Xác định đông thơi a cetaminophen, loratadin và dex–tromethorphan hydrobromit trong thuốc viên nén hapacol cf bằng phương pháp trắc quang

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM LÊ NGỌC ANH XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI ACETAMINOPHEN, LORATADIN VÀ DEX TROMETHORPHAN HYDROBROMIT TRONG THUỐC VIÊN NÉN HAPACOL – CF BẰNG PHƢƠNG PHÁP TRẮC QUANG Chuyên ngành: Hóa Phân Tích Mã số : 60.44.29 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS MAI XUÂN TRƢỜNG Thái nguyên - 2011 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Luận văn đƣợc thƣ̣c hiện tại Khoa Hóa học - Trƣờng Đại h ọc Sƣ phạm – Đại học Thái Nguyên Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy , cô giáo và các cán bộ phòng thí nghiệm Khoa Hóa học - Trƣờng Đại học Sƣ Phạm – Đại học Thái Nguyên đã tận tì nh giảng dạy , giúp đỡ, tạo điều kiện tốt và đƣa nhiều ý kiến quý báu về mặt chuyên môn cho suốt quá trì nh nghiên cƣ́u và hoàn thiện luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu Trƣờng Đại học Sƣ phạm , Khoa Sau đại học - – Đại học Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho suốt quá trì nh học tập và làm luận văn Tôi xin bày tỏ lò ng biết ơn sâu sắc đến thầy giáo TS Mai Xuân Trƣờng đã tận tì nh chỉ bảo , động viên và giúp đỡ suốt quá trình học tập, nghiên cƣ́u và thƣ̣c hiện luận văn Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới bố mẹ , bạn bè và anh chị học viên tập thể lớp cao học Hóa K 17 đã đợng viên , góp ý rất nhiều cho quá trì nh hoàn thiện luận văn Xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, tháng 10 năm 2011 Tác giả Lê Ngọc Anh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CỦA LUẬN VĂN Tiếng việt Tiếng Anh Viết tắt Axetaminophen Acetaminophen ACE Loratadin Loratadine LOR Dex–tromethophan Dex–tromethophan hydrobromit hydrobromide Sắc ký lỏng hiệu cao High Performance Liquid Chromatography DEX HPLC Giới hạn phát Limit Of Detection LOD Giới hạn định lƣợng Limit Of Quantity LOQ Bình phƣơng tối thiểu Least Squares LS Sai số tƣơng đối Relative Error RE Độ lệch chuẩn Standard Deviation S hay SD Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iv DANH MỤC CÁC BẢNG CỦA LUẬN VĂN Tên bảng STT Trang Bảng Độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX các giá trị pH Bảng 3.2 Độ hấp thụ quang dung dịch ACE, LOR DEX theo nhiệt độ Bảng 3.3 Độ hấp thụ quang dung dị chACE, LOR DEX theo thời gian Bảng 3.4 Độ hấp thụ quang ACE, LOR, DEX và hỗn hợp số bƣớc sóng 34 35 36 38 Bảng 3.5 Độ hấp thụquang của dung dịch ACE các giá trị nồng độ 39 Bảng 3.6 Kết quả xác định LOD và LOQ ACE 40 Bảng 3.7 Độ hấp thụ quang dung dịch LOR các giá trị nồng độ 40 Bảng 3.8 Kết quả xác định LOD và LOQ LOR 41 Bảng 3.9 Độ hấp thụ quang dung dịch DEX các giá trị nồng độ 42 10 Bảng 3.10 Kết xác định LOD và LOQ dextromethorphan 43 11 Bảng 3.11 Nồng độ ACE , LOR hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng ACE > LOR 44 12 Bảng 3.12 Nồng độ ACE , LOR hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng LOR>ACE 45 13 Bảng 3.13 Kết quả tính toán nồng độ ACE và LOR hỗn hợp tự pha hàm lƣợng ACE > LOR 46 14 Bảng 3.14 Kết quả tính toán nồng độ ACE và LOR hỗn hợp tự pha hàm lƣợng LOR > ACE 47 15 Bảng 3.15 Nồng độACE, DEX hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng ACE >DEX 49 16 Bảng 3.16 Nồng độACE, DEX hỗn hơ p̣ tƣ̣ phakhi hàm lƣợng DEX > ACE Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 50 http://www.lrc-tnu.edu.vn v 17 Bảng 3.17 Kết quả tính toán nồng độ ACE, DEX hỗn hợp tƣ̣ phakhi hàm lƣợng ACE >DEX 51 18 Bảng 3.18 Kết quả tính toán nồng độ ACE, DEX hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng DEX > ACE 52 19 Bảng 3.19 Nồng độ DEX, LOR hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng DEX >LOR 54 20 Bảng 3.20 Nồng độ DEX, LOR hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng LOR >DEX 55 21 Bảng 3.21 Kết quả tí nh toán nồng độ DEX , LOR hỗnhợp tƣ̣ phakhi hàm lƣợng DEX >LOR 56 22 Bảng 3.22 Kết quả tí nh toán nồng độ DEX , LOR hỗn hợp tƣ̣ pha hàm lƣợng LOR >DEX 57 23 Bảng 3.23 Thành phầncủa ACE, LOR DEX hỗn hợp 59 24 Bảng 3.24 Kết quả tính nồng độ, sai sớ ACE, LOR, DEX các hỗn hợp 60 25 Bảng 3.25 Xác định nồng độ ACE, LOR, DEX các mẫu thuốc Hapacol-CF 62 26 27 Bảng 3.26 Thành phần các dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX thêm vào dung dịch mẫu Hapacol - CF Bảng 3.27 Kết quả xác đị nh độ thu hồi dung dịch mẫu Hapacol - CF Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên ACE, LOR DEX 63 64 http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC CÁC HÌNH CỦA LUẬN VĂN STT Tên hình Trang Hình 1.1 Quá trình tổng hợp acetaminophen Hình 1.2 Các phản ứng chuyển hóa acetaminophen Hình 1.3 Mơ hình hoạt động mạng nơron 25 Hình 3.1 Phổ hấp thụ của dung dị ch chuẩn ACE( 1), LOR (2), DEX (3) 33 Hình 3.2 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang dung dịch ACE(1), LOR (2), DEX(3) vào nhiệt độ 35 Hình 3.3 Sự phụ thuộc độ hấp thụ quang dung dịch ACE(1), LOR (2), DEX(3) theo thời gian 36 Hình 3.4 Đƣờng hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ ACE 39 Hình 3.5 Đƣờng hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ LOR 40 10 Hình 3.6 Đƣờng hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc độ hấp thụ quang A vào nồng độ DEX 42 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn vii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT CỦA LUẬN VĂN DANH MỤC CÁC BẢNG CỦA LUẬN VĂN DANH MỤC CÁC HÌNH CỦA LUẬN VĂN MỞ ĐẦU i Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan acetaminophen, loratadine dextromethorphan hydrobromit 1.1.1 Acetaminophen 1.1.2 Loratadin 12 1.1.3 Dextromethorphan hydrobromit 16 1.2 Chế phẩm chứa acetaminophen, loratadine dextromethorphan hydrobromit - Hapacol – CF 19 1.3 Một số phƣơng pháp xác định đồng thời các cấu tử 20 1.3.1 Phƣơng pháp lọc Kalman 20 1.3.2 Phƣơng pháp Vierordt 23 1.3.3 Phƣơng pháp phổ đạo hàm 25 1.3.4.Phƣơng pháp mạng nơron nhân tạo………….