Khảo sát đặc điểm sinh học một số nhóm nấm sợi tại rừng ngập mặn cần giờ tp hồ chí minh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Võ Thị Bích Viên KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC MỘT SỐ NHÓM NẤM SỢI TỪ RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ TP HỒ CHÍ MINH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC SINH HỌC Chuyên ngành : Vi Sinh Vật Mã số: 60 42 40 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THANH THUỶ Thành phố Hồ Chí Minh - 2009 MỞ ĐẦU Nấm sợi hay gọi nấm mốc, phát triển nhanh nhiều nguồn chất hữu gặp điều kiện khí hậu nóng ẩm Trong tự nhiên, nấm sợi phân bố rộng rải tham gia tích cực vào vịng tuần hồn vật chất, q trình phân giải chất hữu hình thành chất mùn Ngồi ra, có nhiều lồi nấm sợi sử dụng rộng rải CN chế biến thực phẩm (làm tương, nước chấm…), CN enzim (sản xuất amilaza, proteaza, cellulaza…), CN dược phẩm (sản xuất KS, steroid…), sản xuất thuốc trừ sâu sinh học, kích thích tố sinh trưởng TV, sản xuất sinh khối nấm sợi để phục vụ chăn nuôi dinh dưỡng cho người (mycoprotein), dùng nấm sợi để xử lý nhiễm MT [4] Bên cạnh cịn có nhiều lồi nấm sợi ký sinh người, ĐV, TV gây nhiều bệnh nguy hiểm Nhiều nấm sợi sinh độc tố nấm gây bệnh ung thư nhiều bệnh khác Nấm mốc cịn phát triển, sinh axít làm mờ vật liệu vơ (thấu kính ống nhịm, kính hiển vi số dụng cụ quang học khác) Để tận dụng tối đa nguồn lợi to lớn từ nấm sợi đồng thời hạn chế tác hại nấm sợi gây ra, người tập trung nghiên cứu vấn đề liên quan đến nấm sợi Trước đây, nhà nghiên cứu thường tập trung tìm hiểu nấm sợi phân bố đất liền Những năm gần đây, người nhận thấy hết tầm quan trọng hệ sinh thái RNM - HST có suất sinh học cao HST Với điều kiện sinh thái RNM người nghiên cứu khả chịu đựng phục hồi tổ hợp gen Có thể tìm chủng nấm sợi có hệ gen bền vững mang nhiều đặc tính có lợi cho người Nhiều lồi thuộc chi Aspergillus Penicillium phân bố rộng rải nhiều loại chất tự nhiên, phổ biến khắp nơi trái đất Theo E Kister, M Morelet (2000) ước tính số lượng lồi biết chi Penicillium khoảng 233 loài, chi Aspergillus khoảng 185 loài.[52] Sự phong phú đa dạng thành phần loài chúng mang lại lợi ích sinh thái kinh tế vơ to lớn Bên cạnh tác hại khơng nhỏ, với khó khăn công tác phân loại, hệ thống hai chi nấm Trong hệ sinh thái RNM Cần Giờ chi Aspergillus Penicillium có vai trị quan trọng, tham gia vào phân huỷ nhanh xác TV, ĐV, góp phần khép kín chu trình vật chất nhờ có khả sinh enzim cellulaza, proteaza, amilaza, kitinaza để phân giải hợp chất hữu MT Ngoài ra, nấm sợi cịn có khả phân giải hợp chất hydrocacbon giúp bảo vệ MT, nấm sợi có khả sinh KS Trên giới, cơng trình nghiên cứu phân loại, ứng dụng chi Aspergillus Penicillium nhiều tập trung đất liền Rất có nghiên cứu hai chi biển hay RNM Cho đến nay, chưa có cơng trình khoa học thức có hệ thống VSV, đặc biệt khu hệ nấm sợi RNM Việt Nam nói chung, RNM Cần Giờ nói riêng Để góp phần nâng cao hiểu biết giá trị tài nguyên sinh học từ RNM, đặc biệt khu hệ nấm sợi tiến hành nghiên cứu đề tài “Khảo sát đặc điểm sinh học số nhóm nấm sợi từ Rừng ngập mặn Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí Minh”.Thực tế, số nhóm nấm sợi RNM Cần Giờ lớn, nên phạm vi đề tài tập trung khảo sát hai chi Aspergillus Penicillium Mục tiêu đề tài nhằm tìm hiểu tính đa dạng vai trị số chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicillium RNM Cần Giờ Tp Hồ Chí Minh Nhiệm vụ đề tài + Phân lập chủng nấm sợi RNM Cần Giờ + Phân loại chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicillium + Khảo sát số đặc điểm sinh học chủng nấm sợi phân lập + Từ chủng phân lập tuyển chọn chủng có đặc điểm bật Bước đầu nhận xét sơ đặc điểm sinh học chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicillium Đề tài tiến hành từ tháng năm 2008 đến tháng năm 2009 phòng thí nghiệm Sinh hố – Vi sinh, khoa Sinh, Trường Đại học Sư phạm Tp Hồ Chí Minh PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Rừng ngập mặn Cần Giờ Rừng ngập mặn (RNM) HST quan trọng hệ thống đất ngập nước RNM HST đặc biệt với điều kiện sinh thái đặc trưng khí hậu nóng, đất mặn ngập nước quanh năm, có thuỷ triều lên xuống, thường xuyên thiếu khí oxy ngập nước, đất chưa ổn định Với MT đó, quần hợp TV khơng họ hàng với có đặc tính sinh lý giống nhau, thích nghi sinh thái giống tạo nên kiểu rừng gọi RNM Ở miền Nam, Việt Nam RNM gọi Rừng sát, tiếng Anh gọi Mangrove Danh từ Mangrove thông dụng giới Trên giới, RNM thường gặp vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Ở Việt Nam, RNM bao phủ diện tích khoảng 400,000 vào năm 1943 (Maurand, 1943) Tuy nhiên, nhiều nguyên nhân khác chiến tranh, chuyển đổi mục đích sử dụng, đốn củi, làm cho diện tích RNM ngày thu hẹp Hơn 60 năm qua, 80% diện tích RNM bị tàn phá suy giảm chất lượng (worldbank, 2003) Đặc biệt năm 1995 trở lại đây, RNM bị thu hẹp cách nhanh chóng nguyên nhân người phá RNM để nuôi tôm.