loài sống giá thể bề mặt rắn chất nhầy dính bám Do đó, VK tạo nên bề mặt mỏng mặt bùn tạo điều kiện cho loài tảo, cỏ biển ngập mặn phát triển [36]  Nấm Khu hệ nấm RNM nhiều đa dạng, phần lớn vi nấm, có số lồi có kích thước lớn Nấm đóng vai trị quan trọng RNM, với VK chúng góp phần phân huỷ nhanh xác thực vật (Fell cộng sự, 1975) Người ta phân loại nấm dựa mơi trường RNM: tán cây, thân, rễ hô hấp đất, có số lồi sống từ hai MT trở lên [36] Người ta tìm thấy ngập mặn có loài nấm ký sinh hoại sinh như: Ascomycetes, Bacidomycetes Deuteromycetes Người ta tìm thấy chi nấm có mặt Đước đỏ (R mangle) cây: Cladosporium, Pestalotia, Alternaria, Zygosporium, Penicillium Aureobacidium [36] Các chi nấm ký sinh hoại sinh sống ngập mặn thường gây bệnh cho chủ như: Pestalotia, Phyllosticta, Cladosporium Cercospora Hầu hết lồi nấm đất liền có ngập mặn, cịn lồi nấm biển có rễ phần gỗ ngâm nước mặn Khi chết gỗ phân huỷ tạo điều kiện thuận lợi cho loại nấm phân huỷ phát triển Các mẫu gỗ để ngâm nước biển có tỉ lệ phân huỷ cao vùng ngập triều cao [36] Đối với ngập mặn nấm sinh vật phân huỷ nhờ khả phân giải cellulose, lignin Fell Masters (1973) nghiên cứu tồn q trình phân hủy ngập mặn đồng thời phân lập 66 chi nấm, đại diện chi Phycomycetes, Thraustochytrium, Aspergillus, Penicillium, Tricoderma, Fusarium… Đa số loại nấm phân lập lá, gỗ thường nấm hoại sinh góp phần phân huỷ xác thực vật Chúng cịn góp phần phân huỷ cỏ biển, bùn đầm lầy mặn Những loài chịu điều kiện mặn RNM [36]  Tảo Tảo mọc RNM thường làm thành lớp phủ màu hồng, nâu lục nhạt phát triển MT: bề mặt bùn, bề mặt thân cây, rễ, cành tán phía Trong bề mặt bùn gồm tảo đơn bào, tảo đa bào mà chủ yếu tảo xanh lục Người ta liệt kê có khoảng 41 lồi tảo silic mặt bùn quần xã RNM; Chúng khơng hình thành vùng rõ ràng mà tùy thuộc vào độ ngập triều [36] Tảo bùn có tầm quan trọng kinh tế đất làm tăng hàm lượng hữu đất nhờ q trình quang hợp Tảo cịn tạo độ thống khí hạt đất, tiết chất nhầy hình thành phức hệ keo, tảo xanh lục dị dưỡng làm tăng hàm lượng đạm cho đất nhờ khả cố định đạm [36] Các SV RNM làm nên đa dạng sinh học quần xã RNM, chúng mắt xích quan trọng chuỗi thức ăn, nhân tố thiếu chu trình chuyển hóa vật chất RNM Cần Giờ 1.1.3 Vai trò RNM hệ sinh thái RNM có liên quan mật thiết với đầm lầy mặn, bãi bùn, bãi cỏ ven biển quần xã cửa sơng khác Dịng nước đổ từ thượng nguồn biển, dòng nước triều từ biển lên xuống vùng cửa sông qua RNM Các dòng nước vận chuyển vật chất, SV từ quần xã tới quần xã khác hệ sinh thái RNM nơi giao lưu quần xã, tạo nên phong phú thành phần SV cho nơi [36] Hệ thực vật RNM bao gồm loài thực vật (Sú, Vẹt, Mắm, Đước, Bần,…) sống vùng nước mặn, hệ rễ góp phần vào việc làm giảm tốc độ dịng chảy thủy triều, tạo điều kiện lắng đọng bùn, vật chất lơ lửng, chúng góp phần bảo vệ vùng ven bờ; cung cấp giá trị lâm sản than, gỗ, củi, thức ăn, thuốc,…Bên cạnh đó, hệ thực vật cịn đóng vai trị quan trọng việc điều hịa khí hậu, cung cấp chất hữu để tăng suất cho vùng ven biển [34] RNM nơi kiếm ăn, sinh sản cư trú nhiều lồi hải sản có giá trị kinh