……………… 24 1.4 Các định luật sở hấp thụ ánh sáng 27 1.4.1 Định luật Bughe - Lămbe – Bia 27 1.4.2 Định luật cộng tính 28 1.4.3 Những nguyên nhân làm cho hấp thụ ánh sáng dung dịch không tuân theo định luật Bughe – Lămbe – Bia 28 Chƣơng 2: THỰC NGHIỆM 30 2.1 Nội dung nghiên cứu 30 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 31 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn viii 2.3 Hóa chất, dụng cụ và thiết bị thí nghiệm 31 2.3.1 Hóa chất 31 2.3.2 Dụng cụ, thiết bị 32 2.4 Đánh giá độ tin cậy quy trình phân tích 32 2.4.1 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng 32 2.4.2 Đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp 32 2.4.3 Đánh giá kết quả phép phân tích theo thớng kê 34 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 34 3.1 Khảo sát phổ hấp thụ phân tử acetaminophen, loratadin dex tromethorphan hydrobromit 34 3.2 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX vào pH 35 3.3 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo nhiệt độ 36 3.4 Khảo sát phụ thuộc độ hấp thụ quang ACE, LOR DEX theo thời gian 37 3.5 Kiểm tra tính cộng tính độ hấp thụ quang dung dịch hỗn hợp ACE, LOR DEX 38 3.6 Khảo sát khoảng tuyến tính tuân theo định luật Bughe - Lămbe Bia và xác định LOD, LOQ dung dị ch ACE, LOR, DEX 40 3.6.1 Khảo sát khoảng tuyến tính ACE 40 3.6.2 Xác định LOD và LOQ của ACE 41 3.6.3 Khảo sát khoảng tuyến tính LOR………………………….40 3.6.4 Xác định LOD và LOQ của LOR 42 3.6.5 Khảo sát khoảng tuyến tính DEX 43 3.6.6 Xác định LOD và LOQ của DEX 44 3.7 Khảo sát, đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp nghiên cứu các hỗn hợp tự pha 44 3.7.1 Xác định tỷ lệ hàm lƣợng ACE và LOR hỡn hợp tự pha 44 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ix 3.7.2 Xác định tỷ lệ hàm lƣợng ACE DEX hỗn hợp tự pha 50 3.7.3 Xác định tỷ lệ hàm lƣợng LOR và DEX hỗn hợp tự pha 55 3.7.4 Xác định hàm lƣợng ACE, LOR, DEX các hỗn hợp tự pha 60 3.8 Xác định hàm lƣợng ACE, LOR DEX mẫu thuốc Hapacol CF và đánh giá độ đúng của phép phân tí ch theo phƣơng pháp thêm chuẩn 63 3.8.1 Xác định hàm lƣợng ACE, LOR và DEX mẫu thuốc Hapacol – CF 63 3.8.2 Xác định hàm lƣợng ACE, LOR và DEX mẫu thuốc Hapacol - CF theo phƣơng pháp thêm chuẩn 65 KẾT LUẬN:………………………………………………………………68 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN …………………………………………………………………………….69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 PHỤ LỤC Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Trên thị trƣờng có nhiều loại th́c hỗn hợp có tác dụng giảm đau, chống viêm, chữa ho, cảm cúm đƣợc bày bán rộng rãi với tên gọi và thành phần khác Để định lƣợng các hoạt chất các thuốc theo nhiều tiêu chuẩn các nhà sản xuất thì phải chiết tách riêng chất định lƣợng các phƣơng pháp khác nhƣ chuẩn độ môi trƣờng khan với axit pecloric hay phƣơng pháp pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)… Tuy nhiên kĩ thuật tiến hành phức tạp, tốn nhiều thời gian, dung mơi, hóa chất Bên cạnh là thiếu thốn sở vật chất