[10] Khu dự trữ sinh RNM Cần Giờ hình thành hạ lưu sơng Đồng Nai – Sài Gịn nằm cửa ngõ Đơng Nam Thành phố Hồ Chí Minh: RNM Cần Giờ giới hạn đoạn sơng, rạch, tắc: sơng Sồi Rạp, sơng Vàm Sát- rạch Đơn- tắc An Nghĩa- sơng Lịng tàu, tắc Rổi- sơng Đồng Tranh- tắc Nước Hội- sơng Thị Vải- sơng Gị Giasông Cái Mép biển Đông, từ bắc xuống Nam dài 28km, từ Đông sang Tây dài 30km Thổ nhưỡng phát triển đầm mặn mới, phù sa sơng Sài Gịn sơng Đồng Nai mang đến lắng đọng tạo thành đất Đất Cần Giờ cấu tạo q trình trầm tích sét, q trình phèn hố q trình nhiễm mặn Khí hậu Cần Giờ nóng ẩm chịu chi phối qui luật gió mùa cận xích đạo với hai mùa mưa nắng rõ rệt Lượng mưa: thấp TP Hồ Chí Minh, trung bình 1300 – 1400mm/năm, mùa mưa thường tháng kết thúc vào tháng 10, lượng mưa thường tập trung vào tháng tháng [35] - Chế độ nhiệt: Biên độ nhiệt ngày từ – 70C, nhiệt độ trung bình 25,80C, nhiệt độ thấp tuyệt đối 18,80C, nhiệt độ cao tuyệt đối 350C [35] - Độ ẩm khơng khí: cao nơi khác TP Hồ Chí Minh, mùa mưa độ ẩm từ 79 – 83%, mùa khô độ ẩm từ 74 – 77%, ẩm vào tháng 9, khô vào tháng [36] - Chế độ thuỷ triều: chế độ bán nhật triều không đều, hai lần nước lớn hai lần nước rịng ngày Các tháng có đỉnh triều cực đại tháng 10 tháng 11, đỉnh triều thấp tháng tháng [36] - Độ mặn: trung bình từ 1,5 – 2,5% , tùy theo khu vực lên đến 18% [13], lớn triều cường nhỏ triều kém, nước mặn xâm nhập sâu vào tháng bị đẩy xa vào tháng tháng 10 * Khu hệ thực vật Khu dự trữ sinh RNM Cần Giờ có 150 lồi TV, lồi chủ yếu bần trắng, mấm trắng, quần hợp đước đôi - bần trắng sú, ổi, trang, đưng v.v… loại nước lợ bần chua, quần hợp mái dầm – ô rô, dừa lá, ráng, v.v… Thảm cỏ biển với loài ưu Halophyla sp., Halodule sp., Thalassia sp.; đất canh tác nông nghiệp với lúa, khoai mỡ, loại đậu, dừa v.v…; vườn ăn trái [34] * Khu hệ động vật Theo khảo sát sơ dự án khả thi khu bảo tồn tự nhiên RNM Cần Giờ năm 1999, kết quả: + Khu hệ ĐV thuỷ sinh không xương sống cạn có lồi lưỡng thê, 31 lồi bị sát, lồi hữu nhũ Trong có 11 lồi bị sát có tên sách đỏ Việt Nam như: tắc kè (gekko gekko), kỳ đà nước (varanus salvator), trăn đất (python molurus), trăn gấm (python reticulatus), rắn cạp nong (bungarus fasciatus), rắn hổ mang (naja naja), rắn hổ chúa (ophiophagus hannah), vích (chelonia mydas), cá sấu hoa cà (crocodylus porosus)… [34] + Khu hệ chim có khoảng 130 lồi thuộc 47 họ, 17 Trong có 51 lồi chim nước 79 lồi khơng phải chim nước sống nhiều sinh cảnh khác [35] Phân vùng khu dự trữ sinh Cần Giờ: Tổng diện tích Khu dự trữ sinh RNM Cần Giờ 75.740 ha, đó: vùng lõi 4.721 ha, vùng đệm 41.139 ha, vùng chuyển tiếp 29.880 [35] * Khu hệ VSV - Vi khuẩn VK với nấm tạo nên thành phần quan trọng hệ sinh thái RNM Là SV phân huỷ, chúng đóng vai trò trung tâm mặt chức HST Số lượng VK RNM chiếm tỉ lệ cao, đặc biệt trầm tích quần thể VK dị dưỡng nhiều gấp 2-3 lần lớp nước mặt, quần thể bùn lớn gấp vài lần cát [34] Nhiều loài sống giá thể bề mặt rắn chất nhầy dính bám Do đó, VK tạo nên bề mặt mỏng mặt bùn tạo điều kiện cho loài tảo, cỏ biển ngập mặn phát triển - Nấm Khu hệ nấm RNM nhiều đa dạng Phần lớn vi nấm, có số lồi có kích thước lớn Nấm đóng vai trị quan trọng RNM, với VK chúng góp phần phân huỷ nhanh xác TV (Fell cộng 1975) Người ta phân loại nấm dựa mơi trường RNM: tán cây, thân, rễ hô hấp đất, có số lồi sống từ hai MT trở lên [33] Ở Ấn Độ, muời loài nấm phân lập từ RNM Pichavaram Aspergillus flavus, A ochraceus, Alternaria alternata, A tenuissima, Rhizopus nigricans, Penicillum funiculosum, P expansum, Humicola fuscoatra, Mucor racemosa Fusarium oxysporum Aspergillus Penicillium chiếm số lượng nhiều tất RNM lọai Alternaria alternata Rhizopus nigricans (Sivakumar and Kathiresan, 1990) Số nấm đếm mục RNM nhiều tươi [41] Người ta tìm thấy ngập mặn có lồi nấm ký sinh hoại sinh như: Ascomycetes, Bacidiomycetes Deuteromycetes Người ta tìm thấy chi nấm có mặt Đước đỏ (R mangle): Cladosporium, Pestalotia, Alternaria, Zygosporium, Penicillium Aureobacidium [34] Các chi nấm ký sinh hoại sinh sống ngập mặn thường gây bệnh cho chủ như: Pestalotia, Phyllosticta, Cladosporium, Nigrospora Cercospora Hầu hết loài nấm đất liền có ngập mặn, cịn lồi nấm biển có rễ phần gỗ ngâm nước mặn Khi chết gỗ phân huỷ tạo điều kiện thuận lợi cho loại nấm phân huỷ phát triển Các mẫu gỗ để ngâm nước biển có tỉ lệ phân huỷ cao vùng ngập triều cao [34] Nấm đất RNM phân loại nấm đất loại nấm sống mảnh vụn mặt đất Cả hai loại phụ thuộc vào lượng chất hữu có bề mặt đất Một vài loài, đặc biệt Aspergillus candidus cho thấy khả tạo hợp chất phosphate tan từ chất phosphorus không tan cho SV khác sử dụng Vì vậy, nấm đóng vai trị tạo chất dinh dưỡng HST (Prabhakaran et al., 1987) [41] Đối với ngập mặn nấm SV phân