tế cao tôm, cua, cá, Mới đây, Bell cộng (1984) khẳng định RNM vườn ươm quan trọng cho lồi cá sống cửa sơng Khi so sánh thành phần lồi cá tơm vùng có RNM vào mùa vụ năm thấy lượng non loài cao hẳn vùng đất, cát đầm Từ cho thấy RNM nơi ni dưỡng cho non nhiều loài hải sản [36] Các loài động thực vật, VSV sống MT tự nhiên RNM Cần Giờ liên kết với thông qua q trình trao đổi chất đồng hóa lượng nhằm khép kín chu trình dinh dưỡng hệ sinh thái Các trình nội cố định lượng, tích lũy sinh khối, phân hủy vật chất hữu chu trình dinh dưỡng chịu ảnh hưởng mạnh mẽ nhân tố bên như: thủy triều, nhiệt độ lượng mưa RNM phát triển tốt nước có nồng độ muối 15 - 25‰ [36] Tuy nhiên, RNM có thay đổi đáng kể trước áp lực việc đánh bắt cá, tôm,… khai thác gỗ, củi, nhiên liệu, nuôi trồng thủy sản, du lịch… Sự tác động quản lý khơng tốt vùng đất RNM bị suy thối khơng thể tồn lâu bền 12 PHỤ LỤC 12 (tt) Ảnh hưởng độ ẩm đến hoạt độ α-amylase hai chủng NS Chủng Đ56 (α) Độ ẩm (%) OD 50% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 55% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 60% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 65% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 70% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) Số lần Trung Phương bình sai Sai số 0,179 0,182 0,186 0,182 1,233E-05 0,004 4,269 4,341 4,438 4,349 7,127E-03 0,084 284,615 289,423 295,833 289,957 3,167E+01 5,628 0,197 0,206 0,198 0,200 2,433E-05 0,005 4,702 4,918 4,726 4,782 1,406E-02 0,119 313,462 327,885 315,064 318,803 6,249E+01 7,905 0,198 0,223 0,212 0,211 1,570E-04 0,013 4,726 5,327 5,063 5,038 9,072E-02 0,301 315,064 355,128 337,500 335,897 4,032E+02 20,080 0,209 0,233 0,221 0,221 1,440E-04 0,012 4,990 5,567 5,279 5,279 8,321E-02 0,288 332,692 371,154 351,923 351,923 3,698E+02 19,231 0,198 0,228 0,211 0,212 2,263E-04 0,015 4,726 5,447 5,038 5,071 1,308E-01 0,362 315,064 363,141 335,897 338,034 5,813E+02 24,110 13 PHỤ LỤC 13 Ảnh hưởng độ ẩm đến hoạt độ glucoamylase hai chủng NS Chủng Đ10 (glucoamylase) Độ ẩm (%) sai Sai số 0,034 0,042 0,037 0,038 0,000 0,004 77,200 93,200 83,200 84,533 65,333 8,083 180,133 217,467 194,133 197,244 355,704 18,860 0,056 0,042 0,061 0,053 0,000 0,010 Nồng độ Glucose (μg/ml) 121,200 93,200 131,200 115,200 388,000 19,698 Hoạt độ (UI/g) 282,800 217,467 306,133 268,800 2112,444 45,961 0,082 0,107 0,073 0,087 0,000 0,018 Nồng độ Glucose (μg/ml) 173,200 223,200 155,200 183,867 1241,333 35,233 Hoạt độ (UI/g) 404,133 520,800 362,133 429,022 6758,370 82,209 0,153 0,142 0,162 0,152 0,000 0,010 Nồng độ Glucose (μg/ml) 315,200 293,200 333,200 313,867 401,333 20,033 Hoạt độ (UI/g) 735,467 684,133 777,467 732,356 2185,037 46,744 Nồng độ Glucose (μg/ml) OD OD 65% bình OD 60% Phương Hoạt độ (UI/g) 55% Trung OD 50% Số lần Chủng Đ56 (glucoamylase) Độ ẩm (%) Số lần Trung Phương bình sai Sai số 0,036 0,041 0,047 0,041 3,03E-05 0,006 81,2 91,2 103,2 91,867 1,21E+02 11,015 189,467 212,8 240,8 214,356 6,61E+02 25,702 0,083 0,082 0,093 0,086 3,70E-05 0,006 175,2 173,2 195,2 181,200 1,48E+02 12,166 