nhiều địa phƣơng, vì việc định lƣợng đồng thời các chất mà không phải tách riêng các chất khỏi hỗn hợp là vấn đề đƣợc quan tâm nay, mở hƣớng nghiên cứu Hƣớng nghiên cứu này bao gồm số phƣơng pháp phân tích kết hợp với kỹ thuật tính toán, thống kê và đồ thị Sử dụng phƣơng pháp trắc quang việc xác định thành phần các chất có nhiều ƣu điểm độ nhạy, độ lặp, độ xác, độ tin cậy phép phân tích; phân tích nhanh, tiện lợi, máy móc đơn giản, hóa chất phổ biến Để khắc phục nhƣợc điểm phƣơng pháp trắc quang ta sử dụng kết hợp với kỹ thuật tính toán, thớng kê và đồ thị Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu áp dụng các phƣơng pháp Vierordt, phƣơng pháp phổ đạo hàm, phƣơng pháp mạng nơron nhân tạo, phƣơng pháp lọc Kalman, các phƣơng pháp phân tích hồi quy đa biến tuyến tính, phƣơng pháp hồi quy đa biến phi tuyến tính…để xác định đồng thời các chất hỗn hợp Với lí nêu trên, chọn đề tài nghiên cứu: Xác định đồng thời a cetaminophen, loratadin dex–tromethorphan hydrobromit thuốc viên nén Hapacol - CF phương pháp trắc quang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 58 VDEX(1), VDEX(2), VDEX(3) là thể tích dung dịch DEX tƣơng ứng với các nồng độ 0,5 µg/mL, µg/mL, 25 µg/mL Thƣ̣c hiện phép đo đợ hấp thụ quang các hỗn hợp khoảng bƣớc sóng 210 – 285 nm 250C sau pha dung dịch mẫu 30 phút, 0,5 nm lấy giá trị Từ sớ liệu đo quang tiến hành tính hàm lƣợng LOR, DEX theo chƣơng trình lọc Kalman Kết quả đƣợc trình bày bảng 3.21 và bảng 3.22 Bảng 3.21 Kết quả tí nh toán nồng độ DEX , LOR hỗn hợp tự pha hàm lượng DEX >LOR Mẫu CDEX/CLOR 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 1/1 2/1 3/1 4/1 5/1 6/1 7/1 8/1 9/1 10/1 15/1 20/1 25/1 30/1 35/1 40/1 45/1 50/1 55/1 60/1 65/1 70/1 75/1 80/1 85/1 90/1 C0LOR C0DEX CLOR CDEX RE% CLOR RE% CDEX 14,00 13,00 10,00 10,00 8,00 6,00 6,00 5,00 5,00 5,00 4,00 3,00 2,00 2,00 2,00 1,50 1,20 1,20 1,20 1,00 0,80 1,00 0,80 0,80 0,80 0,80 14,00 26,00 30,00 40,00 40,00 36,00 42,00 40,00 45,00 50,00 60,00 60,00 50,00 60,00 70,00 60,00 54,00 60,00 66,00 60,00 52,00 70,00 60,00 64,00 68,00 72,00 13,66 12,67 9,74 9,73 7,78 5,83 6,00 5,04 4,86 4,86 3,88 3,05 2,11 1,93 2,10 1,44 1,37 1,14 1,15 1,11 0,76 0,95 0,94 0,75 0,76 0,77 13,94 19,85 29,55 39,47 39,35 35,51 41,07 39,12 44,23 49,10 58,85 58,57 48,83 58,87 68,33 58,98 52,73 59,08 64,69 58,56 51,10 68,67 58,57 62,87 66,80 70,48 -2,40 -2,57 -2,61 -2,68 -2,70 -2,81 0,02 0,86 -2,85 -2,86 -2,96 1,78 5,73 -3,46 5,03 -4,28 13,98 -5,16 -3,77 11,07 -5,25 -4,81 17,97 -5,74 -5,43 -3,84 -0,41 -0,73 -1,50 -1,52 -1,63 -1,37 -2,21 -2,19 -1,71 -1,79 -1,91 -2,38 -2,33 -1,88 -2,39 -1,71 -2,35 -1,54 -1,98 -2,40 -1,74 -1,90 -2,38 -1,76 -1,76 -2,11 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 59 27 28 29 30 95/1 100/1 110/1 120/1 0,80 0,70 0,60 0,60 76,00 70,00 66,00 72,00 0,75 0,77 0,57 0,57 74,64 68,61 64,68 70,56 -6,11 -4,37 -4,67 -5,55 -1,79 -1,98 -2,00 -2,01 Bảng 3.22 Kết quả tí nh toán nồng độ DEX , LOR hỗn hợp tự pha hàm lượng LOR >DEX Mẫu CLOR/CDEX C0DEX C0LOR CDEX CLOR RE% CDEX RE% CLOR 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 1/1 2/1 3/1 4/1 5/1 6/1 7/1 8/1 9/1 10/1 15/1 20/1 25/1 30/1 35/1 40/1 45/1 50/1 55/1 60/1 65/1 70/1 75/1 80/1 85/1 15,00 7,50 5,00 5,00 4,00 4,00 3,00 2,00 2,00 2,00 1,00 1,00 1,00 0,80 0,60 0,50 0,40 0,40 0,40 0,30 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 15,00 15,00 15,00 20,00 20,00 24,00 21,00 16,00 18,00 20,00 15,00 20,00 25,00 24,00 21,00 20,00 18,00 20,00 22,00 18,00 13,00 14,00 15,00 16,00 17,00 15,14 7,63 5,14 5,29 4,20 4,22 3,18 2,17 2,17 2,19 1,12 1,17 1,18 0,93 0,76 0,66 0,54 0,53 0,55 0,45 0,32 0,33 0,31 0,29 0,31 14,95 14,96 14,95 19,93 19,92 23,89 20,95 15,95 17,94 19,92 14,97 19,92 24,91 23,96 20,94 19,94 17,95 19,95 21,94 17,95 12,97 13,95 14,97 15,99 16,97 0,92 1,68 2,74 5,84 4,88 5,51 6,07 8,52 8,55 9,25 11,71 16,98 18,04 16,82 26,17 31,43 34,78 33,39 36,43 48,60 59,00 63,29 54,86 43,47 56,34 -0,30 -0,24 -0,32 -0,34 -0,38 -0,44 -0,22 -0,32 -0,34 -0,39 -0,21 -0,39 -0,38 -0,18 -0,28 -0,31 -0,27 -0,25 -0,28 -0,30 -0,24 -0,33 -0,21 -0,06 -0,17 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 26 27 28 29 30 90/1 95/1 100/1 110/1 120/1 0,20 0,20 0,20 0,20 0,15 18,00 19,00 20,00 22,00 18,00 0,34 0,32 0,35 0,34 0,29 17,94 18,97 19,94 21,94 17,96 71,98 57,99 74,16 69,47 96,66 -0,31 -0,18 -0,28 -0,27 -0,21 Trong bảng 3.21 và 3.22: C0DEX C0LOR (μg/mL) là hàm lƣợng DEX, LOR tƣ̣ pha các hỗn hợ.p CDEX CLOR (μg/ mL) là hàm lƣợng DEX, LOR xác định đƣợc RE% CDEX RE%CLOR là sai số phép xác định hàm lƣợng DEX, LOR Nhận xét: - Kết quả thu đƣợc bảng 3.21 cho thấy: Khi hàm lƣợng DEX >LOR đến 25 lần thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 5% 45 lần thì sai số mắc phải lớn 10% phép xác định hàm lƣợng cấu tử LOR (cấu tử có nồng độ nhỏ) Cịn sai số phép xác định hàm lƣợng cấu tử DEX (cấu tử có nồng độ lớn) nhỏ 3% - Kết quả thu đƣợc bảng 3.22 cho thấy: Khi hàm lƣợng LOR >DEX đến lần thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 5% 15 lần thì sai số mắc phải lớn 10% phép xác định hàm lƣợng cấu tử DEX (cấu tử có nồng độ nhỏ) Cịn sai sớ phép xác định hàm lƣợng cấu tử DEX (cấu tử có nồng độ lớn) ln nhỏ 1% 3.7.4 Xác định hàm lượng ACE, LOR, DEX các hỗn hợp tự pha Chúng tiến hành thí nghiệm nghiên cƣ́u đánh giá độ đúng của phƣơng pháp các hỗn hợp có ACE, LOR, DEX bằng cách: Lấy các thể tích ACE, LOR, DEX tƣơng ứng nhƣ bảng 3.23 pha loãng dung dịch HCl 0,1M, định mức thành 25mL Ta đƣợc tỷ lệ nồng độ ACE: DEX: LOR lần lƣợt từ 1:1:1 đến 100:3:1 (bảng 3.23) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 61 Bảng 3.23 Thành phầncủa ACE, LOR , DEX hỗn hợp Mẫu CACE CDEX CLOR 1:1:1 V V V V V V V C C C ACE DEX-3 DEX-2 DEX-1 LOR-3 LOR-2 LOR-1 ACE DEX LOR 6,0 6,0 - - 6,0 - - 6,00 6,00 6,00 5:1:1 5,0 - 5,0 - - 5,0 - 5,00 1,00 1,00 10:1:1 6,0 - 3,0 - - 3,0 - 6,00 0,60 0,60 20:2:1 5,0 - 2,5 - - - 12,5 5,00 0,50 0,25 30:2:1 6,0 - 2,0 - - - 10,0 6,00 0,40 0,20 40:2:1 6,0 - 1,5 - - - 