huỷ đầu tiên, nhờ khả phân giải cellulose lignin Đa số loại nấm phân lập lá, gỗ thường nấm hoại sinh góp phần phân huỷ xác TV Chúng góp phần phân huỷ cỏ biển, bùn đầm lầy mặn [46] Nấm đóng vai trị quan trọng HST Cùng với VK, nấm SV phân hủy hầu hết HST Bởi vậy, nấm sợi có vai trị quan trọng chu trình sinh địa hóa nhiều lưới thức ăn Khi sống hoại sinh hay cộng sinh, chúng phân hủy vật chất hữu thành phân tử vơ cơ, sau chất đồng hóa TV hay SV khác [46] Bản thân nấm sợi RNM trở thành nguồn thức ăn giàu đạm cho nhiều loài ĐV nhỏ ấu trùng số loài (Odum, 1980; Alongi, 1989) Tuy nhiên, hoạt động sống nấm sợi RNM lại làm giảm lượng oxi đất, bùn RNM q trình hơ hấp, gây bệnh cho động thực vật thải vào MT số chất độc amoniac, sunfuahidrơ…[13] VSV RNM ngồi VK nấm sợi cịn có nấm men, xạ khuẩn… chúng đóng vai trị quan trọng chu trình tuần hồn vật chất hệ sinh thái RNM Có vai trị bảo vệ MT sinh thái RNM nói riêng MT sinh thái nói chung, vai trị to lớn mối quan hệ sinh học lồi SV Từ đó, đóng góp vào việc giữ cân cho HST đặc biệt  Vai trò RNM kinh tế Một số loài TV RNM xếp vào nhóm cơng dụng chủ yếu: 30 loài cho gỗ, than, củi, 14 loài cho tannin, 24 loài làm phân xanh, 21 loài dùng làm thuốc, loài chủ thả kiến cánh đỏ, 21 lồi cho mật ni ong, loài cho nhựa để sản xuất nước giải khát [2] Ngồi ra, RNM cịn có nguồn tài nguyên ĐV phong phú loài lưỡng cư, 22 lồi bị sát, 67 lồi chim, 21 lồi thú… SV nước phong phú gồm 64 loài cá thuộc 35 họ, 25 lồi tơm, 66 lồi TV phiêu sinh, 26 loài ĐV phiêu sinh 22 loài ĐV đáy [2] Trong hệ sinh thái RNM, loài động thực vật, VSV đất MT tự nhiên liên kết với thơng qua q trình trao đổi đồng hóa lượng Các q trình nội cố định lượng, tích lũy sinh khối, phân hủy vật chất hữu chu trình dinh dưỡng chịu ảnh hưởng mạnh mẽ nhân tố bên gồm nước, thủy triều, nhiệt độ lượng mưa RNM phát triển tốt nước có nồng độ muối 15 - 25‰ [2]  Vai trò RNM MT Bên cạnh giá trị lâm sản than, gỗ, củi, thức ăn, thuốc… RNM cịn đóng vai trị quan trọng việc điều hịa khí hậu, mở rộng diện tích đất bồi, hạn chế xói lở trình xâm thực bờ biển RNM cung cấp chất hữu để tăng suất cho vùng ven biển, nơi sinh sản ươm ni nhiều lồi hải sản có giá trị kinh tế cao tơm, cua, cá,… Mặt khác, RNM cịn có tác dụng làm chậm dòng chảy phát tán rộng nước triều, làm giảm mạnh độ cao sóng triều cường Hạn chế tác hại sóng thần bão lớn, hạn chế xâm nhập mặn bảo vệ nước ngầm RNM bảo vệ đa dạng sinh học, điều chỉnh nồng độ muối MT, làm MT nước có lũ lụt, lũ quét, sạt lở đất.[4][18] 1.2 Sơ lược nấm sợi 1.2.1 Phân loại nấm sợi Nấm phân bố toàn giới phát triển nhiều dạng MT sống khác nhau, kể sa mạc Đa phần nấm sống cạn, số loài lại tìm thấy MT nước Nấm VK SV phân huỷ chính, có vai trị quan trọng HST cạn Dựa theo tỉ lệ số loài nấm với số loài TV MT, người ta ước tính giới Nấm có khoảng 1,5 triệu lồi [38] Theo G.C.Ainsworth (1973): Hệ thống giới nấm bao gồm hai ngành: Myxomycota Eumycota Eumycota bao gồm ngành phụ: Mastigomycotina, Deuteromycotina, Zygomycotina, Ascomycotina Basidiomycotina [49] Ngành phụ Deuteromycotina chia theo lớp: [50] + Khuẩn ty không phát triển phát triển yếu; dạng thể giống nấm men có nảy chồi: Blastomycetes + Khuẩn ty thật, không nảy chồi; sợi nấm bất dục sinh BT cuống, khơng có tập trung thành túi BT hay cụm cuống BT: Hyphomycetes + Khuẩn ty thật, BT tập trung túi BT cụm cuống BT: Coelomycetes Lớp Hyphomycetes chia thành bộ: Moniliales, Melanconiales Sphaeropsidales Có thể tóm tắt phần phân loại nấm sơ đồ (xem phần phụ lục 12) Theo C J Alexopoulos (2002), nấm có phần giới nấm, giới Stramenopila (một giới bao gồm SV có cấu trúc lơng roi tách từ protista) giới Protista Giới nấm có ngành: Chytridiomycota, Zygomycota, Ascomycota, Basidiomycota Phần nấm giới Stramenopila có ngành: Oomycota, Hyphochytriomycota, Labryrinthulomycota Bốn ngành khác nấm xem SV nguyên sinh giới protista: Plasmodiomycota, Dictyosteliomycota, Acrasiomycota, Myxomycota Lý phân chia từ chứng nghiên cứu rRNA hoá sinh học Các chứng chứng minh tồn nhóm nấm khác Gần đây, sau hệ thống phân loại giới xuất hiện, giới nấm tái cấu trúc xếp lại Tất phần giới khác tập hợp lại giới nấm Các nhà nấm học phân chia giới thành hai phần: nấm giả, bao gồm ngành: Oomycota, Hyphochytridiomycota, Labyrinthulomycota, Plasmodiophoromycota, Dictyosteliomycota, Acrasiomycota Myxomycota nấm thật phần cịn lại [49] 1.2.2 Hình thái cấu tạo chung nấm sợi Sợi nấm (hypha) có dạng hình ống phân nhánh, bên chứa chất nguyên sinh chuyển động Có đường kính 1-30µm (thơng thường 5-10 µm) Đỉnh sợi nấm có hình chóp nón khơng tăng trưởng, có tác dụng bảo vệ phần sợi nấm Phần chất ngun sinh khơng có nhân chứa quan tử Tiếp đến phần tăng trưởng chứa nhiều nhân, nhiều quan tử nhiều enzim Đây phần định tăng trưởng phân nhánh sợi nấm Dưới phần thành cứng - phần thành thục sợi nấm Bắt