Hoạt độ (UI/g) 408,8 404,13 455,467 422,800 8,06E+02 28,386 OD 0,092 0,087 0,098 0,092 3,03E-05 0,006 193,2 183,2 205,2 193,867 1,21E+02 11,015 Hoạt độ (UI/g) 450,8 427,47 478,8 452,356 6,61E+02 25,702 OD 0,104 0,112 0,103 0,106 2,43E-05 0,005 217,2 233,2 215,2 221,867 9,73E+01 9,866 506,8 544,13 502,133 517,689 5,30E+02 23,020 OD 50% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 55% Nồng độ Glucose (μg/ml) 60% Nồng độ Glucose (μg/ml) 65% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) 14 PHỤ LỤC 14 Ảnh hưởng độ mặn đến hoạt độ α-amylase hai chủng NS Chủng Đ10 (α) Độ mặn (%) 0% Sai số 0,129 4,333E-06 0,002 3,019 3,059 2,504E-03 0,050 207,692 202,885 201,282 203,953 1,113E+01 3,336 OD 0,131 0,128 0,127 Lượng tinh bột (mg/ml) 3,115 3,043 bình OD 0,178 0,181 0,179 0,179 2,333E-06 0,002 Lượng tinh bột (mg/ml) 4,245 4,317 4,269 4,277 1,348E-03 0,037 283,013 287,821 284,615 285,150 5,992E+00 2,448 OD 0,207 0,199 0,204 0,203 1,633E-05 0,004 Lượng tinh bột (mg/ml) 4,942 4,750 4,870 4,854 9,438E-03 0,097 329,487 316,667 324,679 323,611 4,195E+01 6,477 Hoạt độ (UI/g) 5% Phương sai Hoạt độ (UI/g) 3% Trung Hoạt độ (UI/g) 1% Số lần OD 0,178 0,165 0,172 0,172 4,233E-05 0,007 Lượng tinh bột (mg/ml) 4,245 3,933 4,101 4,093 2,446E-02 0,156 283,013 262,179 273,397 272,863 Hoạt độ (UI/g) OD 10% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 1,087E+02 10,427 0,107 0,088 0,097 0,097 9,033E-05 0,010 2,538 2,082 2,298 2,306 5,220E-02 0,228 169,231 138,782 153,205 153,739 0,092 0,021 0,067 0,060 2,320E+02 15,231 1,297E-03 0,036 14 PHỤ LỤC 14 (tt) Ảnh hưởng độ mặn đến hoạt độ α-amylase hai chủng NS Chủng Đ56 (α) Độ mặn (%) 0% Phương sai Sai số OD 0,083 0,097 0,072 0,084 0,000157 0,013 Lượng tinh bột (mg/ml) 1,962 2,298 1,697 1,986 0,091 0,301 130,769 153,205 113,141 132,372 403,209 20,080 OD 0,086 0,087 0,091 0,088 7E-06 0,003 Lượng tinh bột (mg/ml) 2,034 2,058 2,154 2,082 0,004 0,064 135,577 137,179 143,590 138,782 17,977 4,240 OD 0,122 0,121 0,119 0,121 2,33333E-06 0,002 Lượng tinh bột (mg/ml) 2,899 2,875 2,827 2,867 0,001 0,037 193,269 191,667 188,462 191,132 5,992 2,448 Hoạt độ (UI/g) 5% bình Hoạt độ (UI/g) 3% Trung Hoạt độ (UI/g) 1% Số lần OD 0,132 0,123 0,138 0,131 5,7E-05 0,008 Lượng tinh bột (mg/ml) 3,139 2,923 3,284 3,115 0,033 0,181 209,295 194,872 218,910 207,692 146,388 12,099 Hoạt độ (UI/g) OD 10% Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 20% Lượng tinh bột (mg/ml) 0,099 0,07 0,086 0,085 0,000211 0,015 2,346 1,649 2,034 2,010 0,122 0,349 156,410 109,936 135,577 133,974 541,893 23,279 0,014 0,046 0,039 0,033 0,000283 0,017 0,303 1,072 0,904 0,760 0,164 0,404 PHỤ LỤC 15 Ảnh hưởng độ mặn đến hoạt độ glucoamylase hai chủng NS Chủng Đ10 (glucoamylase) Độ mặn (%) OD 0% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 1% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 3% Trung bình Phương sai Sai số 0,025 0,042 0,037 0,035 0,000 0,009 59,200 93,200 83,200 78,533 305,333 17,474 138,133 217,467 194,133 183,244 1662,370 40,772 0,029 0,081 0,032 0,047 0,001 0,029 67,200 