7,5 6,00 0,30 0,15 50:2:1 6,0 - 1,2 - - - 6,0 6,00 0,24 0,12 60:2:1 6,0 - 1,0 - - - 5,0 6,00 0,20 0,10 70:3:1 7,0 - 1,2 - - - 5,0 7,00 0,30 0,10 10 80:3:1 4,0 - - 7,5 - - 2,5 4,00 0,15 0,05 11 90:3:1 4,5 - - 7,5 - - 2,5 4,50 0,15 0,05 12 100:3:1 5,0 - - 7,5 - - 2,5 5,00 0,15 0,05 Trong đó: - VACE;;VLOR-1; VLOR-2; VLOR-3, VDEX-1; VDEX-2; VDEX-3 là thể tích dung dịch ACE, LOR, DEX (mL) tƣơng ứng lần lƣợt với các nồng độ CACE = 25 μg/ mL; CLOR-1 = 0,5 μg/ mL, CLOR-2 = μg/ mL, CLOR-3=25 μg/ mL, CDEX-1 = 0,5 μg/ mL; CDEX-2 = μg/ mL; CDEX-3 = 25 μg/ mL Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 Thƣ̣c hiện phép đo độ hấp thụ quang các h ỗn hợp khoảng bƣớc sóng 210 – 285 nm 250C sau pha dung dịch mẫu 30 phút, 0,5nm lấy giá trị Từ kết quả đo quang tiến hành tính hàm lƣợng ACE, LOR, DEX theo chƣơng trình lọc Kalman, kết quả đƣợc trình bày ở bảng 3.24 Bảng 3.24 Kết tính nồng độ, sai số ACE, LOR, DEX các hỗn hợp Mẫu C0ACE C0LOR C0DEX CACE CLOR CDEX 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 5,99 5,00 1,00 1,00 4,99 1,00 0,98 6,00 0,60 0,60 5,99 0,60 0,58 5,00 0,25 0,50 4,99 0,25 0,48 6,00 0,2 0,40 5,99 0,20 0,38 6,00 0,15 0,30 5,99 0,25 0,28 6,00 0,12 0,24 5,99 0,12 0,22 6,00 0,10 0,20 5,99 0,10 0,18 7,00 0,10 0,30 6,99 0,10 0,28 10 4,00 0,05 0,15 3,99 0,05 0,13 11 4,50 0,05 0,15 4,49 0,00 0,13 12 5,00 0,05 0,15 4,99 0,05 0,13 RE% RE% RE% CACE CLOR CDEX -0,08 0,03 -0,15 -0,10 0,31 -1,68 -0,09 0,68 -3,40 -0,10 1,18 -4,30 -0,10 0,84 -4,57 -0,09 67,96 -6,70 -0,09 2,10 -9,08 -0,09 2,61 -11,37 -0,07 2,66 -7,46 -0,14 6,66 -14,95 -0,13 -93,68 -14,31 -0,12 5,91 -14,49 Trong đó: C0 là nồng độ ACE, LOR , DEX pha chế (g/ mL) đã biết; C là nồng ACE, LOR , DEX tính toán đƣợc (g/ mL); RE% CACE, RE% CLOR RE% CDEX là sai số phép xác định hàm lƣợng ACE, LOR , DEX Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 63 Nhận xét: Kết quả thu đƣợc bảng 3.24 cho thấy: - Khi hàm lƣợng ACE >LOR đến 40 lần và hàm lƣợng DEX> LOR lần (mẫu 6) thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 10% phép xác định hàm lƣợng cấu tử LOR (cấu tử có nồng độ nhỏ nhất) - Khi hàm lƣợng DEX > LOR lần và hàm lƣợng ACE >DEX đến 20 lần (mẫu 6) thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 5%, hàm lƣợng ACE >DEX 30 lần (mẫu 8) thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 10% phép xác định hàm lƣợng cấu tử DEX (cấu tử có nồng độ nhỏ) - Trong phép xác định hàm lƣợng cấu tử ACE (cấu tử có nồng độ lớn) thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số nhỏ 1% Nhƣ ta xác định đƣợc ACE hỗn hợp tƣơng đới xác ACE có hàm lƣợng lớn Tuy nhiên khơng thể xác định đƣợc LOR DEX hỗn hợp hàm lƣợng LOR DEX quá nhỏ Do đó, để xác định hàm lƣợng ACE, LOR DEX mẫu thuốc Hapacol - CF cần sử dụng phƣơng pháp thêm chuẩn 3.8 Xác định hàm lƣợngACE, LOR DEX mẫu thuốcHapacol CF đánh giá độ của phép phân tí ch theo phƣơng pháp thêm chuẩn 3.8.1 Xác định hàm lƣợngACE, LOR DEX mẫu thuốc Hapacol – CF Tiến hành pha thuốc viên nén Hapacol - CF công ty cổ phần dƣợc Hậu Giang sản xuất Thành phần theo công bố là ACE: 500mg, LOR: 5mg DEX: 15mg Ngày sản xuất: 28/06/2010 Số lô sản xuất: 040510A Hạn sử dụng: 28/06/2012 Xử lý mẫu th́c: Cân 10 viên th́c, tính khới lƣợng trung bình viên đƣợc m = 0,7874 g Đem nghiền nhỏ thành bột mịn, lấy xác 0,0787g th́c cho vào bình định mức 100 ml, thêm dung dịch HCl 0,1 M, lắc kỹ cho tan hoàn toàn, định mức đến vạch, ta đƣợc 100 mL, đem lọc, bỏ khoảng 20 ml dung dịch đầu, lấy 10 mL dung dịch lọc pha loãng thành 100 mL ta đƣợc dung dịch gớc chứa hàm lƣợng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 tƣơng đƣơng ACE 50 g/ mL, LOR 0,5 g/ mL DEX 1,5 g/ mL Sau ta tiếp tục lấy các thể tích dung dịch gớc pha loãng HCl 0,1M định mức thành 25mL dung dịch th́c có tỷ lệ nồng độ lần lƣợt là ACE:LOR:DEX từ 6:0,06:0,18 đến 14:0,14:0,42 (bảng 3.25) 30 phút sau pha dung dịch thƣ̣c hiện phép đo độ hấp thụ quang các hỗn hợp khoảng bƣớc sóng 210 – 285 nm 250C , 0,5nm lấy giá trị Từ kết quả đo quang tiến hành tính hàm lƣợng ACE, LOR, DEX theo chƣơng trình lọc Kalman , kết quả đƣợc trình bày bảng3.25 Bảng 3.25 Xác định nồng độ ACE, LOR, DEX mẫu thuốc Hapacol-CF STT Vdd C0ACE C0LOR C0DEX CACE CLOR CDEX RE% RE% RE% CACE CLOR CDEX 3,0 6,0 0,06 0,18 6,28 0,00 0,40 0,46 -104,76 123,59 4,0 8,0 0,08 0,24 8,16 0,02 0,42 2,04 -71,01 75,82 5,0 10,0 0,1 0,3 10,05 0,05 0,43 0,49 -51,1 44,00 6,0 12,0 0,12 0,36 11,94 0,08 0,46 -0,53 -33,91 28,63 7,0 14,0 0,14 0,42 13,77 0,12 0,46 -1,63 -13,24 10,53 Trong : Vdd thể tích (mL) dung dịch gớc đem pha loãng C0ACE, C0LOR, C0DEX là hàm lƣợng ACE, LOR, DEX các mẫu thuốc CACE, CLOR , CDEX là hàm lƣợng ACE, LOR, DEX xác định đƣợc các mẫu thuốc RE% CACE, RE% CLOR RE% CDEX là sai số phép xác định hàm lƣợng ACE, LOR , DEX Nhận xét: Kết quả thu đƣợc bảng 3.25 cho thấy: - Trong phép xác định hàm lƣợng cấu tử LOR và DEX (cấu tử có nồng độ nhỏ) thì phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai số lớn 10% - Trong phép xác định hàm lƣợng cấu tử ACE( cấu tử có nồng độ lớn) phƣơng pháp lọc Kalman mắc sai sớ nhỏ 3% Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 65 3.8.2 Xác định hàm lƣợngACE, LOR DEX mẫu thuốcHapacol - CF theo phƣơng pháp thêm chuẩn Để đánh giá độ đúng phƣơng pháp ta thêm vào dung dị ch mẫu phân tí ch một lƣợng chí nh xác ACE, LOR DEX đã biết nồng đợ Đem qt phổ và tính độ thu hồi ACE, LOR DEX mẫu phƣơng pháp lọc Kalman, qua đó ta đánh giá đƣợc độ tin cậy của phép phân tí ch Pha các dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX có nồng độ là 25 μg/ mL Sau đó , lấy mL dung dị ch gốc thuốc Hapacol - CF cho vào 14 bình đị nh mƣ́c 25 mL, đánh số thƣ́ tƣ̣ rồi tiến hành thêm lần lƣợt thể tí ch các dung dị ch ACE, LOR DEX nhƣ bảng 3.26, pha loãng bằng dung dịch HCl 0,1M, đị nh mƣ́c thành 25mL Bảng 3.26 Thành phần dung dịch chuẩn ACE, LOR DEX thêm vào dung dịch mẫu Hapacol - CF Mẫu Vthuốc (mL) VDEX VLOR VACE (mL) (mL) (mL) CACE CLOR CDEX 4,0 2,0 - - 8,00 0,08 2,24 4,0 4,0 - - 8,00 0,08 