đầu từ phần trở xuống chấm dứt tăng trưởng sợi nấm (xem hình 1a) [4] [50] Nhân tế bào bao bọc màng nhân, màng nhân có nhiều lỗ nhỏ, nhân có hạch nhân (nucleolus) Trong tế bào nấm cịn có ty thể (mitochondrion), mạng nội chất (endoplasmic reticulum), dịch bào hay không bào (vacuolus), ribosome, bào nang (vesicle) , thể golgi [4], giọt lipid (lipid droplet), tinh thể (chrystal) vi thể đường kính 0,5-1,5 nm (microbody), thể vơrơnin đường kính 0,2µm (Woronin body), thể Chitơ đường kính 40-70nm(chitosome)… Ngồi tế bào chất cịn có vi quản rỗng ruột, đường kính 25nm (microtubule), vi sợi đường kính 5-8nm (microfilament), thể màng biên (plasmalemmasome) (xem hình 1b) [50] Khơng bào Nhân Vách tế bào Màng tế bào Thể golgi Ti thể Luới nội chất (a) Cấu tạo phần sợi nấm [51] Nhân (b) Cấu trúc sợi nấm [51] Hình 1.1: Cấu tạo phần cấu trúc sợi nấm Ribosome nấm thuộc loại 80S (S đơn vị hệ số lắng Svedberg) có đường kính khoảng 20-25nm, gồm tiểu phần: tiểu phần lớn 60S tiểu phần nhỏ 40S [51] Phần lớn sợi nấm có dạng suốt, số nấm có sợi mang sắc tố tạo nên màu tối hay màu sặc sỡ Sắc tố số nấm cịn tiết ngồi MT làm đổi màu khu vực có nấm phát triển Một số nấm tiết chất hữu tạo nên tinh thể bề mặt KL Vì BT nấm thường có màu nên KL thường có màu Các nấm bậc thấp thường có sợi nấm khơng vách ngăn Ngược lại, nấm bậc cao thường mang sợi nấm có vách ngăn (xem hình 2) Sợi nấm khơng vách ngăn mang nhiều nhân gọi đơn bào Ở nấm không vách ngăn vách ngăn hình thành thể sinh sản, phận bị thương tổn sợi nấm hình thành vách ngăn Đó loại vách ngăn liền, khơng có lỗ thủng, có tác dụng bảo vệ thể [5] Sợi nấm có vách ngăn thể đa bào Mỗi tế bào có nhân nhiều nhân Tuy nhiên, sợi nấm nhiều tế bào hợp thành mà vách ngăn tách sợi nấm thành nhiều tế bào Hình 1.2: Sợi nấm có vách ngăn sợi nấm khơng có vách ngăn Vách ngăn ngang hình thành từ thành tế bào Lúc đầu gờ nhỏ hình khun tiến dần vào lấp kín lại Tuy nhiên, vách ngăn thường có hay nhiều lỗ thủng Các lỗ có kích thước hay có lỗ lớn nhiều lỗ nhỏ xung quanh Ngoài đặc điểm chung nấm sợi RNM cịn có đặc trưng riêng đáng quan tâm cần có nhiều cơng trình nghiên cứu đối tượng lý sau: Ở MT sống khắc nghiệt, kiểu trao đổi chất chúng khác biệt so với nấm đất liền Do đó, sản phẩm trao đổi chất, đặc biệt chất KS mang tính chất khác lạ [14] Điều kiện MT khắc nghiệt mang tính cạnh tranh cao làm tăng khả thích nghi nấm sợi RNM Do đó, phần lớn nấm sợi RNM có khả sinh hợp chất có hoạt tính sinh học nhằm giúp chúng thích ứng với điều kiện sống Điển hình khả sinh nhiều loại enzim, ezim ngoại bào có chức phân giải xác động thực vật thành phần hữu RNM, chất KS độc tố giúp làm tăng khả ĐK nấm sợi trình cạnh tranh MT sống Gần đây, người ta phát nấm biển nấm sợi RNM nguồn VSV có tiềm sinh chất KS mới, chống lại VSV nhờn thuốc Sống MT biến động, MT chịu ảnh hưởng chất thải từ đất liền, ô nhiễm tràn dầu…đã tạo cho nấm sợi RNM có chế phản ứng lại với tác động này, khả phân giải chất thải độc hại nhờ sinh tổng hợp hệ enzim phân giải RNM HST chịu nhiều tác động gió bão Sau tác động trên, vấn đề ô nhiễm điều tránh khỏi, ô nhiễm VSV gây bệnh [13] Nhờ có đặc tính sinh học đáng q khả sinh sản phẩm giúp khống chế VSV có hại Từ đó, cải thiện MT sống giúp người nâng cao khả điều trị bệnh tật Đa số nấm sợi RNM có khả chịu mặn cao Chúng sinh trưởng nồng độ muối từ 2% - 20% Thậm chí, số nấm sợi RNM cịn sinh trưởng nồng độ muối 30% [13] Đây đặc điểm có ý nghĩa sinh thái RNM Nấm sợi RNM có đặc tính sinh học đáng quí cần khai thác nhằm phục vụ nhu cầu lợi ích người Tuy nhiên, nghiên cứu nấm sợi RNM khiêm tốn, chưa tương xứng với qui mô tiềm chúng, 1.2.4 Tình hình nghiên cứu nấm sợi RNM giới Việt Nam Hiện nay, có khoảng 800 – 1000 loài nấm biển định loại (Hawkswworth et al., 1995; Jones, 1995), có số lượng lớn loài nấm đất liền phân loại Sự hiểu biết loài người nấm RNM vai trò chúng khu HST cịn q chưa đầy đủ (Agate A.D., Subramania, C.V Anuci, V.1998) Sự nghiên cứu nấm RNM nhà nấm học quan tâm từ năm 1950 Theo sở liệu (chưa đầy đủ) mạng nấm RNM tồn cầu thấy nhiều nước tích cực nghiên cứu phân loại hệ thống hố lồi nấm biển có mặt vùng RNM họ Cụ thể: Ấn Độ phân loại 170 lồi, Hồng Kơng: 170 loài, Đài Loan: loài, Trung Quốc: loài, Singapore: 116 loài, Nhật: 26 loài, Úc: 67 loài, Mỹ: 18 loài, Malaysia: 164 loài, Indonesia: loài, Thái Lan: 83 loài, Brasil: 48 loài, Mexico: 94 loài, Kuwait: 14 lồi, Đức: lồi Qua đó, thấy phân Bảng 3.16 : Giá trị trung bình khả sinh enzim chủng nấm sợi đợt Enzim ngoại bào Giá trị trung Tổng số chủng sinh enzim bình Số lượng Tỷ lệ (%) Amylaza 8,20 ± 0,37 214 80,45 Proteaza 7,02 ± 0,33 221 83,08 Cellulaza 8,64 ± 0,31 235 88,35 * Khả sinh enzim ngoại bào chủng nấm sợi thay đổi tùy theo loại chất Giá trị trung bình khả sinh amylaza cao vàng, tiếp đến đất mặt, mục cành mục, thấp đất sâu