171,200 73,200 103,867 3409,333 58,389 156,800 399,467 170,800 242,356 0,056 0,041 18561,926 136,242 0,053 0,050 0,000 0,008 Nồng độ Glucose (μg/ml) 121,200 91,200 115,200 109,200 252,000 15,875 Hoạt độ (UI/g) 282,800 212,800 268,800 254,800 1372,000 37,041 0,093 0,099 0,000 0,013 Nồng độ Glucose (μg/ml) 235,200 189,200 195,200 206,533 625,333 25,007 Hoạt độ (UI/g) 548,800 441,467 455,467 481,911 3404,593 58,349 OD 5% Số lần OD 10% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 20% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) 0,113 0,090 0,022 0,038 0,034 0,031 0,000 0,008 53,200 85,200 77,200 71,867 277,333 16,653 124,133 198,800 180,133 167,689 1509,926 38,858 0,012 0,041 0,029 0,027 0,000 0,015 33,200 91,200 67,200 63,867 849,333 29,143 77,467 212,800 156,800 149,022 4624,148 68,001 15 PHỤ LỤC 15 (tt) Ảnh hưởng độ mặn đến hoạt độ glucoamylase hai chủng NS Chủng Đ56 (glucoamylase) Độ mặn (%) Sai số 0,021 0,017 0,019 0,019 0,000 0,002 51,200 43,200 47,200 47,200 16,000 4,000 119,467 100,800 110,133 110,133 87,111 9,333 0,029 0,030 0,032 0,030 0,000 0,002 67,200 69,200 73,200 69,867 9,333 3,055 156,800 161,467 170,800 163,022 50,815 7,128 0,088 0,090 0,086 0,088 0,000 0,002 Nồng độ Glucose (μg/ml) 185,200 189,200 181,200 185,200 16,000 4,000 Hoạt độ (UI/g) 432,133 441,467 422,800 432,133 87,111 9,333 0,109 0,123 0,097 0,110 0,000 0,013 Nồng độ Glucose (μg/ml) 227,200 255,200 203,200 228,533 677,333 26,026 Hoạt độ (UI/g) 530,133 595,467 474,133 533,244 3687,704 60,726 0,100 0,101 0,107 0,103 0,000 0,004 209,200 211,200 223,200 214,533 57,333 7,572 488,133 492,800 520,800 500,578 312,148 17,668 0,024 0,021 0,026 0,024 0,000 0,003 57,200 51,200 61,200 56,533 25,333 5,033 133,467 119,467 142,800 131,911 137,926 11,744 Nồng độ Glucose (μg/ml) Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD OD 5% Phương sai OD 3% bình Hoạt độ (UI/g) 1% Trung OD 0% Số lần OD 10% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 20% Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) 16 PHỤ LỤC 16 Đơng học q trình sinh α-amylase hai chủng NS Chủng Đ10 (α) Tổng hợp OD 24 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 36 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 48 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 60 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 72 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 84 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 96 Lượng tinh bột (mg/ml) Số lần Trung Phương bình sai Sai số 0,114 0,109 0,105 0,109 2,033E-05 0,005 2,707 2,587 2,490 2,595 1,175E-02 0,108 172,970 5,222E+01 7,226 180,449 172,436 166,026 0,158 0,149 0,154 0,154 2,033E-05 0,005 3,764 3,548 3,668 3,660 1,175E-02 0,108 244,017 5,222E+01 7,226 250,962 236,538 244,551 0,187 0,186 0,189 0,187 2,333E-06 0,002 4,462 4,438 4,510 4,470 1,348E-03 0,037 297,970 5,992E+00 2,448 297,436 295,833 300,641 0,157 0,153 0,163 0,158 2,533E-05 0,005 3,740 3,644 3,885 3,756 1,464E-02 0,121 250,427 6,506E+01 8,066 249,359 242,949 258,974 0,167 0,147 0,141 0,152 