4,24 4,0 6,0 - - 8,00 0,08 6,24 4,0 7,5 - - 8,00 0,08 7,74 4,0 - 2,0 - 8,00 2,08 0,24 4,0 - 4,0 - 8,00 4,08 0,24 4,0 - 6,0 - 8,00 6,08 0,24 4,0 - 7,5 - 8,00 7,58 0,24 4,0 2,0 2,0 - 8,00 2,08 2,24 10 4,0 4,0 4,0 - 8,00 4,08 4,24 11 4,0 6,0 6,0 - 8,00 6,08 6,24 12 4,0 7,5 7,5 - 8,00 7,58 7,74 13 4,0 - - 1,0 9,00 0,08 0,24 14 4,0 - - 1,5 9,50 0,08 0,24 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 66 Trong đó: Vth́c là thể tích dung dịch gớc th́c Hapacol - CF có chứa hàm lƣợng ACE 50 g/ mL, LOR 0,5 g/ mL DEX 1,5 g/ mL VACE, VLOR, VDEX là thể tích ACE, LOR, DEX có nồng độ 25 μg/ mL thêm vào dung dị ch mẫu CACE, CLOR CDEX (μg/ mL) là hàm lƣợng ACE, LOR DEX thuốc Hapacol - CF sau thêm chuẩn Đo độ hấp thụ quang bƣớc sóng từ 210-285 nm 250C, sau pha 30 phút Từ sớ liệu đo quang tiến hành tính hàm lƣợng ACE, LOR DEX theo chƣơng trình lọc Kalman để tính toán xác định hàm lƣợng ACE, LOR DEX, qua đó tí nh độ thu hồi Kết quả đƣợc trình bày bảng 3.27 Bảng 3.27 Kết quả xác đị nh độ thu hồi ACE, LOR DEX dung dịch mẫu Hapacol - CF Mẫu CACE CLOR CDEX 8,00 0,08 2,24 8,00 0,08 4,24 8,00 0,08 6,24 8,00 0,08 7,74 8,00 2,08 0,24 8,00 4,08 0,24 8,00 6,08 0,24 8,00 7,58 0,24 8,00 2,08 2,24 10 8,00 4,08 4,24 11 8,00 6,08 6,24 12 8,00 7,58 7,74 C[ACE] C[LOR] C[DEX] Rev% Rev% Rev% CACE CLOR CDEX 8,02 0,08 2,26 101,15 8,03 0,07 4,25 100,14 8,03 0,07 6,23 99,90 8,03 0,07 7,73 99,87 8,01 2,07 0,29 99,41 8,01 4,06 0,32 99,45 8,02 6,04 0,36 99,26 8,02 7,53 0,37 99,36 8,02 2,06 2,28 99,21 102,24 8,02 4,05 4,32 99,23 102,04 8,02 5,65 6,33 92,90 101,55 8,03 7,52 7,85 99,18 101,52 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 67 13 9,00 0,08 14 9,50 0,08 0,24 9,02 0,07 0,27 0,24 9,52 0,07 0,26 102,08 101,08 Trong đó: CACE, CLOR CDEX (μg/ mL) là hàm lƣợng ACE, LOR DEX thuốc Hapacol - CF sau thêm chuẩn C[ACE], C[LOR] C[DEX] (μg/ mL) là hàm lƣợng ACE, LOR DEX xác định đƣợc sau thêm chuẩn Rev(%) CACE, Rev(%) CLOR, Rev(%) CDEX là độ thu hồi ACE, LOR DEX Nhận xét: Qua bảng 3.27 cho thấy độ thu hồi ACE từ 101,08% đến 102,08%, LOR là từ 92,9% đến 99,45% và DEX là từ 99,87% đến 102,24 % Vì dùng phƣơng pháp thêm chuẩn để tính hàm lƣợng ACE, LOR DEX mẫu th́c Hapacol - CF Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 68 KẾT LUẬN Sau thời gian tiến hành làm thực nghiệm, với nội dung nghiên cứu xác định đồng thời ACE, LOR DEX mẫu thuốc Hapacol – CF cách áp dụng phƣơng pháp trắc quang dùng phổ toàn phần sử dụng chƣơng trình lọc Kalman, luận văn đã đạt đƣợc sớ kết quả sau đây: Tìm đƣợc điều kiện tối ƣu để xác định đồng thời ACE, LOR DEX hỗn hợp: bƣớc sóng ứng với độ hấp thụ quang cực đại dung dịch ACE λmax = 244 nm, LOR λmax = 273 nm DEX λmax = 278 nm; mơi trƣờng axit HCl 0,1M đợ hấp thụ quang của ACE, LOR DEX ổn định và đạt cực đại ; khoảng thời gian tối ƣu để tiến hành thí nghiệm đo quang là khoảng 30 đến 60 phút sau pha và tại nhiệt độ 250C Kiểm tra tính cộng tính độ hấp thụ quang các chất hỗn hợp đối với các mẫu giả tự pha với sai số