cành khơ Vì chất vàng có nhiều tinh bột quang hợp Hoạt tính proteaza có nhiều chất cành khô, đất mặt vàng, thấp chất mục, cành mục đất sâu Vì đất mặt có chứa xác ĐV lượng phù sa màu mỡ cung cấp nguồn chất protid dồi cho proteaza hoạt động Trong đó, khả sinh cellulaza chủng nấm sợi có nhiều chất mục, cành mục đất sâu, thấp đất mặt, vàng cành khơ Vì mục cành mục có nhiều cellulose nguồn chất cellulaza (Xem bảng 3.17) Khi so sánh với kết khảo sát ban đầu tác giả Khưu Phương Yến Anh phân lập 10 chủng có hoạt tính cellulaza mạnh Các chủng chủ yếu phân lập từ đất mặt, cành khô cành mục RNM Vậy qua khảo sát đợt nhận thấy khả sinh enzim ngoại bào chủng nấm sợi thay đổi theo mùa, tùy theo loại chất có khác chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicillium Bảng 3.17: Giá trị trung bình khả sinh enzim ngoại bào chủng nấm sợi theo chất Enzim Amylaza Proteaza Cơ chất Giá trị trung Tổng số chủng bình Số lượng Tỷ lệ (%) Lá vàng 8,88 ± 0,93 31 11,65 Lá mục 8,12 ± 0,73 43 16,17 Cành khô 7,69 ± 1,11 27 10,15 Cành mục 8,11 ± 0,10 38 14,29 Đất mặt 8,40 ± 0,77 57 21,43 Đất sâu 7,56 ± 1,08 19 7,14 Lá vàng 7,01 ± 0,90 29 10,90 Lá mục 6,43 ± 0,47 47 17,67 Cành khô 8,78 ± 1,08 23 8,6 Cành mục 6,49 ± 0,73 37 13,91 Đất mặt 7,12 ± 0,63 60 22,56 Cellulaza Đất sâu 6,87 ± 1,07 25 9,40 Lá vàng 7,88 ± 0,77 33 12,41 Lá mục 9,75 ± 0,76 53 19,92 Cành khô 8,15 ± 0,82 26 9,77 Cành mục 9,24 ± 0,77 46 17,29 Đất mặt 7,56 ± 0,56 54 20,30 Đất sâu 9,10 ± 0,98 23 8,65 3.2.2 Khảo sát khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi phân lập Sau khảo sát khả sinh enzim tiếp tục khảo sát khả ĐK với VSVKĐ VK G+ (B subtillis), VK G- (E.coli) 3.2.2.1 Kết đợt Khảo sát khả ĐK với VSVKĐ đợt thu kết bảng 3.18 Bảng 3.18: Khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi (đợt 1) STT Ký hiệu chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 L1P L2P L3A L4A L5A L6A L7P L8A L9A LM1P LM2A LM5A LM8A LM9A LM10A LM11P LM14P LM15A LM16A LM18P LM20P LM21P LM22P LM23P LM24P LM25P CK1P CK2A CK3A CK4A CK5P CK6P Hoạt tính đối kháng (D –d) mm B.subtillis E.coli 12 11 10 17 0 19 11 16 21 10 17 23 11 22 14 11 15 19 13 12 0 15 0 18 0 0 0 16 0 22 18 16 10 12 20 12 0 17 13 STT Ký hiệu chủng 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 CM15A CM17P CM19P CM21A CM22P CM23P CM26A CM29P CM30P CM32P CM38P CM41P Đ1A Đ2A Đ3A Đ4P Đ6P Đ8A Đ9A Đ10A Đ11P Đ16P Đ18P Đ19P Đ20P Đ22P Đ25A Đ27P Đ28A Đ29A ĐS1A ĐS2P Hoạt tính đối kháng (D – d) mm B.subtillis E.coli 10 15 19 23 23 23 14 13 11 11 12 14 14 12 9 19 16 14 15 13 13 14 11 12 12 0 0 20 19 20 23 0 15 11 11 0 0 0 0 0 0 33 34 35 36 37 38 39 CK7P CK8P CM1P CM2A CM3A CM4P CM5P 15 16 12 22 0 16 13 22 72 73 74 75 76 77 ĐS3A ĐS6P ĐS7P ĐS9P ĐS10P ĐS11P 15 11 11 11 15 12 12 15 Kết thu đợt 1, tổng số chủng có khả ĐK với VSVKĐ 68/77 chủng ( 88,31%) Trong đó, số chủng có khả ĐK với B.subtillis 68/77 chủng ( 88,31%), với E.coli 44/77 chủng (42,86%), khả ĐK với B.subtillis E.coli 44/77 chủng (42,86%) Số chủng có khả ĐK với VSVKĐ mạnh (D – d ≥ 20mm) chủng (10,39%) Trong đó, số chủng có khả ĐK với B.subtillis E.coli mạnh 5/77 chủng (6,49%), số chủng có khả ĐK với B subtillis mạnh chủng (2,6%), số chủng có khả ĐK với E coli mạnh chủng (2,6%) Theo chúng tôi, thời gian lấy mẫu đợt vào mùa mưa (tháng 9) làm cho độ mặn MT thấp (< 1,5%) tác động đến khả ĐK nấm sợi Có thể tóm tắt bảng 3.18 sau: Khơng có hoạt Vi sinh vật tính kiểm định Hoạt tính yếu Hoạt tính Hoạt tính trung bình mạnh SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) B.subtillis 11,69 17 22,08 44 57,14 9,09 E.coli 44 57,14 10,39 19 24,68 7,79 (Ghi chú: SL: Số lượng, TL: Tỷ lệ) 3.2.2.2 Kết đợt Ở đợt kết khả ĐK với VSVKĐ trình bày bảng 3.19 Bảng 3.19: Khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi (đợt 2) STT Ký hiệu chủng 10 11 12 13 14 15 16 L10A L11P L12A L13P L14P L15A L17A L19P L21A L24P L28A L31P L32P L33P L34A LM26A Hoạt tính đối kháng (D – d) mm B.subtillis E.coli 13 13 10 7 10 0 0 0 0 0 0 0 0 STT Ký hiệu chủng 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 CM50P CM51P CM52A CM53P CM54P CM55P CM56P CM57A CM58P CM60A CM61A CM62P Đ32P Đ33A Đ34A Đ35P Hoạt tính đối kháng (D – d) mm B.subtilis E.coli 12 14 0 4 10 0 0 0 0 0 0 0 0 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 LM27A LM31P LM35A LM36A LM38P LM39P LM40P LM41A LM42A LM44P LM47P LM48P LM49P LM51P LM52A LM53P LM55P LM56P LM60A LM61P CK11P CK12A CK13A CK14A CK15A CK16P CK17P CK20P CK23P CM44P CM45A CM46A CM47A CM48P CM49A 4 20 10 19 28 9 12 4 12 14 10 11 12 10 4 12 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 Đ36P Đ37P Đ38P Đ39P Đ40P Đ42P Đ43P Đ44P Đ45A Đ46P Đ47P Đ48P Đ49P Đ50P Đ51P Đ52P Đ53A Đ54P Đ56P Đ57P Đ58P Đ59A Đ60P Đ62A ĐS19P ĐS21P ĐS22P ĐS24A ĐS25A ĐS26A ĐS27A ĐS28P ĐS32P ĐS33A ĐS35P 18 12 6 7 0 14 21 5 5 22 