1,853E-04 0,014 3,981 3,500 3,356 3,612 1,071E-01 0,327 265,385 233,333 223,718 240,812 4,760E+02 21,817 0,149 0,149 0,137 0,145 4,800E-05 0,007 3,548 3,548 3,260 3,452 2,774E-02 0,167 236,538 236,538 217,308 230,128 1,233E+02 11,103 0,133 0,128 0,125 0,129 1,633E-05 0,004 3,163 3,043 2,971 3,059 9,438E-03 0,097 16 PHỤ LỤC 16 (tt) Đơng học q trình sinh α-amylase hai chủng NS Chủng Đ56 (α) Tổng hợp OD 24 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 36 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 48 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 60 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 72 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 84 Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 96 Lượng tinh bột (mg/ml) Số lần Trung Phương bình sai Sai số 0,115 0,117 0,114 0,115 0,000 0,002 2,731 2,779 2,707 2,739 0,001 0,037 182,051 185,256 180,449 182,585 5,992 2,448 0,155 0,145 0,146 0,149 0,000 0,006 3,692 3,452 3,476 3,540 0,018 0,132 246,154 230,128 231,731 236,004 77,902 8,826 0,146 0,172 0,153 0,157 0,000 0,013 3,476 4,101 3,644 3,740 0,105 0,323 231,731 273,397 242,949 249,359 464,846 21,560 0,179 0,162 0,164 0,168 0,000 0,009 4,269 3,861 3,909 4,013 0,050 0,223 284,615 257,372 260,577 267,521 221,722 14,890 0,163 0,129 0,138 0,143 0,000 0,018 3,885 3,067 3,284 3,412 0,179 0,423 258,974 204,487 218,910 227,457 797,002 28,231 0,124 0,127 0,126 0,126 0,000 0,002 2,947 3,019 2,995 2,987 0,001 0,037 196,474 201,282 199,679 199,145 5,992 2,448 0,121 0,123 0,118 0,121 0,000 0,003 2,875 2,923 2,803 2,867 0,004 0,060 17 PHỤ LỤC 17 Đơng học q trình sinh glucoamylase hai chủng NS Chủng Đ10 (glucoamylase) Tổng hợp OD 24 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 36 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 48 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 60 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 72 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 84 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 96 Nồng độ Glucose (μg/ml) Số lần Trung bình Phương sai Sai số 0,094 0,062 0,076 0,077 0,000 0,016 197,200 133,200 161,200 163,867 1029,333 32,083 460,133 310,800 376,133 382,356 5604,148 74,861 0,152 0,136 0,141 0,143 0,000 0,008 313,200 281,200 291,200 295,200 268,000 16,371 730,800 656,133 679,467 688,800 1459,111 38,198 0,217 0,222 0,213 0,217 0,000 0,005 443,200 453,200 435,200 443,867 81,333 9,018 1015,467 1035,689 442,815 21,043 0,007 0,084 1034,133 1057,467 0,166 0,334 0,262 0,254 341,200 677,200 533,200 517,200 796,133 1580,133 28416,000 168,570 1244,133 1206,800 154709,333 393,331 0,247 0,086 0,162 0,165 0,006 0,081 503,200 181,200 333,200 339,200 1174,133 422,800 777,467 791,467 141272,444 375,862 0,109 0,167 0,137 0,138 0,001 0,029 227,200 343,200 283,200 284,533 3365,333 58,011 530,133 800,800 660,800 663,911 0,049 0,069 0,063 0,060 0,000 0,010 107,200 147,200 135,200 129,867 421,333 20,526 25948,000 161,084 18322,370 135,360 17 PHỤ LỤC 17 (tt) Đơng học q trình sinh glucoamylase hai chủng