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Ở đợt tổng số chủng có khả ĐK với VSVKĐ 85/102 chủng (83,33%) Trong đó, số chủng có khả ĐK với B.subtillis 85/102 chủng (83,33%), với E.coli 4/102 chủng (3,92%), khả ĐK với B.subtillis E.coli 4/102 chủng (3,92%) Số chủng có khả ĐK với B subtillis mạnh (D – d ≥ 20 mm) chủng (2,94%), mạnh (D – d ≥ 25mm) chủng (0,98%) Số chủng ĐK với E coli mạnh khơng có Như vậy, đợt số chủng nấm sợi chủ yếu có khả ĐK với B subtillis số chủng có khả ĐK mạnh với VSVKĐ so với đợt Các chủng có khả ĐK mạnh thuộc Penicillium Theo chúng tôi, đợt lấy mẫu vào thời điểm giao mùa mưa – khơ, lượng mưa nên độ mặn (2 – 3%) cao đợt Điều ảnh hưởng đến khả ĐK chủng nấm sợi Có thể tóm tắt bảng 3.19 sau: Vi sinh vật kiểm định B.subtillis Khơng có hoạt tính Hoạt tính yếu Hoạt tính trung bình Hoạt tính mạnh Hoạt tính mạnh SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) 17 16,67 61 59,80 20 19,61 2,94 0,98 E.coli 98 96,08 3,92 0 0 0 3.2.2.3 Kết đợt Kết khảo sát khả ĐK với VSVKĐ đợt trình bày bảng 3.20 Bảng 3.20: Khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi (đợt 3) STT Ký hiệu chủng 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 L36A L37P L39P L40P L41P L42A L43P L45P L46P L49A L50P L52A LM63P LM64A LM65P LM66A LM67A LM68P LM69P LM70P LM71P LM73P LM74P LM75P LM76P LM77P LM78A LM80P CK25A CK26P CK29P CK30P CK31A CK32P CK33P CK34A CK36P CK37A CK44P CK46P CM63A CM66P CM68A CM69A Hoạt tính đối kháng (D – d)mm B.subtillis E.coli 0 5 17 0 13 11 10 6 13 12 11 14 11 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 STT Ký hiệu chủng 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 CM70A CM71A CM72A CM75P CM76P CM77P CM79P CM80P CM81P CM82P Đ63A Đ64P Đ65P Đ66P Đ67P Đ68A Đ69P Đ70P Đ71A Đ72P Đ73P Đ74P Đ75P Đ76A Đ77P Đ78P Đ79P Đ80P Đ81P Đ82P Đ83A Đ84A Đ85A ĐS31P ĐS37A ĐS38P ĐS39A ĐS40P ĐS42P ĐS43P ĐS44P ĐS45P ĐS46A Hoạt tính đối kháng (D – d)mm B.subtillis E.coli 15 13 10 12 11 17 10 15 5 18 10 10 11 5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Ở đợt 3, số chủng có khả ĐK với B.subtillis 71/87 chủng (81,61%), khơng có khả ĐK với E.coli Số chủng có khả ĐK với VSVKĐ mạnh khơng có Theo chúng tơi, đợt lấy mẫu vào mùa khô độ mặn cao (> 4%) đợt đợt ảnh hưởng đến khả ĐK nấm sợi Có thể tóm tắt bảng 3.20 sau: Vi sinh vật Khơng có hoạt tính kiểm định Hoạt tính trung Hoạt tính yếu bình SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) B subtilis 16 18,39 49 56,32 22 25.29 E coli 0 0 0 * Tổng kết chung ba đợt khảo sát khả ĐK với VSVKĐ Qua khảo sát ba đợt chúng tơi nhận thấy tỷ lệ chủng có khả ĐK với B.subtillis giảm dần từ mùa mưa (88,31%) đến giao mùa (83,33%) mùa khô (81,61%) Mặt khác, tỷ lệ chủng có hoạt tính ĐK với E.coli giảm dần theo mùa Tỷ lệ cao vào mùa mưa (42,86%), tiếp đến thời điểm giao mùa (3,92%), mùa khô tỷ lệ không Chứng tỏ khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi có thay đổi theo mùa Bảng 3.21: Khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi đợt Vi sinh vật kiểm Khơng có hoạt Hoạt tính Hoạt tính trung Hoạt tính Hoạt tính tính yếu bình mạnh mạnh định SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) SL TL(%) B.subtillis 42 15,79 127 47,74 86 32,33 10 3,76 0,38 E.coli 142 53,38 12 4,51 19 7,14 2,26 0 Từ bảng 3.21 nhận thấy tổng số chủng có khả ĐK với VSVKĐ mạnh (D – d ≥ 20mm) 11/266 chủng (4,14%) Trong đó, số chủng có khả ĐK với B.subtillis E.coli mạnh 5/266 chủng (1,88%), số chủng có khả ĐK với B subtillis mạnh 5/266 chủng (1,88%), số chủng có khả ĐK với E coli mạnh 1/266 chủng (0,38%), số chủng có khả ĐK với B subtillis mạnh (D – d ≥ 25mm) 1/266 chủng (0,38%) Các chủng có khả ĐK với VSVKĐ mạnh thuộc chi Penicillium Ngoài ra, khả ĐK với B.subtillis chủng nấm sợi thuộc chi Penicillium (10,13 ± 0,48) cao so với chi Aspergillus (7,15 ± 0,43) Bảng 3.22: Khả ĐK với B subtillis chủng nấm sợi đợt theo chất Vi sinh vật kiểm Tổng số chủng Cơ chất Giá trị trung bình Lá vàng Số lượng Tỷ lệ(%) 7,32 ± 0,74 30 11,28 Lá mục 8,31 ± 0,91 49 18,42 Cành khô 10,86 ± 1,06 24 9,02 định B subtillis Cành mục 10,16 ± 0,94 39 14,66 Đất mặt 8,63 ± 0,42 61 22,93 Đất sâu 8,8 ± 1,09 25 9,4 Khả ĐK với VK B subtillis chủng nấm sợi khác tùy theo loại chất Điều thể bảng 3.22 Giá trị trung bình khả ĐK với B subtillis chủng nấm sợi cao chất cành khô cành mục, tiếp đến đất sâu, đất mặt mục, thấp chất vàng So sánh với kết khảo sát ban đầu tác giả Phan Thanh Phương (2007) tuyển chọn 10 chủng nấm sợi có khả ĐK với VSVKĐ cao Các chủng chủ yếu phân lập từ chất cành khô, cành mục đất mặt RNM Vậy qua khảo sát đợt nhận thấy khả ĐK với VSVĐK chủng nấm sợi thuộc chi Penicillium cao so với chi Aspergillus Ngoài ra, khả ĐK chủng nấm sợi thay đổi tùy theo loại chất Khi khảo sát chủng nấm sợi có khả sinh chất có hoạt tính sinh học mạnh (enzim ngoại bào, chất ĐK với VSVKĐ) chúng tơi nhận thấy số chủng có khả sinh amylaza mạnh (D – d ≥ 20 mm) tập trung chủ yếu chi Aspergillus Mặt khác, số chủng có hoạt tính proteaza mạnh có Aspergillus Penicillium Số chủng có hoạt tính cellulaza mạnh Penicillium nhiều so với Aspergillus Ngoài ra, số chủng có khả ĐK với VSVKĐ mạnh tập trung chủ yếu Penicillium Điều thể biểu đồ 3.5 Biểu đồ 3.5: Các chủng nấm sợi có hoạt tính sinh học mạnh đợt (Chú thích: HTĐK: tính đối VSVcác kiểmchủng định) nấm sợi thuộc chi Aspergillus Kết luận: Qua khảo sátHoạt kháng nhận với thấy Penicillium có khả sinh enzim ngoại bào (amylaza, proteaza, cellulaza…) mạnh, chúng phân giải chuyển hóa hợp chất hữu cơ, vơ khó tan, cung cấp chất dinh dưỡng cho hệ sinh thái RNM Trong điều kiện RNM - nơi mà nguồn dinh dưỡng chủ yếu biopolyme sinh khối thực vật RNM ĐV biển nấm sợi tác nhân tham gia tích cực vào q trình phân giải hợp chất hữu phức tạp này, mắt xích quan trọng chuỗi thức ăn tham gia khép kín chu trình sinh địa hóa RNM [14] Ngồi ra, nấm sợi cịn có khả ĐK với VSVKĐ mạnh Điều góp phần giúp nấm sợi có khả tồn MT có điều kiện sống đặc biệt 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên khả sinh trưởng, khả sinh enzim ngoại bào khả ĐK với VSVKĐ số chủng nấm sợi Thí nghiệm nhằm tìm hiểu khả chịu mặn – đặc trưng nấm sợi RNM Vì số lượng chủng lớn (266 chủng) nên khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh hoạt chất sinh học (enzim ngoại bào, hoạt chất ĐK) số chủng nấm sợi Mỗi tiêu chọn hai chủng thuộc Aspergillus Penicillium Cấy chủng nấm sợi MT thử hoạt tính tương ứng Ủ - ngày, quan sát sinh trưởng chủng nấm sợi cách đo đường kính vịng KL Khảo sát hoạt tính enzim phương pháp cấy chấm điểm, khảo sát khả ĐK với VSVKĐ phương pháp khối thạch thu kết sau: * Khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên khả sinh trưởng khả sinh amylaza: chủng CM47A (chi Aspergillus), chủng Đ46P (chi Penicillium) Kết thu trình bày bảng 3.24 Bảng 3.23: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh enzim amylaza chủng CM47A chủng Đ46P Ký hiệu chủng CM47A Đ46P Đặc điểm Nồng độ muối môi trường (%) 10 Hoạt tính enzim (D-d, mm) 12 15 20 18 15 ĐKKL(mm) 33 35 40 38 28 20 Hoạt tính enzim (D-d,mm) 14 14 17 15 15 ĐKKL(mm) 20 24 28 25 25 20 Kết bảng 3.23 cho thấy hai chủng CM47A Đ46P sinh trưởng phát triển MT nước lẫn nước mặn Cả hai chủng sinh trưởng tốt sinh amylaza MT có nồng độ muối 3% Kết thể biểu đồ 3.6 Biểu đồ 3.6: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh amylaza chủng CM47A chủng Đ46P * Khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên khả sinh trưởng khả sinh proteaza: chủng Đ2A (chi Aspergillus), chủng LM51P (chi Penicillium) Kết thu thể bảng 3.24 biểu đồ 3.7 Bảng 3.24: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh proteaza chủng Đ2A chủng LM51P Ký hiệu 10 Hoạt tính enzim (D-d,mm) 11 16 18 17 16 10 ĐKKL(mm) 35 37 41 36 30 22 Hoạt tính enzim (D-d,mm) 10 14 16 15 13 17 24 18 15 10 chủng Đ2A LM51P Nồng độ muối (%) Đặc điểm ĐKKL(mm) 15 Kết bảng 3.24 cho thấy hai chủng Đ2A LM51P sinh trưởng MT nước lẫn nước mặn Cả hai chủng sinh trưởng tốt sinh proteaza MT có độ mặn 3% Kết cịn thể biểu đồ 3.7 Biểu đồ 3.7: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh proteaza chủng Đ2A chủng LM51P (Chú thích: HT: Hoạt tính enzim, ĐKKL: Đường kính KL) * Khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên khả sinh trưởng khả sinh cellulaza: chủng LM8A (chi Aspergillus), chủng LM53P (chi Penicillium) Kết thu trình bày bảng 3.25 Bảng 3.25: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh cellulaza chủng LM8A chủng LM53P Ký hiệu chủng LM8A Đặc điểm Nồng độ muối (%) 10 Hoạt tính enzim (D-d,mm) 19 20 22 17 16 12 ĐKKL(mm) 25 28 30 20 18 12 LM53P Hoạt tính enzim (D-d,mm) 18 20 23 15 14 11 ĐKKL(mm) 12 12 13 10 Kết bảng 3.25 cho thấy hai chủng LM8A LM53P sinh trưởng MT nước lẫn nước mặn Cả hai chủng sinh trưởng tốt sinh cellulaza MT có nồng độ muối 3% Kết thể biểu đồ 3.8 Biểu đồ 3.8: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh cellulaza chủng LM8A chủng LM53P (Chú thích: HT: Hoạt tính enzim, ĐKKL: Đường kính KL) * Khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên khả sinh trưởng khả ĐK với VSVKĐ: chủng LM9A (chi Aspergillus), chủng CM30P (chi Penicillium) Kết thu trình bày bảng 3.26 Bảng 3.26: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả ĐK với VSVKĐ chủng LM9A chủng CM30P Ký hiệu chủng LM9A Đặc điểm VSVKĐ Khả ĐK (D – d),mm 10 B.subtillis 17 14 9 E.coli 16 14 18 36 80 73 49 25 18 ĐKKL,mm CM30P Nồng độ muối (%) Khả ĐK B.subtillis 18 13 10 (D – d),mm E.coli 17 14 11 14 13 13 12 10 ĐKKL,mm Kết bảng 3.26 cho thấy hai chủng LM9A CM30P sinh trưởng MT nước lẫn nước mặn Chủng LM9A sinh trưởng tốt MT có nồng độ muối 2% Trong đó, chủng CM30P lại sinh trưởng tốt nồng độ muối 0% Mặt khác, khả ĐK với VSVKĐ hai chủng tốt nồng độ muối 0%, khả ĐK giảm tăng dần nồng độ muối Chứng tỏ, độ mặn điều kiện thuận lợi để nấm sợi thể khả ĐK Kết thể biểu đồ 3.9 biểu đồ 3.10 Biểu đồ 3.9: Khảo sát ảnh hưởng độ mặn đến sinh trưởng khả ĐK với VSVKĐ chủng LM9A Bảng 3.10: Ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả ĐK với VSVKĐ chủng CM30P Kết luận: Qua khảo sát ảnh hưởng độ mặn nhận thấy chủng nấm sợi có khả sinh trưởng MT nước lẫn nước mặn Độ mặn để nấm sợi sinh trưởng tốt từ - 3% Các chủng nấm sợi sinh enzim ngoại bào (amylaza, proteaza, cellulaza) mạnh MT có độ mặn 3% Kết phù hợp với nghiên cứu tác giả Khưu Phương Yến Anh (2007) [1] Ngoài ra, khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi tốt nồng độ 0% Kết trùng khớp với nghiên cứu tác giả Phan Thanh Phương (2007) [28] Tính chịu mặn đặc trưng RNM, qua khảo sát chứng tỏ chủng du nhập từ đất liền dần thích nghi với điều kiện sống RNM Cần Giờ Khả chịu mặn với hệ thống enzym ngoại bào mạnh amylase, cellulase, protease… giúp nấm sợi đóng góp vai trị to lớn việc phân hủy xác động thực vật RNM Nấm sợi tham gia khép kín chu trình tuần hồn vật chất, góp phần làm MT, đặc biệt MT có nồng độ muối cao RNM 3.3 Tuyển lựa chủng có hoạt tính sinh học cao Khảo sát số đặc điểm sinh học chủng nấm sợi phân lập chọn số chủng có hoạt tính tốt a- Chủng CM47A có khả sinh enzyme amylaza cao (D – d = 25mm) Hình 3.8: Khả sinh enzim amylaza chủng CM47A b- Chủng LM51P có khả sinh enzim proteaza cao (D – d = 22mm) Hình 3.9: Khả sinh enzim proteaza chủng LM51P c- Chủng LM8A LM53P có khả sinh enzim cellulaza cao (23mm) LM8A CM5.1P Hình 3.10: Khả sinh enzim proteaza chủng LM8A CM5P d- Chủng LM49.2P có khả ĐK với VK B.subtillis (29mm) Hình 3.11: Khả ĐK với B.subtillis chủng LM49P e- Chủng CM30P có khả ĐK với B.subtillis (23mm) E.coli (20cm) a b Hình 3.12: Khả ĐK với B.subtillis (a) E.coli (b) chủng CM30P KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ * Kết luận Qua khảo sát đưa số kết luận sau: Cả ba đợt phân lập 476 chủng nấm sợi, tiếp tục tiến hành tuyển chọn phân loại thu 266 chủng thuộc Aspergillus (98/266 – 36,84%) Penicillium (168/266 – 63,16%) Chúng có mặt hầu hết chất RNM, đất mặt chất có nhiều chủng nấm sợi Số chủng nấm sợi phân lập vào thời điểm giao mùa khô - mưa cao nhất, tiếp đến mùa khô, thấp vào mùa mưa Vào mùa mưa số chủng phân lập từ xã Long Hoà xã Lý Nhơn cao xã An Thới Đông xã Tam Thôn Hiệp Đến mùa khô ngược lại, số chủng phân lập từ xã An Thới Đông Tam Thôn Hiệp lại cao hai xã lại Chứng tỏ, phân bố chủng nấm sợi khơng thay đổi theo mùa mà cịn thay đổi theo vị trí xã Đã khảo sát khả sinh enzim ngoại bào thu kết sau: * Số chủng có khả sinh cellulaza cao nhất, tiếp đến proteaza amylaza Trong đó, số chủng có khả sinh amylaza mạnh chủ yếu tập trung chi Aspergillus, sinh proteaza mạnh có hai chi Aspergillus Penicillium, sinh cellulaza mạnh có Penicillium nhiều Aspergillus * Số chủng có enzim ngoại bào mạnh đợt cao nhất, tiếp đến đợt 1, đợt khơng có chủng Vậy số chủng có enzim ngoại bào mạnh khác chi Aspergillus Penicillium tuỳ theo mùa Kết khảo sát khả ĐK với VSVKĐ chủng nấm sợi cho thấy: Số chủng có khả ĐK mạnh với VSVKĐ chủ yếu tập trung Penicillium Trong đó, số chủng có khả ĐK mạnh với B subtillis nhiều E.coli Đã khảo sát ảnh hưởng độ mặn lên sinh trưởng khả sinh chất có hoạt tính sinh học (enzim ngoại bào, hoạt tính ĐK) số chủng nấm sợi, thu kết sau: * Nấm sợi sinh trưởng tốt MT có nồng độ muối từ – 3% * Nồng độ muối mà nấm sợi sinh enzim ngoại bào tốt 3%, sinh hoạt tính ĐK với VSVKĐ 0% Qua khảo sát chúng tơi chọn chủng có hoạt tính sinh học cao để tiếp tục nghiên cứu Bảng 3.27: Một số chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus Penicillium có hoạt tính sinh học cao STT Các hoạt tính sinh học Amylaza Proteaza Cellulaza Ký hiệu chủng CM47.3A D - d (mm) 25 Chi Aspergillus LM51.1P 22 Penicillium LM8.1A 23 Aspergillus CM5.1P 23 Penicillium Khả ĐK LM49.2P 29 Penicillium B.subtillis CM30.1P 22 Penicillium Khả ĐK E.coli CM30.1P 23 Penicillium * Kiến nghị Tiếp tục khảo sát chi lại nấm sợi Các chủng nấm sợi có hoạt tính sinh học cao tuyển chọn tiếp tục nghiên cứu sâu ... cứu đề tài ? ?Khảo sát đặc điểm sinh học số nhóm nấm sợi từ Rừng ngập mặn Cần Giờ, Thành phố Hồ Chí Minh? ??.Thực tế, số nhóm nấm sợi RNM Cần Giờ lớn, nên phạm vi đề tài tập trung khảo sát hai chi... Aspergillus Penicillium + Khảo sát số đặc điểm sinh học chủng nấm sợi phân lập + Từ chủng phân lập tuyển chọn chủng có đặc điểm bật Bước đầu nhận xét sơ đặc điểm sinh học chủng nấm sợi thuộc chi Aspergillus... nghiệm Sinh hố – Vi sinh, khoa Sinh, Trường Đại học Sư phạm Tp Hồ Chí Minh PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Rừng ngập mặn Cần Giờ Rừng ngập mặn (RNM) HST quan trọng hệ thống đất ngập nước RNM HST đặc