NS Chủng Đ56 (glucoamylase) Tổng hợp 0,119 0,119 0,000 0,001 Nồng độ Glucose (μg/ml) 247,200 245,200 247,200 246,533 1,333 1,155 Hoạt độ (UI/g) 576,800 572,133 576,800 575,244 7,259 2,694 0,142 0,117 0,125 0,128 0,000 0,013 Nồng độ Glucose (μg/ml) 293,200 243,200 259,200 265,200 652,000 25,534 Hoạt độ (UI/g) 684,133 567,467 604,800 618,800 3549,778 59,580 0,254 0,158 0,216 0,209 0,002 0,048 517,200 325,200 441,200 427,867 9349,333 96,692 1206,800 758,800 1029,467 998,356 50901,926 225,615 0,205 0,234 0,227 0,222 0,000 0,015 Nồng độ Glucose (μg/ml) 419,200 477,200 463,200 453,200 916,000 30,265 Hoạt độ (UI/g) 978,133 1113,467 1080,800 1057,467 4987,111 70,619 0,297 0,255 0,261 0,271 0,001 0,023 603,200 519,200 531,200 551,200 2064,000 45,431 1407,467 1211,467 1239,467 1286,133 11237,333 106,006 0,065 0,113 0,073 0,084 0,001 0,026 93,200 127,200 113,200 111,200 292,000 17,088 217,467 296,800 264,133 259,467 1589,778 39,872 0,042 0,059 0,052 0,051 0,000 0,009 139,200 235,200 155,200 176,533 2645,333 51,433 Nồng độ Glucose (μg/ml) OD Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 84 Nồng độ Glucose (μg/ml) Hoạt độ (UI/g) OD 96 Sai số 0,118 OD 72 sai 0,119 Hoạt độ (UI/g) 60 bình OD 48 Phương OD 36 Trung OD 24 Số lần Nồng độ Glucose (μg/ml) PHỤ LỤC 18 So sánh hoạt độ amylase chế phẩm thu với chế phẩm amylase lưu hành thị trường Khả dịch hóa Chủng Đ10 0.338 0.001 0.023 8.308 8.099 0.312 0.559 568.269 553.846 539.957 1387.690 37.252 0.403 0.413 0.378 0.398 0.000 0.018 9.654 9.894 9.053 9.534 0.188 0.433 643.590 659.615 603.526 635.577 834.669 28.891 OD 0.176 0.223 0.215 0.205 0.001 0.025 Lượng tinh bột (mg/ml) 4.197 5.327 5.135 4.886 0.365 0.604 bình OD 0.312 0.356 0.347 Lượng tinh bột (mg/ml) 7.466 8.524 497.756 OD Lượng tinh bột (mg/ml) Hoạt độ (UI/g) Chế phẩm VSHNNĐ Trung Sai số Chỉ số Hoạt độ (UI/g) Chủng Đ56 Số lần Phương sai Enzyme Khả đường hóa Enzyme Chỉ số OD Chủng Đ10 0.082 0.107 Trung 0.073 Phương sai Sai s 0.087 0.000 0.01 bình Nồng độ Glucose (μg/ml) 173.200 223.200 155.200 183.867 1241.333 35.23 Hoạt độ (UI/g) 4041.333 5208.000 3621.333 4290.222 675837.037 822.0 0.088 0.000 0.00 OD Chủng Đ56 Số lần 0.086 0.087 0.091 Nồng độ Glucose (μg/ml) 181.200 183.200 191.200 185.200 28.000 5.29 Hoạt độ (UI/g) 4228.000 4274.667 4461.333 4321.333 15244.444 123.4 0.242 0.001 0.02 492.533 2149.333 46.36 OD 0.217 0.245 0.263 443.200 499.200 535.200 Chế phẩm Nồng độ Glucose (μg/ml) ... muốn thu nhận chủng NS mang đặc tính q, chúng tơi tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu thu nhận enzym amylase số chủng NS phân lập từ rừng ngập mặn Cần Giờ? ??  Mục tiêu đề tài Tuyển chọn khảo sát số chủng. .. α -amylase glucoamylase cao từ RNM Cần Giờ Tp Hồ Chí Minh  Nhiệm vụ đề tài - Phân lập chủng NS thu nhận từ RNM Cần Giờ - Khảo sát khả sinh tổng hợp amylase chủng NS phân lập - Tuyển chọn chủng. .. Lan Hương ? ?Nghiên cứu khả sinh enzym amylase số chủng NS RNM Cần Giờ? ?? [15] Có thể nói nghiên cứu NS sinh amylase đất liền phong phú đa dạng, nghiên cứu amylase NS từ RNM Cần Giờ cịn ỏi, chưa